rTEV蛋白酶

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品牌: 派瑞曼
规格: 1000U
货号: P-PR1348
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rTEV蛋白酶

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P-PR1348-1000U

1000U

rTEV蛋白酶

 产品介绍

描述:

rTEV 蛋白酶(重组型)是经过基因工程改造后的重组蛋白酶,该酶特异性识别 Glu-Asn- Leu-Tyr -Phe-Gln-Gly七氨基酸序列,并高特异性、高活性剪切(剪切位点在Gln-Gly之间)。该酶经 6×His 标签纯化而得(含组氨酸标签),纯度达99%,剪切反应完毕后可通过 Ni-NTA Resin )去除。该酶在 4℃-30℃温度、pH 范围(6.0-8.5)反应条件下均具有活性(见下表)。

活性定义:在 1×rTEV Buffer(50 mM,pH8.0, 0.5 mM EDTA,1mM DTT),30℃反应 1h,剪切>85%的 3 μg 底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
应用:融合蛋白标签剪切去除。
储存:长期储存-70℃,可储存 2 年,-20℃可储存 6 个月。

注意事项:

1. 在 EP 管中配制如下反应体系
融合蛋白 20 μg
20×rTEV Buffer 7.5 μl
0.1M DTT 1.5 μl
rTEV Protease 1-3 μl
ddH20 Up to 150 μl
2. 30℃孵育,在 1、2、4、6 小时分别吸出 30 μl 上述反应液,置于单独的 EP 管中。
3. 向上述 EP 管中加入 30 μl 2×SDS Loading Buffer,置于-20℃。
4. 样品全部反应完毕后,样品煮沸 5 min,取 40 μl 进行SDS-PAGE 分析。
5. 如融合蛋白要求低温处理,可将反应液置于 4℃,请延长反应时间,并增加 rTEV 酶用量。

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pcr相关试剂实验结果分析:

PCR实验结果的分析涉及多个方面,‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等,‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:‌

循环次数过多:‌增加模板量减少循环次数,‌缩短退火时间及延伸时间,‌或改用两种温度的PCR循环,‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低:‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增,‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题:‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题,‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题:‌运输储存不当可能引起试剂盒失效,‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板:‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果:‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果,‌需要注意以下几点:‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染,‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析,‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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