在线脱盐高通量液质联用分析寡核苷酸

2023/09/08   下载量： 1 次

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应用领域 制药/生物制药
检测样本 生物药品药物研发
检测项目
参考标准 /

寡核苷酸是一类短链核苷酸的总称（包括脱氧核糖核酸及核糖核酸），如用于基因扩增和基因诊断的 PCR 引物和反义核酸，介导基因沉默的小干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）等，努力研究开发基因靶向治疗药物用于治疗病毒、肿瘤和遗传疾病。天然的寡核苷酸在体内容易降解，稳定性差。通过修饰的寡核苷酸具有较好的药学特性和体内稳定性 [1-2]，但合成的寡核苷酸产物含有各种杂质，需纯化精制，产物的鉴定和产品的质量控制至关重要。 液相和液质联用于寡核苷酸目标产物的高分辨分离和鉴定， 可以判断待测寡核苷酸结构的变化，比如脱嘌呤、氧化、磷酸化等。寡核苷酸样品中存在的盐分会影响其离子化过程和造成峰强度降低，因此有必要进行质谱鉴定前的除盐处理。常规离线除盐方法耗时；可以利用在线除盐方式进行寡核苷酸的分离鉴定，但样品通量需要提高，以满足高通量的要求，如平均每天 2000 个样品的需求等。

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本文建立了简单、快速、高效的液相色谱 - 线性离子阱质谱仪 （Vanquish Duo-LTQ XL）在线除盐和检测寡核苷酸分子量的分析 方法。该方法一个样品的整个分析周期为 42 秒（包括进样针清洗、 进样和质谱数据采集），利用该方法对不同分子量的寡核苷酸样品 进行快速除盐分析，测定分子量与理论分子量平均偏差约 100 ppm （表 4）。建立的在线除盐方法快速简便，质谱鉴定准确度高，样 品分析周期非常短（42 秒），24h 内可以分析高达 2000 个样品， 满足寡核苷酸样品的高通量分析要求。

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文献贡献者

赛默飞色谱与质谱
钻石会员 丨 第23年
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