强力霉素(Doxycycline)ELISA试剂盒

产品名称：强力霉素(Doxycycline)ELISA试剂盒

产品规格：48T/96T

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实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中指标水平。用纯化的指标抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入指标，再与HRP标记的-O-甲基转移酶（COMT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过 洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中指标浓度。

组成：

（1）结合物及标本的稀释液；

（2）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；

（3）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

（4）酶的底物；

（5）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），elisa试剂盒参考标准品和控制血清（定量测定中）；

强力霉素(Doxycycline)ELISA试剂盒操作步骤：

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

强力霉素(Doxycycline)ELISA试剂盒判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

强力霉素(Doxycycline)ELISA试剂盒准备

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2. 灵敏度：*检测浓度小于1.0 ng/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

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