脂质体制备仪

植物细胞原生质体制制备与融合2006-11-20 17:14植物细胞原生质体制制备与融合1、原生质体常现的杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示，逐渐将眼光转向细胞融合，试图用这种崭 图3-2新的手段冲破自然界的禁钢。１９３７年michel率先实施植物细胞融合的试验。如何去除坚韧的细胞'接成了牛物学工作者必须解决的首要难题。１９６Ｏ年该领域终于出现了重大突破。由英国诺丁汉大学Cocking教授领导的小组率先利用真菌纤维素酶，成功地制备出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体，开辟了原生质体融合研究的新阶段。植物细胞原生质体是指那些已去除全部细胞壁的细胞。2、原生质体制备（１）取材与除菌 为了让制得的原生质体一般都生活力较强，再生与分生比例较高。常用的外植体包括：种子根。子叶、下胚轴、胚细胞、花粉母细胞、悬浮培养细胞和嫩叶。对外植体的除菌要因材而异。悬浮培养细胞一般无需除菌。对较脏的外植体往往要先用肥皂水清洗再以清水洗２～３次，然后浸人 ７０％酒精消毒后，再放进 ３％次氯酸钠处理。最后用无菌水漂洗数次，并用无菌滤纸吸干。（２）酶解 现以叶片为例说明如何制备植物原生质体。①配制酶解反应液：反应液应是一种ＰＨ值在５·５～５·８的缓冲液，内合纤维素酶０．３%～３．０%以及渗透压稳定剂、细胞膜保护剂和表面活性剂等，②酶解：除菌后的叶片 撕去下表皮 切块放人反应液 不时轻摇 (条件25℃～30℃,2～4h)反应液转绿。反应液转绿是酶解成功的一项重要指标，说明已有不少原生质体游离在反应液中。经镜检确认后应及时终止反应，避免脆弱的原生质体受到更多的损害。（３） 分离 在反应液中除了大量的原生质体外，尚有一些残留的组织块和破碎的细胞。为了取得高纯度的原生质体就必需进行原生质体的分离。可选取２００～４００目的不锈钢网或尼龙布ｊ叭ｉ过滤除渣，也可采用低速离心法或比重漂浮法直接获取原生质体。（４） 洗涤刚分离得到的原生质体往往还含有酶及其他不利于原生质体培养。再生的试剂，应以新的渗透压稳定剂或原生质体培养液离心洗涤２～４次。 （5） 鉴定 只有经过鉴定确认已获得原生质体后才能进行下阶段的细胞融合工作。由于已去除全部或大部分细胞壁，此时植物细胞呈圆形。如果把它放人低渗溶液中，则很容易胀破。也。'厂月荧光增白剂染色后置紫外显微镜下观察，残留的细胞壁呈现明显荧光。通过以上观测，基本上可判别是否原生质体及其百分中 此外，尚可借助台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察以及测定人、作用、呼吸作用等参数定量检测原生质体的活力。4、 原生质体的融合（1）化学法诱导融合 化学法诱导融合无需贵重仪器，试剂易于得到，因此一直是细胞融合的主要方法。尤其是聚乙二醇（ＰＥＧ）纳合成钙高ｐＨ诱导融合法已成为化学法诱导细胞融合的主流。以下简介此方法（在无菌条件下进行）：按比例混合双亲原生质体-----滴加 ＰＥＧ溶液，摇匀，静置----滴加高钙高ｐＨ值溶液，摇匀，静置-----滴加原生质体培养液洗涤数次-----离心获得原生质体细胞团一筛选、再生杂合细胞。（２）物理法诱导融合 １９７９年Ｓｅｎｄａ等发明了微电极法诱导细胞融合。１９８１年Ｚｉ。。ｍａｎｎ等提出了改进的平行电极法，现简介如下：将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后，插入微电极，接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲，则使原生质体质膜被击穿而发生融合。电激融合不使用有毒害作用的试剂，作用条件比较温和，而且基本上是同步发生融合。只要条件摸索适当，亦可获得较高的融合率。上述操作实际上是供体与受体原生质体对等融合的方法。由于双方各具几万对基因，要筛选得到符合需要且能稳定传代的杂合细胞是相当困难的。最近，有人提出以Ｘ射线、伽玛射线。纺锤体毒素或染色体浓缩剂等对供体原生质体进行前处理。轻剂量处理可造成染色体不同程度的丢失、失活、断裂和损伤，融合后实现仅有少数染色体甚至是DNA片段的转移；致死量处理后合ｕ可能产生没再仅体万染色体ｗ划她旋余种。利用这种价值不对称融合方法，大大提高了融合体的生存率和可利用率。经过上述融合处理后再生的细胞株将可能出现以下几种类型．2） 亲本双方的细胞核和细胞质能融洽地合为一体，发育成为完全的杂合植株。这种例子不多。3） 融合细胞由一方细胞核与另一方细胞质构成，可能发育为核质异源的植株。亲缘关系越远的物种，某个亲本的染色体被丢失的现象就越严重。 4） 融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或ＤＮＡ片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未融合时就过早地被新出现的细胞壁分开。以后它们各自分生长成嵌合植株。5、 杂合体的鉴别与筛选双亲本原生质体经融合处理后产生的杂合细胞，一般要经含有渗透压稳定剂的原生质体培养基培养（液体或固体），再生出细胞壁后转移到合适的培养基中。待长出愈伤组织后按常规方法诱导其长芽、生根、成苗。在此过程中可对是否杂合细胞或植株进行鉴别与筛选。 (1) 杂合细胞的显微镜鉴别 根据以下特征可以在显微镜下直接识别杂合细胞：若一方细胞大，另一方细胞小，则大。小细胞融合的就是杂合细胞；若～方细胞基本无色，另一方为绿色，则自绿色结合的细胞是杂合细胞；如果双方原生质体在特殊显微镜下或双方经不同染料着色后可见不同的特征，则可作为识别杂合的标志；发现ｈ述杂合细胞后可借助显微操作仪在显微镜下直接取出，移置再牛培养基培养。（2）以互补法筛选杂合细胞 显微鉴别法虽然比较可信，但实验者有时会受到仪器的限制，工作进度慢且未知其能否存活与个长 遗传互补法则可弥补以上不足。 遗传互补法的前提是获得各种遗传突变细胞株系。白化互补：不同基山叨的白化突变株出aBｘAh，可互补为绿色细胞株AaBb。生长互补：甲细胞株缺外源激素Ａ不能生长，乙细胞株需要提供外源激素Ｂ才能生长，则甲株与乙株融合，杂合细胞在不含激素Ａ、Ｂ的选择培养基上可能生长。抗性互补筛选：假如某个细胞株具某种抗性(抗青霉素)另一个细胞株具另一种抗性（如抗卡那霉素），则它们的杂合株将可在含上述两种抗生素的培养基上再生与分裂。这种筛选方式即所谓的抗性互补筛选。代谢互补筛选：根据碘代乙酚胺能抑制细胞代谢的特点，用它处理受体原生质体，只有融合后的供体细胞质才能使细胞活性得到恢复，等等。 （３）采用细胞与分子生物学的方法鉴别杂合体 经细胞融合后长出的愈伤组织或植株，可进行染色体核型分析、染色体显带分析、同功酶分析以及更为精细的核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ，见８．２．２．２）和随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析，以确定其是否结合了双亲本的遗传素质。（４）根据融合处理后再生长出的植株的形态特征进行鉴别质。

植物细胞原生质体制制备与融合1、原生质体常现的杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示，逐渐将眼光转向细胞融合，试图用这种崭 图3-2新的手段冲破自然界的禁钢。１９３７年michel率先实施植物细胞融合的试验。如何去除坚韧的细胞'接成了牛物学工作者必须解决的首要难题。１９６Ｏ年该领域终于出现了重大突破。由英国诺丁汉大学Cocking教授领导的小组率先利用真菌纤维素酶，成功地制备出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体，开辟了原生质体融合研究的新阶段。植物细胞原生质体是指那些已去除全部细胞壁的细胞。2、原生质体制备（１）取材与除菌 为了让制得的原生质体一般都生活力较强，再生与分生比例较高。常用的外植体包括：种子根。子叶、下胚轴、胚细胞、花粉母细胞、悬浮培养细胞和嫩叶。对外植体的除菌要因材而异。悬浮培养细胞一般无需除菌。对较脏的外植体往往要先用肥皂水清洗再以清水洗２～３次，然后浸人 ７０％酒精消毒后，再放进 ３％次氯酸钠处理。最后用无菌水漂洗数次，并用无菌滤纸吸干。（２）酶解 现以叶片为例说明如何制备植物原生质体。①配制酶解反应液：反应液应是一种ＰＨ值在５·５～５·８的缓冲液，内合纤维素酶０．３%～３．０%以及渗透压稳定剂、细胞膜保护剂和表面活性剂等，②酶解：除菌后的叶片 撕去下表皮 切块放人反应液 不时轻摇 (条件25℃～30℃,2～4h)反应液转绿。反应液转绿是酶解成功的一项重要指标，说明已有不少原生质体游离在反应液中。经镜检确认后应及时终止反应，避免脆弱的原生质体受到更多的损害。（３） 分离 在反应液中除了大量的原生质体外，尚有一些残留的组织块和破碎的细胞。为了取得高纯度的原生质体就必需进行原生质体的分离。可选取２００～４００目的不锈钢网或尼龙布ｊ叭ｉ过滤除渣，也可采用低速离心法或比重漂浮法直接获取原生质体。（４） 洗涤刚分离得到的原生质体往往还含有酶及其他不利于原生质体培养。再生的试剂，应以新的渗透压稳定剂或原生质体培养液离心洗涤２～４次。 （5） 鉴定 只有经过鉴定确认已获得原生质体后才能进行下阶段的细胞融合工作。由于已去除全部或大部分细胞壁，此时植物细胞呈圆形。如果把它放人低渗溶液中，则很容易胀破。也。'厂月荧光增白剂染色后置紫外显微镜下观察，残留的细胞壁呈现明显荧光。通过以上观测，基本上可判别是否原生质体及其百分中 此外，尚可借助台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察以及测定人、作用、呼吸作用等参数定量检测原生质体的活力。4、 原生质体的融合（1）化学法诱导融合 化学法诱导融合无需贵重仪器，试剂易于得到，因此一直是细胞融合的主要方法。尤其是聚乙二醇（ＰＥＧ）纳合成钙高ｐＨ诱导融合法已成为化学法诱导细胞融合的主流。以下简介此方法（在无菌条件下进行）：按比例混合双亲原生质体-----滴加 ＰＥＧ溶液，摇匀，静置----滴加高钙高ｐＨ值溶液，摇匀，静置-----滴加原生质体培养液洗涤数次-----离心获得原生质体细胞团一筛选、再生杂合细胞。（２）物理法诱导融合 １９７９年Ｓｅｎｄａ等发明了微电极法诱导细胞融合。１９８１年Ｚｉ。。ｍａｎｎ等提出了改进的平行电极法，现简介如下：将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后，插入微电极，接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲，则使原生质体质膜被击穿而发生融合。电激融合不使用有毒害作用的试剂，作用条件比较温和，而且基本上是同步发生融合。只要条件摸索适当，亦可获得较高的融合率。上述操作实际上是供体与受体原生质体对等融合的方法。由于双方各具几万对基因，要筛选得到符合需要且能稳定传代的杂合细胞是相当困难的。最近，有人提出以Ｘ射线、伽玛射线。纺锤体毒素或染色体浓缩剂等对供体原生质体进行前处理。轻剂量处理可造成染色体不同程度的丢失、失活、断裂和损伤，融合后实现仅有少数染色体甚至是DNA片段的转移；致死量处理后合ｕ可能产生没再仅体万染色体ｗ划她旋余种。利用这种价值不对称融合方法，大大提高了融合体的生存率和可利用率。经过上述融合处理后再生的细胞株将可能出现以下几种类型．2） 亲本双方的细胞核和细胞质能融洽地合为一体，发育成为完全的杂合植株。这种例子不多。3） 融合细胞由一方细胞核与另一方细胞质构成，可能发育为核质异源的植株。亲缘关系越远的物种，某个亲本的染色体被丢失的现象就越严重。 4） 融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或ＤＮＡ片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未融合时就过早地被新出现的细胞壁分开。以后它们各自分生长成嵌合植株。5、 杂合体的鉴别与筛选双亲本原生质体经融合处理后产生的杂合细胞，一般要经含有渗透压稳定剂的原生质体培养基培养（液体或固体），再生出细胞壁后转移到合适的培养基中。待长出愈伤组织后按常规方法诱导其长芽、生根、成苗。在此过程中可对是否杂合细胞或植株进行鉴别与筛选。 (1) 杂合细胞的显微镜鉴别 根据以下特征可以在显微镜下直接识别杂合细胞：若一方细胞大，另一方细胞小，则大。小细胞融合的就是杂合细胞；若～方细胞基本无色，另一方为绿色，则自绿色结合的细胞是杂合细胞；如果双方原生质体在特殊显微镜下或双方经不同染料着色后可见不同的特征，则可作为识别杂合的标志；发现ｈ述杂合细胞后可借助显微操作仪在显微镜下直接取出，移置再牛培养基培养。（2）以互补法筛选杂合细胞 显微鉴别法虽然比较可信，但实验者有时会受到仪器的限制，工作进度慢且未知其能否存活与个长 遗传互补法则可弥补以上不足。 遗传互补法的前提是获得各种遗传突变细胞株系。白化互补：不同基山叨的白化突变株出aBｘAh，可互补为绿色细胞株AaBb。生长互补：甲细胞株缺外源激素Ａ不能生长，乙细胞株需要提供外源激素Ｂ才能生长，则甲株与乙株融合，杂合细胞在不含激素Ａ、Ｂ的选择培养基上可能生长。抗性互补筛选：假如某个细胞株具某种抗性(抗青霉素)另一个细胞株具另一种抗性（如抗卡那霉素），则它们的杂合株将可在含上述两种抗生素的培养基上再生与分裂。这种筛选方式即所谓的抗性互补筛选。代谢互补筛选：根据碘代乙酚胺能抑制细胞代谢的特点，用它处理受体原生质体，只有融合后的供体细胞质才能使细胞活性得到恢复，等等。 （３）采用细胞与分子生物学的方法鉴别杂合体 经细胞融合后长出的愈伤组织或植株，可进行染色体核型分析、染色体显带分析、同功酶分析以及更为精细的核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ，见８．２．２．２）和随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析，以确定其是否结合了双亲本的遗传素质。（４）根据融合处理后再生长出的植株的形态特征进行鉴别质。

目前我们采用过柱子的方法纯化脂质体，效率不高，并且纯化产物纯度不高，想咨询一下是否可以采用制备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]来对产物进行纯化。

请问有没有人测量脂质体的膜厚啊？ 我想测量脂质体的膜厚，不知道有没有人测量过这个？我想测几个样品，有没有人知道哪里有这方面的经验？

脂质体包覆的COX-2抑制剂纳米颗粒的靶向化疗脂质体确 (liposome) 是一种磷脂和胆固醇组成的双层膜球形囊泡. 脂质体可以用天然的磷脂和磷脂乙醇胺 (phosphatidylethanolamine, 源于鸡蛋) 或纯表面活性剂, 如 DOPE (dioleolylphosphatidylethanolamine) . 脂质体通常含有一个核心的水溶液 (但这并非脂质体定义). 不含有水溶性物质的脂质双膜体被称为胶束(miscell).脂质体 (Liposome) 是由两个希腊词'脂'和 '体' 的意思构成. 脂质体本身并不表明任何大小之特点, 因此不同于纳米体 (nanosome). 1961年英国剑桥大学巴巴拉汉姆学院血液学家Bangham先生首次描述脂质体. Bangham先生与其同事Horne为了测试研究所新到的电子显微镜, 加负染色剂(三氯醋酸,TCA)于干磷脂中, 随后他们观察到一种类脂双层结构, 酷似质膜, 这就是首次显微镜照片展示的细胞膜实质性证据. 由于其独特的性能脂质体可用于药物载体, 这是由于亲水溶解溶质不能轻易通过脂质双膜, 而疏水性化学物质,可以溶解到脂质体膜内, 所以脂质体既可携带疏水性分子, 也可亲水性分子. 脂质体双层可以与其他细胞膜双层融合, 从而传递携带内含物. 用脂质体来投递DNA (lipofection) 比 单独用DNA感染细胞要有效的多. 低(或高) pH脂质体中的水溶解药物都带有电荷 (即pH值是药物的等电点范围以外) . 随着pH值自然抵销 (质子能通过膜), 因药物能自由穿过细胞膜, 中和后的脂质体药物也会自由扩散, . 这一投递是借脂质体双层膜与细胞接触来扩散脂质体药物, 而不是直接的融合. 所以这种脂质体药物的生产与使用受到时间上的限制.另一种脂质体药物投递的方式是借巨吞噬细胞作用. 一定大小范围内的脂质体可被人体中巨噬细胞吞噬. 脂质体药物在脂质体被巨噬细胞的胞溶体溶解后释放出来.加上陪体 的脂质体更易激活这种内吞噬作用.另一脂质体的好处是它的癌细胞靶向能力, 所有健康人的血管内皮都是由内皮细胞所包裹, 严密阻止任何大颗粒从血液中漏出. 但肿瘤血管则不具有相同水平的密封效果,通常小于400nm的脂质体可可迅速从患者的血液进入肿瘤. 抗癌药物如阿霉素(Doxorubicin, Doxil) 和柔红霉素 (Daunorubicin, Daunoxome ) 就是利用脂质体给药系统. 脂质体可用磷脂水经超声波而制成. 低剪切率超声波制成像洋葱多层状脂质体, 如持续用高剪切超声波则倾向于形成较小的单层脂质体 (unilamellar). 超声波法被普遍认为是"毛, 粗"的制备方法, 较新的方法, 如挤出法(extrusion)制成的脂质体药物可供人类使用.当前研究已经能够使脂质体能躲避人体的免疫系统, 成为"隐形脂质体", 即脂质体外挂上惰性聚乙二醇( PEG ), PEG脂质体延长循环中的药物运送. 但是 目前的困难是PEG涂的厚度. 太厚则阻止脂质体与细胞的接合. 为了特异性接合脂质体可挂上单克隆抗体, 或特异性抗原. 这样脂质体药物只送到病变组织.

有个问题，脂质体的不溶性微粒检测，是跟药典里面关于脂质体的不溶性微粒检测方法一样么？有没有什么文件可以看啊，哪位大神知道，求指导

测脂质体内相pH用什么仪器呢

如题，想问下，多相脂质体需要分析什么参数？今天被人问到，手边没有药典，不知论坛有没有做，帮忙看看药典有没有这个规定啊。看看附录里面。

脂质体被用作病毒体的人工模型，能够对关键的膜结合药物目标进行系统梳理。隆德大学（瑞典）质子通道研究小组的副教授Sindra Peterson Årsköld博士及其同事的工作重点从事病毒蛋白质和抗病毒剂的脂质体研究。Peterson Årsköld博士表示，如果没有马尔文Zetasizer Nano ZS纳米颗粒分析系统快速、可靠而且高资源利用率的测定性能,在各种样品条件下精确的例行样品质量控制就不可能实现。作为一名蛋白质科学家，Peterson Årsköld博士解释了样品分析成本为何对其工作如此至关重要的原因:“水中超声降解磷脂产生的脂质体被用于获取极其详细的定量生物物理数据。因此极其重要的是,每批脂质体需要在窄分布粒径和单层方面具有相同的高品质，而且其形态也需要能够复制并始终如一。在脂质体生产方法的开发以及对脂质体进行优化以获得新型蛋白质体系的过程中，对这些参数的监测也很关键。举例来说，一些条件会形成多层脂质体，像洋葱一样有许多薄层。这意味着，我们每次生产一种新样品时，我们都必须进行质量检查以确保过程的一致性。”“虽然电子显微镜检查（EM）能为我们提供更加详细的数据，但获得图像要花一整天。因此使用EM进行常规样品检测的成本很高。Zetasizer Nano ZS应用动态光散射原理（DLS）,既没有破坏性也很快速。"它能够在几分钟内对我们的样品进行检测，” Peterson Årsköld博士说。“实际上，这是一种有用而且易于使用的系统，自从我购入该仪器以来，我们系的蛋白质化学家们每天都使用它，而且现在再也不愿意在没有它的情况下工作了！”作为隆德大学生物化学及结构生物系的一部分，Peterson Årsköld博士 以及质子通道研究小组一直在研究甲型流感病毒产生的M2蛋白质，一种小型单跨横跨膜（TM）蛋白质的性状。Peterson Årsköld博士共同署名，发布在国家科学院会议论文集（PNAS）上的论文指出使多个质子能够侵入甲型流感病毒，引发宿主细胞感染，而不形成较大电位的神秘过程。结果证明M2蛋白质与pH值非常复杂、功能调谐关系，能够为成功的抗病毒药物的开发提供更好的机会。

要了解脂质体毛细管电泳（LCE），首先得给大家解释一个概念：生物膜（Biomembrane）。生物膜是指组成生物体细胞各个“构件”的膜，细胞内的细胞膜、核膜以及内质网、高尔基体、线粒体等细胞器，就是这台“机器”中一些功能相关的“部件”，它们都由膜构成，这些膜的化学组成相似，基本结构大致相同，统称为生物膜。生物膜色谱（Biomembrane Chromatography）是一种新型液相色谱模式，它以天然或人工模拟生物膜为固定相，主要用来研究溶质分子与生物膜间的相互作用。目前，最常用的生物膜色谱固定相是固定化脂质体，因为它能更好的模拟生物膜的脂双层结构，并具备生物膜的流动性特征。这种人工模拟的生物膜体系不仅可以精确地模拟生物膜的化学环境，而且其物理性能也可以通过调节温度，pH、离子强度等得到有效控制。LCE就是利用脂质体作为假固定相的毛细管电泳，主要用于分离蛋白质、手性分子及模拟药物-生物膜相互作用的新型毛细管电泳。与生物膜色谱相比，LCE方法简单，可操作性强，成本低廉，尤其是测定药物的Klw 准确、重现性好，具有更好的发展前景。目前，LCE 无论在理论还是技术方面都还不太成熟，应用范围也较为有限，因而其发展空间还很广阔。

如何用浊度法检测脂质体的稳定性。其中应用紫外可见分光光度计。浊度与吸光度之间有什么关系？

称量固体标准品配制标准曲线溶液，使用注射液脂质体来配制质控样品，怎么比较都是标准曲线高于质控，已经做过溶液准确度考察。两个处理方式不同只在于标准曲线是直接用溶液，后面再加基质，而质控是直接配制在基质中。已经做过脂质体破碎的考察，增加涡旋时间或者增加有机试剂都没有变化。前处理方式也比较过，没有变化。现在不知道原因出在哪了？

眼部疾病的常用治疗方式是局部给以药物溶液（例如滴眼液），这些传统剂型占据市售制剂的90%左右。然而，眼部的生理屏障以及候选药物的低溶解性为眼部给药系统的发展带来许多难题。 最近，各种旨在提高难溶性药物生物利用度的眼部给药方式大量出现。中科院上海药物所甘勇课题组专题综述了这些眼部给药方式，包括水凝胶、聚合物胶束、纳米混悬液和脂质纳米载体等。同时，深入阐述了脂质纳米载体，包括乳液、脂质体、立方液晶、囊泡等，为眼部药物传递提供许多优势，比如提高难溶性药物的生物利用度、靶向给药、控制药物释放以及降低全身副作用等。(相关工作主要由甘莉、王静完成：Drug Discovery Today, in press.) 依据脂质体纳米粒作为眼用载体的独特优势，上海药物所甘勇课题组设计研究了一种新型双阳离子型核壳脂质体纳米粒(DLCS-NP)。采用薄膜分散水化-挤膜法，直接将旋干的脂质膜与分散的壳聚糖纳米粒(CS-NP)混悬液水化，自组装形成核壳结构的阴离子脂质体纳米粒(LCS-NP)，随后利用阳离子N--N,N,N-三甲酰丙烷甲基硫酸盐与磷脂双分子层的亲和作用，在LCS-NP表面形成正电荷磷脂修饰层，形成DLCS-NP。该具有独特双阳离子型核壳脂质体纳米粒，能够显著延长载体角膜滞留时间，提高细胞摄取量，并具有一定的溶酶体逃逸能力，取得了理想的体内外眼表基因转染效果，为眼表疾病的基因治疗开辟了新途径。(相关工作主要由蒋敏、甘莉完成：Biomaterials, 2012, 33: 7621-7630.) 该项研究取得了上海市自然科学基金 (No.11ZR1444700)、国家自然科学基金资助项目(No.81102387)、国家科技重大专项“重大新药创制” (No.2009ZX09301-01) 和国家重点基础研究发展计划 (No.2009CB930300)的资助。 全文链接 1 2　 http://www.cas.cn/ky/kyjz/201211/W020121127573032605614.jpgDLCS-NP的细胞摄取及摄取机制示意图

【序号】：1【作者】：[url=http://yuanjian.cnki.com.cn/Search/Result?author=%E5%BC%A0%E5%B0%8F%E6%B4%AA]张小洪[/url] 【题名】：[b]脂质体、分散体和肠溶包衣替米考星体外释放和抑菌研究[/b]【期刊】：重庆大学硕士论文【年、卷、期、起止页码】: [color=#333333]2014[/color]【全文链接】：http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10611-1014043590.htm

【作者】 张晓云； 倪京满； 乔华； 孟庆刚； 王荷；【机构】 兰州大学药学院药剂教研室； 兰州大学第一医院药剂科； 兰州大学药学院药剂教研室 兰州730000； 兰州730000； 兰州730000；【摘要】 采用RP-HPLC法测定鬼臼毒素纳米脂质体的重要质控指标包封率。流动相:甲醇-水=60∶40;色谱柱:D ikm a公司的D iamonsil C18(150×4.6 mm,5μm);紫外检测波长:290 nm;流速:1 m l/m in。回收率为101.1%,RSD=1.94%(n=3)。本测定方法简便、快速,准确度高,可用于鬼臼毒素纳米脂质体的含量测定。 更多还原【关键词】 高效液相色谱； 鬼臼毒素； 纳米脂质体； 包封率；

小弟以前在学校图书馆看到一本 有机中间体的制备与合成手册 是本红色封面的,现在没看到外面有卖的,不知道哪为GGJJ有没有电子版的.如果能传上来的话.不胜感激!

[size=4][/size]如题，请高手多多指教。

[font=宋体]在生物医学领域中，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-production][b]多克隆抗体制备[/b][/url]是一个重要的技术，广泛应用于疾病诊断、治疗和基础研究中。然而，许多初学者对于这一技术可能存在一些疑问。本文将针对多克隆抗体制备过程中的常见问题，进行详细的解答和解析，帮助读者更好地理解和应用这一技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫宿主该如何选择[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择宿主时，一般要考虑两个问题：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）免疫效果能否保证。特别是对于蛋白抗原的情况，为了保证免疫成功，就要求宿主与抗原来源物种之间有较远的亲缘关系，如果不太能确定亲缘关系的远近，建议把抗原的序列与被免疫的宿主相应的蛋白的序列进行一个对比，优先选择同源性较低的物种进行免疫。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]抗血清产量的问题。根据实验目的不同，抗血清的用量也有所不同。如果后续是做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]，那么只需要一点点血清就够了，这个时候就可以选用小[/font][font=Calibri]Mouse[/font][font=宋体]这样的小宿主作为免疫宿主，而如果想生产二抗作为商业使用，则可选用羊、驴、马这样的大型宿主，大型宿主还可以进行多次放血，以提高宿主的利用率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、如何选择抗原？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](1)[/font][font=宋体]降解的蛋白抗原利于制备用于筛选细菌表达[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库或免疫沉淀[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]用于筛选真核细胞转染系统表达的[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库或免疫沉淀，最好选用自然的蛋白抗原。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](3)[/font][font=宋体]如果制备抗独特型抗体，所用抗原可以是可溶性[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]分子，或者是完整的细胞，也可以是基因工程表达产品独特型决定簇、人工合成多肽及抗原化抗体等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]目前，以各类病原生物活体感染宿主而获得多克隆抗体（抗血清）作为检测抗体，仍是常用方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、多克隆抗体有哪些优势？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）成本低廉，技术门槛低，制备周期短。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）能识别一个抗原上的多个表位，可在[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]等实验中获得更加理想的结果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）多抗因为靶蛋白可在多个表位上结合不止一个抗体分子，有助于放大低表达水平的靶蛋白信号。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）能识别出与免疫原蛋白具有高同源性的蛋白，或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白，例如当未测试物种中的抗原性质未知时，有时会使用多克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）可识别多个结构域，即使原始抗原的一些空间结构或者序列发生小变化或者部分抗原决定簇变化，仍可以识别抗原，因此有更大的适应性[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、多抗用来做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测为何有杂带出现？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）你可能是用[/font][font=Calibri]ProteinA/G[/font][font=宋体]来进行抗体纯化，这种纯化方式得到的多抗掺杂有宿主本身对其自身抗原产生的抗体，这些抗体在检测中会识别样本中的蛋白而出现杂带，建议采用抗原亲和纯化来避免杂带的产生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）天然蛋白存在复杂的翻译后修饰。可以通过信息学分析来解释。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）翻译后蛋白前体经切割可能会使部分蛋白分子量偏小，而天然组织中同时存在蛋白前体和切割加工后的蛋白，二者序列有相同部分，可能会产生杂带。最好是通过查阅与目的蛋白相关文献进行了解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）当目的蛋白有同源家族蛋白时，蛋白异构体的存在可能会使分子量偏离预测分子量，因为天然样本中由同一个[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]不同的剪接方式进行翻译形成的蛋白产物也会有相同的抗原表位，同时被抗体识别时会产生杂带。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）强烈的蛋白间相互作用在还原条件下也有可能不解聚导致条带偏大。如二聚体或三聚体，这些多聚体的形式通常会抵制[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]时所做的还原条件，因此造成检测的条带偏大。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、多克隆抗体如何保存及运输？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]我们的抗体是添加[/font][font=Calibri]5%[/font][font=宋体]甘油，免疫前血清和抗血清已添加[/font][font=Calibri]0.02%[/font][font=宋体]防腐剂，若客户有其他要求，会提前告知生产；抗体会超低温包装运输寄送， 收到抗体请尽快检测，建议分装成小包装（分装为每次使用量）后保存于[/font][font=Calibri]-80[/font][font=宋体]摄氏度冰箱，并避免反复冻融， 保存时间若超过[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]年，使用前请先电泳检测蛋白是否降解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、制备的多克隆抗体是否可以保证后续[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]实验？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]制备抗体的抗原是原核重组表达的蛋白，与后续用于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]的天然蛋白样品是有差异的，无法保证构象及活性与天然蛋白一致，所以不能保证后续应用于天然蛋白的[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]，但可以保证制备出的抗体与抗原蛋白是[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]呈阳性的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services][b]多克隆抗体制备服务[/b][/url]，最快仅需[/font][font=Calibri]45[/font][font=宋体]天交付抗血清或纯化抗体。您只需提供抗原的基因序列，我们就可以为您制备高亲和力的多克隆抗体，以满足您在研究或诊断方面的应用。[/font][/font]

那位有[医药中间体制备方法与加工技术及质量检测标准实用手册]第三篇、第四篇全部内容文件有：编委会、目 录、第一篇、第二篇、第三篇、第四篇、第五篇、第六篇、第七篇、第八篇、第九篇、第十篇、附 录。其它我都有了，就缺这两篇。

想请教各位制备脂质体过程中，磷脂双分子层形成的原理，教科书上没有讲清楚，在此请教各位！

[font=宋体][font=宋体]单克隆抗体（[/font][font=Calibri]Monoclonal antibodies[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]mAb[/font][font=宋体]）是由[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞产生，并能特异性靶向抗原的免疫球蛋白。单克隆抗体不仅是生物化学、分子生物学和医学研究中必不可少的工具，其在临床治疗上的应用也以革命性的速度改进了多种疑难杂症的治疗方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1975[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri]Khler[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Milstein[/font][font=宋体]提出的杂交瘤技术（[/font][font=Calibri]Hybridoma technology[/font][font=宋体]），使得大量获得单克隆抗体成为可能，为基础研究及其临床应用提供了无限潜力。其他科学和技术进步也促进了单克隆抗体的发展、丰富了单克隆抗体的制备方法。 经过近[/font][font=Calibri]50[/font][font=宋体]年的发展，单克隆抗体制备方法不再局限于免疫小鼠的淋巴细胞术，噬菌体展示技术（[/font][font=Calibri]Phage display[/font][font=宋体]）、人源抗体转基因小鼠（[/font][font=Calibri]Human antibody-producing mice[/font][font=宋体]）和单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术（[/font][font=Calibri]Single B cell antibody technology[/font][font=宋体]）也都陆续登上舞台。这些方法虽然有各自的局限性，但都已广泛应用于单克隆抗体筛选。同时，这些技术都不完全是独立存在的，如果能充分利用各技术的优点，采用灵活的方法将各技术优化组合就能更加高效、快速地进行抗体开发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一、杂交瘤技术[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]杂交瘤技术是一种将[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞与骨髓瘤细胞融合生产小鼠单克隆抗体的传统方法，是目前应用最广泛的单克隆生产技术。在这种技术中，首先收集免疫小鼠的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞，并将其与[/font][font=Calibri]BALB/c[/font][font=宋体]小鼠骨髓瘤细胞融合，从而形成永生化的杂交瘤细胞。然后筛选杂交瘤细胞，鉴定出能生产特异性抗体的单克隆细胞株。十几年后，[/font][font=Calibri]1988[/font][font=宋体]年，兔单克隆抗体制备方法首次被《[/font][font=Calibri]Science[/font][font=宋体]》杂志报道 [/font][font=Calibri][1][/font][font=宋体]。该研究使用小鼠[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]兔异种杂交瘤方法生产兔单克隆抗体，但鼠[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]兔异种杂交瘤细胞分泌抗体的效率较低、不稳定，且无法长时间分泌抗体。时间进展到[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代中期，[/font][font=Calibri]1995[/font][font=宋体]年，《[/font][font=Calibri]PNAS[/font][font=宋体]》报道了能稳定生产兔单抗的兔[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]兔杂交瘤细胞。但兔杂交瘤细胞也被证明不如常规鼠杂交瘤细胞稳定，这大大阻碍了其实验室水平的广泛使用。并且，由于融合和转化效率低下，使用兔杂交瘤细胞生产单克隆抗体在应用推广中受到了极大的限制。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]经过多年发展及应用，杂交瘤技术作为一种成熟的产生鼠单克隆抗体的方法已被广泛应用于多种抗体的生产。然而，由于缺乏合适的骨髓瘤融合伴侣，杂交瘤技术一直局限于免疫啮齿动物。[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]世纪[/font][font=Calibri]80[/font][font=宋体]年代，《[/font][font=Calibri]PNAS[/font][font=宋体]》报道了一种应用人杂交瘤技术生产治疗用抗体的文章 [/font][font=Calibri][3][/font][font=宋体]。利用该方法可以在无额外修饰的情况下产生天然的人源抗体，并用于临床治疗。随着融合伴侣和电融合技术的发展，人杂交瘤细胞融合成功率逐步增加，这将在未来促进治疗性抗体的开发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]二、噬菌体展示技术[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1990[/font][font=宋体]年开始，噬菌体展示技术被视为一种新的产生单克隆抗体的方法。这种方法是从淋巴细胞中收获抗体可变区基因（[/font][font=Calibri]V gene[/font][font=宋体]）全集，克隆[/font][font=Calibri]VHs[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VLs[/font][font=宋体]的组合并与外壳蛋白融合后表达于丝状噬菌体表面，然后筛选表达特异性抗体的噬菌体。与受限于啮齿动物的杂交瘤技术相比，噬菌体展示技术已经成功用于任何已知免疫球蛋白基因的物种中筛选和分离单克隆抗体。[/font][font=Calibri]2000[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Rader[/font][font=宋体]等人首次介绍了应用噬菌体展示技术生产兔单克隆抗体的全过程。在这篇文章中，[/font][font=Calibri]Rader[/font][font=宋体]等人用噬菌体展示技术筛选和人源化的人[/font][font=Calibri]A33[/font][font=宋体]兔抗体，不仅对人[/font][font=Calibri]A33[/font][font=宋体]抗原有高特异性，且保留高亲和力。目前，噬菌体展示技术因为其高效、简便及体外控制在原核或真核系统中原则参数的能力正逐步成为生产治疗用抗体的重要技术平台。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]随着我们对抗体结构、功能和序列多样性研究的不断深入，除了原有的抗体库外，一种新的合成抗体库技术也在不断发展。例如，[/font][font=Calibri]HuCAL&Ylanthia[/font][font=宋体]文库中，为了使筛选出的人源抗体能更好的进行分子识别，将精确设计的序列插入抗原结合位点，并优化设计多种可变重链、轻链框架区域 [/font][font=Calibri][7-10][/font][font=宋体]。随着文库设计和筛选方法的不断进步，合成抗体文库将成为快速生产具有高特异性和高亲和力单克隆抗体不可或缺的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]三、人源抗体转基因小鼠[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1985[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Alt[/font][font=宋体]等人首次提出将人抗体基因引入小鼠种系并使用转基因小鼠中产生人抗体的想法 [/font][font=Calibri][11,12][/font][font=宋体]。随着基因编辑技术的进步，使用人源抗体转基因小鼠生产人源化抗体已不再是天方夜谭。与其他技术相比，使用人源抗体转基因小鼠有许多优势，如无需人源化、具有更多的生物多样性，且由于体内成熟具有天然的亲和力。但是，人免疫球蛋白体量庞大对转基因小鼠抗体生产是一个巨大的挑战。为了克服这些困难，研究人员们通过使用不同策略已成功地获得转基因动物表达的人源抗体库，如全人源抗体小鼠和嵌合人源抗体小鼠等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]四、单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]虽然杂交瘤技术和噬菌体展示技术已经在单克隆抗体生产中广泛应用，但它们依然存在较难克服的缺点制约着抗体生产过程。近些年，为了克服杂交瘤技术细胞融合效率低，噬菌体展示技术导致重链、轻链的天然同源配对丢失等问题，单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术正被逐步开发和应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]简单来说，单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术包含以下几个步骤：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]a.[/font][font=宋体]从外周血或免疫器官中初步提取淋巴细胞；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]b.[/font][font=宋体]使用磁性活化细胞分选（[/font][font=Calibri]MACS[/font][font=宋体]）或荧光活化细胞分选（[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]）技术鉴定和分离出特定的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]c.[/font][font=宋体]将分离出的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞进行单细胞培养；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]d.[/font][font=宋体]使用逆转录聚合酶链式反应（[/font][font=Calibri]RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]）和抗体特异性引物鉴定单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分泌抗体的特异性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]e.[/font][font=宋体]扩增特异抗体基因；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]f.[/font][font=宋体]将抗体基因克隆到表达载体中，并在细菌或细胞系统中表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]g.[/font][font=宋体]纯化表达产生的抗体，并用[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]等方法进行评估。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术现在已广泛用于人和小鼠单克隆抗体生产，如一些治疗性中和单抗，可用于治疗多种疾病，包括癌症、自身免疫性疾病和传染性疾病亡[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]总结[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]种方式制备单克隆抗体的优缺点[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url]：[/font][font=宋体]优势：技术成熟、研发成本低[/font][font=宋体]劣势：周期长、融合率低、需要进行人源化[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]人源抗体转基因小鼠：[/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]①可用杂交瘤技术获得人源抗体[/font][font=宋体]②良好的免疫原性[/font][font=宋体]③亲和力高[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体]①存在免疫耐受[/font][font=宋体]②依然有鼠抗产生[/font][font=宋体]③难以免疫毒性抗原[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]：[/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]①基因来源灵活[/font][font=宋体]②随机库可以避免免疫耐受[/font][font=宋体]③可以灵活，特异得调整设计方案[/font][font=宋体]④可长时间保存[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体]①重链轻链非天然配对[/font][font=宋体]②展示效率具有偏好性[/font][font=宋体]③需要再次进行功能验证[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术：[/font][/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]①无需杂交瘤融合[/font][font=宋体]②制备周期短[/font][font=宋体]③重链、轻链天然配对[/font][font=宋体]④无需合成基因[/font][font=宋体]⑤可直接获得各物种抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体]①需要新鲜样本[/font][font=宋体]②抗原特异性细胞比例低[/font][font=宋体]③操作环境要求严格[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services][b]单克隆抗体制备服务[/b][/url]，同时拥有流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分选平台、噬菌体抗体库技术平台、杂交瘤开发平台…… 可供大家选择，有需求或者了解具体详情可以查看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=Calibri] [/font]

脂质体化妆品及其应用LIPOSOME COSMETICS AND ITS APPLICATION2000年04期张根旺 脂质体是一种生物载体，加载活性成分的脂质体对治疗疾病和皮肤护理非常有效．本文介绍了脂质体的结构、定义、分类、制备方法及其在化妆品中的应用．Liposomes are a kind of biological carrier.Lipsomes loaded active materials are very effective in treatming disease and skin care.The structure,definition,catalogs and preparation of liposomes and its application in cosmetics are introduced in this paper. 关键词： 脂质体 , 制备 , 应用 | 全部关键词

[font=宋体]目前有多种方法可用于开发单克隆抗体。杂交瘤技术是经典的抗体开发技术，但效率相对较低，而且容易丢失抗体的多样性。噬菌体展示技术广泛用于单抗开发，但容易丢失抗体的天然配对信息。[/font][font=宋体][font=宋体]一般认为，在抗体开发中，保留[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的天然[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]配对是十分重要的。近年来兴起的单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术保留了轻重链可变区的天然配对，具有简单快捷、所需细胞数量较少、效率高等优势。该技术通过直接扩增单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]编码基因，是一种从人和免疫动物中制备单克隆抗体的有力技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]利用单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分选平台，义翘神州可向全球客户提供单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体制备服务，整个过程涉及单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分离、测序、克隆和单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体筛选等步骤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体发现的工作流程[/font][/b][/font][font=宋体] [font=Calibri]1[/font][font=宋体]）单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的分离[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]从外周血或淋巴组织中分离单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞，有随机分离和抗原特异性分离两种方式。随机[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分离，可通过显微操作、激光捕获显微切割和荧光激活细胞分选（[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]）等进行细胞挑选。抗原特异性分离可通过抗原包被磁珠、多参数[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]的荧光素标记抗原、溶血斑块实验和荧光焦点法等方法进行抗原特异性[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的筛选。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]利用[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]技术，可以根据特定细胞表面标志物的表达模式，明确区分待分选[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的发育和分化阶段，几乎任何阶段的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞都可以分选。为了有效获得特异性抗体，必须评估供体的免疫应答，例如，在单细胞分离之前，使用酶联免疫斑点技术（[/font][font=Calibri]ELISPOT[/font][font=宋体]）测定外周血中抗体特异性细胞（[/font][font=Calibri]ASC[/font][font=宋体]）的丰度，从而选择含抗原特异性抗体浓度较高的血样进行后续抗体制备。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=Calibri]2[/font][font=宋体]）单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体的测序和克隆[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通常在[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔板上进行单细胞的[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]合成。全长[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]基因转录产物通过巢式或半巢式[/font][font=Calibri]RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]进行扩增。通常情况下，对抗体重链轻链可变区不同前导序列设计前向引物的混合物，反向引物特异性互补于抗体恒定区。某些情况下，如果分离和扩增不同同种型的抗体，反向引物则是特异性互补于各种同种型抗体恒定区的混合物。表达载体可直接转染至哺乳动物细胞中，用于单克隆抗体的体外表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=Calibri]3[/font][font=宋体]）抗体的表达和筛选[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]鉴定抗体或片段的抗原特异性和生物活性之前，需将携带有抗体基因的表达载体在相应系统中表达。最简单和最常见表达系统是原核系统（例如大肠杆菌），而哺乳动物细胞系统（例如[/font][font=Calibri]HEK 293[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞）更有利于抗体的翻译后修饰，主要是瞬时表达或稳定表达。在[/font][font=Calibri]E. coli[/font][font=宋体]中，通常抗体基因表达为抗原结合片段（[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]）的形式，而在哺乳动物细胞中，以完整的[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]形式表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]单个[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]细胞抗体服务[/b][/url]，包含：流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞服务和基于[/font][font=Calibri]Beacon[/font][font=宋体]平台的单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体开发，更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]文章来源：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]单[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]细胞抗体技术[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/news/optimizing-pk-assays-with-anti-idiotype-antibodies][b]抗独特型抗体[/b][/url]在生物医学领域中具有重要地位。作为一种高度特异的免疫分子，它能够精确识别并紧密结合其他抗体或抗原的独特型位点，进而在疾病诊断、治疗和生物标志物发现等多个方面发挥关键作用。因此，在药物研发过程中，对生物药的安全性和疗效评估显得尤为关键。尤其是在对原研药和生物仿制药进行药代动力学（[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]）分析和抗药抗体（[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]）测定时，抗独特型抗体更是衡量患者样本中抗体药物浓度的有力工具，并可用作抗药抗体（[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]）的阳性对照。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]一、药代动力学（[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]）分析[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]药代动力学（[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]）描述并表征了药物在人或动物体内的四个不同阶段：吸收、分布、代谢和排泄（也称为[/font][font=Calibri]ADME[/font][font=宋体]）。在药物开发中，[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]分析提供了药物与身体相互作用以及疗效强度和疗效持续时间的基本信息。在开发生物仿制药时，需要通过比较[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]分析来评价与原研药在生物活性的潜在差异。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]根据结合模式和性质的不同，抗独特型抗体可分为三种类型：抗原阻断型、抗原非阻断型和药物靶标复合物型。基于这些特点，可以建立不同形式的[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]检测，以测量血清中的抗体药物含量，包括游离型、结合型或总量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗独特型抗体可用于定量检测动物或人血清中的抗体药物水平，是[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]研究的关键检测试剂。抗体药物定量分析有多种分析方法，其中[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]为最常用的形式。在抗独特型抗体捕获[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]中，将抗独特型抗体包被在平板上，再将含有抗体药物的样本加入系统中，然后用特异性结合药物的标记抗独特型抗体定量抗体药物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]二、免疫原性[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗药抗体（[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]）检测[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫原性评价主要采用抗药抗体（[/font][font=Calibri]anti-drug antibody, ADA[/font][font=宋体]）分析的方法进行，这是治疗性蛋白药物（如单克隆抗体、[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]和融合蛋白）开发过程中的关键步骤。在这些情况下，通常采用多层次递进式进行（图[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）。该方法首先采用高灵敏的筛选试验鉴别阳性抗体样本，使用验证性试验尽量减少假阳性结果，然后使用表征试验评估抗体的中和能力。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在整个过程中，抗独特型抗体是必要的试剂。检测[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]的检测方法有多种，包括[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、放射免疫沉淀法（[/font][font=Calibri]RIPA[/font][font=宋体]）、表面等离子体共振（[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]）和电化学发光检测（[/font][font=Calibri]ECL[/font][font=宋体]）。其中，桥联[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]是最常用方法，可用于检测所有[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]同种型（[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等）。在典型的桥联[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]中，将抗体药物预包被在平板上，并将标记的抗体药物与患者样本一起孵育，以检测是否存在[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]（图[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）。抗独特型抗体将用作阳性对照或参比标准品，用于样本中[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]的定性分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供为客户提供了从抗原制备、抗独特型抗体开发到检测方法建立和试剂盒开发的全方位、一站式的定制[url=https://cn.sinobiological.com/services/anti-idiotype-antibody-service][b]抗独特型抗体生产服务[/b][/url]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①抗独特型兔多抗制备服务：[/font][font=宋体]交付内容：[/font][font=宋体]? 纯化抗体[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]CoA[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]周期：[/font][font=Calibri]2-3[/font][font=宋体]个月[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②抗独特型鼠单抗制备服务[/font][font=宋体]交付内容：[/font][font=宋体][font=宋体]? 阳性克隆，[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]管细胞[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]克隆[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 纯化抗体，[/font][font=Calibri]10 mg/[/font][font=宋体]克隆[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]抗体对（可选）[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]CoA[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]周期：[/font][font=Calibri]4~6[/font][font=宋体]个月[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：抗独特型抗体[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/news/optimizing-pk-assays-with-anti-idiotype-antibodies[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体：利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术将鼠源单抗的轻链、重链可变区插入含有人抗体恒定区的表达载体中，转化哺乳动物细胞进行表达所产生的单克隆抗体。人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体的人源化程度可达到[/font][font=Calibri]70%[/font][font=宋体]，完整的保留了鼠源单抗的可变区及亲本活性，人抗体恒定区的引入则降低了免疫原性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]人鼠嵌合抗体基本原理[/font][/b][font=宋体][font=宋体]是从分泌某种鼠单抗的杂交瘤细胞基因组中分离并鉴定出重排的功能性鼠[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]（轻链可变区）和[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]（重链可变区），经过基因重组分别与人的[/font][font=Calibri]CL[/font][font=宋体]（轻链恒定区）和[/font][font=Calibri]CH[/font][font=宋体]（重链恒定区）区基因按照一定的方式相拼接，克隆到表达载体中构建鼠[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]人轻重链基因表达载体，并转入适当的宿主细胞表达来制备特异性嵌合抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]对于其他类型的人源化抗体，其优势在于，技术路线简单，易于操作；抗体完整性好，在体内滞留时间长；鼠源抗体的亲和力和特异性都得到保留，在临床上得到了良好的反应。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]构建人鼠嵌合抗体主要包括：克隆鼠抗体可变区基因，钓取人抗体恒定区基因，拼接鼠抗体可变区基因与人抗体恒定区基因以及构建载体和宿主细胞。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]人鼠嵌合型单克隆抗体制备优点：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①不仅保留了亲本鼠抗体的高特异性和亲和力，而且使鼠源性成分减少 [/font][font=Calibri]70%[/font][font=宋体]左右；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②其人源[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段能有效介导生物学效应功能，如抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（[/font][font=Calibri]Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]）、补体依赖性细胞毒作用（[/font][font=Calibri]Complement dependent cytotoxicity[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]）等；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③能自由地选择抗体的型、亚型、类、亚类、大小、结构域及添加糖基化位点等，以利用其不同的生物学特点及理化特性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④由高效真核表达载体和人抗体恒定区组成的嵌合抗体表达“盒子”可以容许插入不同的鼠单克隆抗体的可变区，缩短操作和研制周期；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤操作相对简单。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody]嵌合抗体[/url]主要有三种类型：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、嵌合[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前嵌合抗体的研究主要集中在嵌合[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Immunoglobulin G[/font][font=宋体]）抗体。其构建基本原理是从生产某种鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞中得到目的抗体[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区（[/font][font=Calibri]variable region[/font][font=宋体]）基因，再与人类的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区（[/font][font=Calibri]constant region[/font][font=宋体]）基因重组并克隆到合适载体中，然后转入受体细胞表达（如图[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在构建嵌合抗体时应根据不同目的选择不同的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]片段。这是因为不同类型的人抗体[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区与补体和[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]fragment crystallizable,Fc[/font][font=宋体]）相互作用的能力以及引发细胞溶解的功能不尽相同。在体内免疫系统中，抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段和效应细胞相互作用，发挥特异的生物学功能。例如[/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Immunoglobulin E[/font][font=宋体]）可介导炎症反应等，[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]活化补体的能力强，[/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]的补体活化能力比[/font][font=Calibri]IgG3[/font][font=宋体]强，且在[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]作用（[/font][font=Calibri]antibody dependent cell mediated cytotoxicity[/font][font=宋体]）触发能力上也比[/font][font=Calibri]IgG3[/font][font=宋体]强。在与[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体的结合能力上[/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgG3[/font][font=宋体]比较强，[/font][font=Calibri]IgG4[/font][font=宋体]次之，而[/font][font=Calibri]IgG2[/font][font=宋体]几乎检测不到。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、嵌合[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]F(ab')2[/font][font=宋体]抗体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]嵌合[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]antigen-binding fragment, Fab[/font][font=宋体]）和[/font][font=Calibri]F(ab')2[/font][font=宋体]（具有两个抗原结合表位的片段）抗体的优势就是渗透力强。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]嵌合抗体制备原理为：将功能性抗体[/font][font=Calibri]L,H[/font][font=宋体]链的[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区基因与人的轻链[/font][font=Calibri]k[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]链[/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]进行重组，克隆到表达载体中，在转入宿主细胞表达。不过对于大多数该类型的抗体来说，由于亲和力较低，分子量小，容易被肾小球过滤而从血液中消失，因此大多数不适合单独使用于临床治疗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/services/chimeric-antibody-production-service][b]嵌合抗体生产服务[/b][/url]详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/chimeric-antibody-production-service[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州利用[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]置换技术及计算机辅助结构模拟设计可对羊驼纳米抗体、鼠源单抗进行人源化改造，保证人源化程度 [/font][font=Calibri]95%[/font][font=宋体]，为客户提供优质的[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]单克隆抗体人源化服务[/b][/url]。详情可关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/nanobody][b]纳米抗体[/b][/url]是一种非常有前景的下一代治疗性抗体技术，受到越来越多的研究机构和制药公司的关注。为支持纳米抗体药物的早期发现，义翘神州利用噬菌体抗体库技术自主研发了纳米抗体开发平台，已成功开发了多个纳米抗体候选分子。另外，我们的高通量纳米抗体表达平台，已成功表达和生产了多种纳米抗体形式，包括单价、多价或多特异性[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]，满足客户的各种定制需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]①纳米抗体开发服务[/b][/font][font=宋体][font=宋体]不同于经典的杂交瘤技术制备单克隆抗体，纳米抗体开发的整个流程主要包括羊驼免疫、噬菌体文库构建、抗体筛选、表达纯化及验证等阶段。羊驼免疫后，从羊驼外周血分离[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞，提取总[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]，反转录为[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]，以[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]为模板[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]扩增获得多样化的纳米抗体基因片段，然后将其连接到载体上，从而构建噬菌体文库。随后进行多轮淘洗步骤获得抗原特异性纳米抗体，并对其进行测序、表达和验证。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州建立了纳米抗体开发平台，可提供一站式的纳米抗体定制服务，主要包括抗原设计与制备、羊驼免疫、文库构建、淘洗、单克隆鉴定、测序以及活性分析等实验步骤，已成功交付多个纳米抗体开发项目。获得的纳米抗体需要进行进一步的人源化改造，以降低其免疫原性，实现最佳的治疗效果。义翘神州提供的纳米抗体人源化服务，利用[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]置换技术及计算机辅助结构模拟设计可对羊驼纳米抗体进行人源化改造，保证人源化程度 [/font][font=Calibri]95%[/font][font=宋体]，成功率[/font][font=Calibri]100%[/font][font=宋体]。我们也提供体外药效评价解决方案，满足纳米抗体成药性评估、生物学活性测定等应用场景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]②高通量纳米抗体表达服务[/b][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州自主研发的高通量重组抗体表达平台，结合了专业的高通量引物合成和载体构建等，可实现高通量抗体表达。除全长[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体外，义翘神州可表达多价[/font][font=Calibri]VHHs[/font][font=宋体]以及[/font][font=Calibri]VHH-Fc[/font][font=宋体]融合型抗体等多种形式，成功率很高，满足客户不同的个性化需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]具体流程如下：获得纳米抗体序列文库之后，通过高通量引物合成和载体构建建立纳米抗体表达文库，转至[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞进行摇瓶培养，通过[/font][font=Calibri]Protiein A[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]Ni[/font][font=宋体]亲和层析一步纯化，得到纯度大于[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]的纳米抗体，纯化后抗体均通过功能验证再进行放大生产。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]③无细胞系统纳米抗体表达服务[/b][/font][font=宋体][font=宋体]除了利用[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞表达纳米抗体外，义翘神州还自主研发了[url=https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service][b]无细胞表达系统[/b][/url]，也可实现纳米抗体高通量表达。该系统以外源[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]为模板，通过在细胞抽提物的酶系中添加氨基酸、能量物质等实现纳米抗体的体外合成，将原本需要几天的表达过程缩短至几小时，更加快速、高效。义翘神州可提供优质的[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]快速表达服务，加速您的研发进程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]具体服务流程如下：首先合成基因、构建载体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，接着利用无细胞合成系统合成纳米抗体，再经纯化以及可行性分析，得到可交付的高质量抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原文出自：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/nanobody[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]抗体是一种由[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞或浆细胞产生的免疫球蛋白，它在人体免疫系统中扮演着重要的角色。抗体能够识别并结合抗原，从而启动补体级联反应或通过[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段与效应细胞结合，引发免疫应答。抗体由轻链（[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]）和重链（[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]）组成，每条链都分为恒定区（[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]）和可变区（[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]）。可变区（[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]）负责识别和结合抗原，恒定区（[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]）则与抗体的效应功能相关。其中，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段是抗体的抗原结合片段，具有高亲和力和特异性，是抗体发挥生物学功能的重要部分。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]抗体[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段的主要功能：[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段是由两条相同的轻链和两条相同的重链组成的，每条链上的[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区负责识别并结合特定的抗原。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段的这种结构使其能够与抗原进行高特异性的结合，从而实现对特定抗原的识别和中和。这种结合是抗体与抗原相互作用的基础，使得抗体能够有效地对抗外来入侵者和清除体内突变的细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了识别和结合抗原外，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段还能通过其构象变化来影响抗体的生物学活性。当抗体与抗原结合时，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段的构象会发生变化，这可以触发抗体[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的构象变化，从而影响抗体的生物学功能。例如，当抗体与抗原结合时，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的构象变化可能会增强其与效应细胞的亲和力，从而启动更强大的免疫应答。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在临床上，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段的应用也具有重要意义。例如，针对特定抗原的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体可以用于治疗某些自身免疫性疾病或超敏反应。通过使用[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体，可以特异性地中和或清除体内过多的自身抗体，从而达到治疗的目的。此外，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体还可以用于肿瘤的靶向治疗，通过与肿瘤相关抗原结合，引导药物精确地到达肿瘤部位，提高治疗效果并降低副作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]总之，抗体[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段在免疫应答、免疫治疗和肿瘤靶向治疗等方面都具有重要的应用价值。对其结构和功能的深入了解将有助于我们开发出更加有效的治疗策略和新型抗体药物。同时，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体的研究和应用也为我们提供了更广阔的视野，加深我们对人体免疫系统的认识和理解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体片段制备：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体片段可通过构建噬菌体展示抗体文库筛选获得。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体库具有多项优势。首先，它可以快速有效地筛选出难以用杂交瘤技术获得的理想抗体。其次，和[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]抗体一样，它可以轻松制备出高亲和力的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]利用自主开发的[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞瞬时转染技术，义翘神州成功完成多个[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段抗体的表达和制备项目。并且这些高质量的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段，可用于抗原[/font][font=Calibri]-Fab[/font][font=宋体]共结晶等应用。与酶解法制备抗体片段相比，利用哺乳动物细胞瞬时转染技术制备的重组[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体的质量更优。如果客户要求，我们也可以在大肠杆菌表达系统进行[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由于很多抗体[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段不能很好地结合蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]、蛋白[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]或蛋白[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]亲和树脂，我们通常在抗体重链的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端添加[/font][font=Calibri]poly-histidine[/font][font=宋体]标签，以便于纯化。在设计构建载体时，可在[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签和[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]之间加上蛋白酶识别位点，这样抗体纯化后可通过蛋白酶切去除标签，得到无标签的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果您之前已在义翘神州订购过[/font][font=Calibri]CRO[/font][font=宋体]服务项目，一般情况下，您不需要为抗体制备订单支付预付款。义翘神州会根据抗体制备项目的具体费用进行报价，您在收到纯化抗体和发票后付款即可。但是，对于风险性较大的抗体制备项目，例如，制备恒定区有修饰的抗体，义翘神州需要收取少量的成本费用，用于可行性试验和工艺开发（如需）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]同时义翘神州还提供[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/fab-scfv-antibody-production-service][b]Fab[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/fab-scfv-antibody-production-service][b]抗体片段表达服务[/b][/url]，更多详情可以查看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/fab-antibody-production[/font][/font][font=宋体] [/font]