供货周期: | 现货 |
品牌: | 派瑞曼 |
规格: | 50T |
货号: | P-PR1405 |
CAS号: |
20min全能基因组DNA提取试剂盒
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1405-50T | 50T | 20min全能基因组DNA提取试剂盒 |
产品介绍:
描述:
该试剂盒采用独特的裂解液,可快速可靠的从动物组织、细胞、细菌、病毒、全血、血清、血浆、体液、病毒液、棉拭孖等样品中纯化出高纯度的 DNA。可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、Southern 杂交等多种分子生物学实验
操作方法:
(一)RNA 含量较高的动物组织、细胞、细菌样本的提取方法
(1) 样品组织悬液的制备:动物组织用研钵研磨:将动物组织研磨粉碎,并取 40~60 mg 加入到 1.5ml EP 管中,加入 280 μl 无菌水,漩涡震荡 10s混合均匀,打开管盖加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液和 5 μl 的 RnaseA,漩涡震荡 10s 混合均匀,室温消化 5min,以去除RNA。动物组织用钢珠研磨:取 50~80 mg 组织加入到 400 μl 无菌水,在研磨仪上研磨 1min。在 1.5 ml EP 管底部加入 50 μl 的Buffer AP4 裂解液,并在管盖上加入 5 μl 的 RnaseA,取 280 μl 研磨好的组织悬液到 1.5 ml EP 管中,漩涡 10s 混合均匀,室温消化 5min,以去除 RNA。悬浮的细胞(104~108 个)或细菌(106~1011 个):在 1.5 ml EP 管底部加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液,并在管盖上加入5 μl 的 Rnase A,直接吸取 280 μl 样品到上述 EP 管中,漩涡震荡 10s 混合均匀,室温消化 5min,以去除 RNA。细胞或细菌沉淀:可用 280 μl 无菌水重悬细胞和细菌沉淀,并加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液和 5 μl 的 RnaseA,漩涡震荡 10s 混合均匀,室温消化 5min,以去除 RNA。
(2)RNA 消化完毕后,向上述溶液中加入 20 μl 的蛋白酶 K,漩涡 10s 混合均匀,并置于 56℃水浴锅(或室温条件下)中消化 5min。
(3)消化完毕后,向上述溶液中加入 500 μl 的 Buffer LB5,漩涡混合 15s 后,13000rpm 最高转速离心 2min。将上清液倒入到吸附柱中。
(4)13000rpm 离心 1min,弃过柱液。向吸附柱中加入 500 μl 的 Washing Buffer,13000rpm 离心 15s。弃过柱液,并重复此步骤一次。
(5)将吸附柱重新放回离心机,13000rpm 空离心 2min,将残留的乙醇彻底甩干。
(6)将吸附柱芯放入到 1.5 ml 收集管中,向吸附柱芯中加入 60~150 μl DNA Elution Buffer,室温放置 1min,13,000rpm离心 2min,洗脱液即为基因组 DNA,冷冻保存。
(二)RNA 含量较低的样本(全血、血清、血浆、体液、病毒液、棉拭孖浸泡液等)的提取方法在 1.5 ml EP 管底部预先加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液,在管盖上加入 20 μl 的蛋白酶 K,直接吸取 280 μl 的液体样本到 Buffer AP4 裂解液中。上下颠倒,并漩涡混合 10s,使得样品、Buffer AP4 裂解液、蛋白酶 K 混合均匀,并置于 56℃水浴锅中(或室温)消化 5min。按照上述步骤(3)-(6)进行上柱、漂洗、洗脱操作。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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