Norwalk Viruses G5(Norovirus-5, NoV-5)诺如病毒G5型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

报价:¥4490
供货周期: 14天
品牌: 雅吉生物
规格: 1盒
型号: 50次/盒
货号: 1524850
有效期: 12月
标准值: 详见说明
上海雅吉生物科技有限公司
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产品名称:Norwalk Viruses G5(Norovirus-5, NoV-5)诺如病毒G5型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. 特异性高,不会跟其他微生物的 DNA 发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5个数量级。

6. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

7. 本产品只能用于科研。

包装规格及成分(具体信息详见说明书):

编号

成分

规格

试剂一

探针法qRT-PCR缓冲液500μL

试剂二

探针法qRT-PCR酶混合液50μL

试剂三

 荧光PCR专用模板稀释液1mL

试剂四

PCR引物-探针干粉50T

试剂五

PCR阳性对照(107拷贝/μL)50μL

Norwalk Viruses G5(Norovirus-5, NoV-5)诺如病毒G5型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒操作过程:

一、稀释标准曲线样品(以 10E1-10E6 拷贝/μL 这6 个10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2,1。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同。

3. 在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在 4 号管中加入 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品待提取,最好设置 N+2 个提取,多出的是PC(样品制备阳性对照)和 NC(样品制备阴性对照)。可以取阳性对照的1000倍稀释液10μL 再加上一定量的水,使总体积与待提取样品的规定体积一致,以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。

三、设置qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)

如果进行定量分析,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则6个标准曲线样品只选一个做(可以选4号,其余样品不变)。以下只介绍定量分析的反应设置。

四、数据处理

1. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log 值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品核酸浓度的 log 值,再推算出其浓度。

2. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲

线,Ct 值应该小于或等于 39。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于40 则为阴性,如果小于或等于 39 则为阳性。如果在 39-40 之间,

则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。

保存条件:-20℃

保质期:12个月

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Norwalk Viruses G5(Norovirus-5, NoV-5)诺如病毒G5型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒检测方法的局限性

A.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

B.样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

C.阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

D.病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

E.不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

F.试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;


Norwalk Viruses G5(Norovirus-5, NoV-5)诺如病毒G5型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒注意事项

1操作严格按照说明书进行;

2试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

3反应液应避光保存;

4反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

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