参苓白术散中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的UHPLC/MS/MS分析方法摸索

三耀精细化工品销售（北京）有限公司

2023/12/25 15:55
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使用人参皂苷Rg1、Re和Rb1的标准品（固体）和混合对照品溶液（液体），参苓白术散供试品样品（固体）和处理好的溶液（液体），以及不含人参的阴性供试品样品（固体）和处理好的溶液（液体），摸索UHPLC/MS/MS分析方法，使人参皂苷Rb1与基质得到良好的分离，并使各峰间分离度大于1.7，各峰理论塔板数大于3000，专属性（阴性无干扰）和耐用性符合要求。


由于实验室之前对人参皂苷Rg1和Re在UHPLC条件下进行分析时，进行过色谱柱筛选，我们直接选用分离情况较好的CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱进行分析。

人参皂苷Rg1、Re和Rb1的结构式如下：

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（点击查看大图）


参考客户实验条件的分析结果

我们参考客户提供的实验条件对混合对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液进行分析，结果见图1~3和表1~2。在对照品中，人参皂苷Rg1与Re之间的分离度为3.788。在供试品中，Rg1与Re之间的分离度为3.781，分离良好；Rb1与其峰前杂质之间的分离度为1.903，达到了基线分离。在阴性供试品中的基质中，在Rg1出峰位置附近有干扰峰（图3红色虚线框中）。

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图1  MGII色谱柱分析对照品溶液结果（梯度条件1）


表1  各峰积分结果

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图2  MGII色谱柱分析供试品溶液结果（梯度条件1）


表2  各峰积分结果

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图3  MGII色谱柱分析对照品、供试品和阴性供试品溶液结果对比（梯度条件1）


色谱条件：

色谱柱：CP C18 MGII S2; 2.0×100

流动相：A：水，B：乙腈

           梯度条件1：B% 19%(0 min)-19%(20 min)-25%(35 min)-38%(50 min)-95%(51 min)-95%(60 min)-19%(61 min)-19%(70 min)

流   速：0.4 mL/min

温   度：30 ℃

检   测：PDA 203 nm

进样量：1 µL

对照品溶液：人参皂苷Rg1和Re均为0.04 mg/mL、人参皂苷Rb1为 0.08 mg/mL (溶剂70%甲醇)


调整优化

为了使阴性供试品中的基质杂质峰与目标峰得到分离，继续对流动相的梯度条件进行调整。

从实验结果（图4和图5）可以看出，随着梯度条件的变化，阴性供试品中基质的杂质峰与目标峰展现出不同的保留行为，杂质峰1和杂质峰2有时出现在Rg1附近，有时出现在Re附近（图中红色虚线框中）。但Rg1和Re都可以得到良好分离，Rb1与前后其相邻杂质之间也都可以得到分离度大于1.9的分析结果。

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图4  MGII色谱柱分析对照品、供试品和阴性供试品溶液结果对比（梯度条件2）

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图5  MGII色谱柱分析对照品、供试品和阴性供试品溶液结果对比（梯度条件3）

色谱条件：

色谱柱：CP C18 MGII S2; 2.0×100

流动相：A：水，B：乙腈

           梯度条件2：B% 19%(0 min)-19%(5 min)-25%(20 min)-38%(35 min)-95%(36 min)-95%(45 min)-19%(45.1 min)-19%(50 min)

           梯度条件3：B% 19%(0 min)-19%(10 min)-25%(25 min)-38%(40 min)-95%(41 min)-95%(50 min)-19%(51 min)-19%(60 min)

流   速：0.4 mL/min

温   度：30 ℃

检   测：PDA 203nm

进样量：1 µL

对照品溶液：人参皂苷Rg1和Re均为0.04 mg/mL、人参皂苷Rb1为 0.08 mg/mL (溶剂70%甲醇)


结      论

综上，使用CAPCELL PAK C18 MGII S2; 2.0 mm i.d.×100 mm色谱柱，在不同梯度条件下，均可以得到人参皂苷Rg1和Re之间的良好分离，Rb1与其前后相邻杂质之间也可以得到分离度大于1.9的分析结果。

使用不用的梯度条件，可得到目标峰与基质杂质峰不同的分离结果，可根据供试品溶液的实际情况，对梯度条件进行相应的调整，以得到目标峰与基质杂质峰的良好分离效果。



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