光镜电镜关联技术在神经生物学中的应用--仪器信息网3i讲堂

光镜电镜关联技术在神经生物学中的应用

荧光显微镜和电子显微镜是生物微观研究领域最有力的两大工具。荧光显微镜通过灵活多样的荧光标记，可以在较大的视野范围内，显示单个细胞水平上的三维和多色图像，但它的分辨率不足以解析神经元突触、囊泡及其它具有重要功能的亚细胞结构；电镜有着超高的分辨率，可以在纳米尺度上洞察各亚细胞器的超微结构，然而其狭小的视野和较低的生物标记效率，限制电镜特异性定位目标结构的能力。神经元复杂而精细的形态特征，使得神经科学研究常常需要在较大的尺度和较高的分辨率条件下，研究其形态、投射模式和神经网络连接等问题。本研究建立了一套适用于较大生物样品光电关联的技术路线，先在荧光共聚焦显微镜下获得具有Z轴分辨率的荧光数据，能辨认有荧光信号的特定细胞或细胞器，再利用基于连续切片场发射扫描电镜技术解析同体积的超微结构。该方法将介观和微观结构关联起来，实验成本低，不依赖于集成化的clem设备，在选择光镜和电镜方面也有高度自由度。目前我们应用于不同脑区神经元功能和结构分析、神经元之间的相互作用以及神经元亚型分类等方面研究。