为了解决这个问题,各个厂家开发出不同技术适用于全水相的C18色谱柱,如在C18的底端加入极性基团或采用极性基团封尾。由于这些固定相引入了极性基团,可以改善分离效果,但是缩短了基质的保留时间而大大降低了分离选择性。所以依然有众多用户使用普通C18柱。
今天我们来做个小小的实验,来看看在高水相条件下,为什么普通C18的保留性能会有这么大的变化,到底是不是C18链的脱落和色谱柱的塌陷而引起的?还是有其它的原因?问题到底出在哪儿?
图一:C18色谱柱在100%的全水流动相条件下的保留行为。
(A)首次进样结果(B)在停止泵1小时然,启动后的结果。
色谱柱:150 mm x 4.6 mm,5μm,C18,孔径10 nm; 流动相,100%水;流速1.0 mL / min; 柱40°C;柱后出口的 施加压力1.7 MPa。峰1 =亚硝酸钠(t 0),峰2 = 2-丙醇(t1)。
表1:在100%水性流动相条件下C18色谱柱的保留时间和重量
实验结果表明,水从色谱柱流出。那么流出的水是来自于填料微球之间的水还是微球孔内的水呢?而微球孔内外的水对于分离效果又有什么样的影响呢?
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