一步法miRNA反转录试剂盒

参考价:¥1248
供货周期: 现货
品牌: 派瑞曼
规格: 25T 、100TX20μl
货号: P-PR1321
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上海博湖生物科技有限公司
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一步法miRNA反转录试剂盒

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P-PR1321-25T

25T

一步法miRNA反转录试剂盒

P-PR1321-100TX20μl

100TX20μl

一步法miRNA反转录试剂盒

 产品介绍

描述:由于 miRNAs 分子序列较小,仅 20nt 左右,没有 真核生物特有的 Poly(A)尾巴结构,采用传统 Oligo dT 引 物和随机引物很难获得从 miRNA 到 cDNA 的反转录产 物。 公司开发出一套全新的加 A 法 miRNA 反转 录试剂盒,基于 Peter 改良的 miR-Q 技术, 可以对成熟的 miRNA 同时完成加 A 反应和反转录反应, 直接获得含有特异性 tag 和 15(T)的 cDNA 产物(如图 1 所示)。该方法使得 miRNA 反转录与 mRNA 的反转录一 样轻松。直接将提取的 miRNA 与反应缓冲液混合物混合, 并置于 PCR 仪上 1 小时即可获得高浓度的、包含所有 miRNAs 分子的 cDNA 产物。获得的 cDNA 产物适用于 HG miRNA 荧光定量 PCR 试剂盒进行定量检测,该方法 已被大量文献所采用。 

储存:请置于-20°C,可保存 2 年;避免反复冻融

操作方法:

1. 按以下组分配制反转录反应液
miRNA(0.01-0.1 μg)or Total RNA 0.1-2 μg
4×One step miRNA RT Solution 5 μl
*10×miRNA RT Primer 2 μl
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*特别说明: 10×miRNA RT Primer 引物为
5’-CAGGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTVN-3’,定量扩增
用特异性上下游引物进行扩增,图 2 是以 hsa-miR-21 为
实例说明特异性上下游引物的设计方法
2. 在 PCR 仪上按以下条件进行反应:
 37°C 60min
 95°C 5min
3. 获得 cDNA 产物后使用 HG miRNA 荧光定量 PCR 试剂盒进行 miRNA 定量检测。  1.png

pcr相关试剂实验结果分析:

PCR实验结果的分析涉及多个方面,‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等,‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:‌

循环次数过多:‌增加模板量减少循环次数,‌缩短退火时间及延伸时间,‌或改用两种温度的PCR循环,‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低:‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增,‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题:‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题,‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题:‌运输储存不当可能引起试剂盒失效,‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板:‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果:‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果,‌需要注意以下几点:‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染,‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析,‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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一步法miRNA反转录试剂盒信息由上海博湖生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于一步法miRNA反转录试剂盒报价、型号、参数等信息, 欢迎来电或留言咨询。除供应一步法miRNA反转录试剂盒外,上海博湖生物科技有限公司还可为您提供其他等产品, 公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。

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