| 供货周期： | 两周 |
| 品牌： | 雅吉生物 |
| 规格： | 50次/盒 |
| 货号： | 135050 |
| CAS号： | Xanthomonas campestris pv. phaseoli |
产品名称：野油菜黄单胞菌菜豆致病变种PCR试剂盒
本产品就是根据PCR原理专门开发的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
3. 产品精心优化且特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟除此之外的其它微生物DNA发生交叉反应。
4. PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本产品足够50次20μL体系的PCR反应。
6. 本产品只能用于定性实验，不能用于定量。
7. 本产品只能用于科研
野油菜黄单胞菌菜豆致病变种PCR试剂盒使用方法
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。
二、DNA提取：
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购上海雅吉生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
1、液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
2、固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
3、粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
4、其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 分 |
PCR反应（35个循环） | 95℃ | 10 秒 |
60℃ | 40 秒（采集 SYBR 通道的荧光信号） | |
溶解曲线分析 | 按 qPCR 仪器手册执行 |
注意：循环次数不要超过 35 个循环。
野油菜黄单胞菌菜豆致病变种PCR试剂盒样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限一年。阳性对照需单独放置，不要污染其他试剂。
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
4、自备试剂：样品DNA。
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