供货周期: | 现货 |
品牌: | 派瑞曼 |
规格: | 25T 、100TX20μl |
货号: | P-PR1321 |
CAS号: |
一步法miRNA反转录试剂盒
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1321-25T | 25T | 一步法miRNA反转录试剂盒 |
P-PR1321-100TX20μl | 100TX20μl | 一步法miRNA反转录试剂盒 |
产品介绍:
描述:由于 miRNAs 分子序列较小,仅 20nt 左右,没有 真核生物特有的 Poly(A)尾巴结构,采用传统 Oligo dT 引 物和随机引物很难获得从 miRNA 到 cDNA 的反转录产 物。 公司开发出一套全新的加 A 法 miRNA 反转 录试剂盒,基于 Peter 改良的 miR-Q 技术, 可以对成熟的 miRNA 同时完成加 A 反应和反转录反应, 直接获得含有特异性 tag 和 15(T)的 cDNA 产物(如图 1 所示)。该方法使得 miRNA 反转录与 mRNA 的反转录一 样轻松。直接将提取的 miRNA 与反应缓冲液混合物混合, 并置于 PCR 仪上 1 小时即可获得高浓度的、包含所有 miRNAs 分子的 cDNA 产物。获得的 cDNA 产物适用于 HG miRNA 荧光定量 PCR 试剂盒进行定量检测,该方法 已被大量文献所采用。
储存:请置于-20°C,可保存 2 年;避免反复冻融
操作方法:
1. 按以下组分配制反转录反应液
miRNA(0.01-0.1 μg)or Total RNA 0.1-2 μg
4×One step miRNA RT Solution 5 μl
*10×miRNA RT Primer 2 μl
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*特别说明: 10×miRNA RT Primer 引物为
5’-CAGGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTVN-3’,定量扩增
用特异性上下游引物进行扩增,图 2 是以 hsa-miR-21 为
实例说明特异性上下游引物的设计方法
2. 在 PCR 仪上按以下条件进行反应:
37°C 60min
95°C 5min
3. 获得 cDNA 产物后使用 HG miRNA 荧光定量 PCR 试剂盒进行 miRNA 定量检测。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
大鼠促胰液素/胰泌素(Sct)elisa检测试剂盒 | ras基因相关蛋白Rab30抗体 RAB30 |
小鼠坏死因子α(TNFα)elisa检测试剂盒 | RPUSD3蛋白抗体 RPUSD3 |
组织诱导型巨噬细胞一氧化氮合成酶(iNOS /NOS2/mNOS)活性荧光定量检测试剂盒 | 死亡受体3抗体 DR3 |
人补体C1q坏死因子相关蛋白1(C1QTNF1/CTRP1)elisa检测试剂盒 | FKBP7蛋白抗体 FKBP7 |
小鼠3-α羟基类固醇脱氢酶(Akr1c9)elisa分析检测试剂盒 | GIN1蛋白抗体 GIN1 |
GST融合蛋白THROMBIN酶切试剂盒 | 碳酸酐酶相关蛋白8抗体 CA8 |
蓬乱蛋白2抗体 Dishevelled 2 | 钠通道蛋白10α抗体 SCN10A/Nav1.8 |
桥粒芯蛋白3抗体 Desmoglein 3 | 锚定蛋白重复结构域蛋白激酶ANKK1抗体 ANKK1 |
豆蔻酰基转移酶1抗体 NMT1 | 大鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)elisa检测试剂盒 |
二甲基化组蛋白H3K9抗体 Histone H3 (Di Methyl K9) | 胰腺弹性蛋白酶2A抗体 Elastase-2A |
血管紧张素Ⅱ受体相关蛋白抗体 AGTRAP | 小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)elisa检测试剂盒 |
抑癌基因NDRG4抗体 NDRG4 | 原钙粘蛋白γB5抗体 PCDHGB5 |
/酵母细胞亚硝酸盐还原酶总活性比色法定量检测试剂盒 | 卷曲螺旋结构域蛋白99抗体 Spindly |
人低密度脂蛋白(LDL)elisa分析检测试剂盒 | ADP核糖基化因子3抗体 ARF3 |
精子尾部结构蛋白抗体 Cenexin1 | 一步法miRNA反转录试剂盒钙介质素抗体 Caldesmon |
AF680标记的微管蛋白抗体 beta Tubulin, Alexa Fluor 680 conjugated | 富含半胱氨酸分泌蛋白2抗体 CRISP2 |
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