蛋白浊定仪

【求助】GB/T 5009.5（蛋白质的测定 凯氏定氮法）中的蒸馏定氮装置图，我有这个国标，就是没有仪器装置图，查了半天也没查到，现在急用，请各位前辈帮帮忙啊！先谢了！

[size=18px][font=&] 蛋白质是构成生物体细胞组织的重要成分。食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源，具有不可替代的作用。含氮是蛋白质区别于其他有机化合物的重要标志。在检验食品中蛋白质时，通常是先检定出食品中的总氮量，然后乘以蛋白质换算系数，以此得到蛋白质含量。凯氏定氮法由Kieldahl于1883年首先提出，至今仍被作为标准检验方法。凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸收和滴定过程。[/font][font=&]原理[/font][font=&]向样品中加入浓硫酸和催化剂，充分混匀，然后加热消化分解，样中碳和氢被氧化成二氧化碳和水，其中的有机氮转化为硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。[/font][font=&]样品消化[/font][font=&]浓硫酸具有脱水性和氧化性，可使有机物中的碳、氢被氧化为二氧化碳和水，蛋白质会分解为氨，然后氨与硫酸结合生成硫酸铵。通常加入硫酸钾和硫酸铜作为催化剂来加快蛋白质分解。硫酸钾可以提高溶液的沸点，一般情况下，纯硫酸的沸点在340℃左右，但是在添加硫酸钾后，可提高至400℃以上。提高温度使有机物加快分解。但是不能加入过多的硫酸钾，否则会因为温度过高，使生成的硫酸铵发生热分解成氨而造成损失。硫酸铜除作为催化剂外，还可以指示消化终点的到达，有机物全部消化完全后，溶液呈现清澈的蓝绿色，硫酸铜还可以做蒸馏时碱性反应的指示剂。[/font][font=&]蒸馏[/font][font=&]消化液中的硫酸铵在碱性环境下会转化成氨。为防止水中微量的氨气受热逸出，影响测定结果，所以水蒸气发生器中的水要保持酸性。硫酸铵是一种强酸弱碱盐，需要足够的碱液使结合态的氨完全反应并释放出来，这个过程中的氢氧化钠一定要过量，过量的氢氧化钠会与硫酸铜生成蓝色的氢氧化铜沉淀，氢氧化铜受热分解成黑色的氧化铜沉淀。检验蒸馏是否完成，可用奈氏试纸法，NH4+或NH3遇奈氏试剂会反应生成棕红色的碘化汞铵化合物。[/font][font=&]吸收[/font][font=&]加热蒸馏放出的氨可用硼酸溶液吸收，硼酸有吸收氨的作用，又因其呈微弱酸性，不影响下一步滴定时指示剂的变色反应。温度过高会使硼酸吸收液对氨的吸收作用减弱，从而造成损失，故一般不超过40 ℃。[/font][font=&]滴定[/font][font=&]待吸收完全后，用硫酸或者盐酸标准溶液进行酸碱滴定，滴定液的浓度直接影响结果的准确性，必须按照要求进行配制和标定。混合指示剂在中性溶液中呈灰色，滴定终点时液体呈灰色。[/font][font=&]注意事项[/font][font=&]①所用的试剂溶液应用无氨蒸馏水配制；[/font][font=&]②取样应具有代表性,取样前将样品充分混匀；[/font][font=&]③样品称量放入凯氏烧瓶时，切勿使样品粘附在瓶颈部，避免样品未消化完全而造成氮损失；[/font][font=&]④为了保证使烧瓶壁上的残渣消化完全，在消化过程中要不时地转动凯氏烧瓶；[/font][font=&]⑤消化脂肪或糖含量较高的样品时，易产生大量泡沫，为防止泡沫溢出，消化时应先消化加热并不断摇动，或者加入少量辛醇或液体石蜡或硅油消泡剂；[/font][font=&]⑥当样品消化液浑浊或未澄清透明时，可先将凯氏烧瓶放冷至室温后，再加入30%的过氧化氢，然后继续加热消化；[/font][font=&]⑦加碱后，漏斗要进行水封，避免因装置漏气造成氨的逸出影响结果的准确性；[/font][font=&]⑧要保证蒸馏装置不能漏气；[/font][font=&]⑨在蒸馏时反应室与外界存在的压力差，蒸汽可将氨带出。故蒸馏时，要保证蒸汽均匀、充足，中间不能停止加热，防止发生倒吸；[/font][font=&]⑩蒸馏前如果加碱后消化液呈蓝色而没有生成氢氧化铜沉淀，说明加入的碱量不足，需要适量补加碱；,蒸馏时为防止水蒸气发生器内液体爆沸，加入几片碎瓷片或大的玻璃珠，玻璃珠直径最好大于联通的玻璃管直径，以免玻璃珠进入玻璃管内影响蒸汽均匀、充足的输出；-冷凝管下端要插入硼酸吸收液液面以下，防止氨逸出，蒸馏完毕后先将冷凝管下端提离液面，再蒸1min后清洗管口，再移开吸收瓶，最后关掉热源，否则可能发生倒吸。[/font][font=&]常见问题解答[/font][font=&]一、消化过程中容易沾壁怎么办？消化后定氮瓶内有黑色残留物怎么办？[/font][font=&]解答：称样时需要注意切勿使样品粘附在定氮瓶颈部，避免因样品未消化完全而造成结果偏低。消化过程中如果发生沾壁在定氮瓶肚上或者定氮瓶肚上有黑色残留物，可以在消化较完全时摇动定氮瓶，把定氮瓶肚上的黑色物质摇洗下来。摇动的方法是取下小漏斗，戴上防烫手套，手掌紧握瓶颈，向前后侧甩，使瓶内液体呈半旋转半振荡状态，注意控制力度不要让液体溅离瓶口。[/font][font=&]二、硫酸钾的作用是催化剂吗？[/font][font=&]解答：硫酸钾的作用是提高溶液沸点，从而加快有机物分解。[/font][font=&]三、硫酸铜是否是消化终点以及加碱蒸馏时的指示剂？[/font][font=&]解答：硫酸铜的作用有三个，分别为：[/font][font=&]①催化作用：加速有机物的氧化分解。[/font][font=&]②消化完全的指示剂：使液体呈现蓝绿色澄清透明状态。[/font][font=&]③蒸馏时碱性反应的指示剂：产生褐色沉淀。[/font][font=&]四、混合指示剂必须临用时混合吗？[/font][font=&]解答：混合指示剂必须临用时混合。[/font][font=&]五、请问蒸馏的时取下锥形瓶，需要用洗瓶冲洗吗？不冲洗会有误差吗？[/font][font=&]解答：需要冲洗冷凝管下端以防止产生结果误差。蒸馏后移动蒸馏液接收瓶,液面离开冷凝管下端,再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部,然后取下蒸馏液接收瓶。[/font][font=&]六、蒸馏仪器的检漏如何操作？[/font][font=&]解答：可以将蒸馏装置连接好后，在接口以及瓶塞等可能漏气的地方滴加少量水，打开电炉加热，观察有无气泡产生。[/font][font=&]七、硼酸可以多加吗？[/font][font=&]解答：不可以。按国标的要求正确操作，10mL硼酸足够。[/font][font=&]八、滴定时消耗了很多盐酸溶液，能否换浓度高的盐酸溶液滴定？[/font][font=&]解答：不能更改国标给出的滴定液浓度。蛋白质含量较高的样品可以适当减少称样量，或合理范围内减少吸取消化液的体积V3。[/font][font=&]九、空白消耗标准滴定液的体积指的是什么？[/font][font=&]解答：试剂空白实验消耗的标准滴定溶液的体积就是空白体积。[/font][font=&]十、同时有两种蛋白怎么换算？[/font][font=&]解答：同时含有多种蛋白质，且折算系数不相同时可以按复合配方食品换算蛋白质系数。[/font][font=&]结语：凯氏定氮法经典、准确，适用于食品中蛋白质的测定。但是因样品中一般会含有一些非蛋白质的含氮化合物，所以凯氏定氮法测定结果为样品中粗蛋白质含量。然而，此法实际上测的不是蛋白质含量，而是通过测氮含量来推算出样品中蛋白质的含量。在凯氏定氮法中消化操作的条件是产生误差的主要原因，因此要格外注意。在实际的生产实验中，每一步应该严格按照标准的规定来进行操作。本文为笔者日常工作实验总结所得，望对实验者有些许帮助。[/font][/size]

[b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]在蛋白质研究领域，稳定细胞系的应用已成为生产高质量结构生物学蛋白质的关键手段。随着技术的不断进步，稳定细胞系的生成与筛选方法得到了显著改进，从而推动了蛋白质生产的高效化与精准化。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]细胞系的建立和应用[/font][font=宋体][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞系[/font][/font][/b][font=宋体]因其稳定的蛋白表达和适当的翻译后修饰而被广泛用于结构生物学研究。这些细胞系能有效地生产具有复杂糖基化模式的蛋白质，这对于确保蛋白质的功能和稳定性至关重要。糖基化缺陷细胞系通过特定的基因改造，能够分泌脱糖基化糖蛋白，为蛋白质生产提供了更加纯净的原料。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]稳定细胞系的生成[/font][/b][font=宋体][font=宋体]传统的稳定细胞系生成技术如瞬时转染，虽然方法简便，但存在整合频率低、转基因沉默等问题。为了克服这些困难，研究者们开发出了一系列新技术，如细胞分选技术、位点特异性重组（如[/font][font=Calibri]FLP/FRT[/font][font=宋体]系统）、转座子系统（如[/font][font=Calibri]piggyBac[/font][font=宋体]）、慢病毒系统以及噬菌体整合酶等，提高了稳定细胞系的生成效率和稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]序列特异性基因组工程也为稳定细胞系的生成提供了新的思路。通过敲除或修饰特定的基因，研究者们能够实现对细胞功能的精准调控，从而优化蛋白质生产的效率和纯度。例如，一种同时缺乏[/font][font=Calibri]GnTI[/font][font=宋体]和谷氨酰胺合成酶（[/font][font=Calibri]GS[/font][font=宋体]）活性的[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞系被成功开发出来，为高效筛选具有[/font][font=Calibri]GS[/font][font=宋体]标记的稳定细胞系提供了有力工具。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]稳定细胞系与瞬时转染的比较[/font][/b][font=宋体]稳定细胞系相较于瞬时转染具有多个优点，包括能够进行大规模生产和保持高水平的蛋白表达稳定性。尽管瞬时转染在某些情况下能快速产生大量蛋白，但其表达水平和重复性通常不如稳定细胞系。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]展望[/font][/b][font=宋体]近年来，利用稳定细胞系高效生产结构生物学蛋白质已成为研究的热点和趋势。通过引入新技术、优化筛选方法和改进整合系统，不仅能够提高蛋白质生产的效率和纯度，还能够为结构生物学研究提供更加精准、可靠的实验工具。随着基因编辑和细胞工程技术的进步，预计在未来，通过精确的基因操作能够更有效地创建和利用稳定细胞系。这些技术的进步将促进结构生物学和药物开发中蛋白质的高效和可持续生产。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]本文由义翘神州进行整理，同时提供[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][u][font=宋体][color=#0000ff]稳定细胞系构建服务[/color][/font][/u][/url][font=宋体]，详情可点击了解！[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献：[/font][font=Calibri]Büssow K. Stable mammalian producer cell lines for structural biology. [/font][i][font=Calibri]Curr Opin Struct Biol[/font][/i][font=Calibri]. 2015 32:81-90. doi:10.1016/j.sbi.2015.03.002[/font]

新技术有助于开发更好的药物2013年07月06日 来源： 中国科技网 作者： 陈丹 科技日报讯 据物理学家组织网7月5日（北京时间）报道，瑞典卡罗林斯卡医学院的研究人员开发出一种方法，首次能够直接测量药物抵达其位于细胞中的目标蛋白的效果。《科学》杂志上描述的这项新技术，对于开发新的、改良型的原料药将是一个重大贡献。 大多数药物都是通过与一种或多种蛋白质结合并影响其功能来发挥效力的，但药物开发也因此面临两个常见问题：认定正确的目标蛋白，并设计能够有效地找出和绑定它们的药物分子。此前没有任何一种手段可用于直接测量药物分子定位和绑定其靶蛋白的效率，这使得药物开发过程的很多阶段都存在一定程度的不确定性。在某些情况下，候选药物在人体临床试验中没有达到预期效果，经证实正是由于药物分子没有与正确的蛋白质结合造成的。 而卡罗林斯卡医学院研究人员利用靶蛋白与药物分子结合时通常会变得稳定的观念，开发出了这个被称为CETSA（细胞热转移分析）的新技术。他们认为，这项技术可作为药物开发过程中一个重要的控制阶段，也可作为对其他方法的一个补充。“我们已经证明，该方法适用于多种靶蛋白，使我们能够直接测量药物分子是否抵达了其位于细胞或动物模型中的目标。”该医学院医学生物化学与生物物理学系首席研究员帕尔·诺德隆德说，“我们相信，CETSA技术最终将帮助提高许多药物的效率，并有助于开发更好的药物分子和更有效的治疗方案。” 研究人员还对可能导致细胞耐药性的工序进行了仔细检查，并表示，这一技术能够确定现有药物是否适合个别患者，因此其具有应用于个性化治疗的潜在价值。 “我们认为，该方法可以为癌症治疗提供一个重要的诊断工具，比如，从原则上来说，CETSA技术让我们能够确定哪种药物针对肿瘤中的蛋白质最有效，临床医生也可以在早期治疗阶段确定肿瘤是否已经具备了某种抵抗力、哪种治疗方案对病人更合适。”诺德隆德的同事丹尼尔·马丁内兹·莫利纳说，他带领的团队正在开展一个旨在将CETSA技术用于病患研究的项目。（记者陈丹） 总编辑圈点 体温可以测量，骨密度可以测量，就连药物绑定靶蛋白的效果也可以直接测量，让人不得不慨叹医学技术发展的速度之快。文中提到的细胞热转移分析技术，就好比狙击手的瞄准镜，能帮助狙击手调整位置以便更准确地击中目标。这样一来，不仅可以更好地提高药效，还尽可能地减少副作用，其实际应用价值非同一般。那种“杀敌一千，自损八百”的诊疗方法或将成为过去，那些原本被认为的绝症或将“绝”处逢生。 《科技日报》（2013-07-06 一版）

[font=宋体, SimSun][size=15px]蛋白质按来源可以分为动物蛋白和植物蛋白，两者所含的氨基酸是不同的。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px][/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px]一般说，植物蛋白和动物蛋白从本质上没有太大的区别，但是在氨基酸组成和数量上有一定的不同。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px][/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px]尽管植物蛋白取材来源广泛，但其蛋白的种类和相对数量与人体的要求有一定差距。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px][/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px]例如，植物蛋白中缺乏免疫球蛋白[i][/i]，谷类中则相对缺乏赖氨酸等。植物蛋白的消化、吸收要比动物蛋白差，但是植物蛋白的优势是不含有胆固醇。动物蛋白相对与人类的营养结构比较吻合，其蛋白质的种类和结构更加接近人体的蛋白结构和数量，而且一般都含有人体必需的8种氨基酸(特别是蛋制品和奶制品)，所以动物蛋白质比植物蛋白质营养价值高。[/size][/font]

最近在做公司产品含药量的释放情况，释放液是加了牛血清白蛋白的PBS液，释放后产品从释放液中取出，注射用水洗净后晾干。产品上残留药品再用乙酸乙酯超声洗脱，用UV测定乙酸乙酯中的药品浓度。因最近新换了牛血清白蛋白，后来实验数据与前比似乎有点偏低，怀疑产品上牛血清白蛋白没洗干净，对UV吸收有影响？牛血清白蛋白对UV吸光度值有什么影响呢？哪里有供应质量稳定的牛血清白蛋白？

我现在要写关于 [凯式定氮法测定饲料中粗蛋白]的毕业论文,希望广大朋友兄弟能帮帮我,谢谢!

影响凯氏定氮法测定粗蛋白准确性应注意的细节问题摘 要 阐述了影响凯氏定氮法测定粗蛋白准确性应注意的一些细节问题，并进行了相关分析，且提出了相应的解决办法。关键词 凯氏定氮法；粗蛋白；测定；准确性；问题随着饲料行业的飞速发展，饲料原料及其饲料产品的价格也居高不下。而粗蛋白的检测是评定饲料原料及其产品的重要指标之一，目前常用的为凯氏定氮法，即国家颁布的《饲料中粗蛋白的测定方法》(GB1996-6432)。但是该方法也存在着测定过成较复杂、费时等缺陷，测定时除严格按照规定程序操作外，还需要一定的实验技巧和实践经验。因此有很多饲料企业在实际操作过程中总是出现各种问题，导致检测结果异常而不知如何去分析。下面，笔者以GB/T6432—1994为准，针对影响凯氏定氮对测定结果标准性应注意的细节问题和大家共同探讨。1 试剂的配制粗蛋白测定中所用的化学药品如浓硫酸、盐酸、氢氧化钠、硼酸、硫酸铜、硫酸钾(硫酸钠)、硫酸铵、蔗糖等均为化学纯，标定盐酸标准溶液用的无水碳酸钠为基准试剂。在配制试剂前一定要用PH试纸或酸度计检测一下蒸馏水是否为中性，所用的烧杯、试剂瓶等配液设备清洗干净。1.1 盐酸标准溶液的配制配制的盐酸标准溶液尽量为低浓度，一般C(HCl)=0.02～0.05mol·L-1。低浓度虽然用量大，但可减少操作误差和读数误差。配制盐酸标准溶液一定要严格按照标准操作进行，基准无水碳酸钠已定于270～300℃灼烧至恒重，称准至0.0001g，做4～6个平行样，去掉最高值和最低值后取平均值，同时还要做空白试验。盐酸标准溶液的配制量尽量不要太多、使用时间太长，防止水分蒸发和盐酸挥发而影响其浓度的准确性。1.2 其他试剂的配制400g·L-1氢氧化钠溶液、20g·L-1硼酸溶液、混合指示剂(1g·L-1甲基红乙醇溶液与5g·L-1溴甲酚绿乙醇溶液等体积混合)等主要是在称量时要做到快、准、稳，再就是防止使用时间太长，特别是混合指示剂不要超过3个月。

原理 用硝酸汞沉淀除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，与饱和苦味酸产生沉淀反应。 试剂配制 除蛋白试剂：硝酸汞14g，加入100mL蒸馏水，加浓硝酸约2.5mL，加热助溶，待试剂全部溶解后加蒸馏水至500mL。溶液出现混浊等污染现象停止使用。 饱和苦味酸溶液：称取2 克固体苦味酸于烧杯中，用冷却的蒸馏水定容至100mL,后将定容好的溶液倒入烧杯中煮沸（沸腾即可），然后将液体冷却，待结晶析出后将上清液倒入试剂瓶中。 样品处理奶粉样品的处理： (1)将样品旋转振荡，使之充分混合； (2)准确称取6g 样品，加入50ml 中性温水（60℃左右），充分溶解样品。 原料奶样品：将样品充分混合即可。 操作方法 取5mL 待检处理过的样品，放入干净干燥的平皿或其他容器内，加除蛋白试剂5mL 混合均匀，边加边摇动，不可产生大体积蓄状物，将摇匀的液体用快速定量滤纸过滤于试管中，收集滤液约3mL左右。 然后沿试管壁慢慢加入饱和苦味酸溶液约0.5mL（每加0.5mL约需要30-40秒），切勿使滤液与苦味酸混合(加入的苦味酸溶液层不超出总液体体积的1/3)。 结果判断 方法判定一（沉淀圈判定）：加入苦味酸后，在10 秒内逆光或在黑色背景下）上下左右移动不同方位观察产生沉淀圈情况，无沉淀圈判定为阴性，有明显沉淀圈判定为阳性。 按产生沉淀圈情况进行“阴性、阳性”判定：

用硝酸汞沉淀除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，与饱和苦味酸产生沉淀反应。 试剂配制 除蛋白试剂：硝酸汞14g，加入100mL蒸馏水，加浓硝酸约2.5mL，加热助溶，待试剂全部溶解后加蒸馏水至500mL。溶液出现混浊等污染现象停止使用。 饱和苦味酸溶液：称取2 克固体苦味酸于烧杯中，用冷却的蒸馏水定容至100mL,后将定容好的溶液倒入烧杯中煮沸（沸腾即可），然后将液体冷却，待结晶析出后将上清液倒入试剂瓶中。 样品处理奶粉样品的处理： (1)将样品旋转振荡，使之充分混合； (2)准确称取6g 样品，加入50ml 中性温水（60℃左右），充分溶解样品。 原料奶样品：将样品充分混合即可。 操作方法 取5mL 待检处理过的样品，放入干净干燥的平皿或其他容器内，加除蛋白试剂5mL 混合均匀，边加边摇动，不可产生大体积蓄状物，将摇匀的液体用快速定量滤纸过滤于试管中，收集滤液约3mL左右。 然后沿试管壁慢慢加入饱和苦味酸溶液约0.5mL（每加0.5mL约需要30-40秒），切勿使滤液与苦味酸混合(加入的苦味酸溶液层不超出总液体体积的1/3)。 结果判断 方法判定一（沉淀圈判定）：加入苦味酸后，在10 秒内逆光或在黑色背景下）上下左右移动不同方位观察产生沉淀圈情况，无沉淀圈判定为阴性，有明显沉淀圈判定为阳性。 按产生沉淀圈情况进行“阴性、阳性”判定：

凯氏定氮法测牛乳蛋白质含量时，蒸馏时间一般为（）min？请教

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使用微量定氮法测定食品中的蛋白质，蒸馏结束后，大家一般会如何清洗反应室？是先旋开下面的塞子，还是先旋开上面进样口的塞子？理由是什莫？

分离蛋白样品，用的裸管，磷酸缓冲液PH值2.5，重复性非常不稳定，每天连续进样时出峰时间一直前移，每次进样用氢氧化钠冲洗2min。请大家帮帮忙，急！谢谢！

杜马斯定氮仪 测量固体样品直接出结果 如果测水溶性蛋白应该怎么计算？ 如：样品质量 1g 、最终定容体积 100ml、进样量100ul

本人刚接触气相没多久 最近做了一个蛋白液的乙腈残留，参考了药典白介素的方法，精密量取1ml顶空进样(1ml定量环)，80℃平衡30min，4ml/min柱流速，45摄氏度等温，分流比5:1。对照为0.0004%乙腈，超纯水稀释，峰面积大约35左右。样品为蛋白液，其中有多种无机盐，twen80。问题:现在做了挺多样品，对照品出峰重现性还可以接受，倒是样品峰面积直接差到姥姥家了，几乎每次都相差很大，一个峰面积为5，下一针可能就是20！求有这方面经验的大神不吝赐教啊！

食品中蛋白质含量测定仪的优点主要体现在以下几个方面：　　检测速度快：能够在短时间内完成大量样品的检测，大大提高了检测效率，使食品生产厂家能够快速获取检测结果，及时调整生产策略。　　操作简单：仪器操作简单易用，用户只需按照说明书进行操作即可完成检测，无需复杂的操作步骤和专业技能，降低了操作难度。　　准确度高：采用先进的检测技术，如光谱技术、化学分析方法等，能够确保测量结果的准确性和可靠性，为食品生产厂家提供准确的数据支持。　　应用广泛：适用于各类食品中蛋白质含量的检测，如乳制品、肉制品、豆制品等，满足了不同食品生产厂家的检测需求。　　安全性高：使用食品中蛋白质含量测定仪可以避免直接接触样品，降低了交叉感染的风险，保障了检测人员的安全。　　智能化程度高：一些先进的食品中蛋白质含量测定仪还采用了安卓智能操作系统，具有网线连接、Wi-Fi联网上传、GPRS无线远传等功能，可以快速上传数据，实现远程监控和管理。　　稳定性强：仪器具有稳定的工作性能和较长的使用寿命，保证了长期使用的可靠性。　　综上所述，食品中蛋白质含量测定仪具有检测速度快、操作简单、准确度高、应用广泛、安全性高、智能化程度高和稳定性强等优点，为食品生产和质量控制提供了有力的支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405151149314403_9648_4214615_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

[em09501]，想分析下蛋白质中二硫键的断裂情况，求一种用化学滴定方法进行定量标定的方法

[color=#00008B]据中国公众科技网消息，牛津大学的科学家发现了使蛋白质变得不稳定的秘密。他们对于蛋白质生物功能被破坏的“临界条件”进行了基础性研究，对科学界许多领域，包括生物学、材料科学以及医学都会产生深远影响。特别是它对于一些由蛋白质错叠所引发的疾病病因，以及如何模仿软骨组织和胶原组织的特性给出了新的视角.[/color]这项发现来源于牛津大学动物学系教授FritzVollrath和DavidPorter博士所开发的量子力学模拟实验。DavidPorter博士表示，水与蛋白质的交互作用在生物学中是至关重要的，并且水-蛋白的交互作用变得不稳定的那一点，也就是最为重要的“临界条件”。我们利用这些模拟实验来测试在特定蛋白质中水与氨基化合物之间氢键的物理和化学性质。从我们的模型中得出的预测结果可以被换算到真实的生物应力状态下(温度、机械载荷以及化学条件)，这能导致此蛋白变得不稳定并丧失功能。

本文引用自cheney《蛋白胨和胰蛋白胨简介》蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大。不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽，因此存在着各种蛋白胨，一般来说，用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（酪蛋白、肉类）和植物蛋白（豆类）等两种。能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。因此，蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨，而大豆蛋白胨等则是植物性蛋白胨。动物性来源的蛋白胨还有：蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨等。 　　不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。胰蛋白胨，又称胰酪蛋白胨（Casein Tryptone）、胰酶消化酪蛋白胨（Pancreatic digest of casein），是一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等，可配制各种微生物培养基，用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定，以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。胰蛋白胨还广泛应用于高品质的抗生素、维生素、医药工业，氨基酸、有机酸、酶制剂、黄原胶等发酵工业，生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大，临床用于抗炎消肿，工业上用于皮革制造，生丝处理，食品加工。在国际市场上，胰蛋白胨也属于货紧价昂的短线品种之一。 　　胰酪蛋白胨质量标准及其检验标准： 　　常规各项理化指标： 　　1. 澄清度（磷酸盐、碱性沉淀）：无沉淀、澄清 　　2. 2%水溶液：透明 　　3. 酸碱度：6－7 　　4. 氨基氮：≥3% 　　5. 色氨酸：≥0.8% 　　6. 胨含量：≥80% 　　7. 总氮：≥13% 　　8. 水份：≤5% 　　9. 灰份：≤6% 　　10. 氯化钠：≤0.2%胰蛋白胨特指用胰蛋白酶酶解酪蛋白生成的蛋白胨产物，与一般蛋白胨的区别在于酶解工艺处理上，属于水解度更高、胨分子量更小更均衡的蛋白胨。

分析凯氏定氮法测定样品蛋白质含量时误差的主要来源以及应注意的事项。答： 凯氏定氮仪测定蛋白质含量的误差来源可能是样品、催化剂种类和用量、消化的时间、加碱液后的操作、蒸馏加热、清洗凯氏定氮仪的过程、凯氏定氮仪的气密性、氨气是否完全蒸馏出来；硼酸是否封住蒸馏管口、试剂的准确性、滴定终点的判断、滴定盐酸的浓度准确性等。注意事项：1、 样品的取用量应适中，以免影响后续反应。2、 加入的催化剂硫酸钾和硫酸铜的配比适宜。3、 催化剂的添加量一定要准确，否则催化速度不一致，导致反应程度和挥发的氨不一样，误差大。4、 消化过程中，消化的时间应该充分，确保消化完全，消化至溶液呈现透明的浅蓝色。5、 消化后要将液体充分冷却，定容到容量瓶中备用。6、 消化之前检查凯氏定氮仪的气密性良好，后用蒸馏水清洗凯氏定氮仪，要充分清洗。7、 消化过程中，加碱液后要迅速关闭进样口，防止反应放出的氨气逸出。8、 消化过程中，火焰的温度要适当，太小加热过慢，太大容易导致溶液暴沸甚至从进气口溢出。9、 消化过程中，用硼酸封住蒸馏管口，防止氨气逸出。10、消化过程中，加热应保持均衡，冷凝水流速控制均衡，防止出现倒吸。11、收集完氨气后，应用蒸馏水将蒸馏管口清洗，以收集在管壁残余的氨气。12、滴定的时候，要控制滴定的速度由快到慢，准确判断滴定终点。13、三次平行，保证收集的氨气的量应该相差差不多。

现在人们是越来越注重食品健康了，于是任何关于某种食品不健康的说法都能吸引一堆眼球。有人说自己买的乳清蛋白粉不容易溶在水中，立刻有人跳出来说千万不能用热水，蛋白质会变性。于是有一堆看起来对蛋白质有一点了解的人纷纷附和，大谈如何保持蛋白不变性。 很多人看到“蛋白变性”这个词，就望文生义地想到“变质”“变坏”，仿佛“变性”了就有害健康了。最常见的还有一个例子，反对微波炉的人总是说微波炉会导致蛋白质的变性。 蛋白质通常是由20种不同的氨基酸组成的，不同的蛋白质只是各种氨基酸的组成和连结方式不同。因为各种氨基酸的理化特性不同，它们会互相影响，最后会像积木一样形成一定的空间结构。通常也就说是蛋白质的天然构象。如果因为某种原因，蛋白质分子失去了它的天然构象，被称为变性。而蛋白质被吃到肚子里，首先要被水解（消化）成一个个的氨基酸分子，才能被吸收。而在多数情况下，变性的蛋白更容易被水解。可见，蛋白质变性对于食物来说，不仅不是“变质”，而且是好事。 我们所吃的所有蛋白，比如肉、鱼、鸡蛋、牛奶、豆浆、豆腐，作熟的过程就是蛋白质变性的过程。豆浆中的蛋白质不变性是变不成豆腐的。而作为商品出售的各种蛋白粉，多数都经过了高温灭菌和干燥处理，早已经变性了。对于某些产品而言，适当的工业处理甚至能够提高蛋白质的品质。比如大豆中的蛋白，其蛋白质质量指数（蛋白质消化校正计分）是0.91 ，但是经过分离纯化高温干燥等处理之后，就能达到1了。还有相当多的蛋白质产品甚至经过了酶解处理，以获得更好的理化特性。那些蛋白质，不仅是空间构象，连化学结构都变了，更是“变性”得深入。

凯氏定氮法测定蛋白质含量中，在硼酸（20g/L）中加入甲基红和溴甲芬绿混合指示剂（1:5比例）后显什么颜色，为什么一会是蓝色一会是灰色呢，还有滴定终点为什么从蓝色直接到黄色了，没有灰色呢？

蛋白质是蛋白粉质量的一个重要的检测指标，目前蛋白质检测化学方法主要有凯氏定氮法、杜马斯燃烧法、双缩脲法、福林(Folin)——酚试剂法等。其中在食品领域以凯氏定氮法最为常用，本文主要是使用凯氏定氮仪测定样品含量。1 实验部分1.1仪器和试剂K1100F凯氏定氮仪；SH420石墨消解仪；万分之一电子天平；浓硫酸（98%）；催化剂片（硫酸铜和硫酸钾）；40%氢氧化钠；2%硼酸；0.0500mol/l硫酸标准滴定溶液；甲基红-溴甲酚绿混合指示剂；1.2方法1.2.1称样：三个样品，分别称取浓缩蛋白粉0.3000g，分离蛋白粉0.2000g，乳品蛋白粉0.2000g（区别在于三者工艺不同），连同无灰滤纸一起放于消化管中。每个消化管中再分别加入1片催化剂片，8ml浓硫酸。同时做空白。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307301053_454682_1873342_3.bmp1.2.2消解 ：将样品放于消解仪上，盖好排废罩，打开冷凝水。蛋白粉样品消解过程不易上冲，所以采用直线升温，直接设定消解温度420，消解时间90min。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307301106_454684_1873342_3.bmp1.2.3 蒸馏 滴定：消解冷却好的样品，放于定氮仪，设置好相应参数，直接测试，仪器自动蒸馏滴定，打印计算结果。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307301110_454686_1873342_3.bmp 2 数据与分析乳品蛋白编号质量蛋白质（%）RSD(%)10.193388.51390.2420.194488.462330.198988.264040.191688.085950.195588.144260.192887.9907分离蛋白7

最近在做用气相测白蛋白中有机溶剂的残留量.样品只在水中溶解,所以选择的溶剂为水,溶解后为白色胶体状. 采用80度平衡加热20分钟顶空进样.可是进样后发现白蛋白变性了,变成了固体.虽然有机溶剂有检出,但是很担心,溶剂会不会在蛋白变性的过程中封存在样品内啊,此方法可行吗.

蛋白质与多肽蛋白质粉 人类的营养物质有许多种类，最为重要的为蛋白质，碳水化合物和脂肪，其它则是微量营养物质，如维生素、电解质和微量元素等。虽然每一种营养物质对人体来说都是不可或缺的，但绝大多数的营养学家都会有充分的理由认为，真正最重要的营养物质是蛋白质。一、蛋白质是构成人体的基本物质。 蛋白质是由氨基酸通过肽链相连而构成的，它是人体包括骨骼、肌肉、皮肤和脑的重要物质基础，同时氨基酸也是生成核酸的基本物质。我们知道，核酸既形成遗传密码，也是体内储存能量的基本物质。因而从根本上说，人体是由蛋白质组成的。构成人体蛋白质的生理功能概括有如下三个方面：1）人体组织的主要构成成份：如肌肉、骨骼、血液、皮肤、神经、肝、心等等。2）具有特殊生理功能：可以这样说，人类的一切生理活动都与蛋白质有关。如酶蛋白能催化机体的一切化学反应，包括蛋白质、脂肪、碳水化合物的消化等；载脂蛋白运送脂肪；血红蛋白运送氧；激素蛋白调节代谢与生理活动包括情感；血浆白蛋白调节渗透压、运输金属离子、胆红素和抗生素等。3）供给机体能量：成年人每日约需要更新400g蛋白质，每克蛋白质彻底分解能释放出约4 Kcal的热量。4）为机体提供氮原料：人体内所必需的嘧啶、嘌呤、肌酸、胆碱、肾上腺素、肉碱、牛磺酸等，都是以多肽、氨基酸为原料的。表1. 世界粮食组织（FAD）和世界卫生组织（WHO）根据中国人的体质和膳食结构推荐的中国人蛋白质的摄入量（RNLs）。年 龄蛋白质RNL（g/d） 初生—6个月 1.5-3 1岁 35 3岁 45 5岁 55 7岁 60 9岁 65 10-16岁 75-85 成年女性 65 成年男性 75 妊娠 +15 乳母 +20 根据统计资料：由于贫困、工作紧张、精神压力、减肥节食、以及肠胃疾病、癌症、贫血、肾病、各种结核病、肝硬化、腹水、烧伤、失血等，以及老龄人均不同程度地存在着蛋白质的摄入不足。 上世纪80年代以来，我国营养学家对7个省18个贫困地区，1万名学龄前儿童进行了为期4年的连续调查，发现营养不良现象非常严重，其中蛋白质的摄入量不足WHO规定的60%。近年社会医学工作调查，在发达地区由于生活节奏加快，精神压力异常增加，以及办公室白领阶层的减肥节食，也导致蛋白质摄入不足，代谢异常的人群增加。二、蛋白质缺乏的体征和临床症状 单纯的蛋白质营养不良又叫加西长病，这或许是来源于非洲的单词，单纯的能量不足时叫消瘦；临床上通常把这两种现象叫单纯性蛋白质能量营养不良症或PEM。单纯的PEM症在临床上较少见到，但在慢性消耗性疾病患者中则常见，尤其是在癌症患者和艾滋病的患者中几乎占到90%以上。 现代都市和贫困地区存在着相当数量的蛋白质营养不良族群，他们的临床表现主要是能量损失或不足，如体力不支、睡眠不安、怕冷、怕热、性冷淡、无法进行正常的体力劳动和运动，其次为肌肉组织萎缩、皮肤松驰；腿部、脸部易水肿、脂肪肝、无名皮疹、伤口愈合不良、记忆力下降、视力减弱等。再者免疫力低下易感冒、感染。在做血检时通常会发现这些族群的血浆蛋白处于正常值的下限，其中白蛋白、转铁蛋白、甲状腺素结合前体蛋白和视轴蛋白（retinol-binding protein）均处于低水平时，患者易于感染各种疾病并且出现早衰症状，如果是儿童则感染后死亡率增加30%-40%，对于这类人群WHO的专家最好的建议就是迅速补充优质（或全价）的蛋白质。三、优质蛋白质和劣质蛋白质的区别。 要弄清楚何为优质蛋白质？何为劣质蛋白质？我们要引入什么是必需氨基酸的概念。营养生理学家、生化学家发现构成人体蛋白质的氨基酸共有21种，而这些氨基酸中其中有4种是可以由体内含碳和含氮底物自己合成的，被称为非必需氨基酸，还有10个必需的氨基酸，是人类机体无法制造需要从饮食中摄取的，另有7个是介于这两者之间的被称为条件必需氨基酸。表2. 必需、条件必需和非必需氨基酸 必需氨基酸条件必需氨基酸 非必需氨基酸 亮氨酸牛黄酸 丙氨酸 异亮氨酸酪氨酸 谷氨酸 缬氨酸甘氨酸 天冬氨酸 赖氨酸丝氨酸 天冬酰胺 苯丙氨酸（酪氨酸）脯氨酸 蛋氨酸（半胱氨酸）谷氨酰酸 苏氨酸 胱氨酸 色氨酸 组氨酸 精氨酸 虽然蛋白质广泛存在于许多动物性和植物性食物中，但是必需氨基酸的构成异差很大，WHO把“蛋白质其组成恰好符合人体需要”的蛋白质称为理想蛋白质，在自然界这种理想的蛋白质普遍认为是鸡蛋蛋白，因此就把鸡蛋蛋白作为衡量蛋白质优劣的参照蛋白，科学家把它作为一把尺子来衡量各种蛋白质，并制定出标准，以4种必需氨基酸为最低限来决定其优劣，即色氨酸、苏氨酸、赖氨酸或者蛋氨酸（半胱氨酸）。 通过比较科学发现，肉、鱼、蛋、牛奶、乳酪含有优质蛋白，大豆、花生、豌豆也含有较多的高质量蛋白。进一步研究发现它们都不够完美，因而要求大家对优质的动物性蛋白和植物性蛋白进行了科学搭配才是最完美的全价蛋白质（complete protein）。表3. 部分高质量蛋白