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使用无抗体试剂-高pH分级富集（RF-HpH) 和LC-MS技术定量分析不同物种中肝脏mARC1 蛋白

线粒体铵肟还原成分1(mARC1)是一种位于线粒体外膜的含钼还原酶。使用siRNA敲低mARC1已被证明可有益于停止和/或逆转NASH向肝硬化的进展。因此,定量mARC1蛋白丰度对于理解药代动力学(PK)-药效动力学(PD)、定义优化剂量方案以及药物候选的选择/优化非常重要。在生物治疗蛋白分析中,配基结合测定(LBA),例如ELISA和免疫沉淀(IP)-LC-MS是目标蛋白定量的首选方法,因为具有高灵敏度和通量。然而,LBA方法高度依赖于商业抗体的亲和力和特异性,这并不能总是满足预期。自制试剂的生成既耗时又失败率高。在本研究中,我们开发了一种无抗体试剂工作流程,结合自动高pH(HpH)反相肽段分级,以高灵敏度、稳健性和通量实现低丰度内源性蛋白的定量。该RF-HpH富集-LC/MS方法成功应用于mARC1 siRNA药效动力学研究,并在蛋白水平证实了肝脏mARC1的敲低。

14 2023-12-21

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