实验室需要购买长焦显微镜,用于裂纹扩展测量。国内外产品都可以,当然最好是国内的。比较好的公司有哪些?大概价位是多少可以链接或者邮箱给我
共聚焦显微镜与普通光学显微镜的比较显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同,可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光(紫外线显微镜以紫外光)为光源,后者则以电子束为光源。普通光学显微镜与激光共聚焦显微镜同属于光学显微镜。 一、普通光学显微镜 普通生物显微镜由3部分构成,即:①照明系统,包括光源和聚光器;②光学放大系统,由物镜和目镜组成,是显微镜的主体,为了消除球差和色差,目镜和物镜都由复杂的透镜组构成;③机械装置,用于固定材料和观察方便。 显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数,还与显微镜的分辨力(resolution)有关,分辨力是指显微镜(或人的眼睛距目标25cm处)能分辨物体最小间隔的能力,分辨力的大小决定于光的波长和镜口率以及介质的折射率,用公式表示为: R=0.61λ /N.A. N.A.=nsinα/2 式中:n=介质折射率;α=镜口角(标本对物镜镜口的张角),N.A.=镜口率(numeric aperture)。镜口角总是要小于180?,所以sina/2的最大值必然小于1。 制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78,所用介质的折射率越接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说,介质为空气,镜口率一般为0.05~0.95;油镜头用香柏油为介质,镜口率可接近1.5。 普通光线的波长为400~700nm,因此显微镜分辨力数值不会小于0.2μm,人眼的分辨力是0.2mm,所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X。
请问倒置荧光显微镜与激光共聚焦显微镜功能上有什么区别现在有一台倒置荧光显微镜不知道能不能用来进行钙离子荧光探针标记的测定,我看文献上大多使用激光共聚焦显微镜,激发波长488nm,不知道倒置荧光显微镜能不能实现相同的目的
如何延长金相显微镜的使用寿命(显微镜的使用方法)使用时显微镜时应注意以下几点:(现仅以金相显微镜的使用方法为例作为说明)1、条件许可情况下,建议您的试验室应具备三防条件:防震(远离震源)、防潮(使用空调、干燥器)、防尘(地面铺上地板);电源:220V±10%,50HZ;温度:0°C—40°C。2、金相显微镜调焦时注意不要使物镜碰到试样,以免划伤物镜。3、当载物台垫片圆孔中心的位置远离金相显微镜物镜中心位置时不要切换物镜,以免划伤物镜。4、亮度调整切忌忽大忽小,也不要过亮,影响灯泡的使用寿命,同时也有损视力。5、所有(功能)切换,动作要轻,要到位。6、关机时要将亮度调到最小。7、非专业人员不要调整照明系统(灯丝位置灯),以免影响成像质量8、更换卤素灯时要注意高温,以免灼伤;注意不要用手直接接触卤素灯的玻璃体。9、关机不使用时,将物镜通过调焦机构调整到最低状态。
[url=http://www.leica-microsystems.com/cn/%E4%BA%A7%E5%93%81/%E5%85%B1%E8%81%9A%E7%84%A6%E6%98%BE%E5%BE%AE%E9%95%9C/]激光共聚焦显微镜[/url]用于对样品(如贴片细胞)进行荧光成像,一般具有几条不同波长的激光作为激发光,研究人员可根据自身不同的实验需要来选择合适的激光进行荧光成像。共聚焦显微镜相对于传统的荧光显微镜具有极大的优势。首先,激光共聚焦显微镜具有极高的层切能力,可以对样品进行三维成像。与普通荧光显微镜不同,共聚焦显微镜可以对待观察样品的某一平面清晰成像,通过改变样品的垂直位置对样品的不同平面进行依次成像,还可对样品的特定平面进行实时动态成像。其次,共聚焦显微镜相对于传统的荧光显微镜具有极高的分辨率,基本达到了光学显微镜分辨率的理论极限。再次,由于激光共聚焦显微镜基于单点扫描的成像模式,因此可以在此基础上开发出其他传统荧光显微镜不能达成的技术,如荧光漂白恢复技术,荧光相关光谱技术等。共聚焦显微镜在生物学和化学领域具有极其广阔的应用,如对样品的荧光信号进行定性定量分析,对组织样品进行三维结构观察等。
1.聚光共聚焦显微镜能否如扫描电镜般,获得断口的清晰图像?2.激光共聚焦显微镜能否如普通金相显微镜获得金相谱图?请不吝赐教。
光学显微镜@长霉的条件及@保养方法%%光学显微镜属精密仪器,在工矿企业和科研院校运用的十分广泛,对运用和寄存环境有着较高的需求。湿润、霉菌、氧化腐蚀及工业废气等都会对光学显微镜形成损害。光学显微镜长霉的条件:湿度: 环境相对湿度大于60%霉菌即可成长。大于65%时, 成长加速,湿度达80-95%时, 是霉菌的高发环境。温度: 霉菌菌丝体在8℃以上环境温度即可成长, 12℃以上成长加速,当温度在10℃以上, 湿度在60%以上的环境下, 霉菌即可对物品形成损害。当温度在20-35℃, 湿度在75-95%时, 霉菌即可呈爆发性成长。养分物质: 霉菌对养分物质需要的量很少, 碳、氮、钾、磷、硫、镁等是霉菌的必需养分物质, 霉菌还能吸收一切的无机盐来历的根本元素。当物品富含上述霉菌所需的养分成份, 而环境的温度湿度又适合孢子发育时, 即可长霉。因而,在工作中安放光学显微镜时应尽可能远离上述使光学显微镜长霉的条件。在使用光学显微镜过程中应特别注意做好保养工作。1、严厉依照有关操作规矩运用显微镜,防止因运用不当形成损毁。2、 显微镜在贮存和运用过程中,遍及存在着生霉起雾疑问,霉和雾会使显微镜的视场含糊,分辩率降低。为了使显微镜坚持杰出的作业状况,延伸运用寿命,显微镜的作业环境应坚持清洗、枯燥、防尘。3、显微镜在每次运用结束后应及时做好清洗作业,特别是目镜、物镜等简单污染的光学部件,如发现体现外表有尘埃、指纹、脏物等,应及时用镜头纸清洗洁净。4、显微镜作业室最佳能设备空调、抽湿及防尘设备。5、如发现光学部件内部有生霉等表象,最佳及时联络有关厂家派人清洗、维修。
[size=3]1台真实色共聚焦扫描显微镜综合了以下6种设备的功能:[U]高分辨率光学显微镜SEM扫描电镜ROUGHNESS TESTER表面粗糙度仪3-D PROFILER 三维表面形貌轮廓仪STEP TESTER 台阶仪R.G.B不同波长单色激光共聚焦显微镜[/U]特点:1.真实颜色、形状同时准确的立体观察成像,避免同色异像,同像异色现象的产生;2.根据样品选择最合适R.G.B三原色进行单波长测定;3.高精度彩色图像输出1280*1024;4.图像拼接实现高放大、高分辨、大视场;5.每秒85桢的高速图像读取;6.高度差、粗糙度、三维尺寸等的直接测量。产品应用:MEMS、半导体、液晶相关产品、金属材料、化学材料、其他各种应用领域。[/size][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=64576]真实色共聚焦显微镜材料观测图片[/url]
分子级高分辨率的激光扫描共焦显微镜和结构照明显微镜是在细胞生物学和其他相关领域强有力的研究工具,但是它们高昂的价格也使很多潜在用户望而却步。波士顿大学的科学家最近开发出一种显微新技术 (HiLo Microscopy),能够将普通的广域荧光显微镜变成可与激光扫描共焦显微镜和结构照明显微镜相媲美的高分辨率生物显微镜。这一技术包括一个简单的可以在均衡光源和结构光源之间自由转换的显微镜附件和一套功能强大的图像处理软件。该软件仅通过处理在均衡光源和结构光源条件下拍摄的两张分辨率不同的照片就可以得到全分辨率的三维图像。这一技术可用于任何现有的广域荧光显微镜,而成本大大低于激光扫描共焦显微镜和结构照明显微镜。由于成像机理简单,该技术的成像速度是常用的生物显微技术中最快的,而且操作简便,不受样本移动的影响。波士顿大学目前正在积极寻求企业合作,争取早日将这一突破性的技术推向市场。
[center]真实色共焦显微镜与激光扫描共焦显微镜主要特点对比[/center]真实色共焦显微镜与激光扫描共焦显微镜,二者在成像原理上基本是一样的,最大不同之处是照明光源不同。1、激光扫描共焦显微镜激光扫描共焦显微镜的照明光源是激光,即单色光。其实际成像过程是根据被观察物体对该单色激光的反射光的强弱来成像的。由于是单色光照明,不能分辨颜色,对于在同一试样的同一视场内,颜色不同,但对该单色激光反射光强度相同的不同组织或成分不能分辨。容易产生同相异色,同色异相的现象,不利于对微观组织和成分的正确分辨。2、真实色共焦显微镜真实色共焦显微镜的光源是氙光源,即白光。其实际成像过程是在白光照明的条件下,对物体形貌(包括颜色)进行综合的成像。 由于是多色光照明和成像,真实色共焦显微镜能够更真实的反应物体的颜色和形貌,避免了激光扫描共焦显微镜产生的同相异色,同色异相的现象发生,观察者可以通过颜色,分辨和判断试样的成分和组织。在这方面,其分辨率远强于激光扫描共焦显微镜 综合分析:在有颜色差异的试样的观察条件下,真实色共焦显微镜避免了激光扫描共焦显微镜产生的同相异色,同色异相的现象发生,观察者可以通过颜色,分辨和判断试样的成分和组织。在这种条件下,真实色共焦显微镜的分辨率高于激光扫描共焦显微镜。在单色试样的观察条件下,分辨率才接近各自的技术指标。然而,在实际观察的试样中,绝大多数不同的组织和成分都是有颜色差异的。对应于没有颜色差异或颜色差异小的试样,可以通过人为的染色(例如腐蚀处理),提高图像的分辨能力。在这一方面,激光扫描共焦显微镜是无能为力的。 另外,分辨率是在特定条件下所能达到的一项技术指标,当在实际使用中,不满足该技术条件时(实际是常常不能满足),其分辨率是达不到所给出的数值。
国内有显微镜厂商开发自动对焦显微镜系统吗?有的话,可否提供一些信息?
最近观察了一段时间激光共聚焦显微镜版,人气不是很旺。当初是我提出来要将激光共聚焦显微镜单独开版,主要是考虑到国内激光共聚焦显微镜的用户日益增多,而且激光共聚焦显微镜的应用领域与光学显微镜有一定差异,所以作为一个新的设备,应该有很多可以讨论和交流的。但是目前讨论交流确实存在一些问题。激光共聚焦显微镜的用户大头在生物医学研究所和大型医院,似乎这些用户群体不太愿意在论坛上交流,另一个应用领域在材料上,但是国内材料研究领域拥有激光共聚焦显微镜还是少数,所以真正活跃的用户不多。有感于此,建议将激光共聚焦显微镜版划到我的光学显微镜版作为一个子版,我来管理。
激光共聚焦扫描显微镜简介一、 激光共聚焦显微镜的基本组成激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope LSCM)是20世纪80年代发展起来的一项具有划时代意义的高科技新产品,是当今世界最先进的细胞生物学分析仪器。激光共聚焦显微镜利用激光作为光源,在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦的原理和装置,以及通过针孔的选择和PMT的收集,并带有一套对其所观察到的对象进行数字图像分析处理的系统软件。与传统光学显微镜相比,它具有更高的分辨率,实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点。所以它问世以来在生物学的研究领域中得到了广泛应用。激光共聚焦显微镜主要有四部分组成:1、显微镜光学系统。2、扫描装置。3、激光光源。4、检测系统。整套仪器由计算机控制,各部件之间的操作切换都可在计算机操作平台界面中方便灵活地进行。1.1 显微镜光学系统 显微镜是LSCM的主要组件,它关系到系统的成象质量。显微镜光路以无限远光学系统可方便地在其中插人光学选件而不影响成象质量和测量精度。物镜应选取大数值孔径平场复消色 差物镜,有利于荧光的采集和成象的清晰。物镜组的转换,滤色片组的选取,载物台的移动调节,焦平面的记忆锁定都应由计算机自动控制。1.2 扫描装置 LSCM使用的扫描装置在生物领域一般为镜扫描。由于转镜只需偏转很小角度就能涉及很大的扫描范围,图象采集速度大大提高,512×512画面每秒可达4帧以上,有利于那些寿命短的离子作荧光测定。扫描系统的工作程序由计算机自动控制。1.3 激光光源 LSCM使用的激光光源有单激光和多激光系统。多激光器系统在可见光范围使用多谱线氩离子激光器,发射波长为457nm、488nm和514nm的蓝绿光,氦氖绿激光器提供发射波长为543nm的绿光,氦氖红激光器发射波长为633nm的红光,新的405nm半导体激光器的出现可以提供近紫外谱线,但是小巧便宜而且维护简单。1.4 检测系统 LSCM为多通道荧光采集系统,一般有三个荧光通道和一个透射光通道,能升级到四个荧光通道,可对物体进行多谱线激光激发,样品发射荧光的探测器为感光灵敏度高的光电倍增管PMT,配有高速12位A/D转换器,可以做光子计数。PMT前设置针孔,由计算机软件调节针孔大小,光路中设有能自动切换的滤色片组,满足不同测量的需要,也有通过光栅或棱镜分光后进行光谱扫描功能的设置。二、激光共聚焦显微镜的特点以及在生物领域的应用传统光学显微镜相比,激光共聚焦显微镜具有更高的分辨率,实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点,在对生物样品的观察中,激光共聚焦显微镜有如下优越性:1、对活细胞和组织或细胞切片进行连续扫描,可获得精细的细胞骨架、染色体、细胞器和细胞膜系统的三维图像。2、 可以得到比普通荧光显微镜更高对比度、高解析度图象、同时具有高灵敏度、杰出样品保护。3、***图象的获得,如7 维图象(XYZaλIt): xyt 、xzt 和xt 扫描,时间序列扫描旋转扫描、区域扫描、光谱扫描、同时方便进行图像处理。 4、细胞内离子荧光标记,单标记或多标记,检测细胞内如PH和钠、钙、镁等离子浓度的比率测定及动态变化。5、荧光标记探头标记的活细胞或切片标本的活细胞生物物质,膜标记、免疫物质、免疫反应、受体或配体,核酸等观察;可以在同一张样品上进行同时多重物质标记,同时观察; 6、对细胞检测无损伤、精确、准确、可靠和优良重复性;数据图像可及时输出或长期储存。 由于共聚焦显微镜的以上优点,激光共聚焦显微镜在以下研究领域中应用较为广泛:1、细胞生物学:如:细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构和分布变化、细胞凋亡机制;各种细胞器、结构性蛋白、DNA、RNA、酶和受体分子等细胞特异性结构的含量、组分及分布进行定量分析;DNA、RNA含量、利用特定的抗体对紫外线引起的DNA损伤进行观察和定量;分析正常细胞和癌细胞细胞骨架与核改变之间的关系;细胞黏附行为等 2、生物化学:如:酶、核酸、受体分析、荧光原位杂交、杂色体基因定位等,利用共聚焦技术可以取代传统的核酸印迹染交等技术,进行基因的表达检测,使基因的转录、翻译等检测变的更加简单、准确。3、药理学:如:药物对细胞的作用及其动力学;药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量 4、生理学、发育生物学:如:膜受体、离子通道、离子含量、分布、动态;动物发育以及胚胎的形成,骨髓干细胞的分化行为;细胞膜电位的测量.荧光漂白恢复(FRAP)、荧光漂白丢失(FLIP)的测量等。 5、遗传学和组胚学:如:细胞生长、分化、成熟变化、细胞的三维结构、染色体分析、基因表达、基因诊断; 6、神经生物学:如:神经细胞结构、神经递质的成分、运输和传递; 7、微生物学和寄生虫学:如:细菌、寄生虫形态结构; 8、病理学及病理学临床应用:如:活检标本的快速诊断、肿瘤诊断、自身免疫性疾病的诊断; 9、免疫学、环境医学和营养学。如:免疫荧光标记(单标、双标或三标)的定位,细胞膜受体或抗原的分布,微丝、微管的分布、两种或三种蛋白的共存与共定位、蛋白与细胞器的共定位;对活细胞中的蛋白质进行准确定位及动态观察可实时原位跟踪特定蛋白在细胞生长、分裂、分化过程中的时空表达,荧光能量共转移(FRET)。
各位大神哪个人知道共聚焦显微镜的原理
用光学显微镜可以得到物体移动微米级的距离造成的离焦图像吗?
[url=http://www.f-lab.cn/microscopes-system/rs-g4.html][b]脑切片共聚焦显微镜[/b][/url]是专业为大脑研究设计的[b]脑切片共聚焦成像显微镜[/b],非常适合大面积[b]脑切片共聚焦成像[/b],具有[b]共聚焦反射成像[/b]CRM和[b]共聚焦荧光成像[/b]CFM模式,[color=#333333][color=#333333]方便获得活体组织共聚焦图像.[/color][/color]脑切片共聚焦显微镜采用全球领先的图像缝合技术和条带图像镶嵌技术,快速创建亚像素精度的细胞尺度图像,并能够快速从脑切片图像中定位某个区域.脑切片共聚焦显微镜还可以用于动物研究,得益于其较大的成像视场,能够快速获得动物各个生长阶段的共聚焦图像和荧光细胞突出的图像,成像面积覆盖微米分辨率到30x30mm,实现微观成像和宏观成像.脑切片共聚焦显微镜还提供785nm和830nm激光,用于动物活体成像,成像传统深度高达250微米.脑切片共聚焦显微镜可广泛用于病理学研究,提供共聚焦反射成像CRM和共聚焦荧光成像CFM,有效获得活体组织图像.[img=脑切片共聚焦显微镜]http://www.f-lab.cn/Upload/RS-G4.jpg[/img][img=脑切片共聚焦显微镜]http://www.f-lab.cn/Upload/rsg4brain-section-.JPG[/img]脑切片共聚焦显微镜:[url=http://www.f-lab.cn/microscopes-system/rs-g4.html][b]http://www.f-lab.cn/microscopes-system/rs-g4.html[/b][/url]
显微镜观察可以有明场、暗场、偏光、相差等观察方式,不同功能显微镜分别用不同的观察方式,而且方法也不同。下面介绍一下暗场的观察方法。1.取下明场聚光镜U-AAC,或U-SC3,将暗场聚光镜U-DFA安装在聚光镜支架上;2.使物镜进入光路;3.打开孔径光阑;4.把样品放在载物台上聚焦;5.从目镜筒中取下目镜,从观察观察筒中观察物镜边缘,同时调节聚光镜两侧的旋钮,使暗场环对中;6.把目镜插入目镜筒中并观察获得的暗场图象;7.上下移动聚光镜直到达到均匀的暗场照明。以上7点为显微镜暗场观察的七大方法,这是从广州明美网站转载过来的
①照明源不同。电镜所用的照明源是电子枪发出的电子流,而光镜的照明源是可见光(日光或灯光),由于电子流的波长远短于光波波长,故电镜的放大及分辨率显著地高于光镜。 ②透镜不同。电镜中起放大作用的物镜是电磁透镜(能在中央部位产生磁场的环形电磁线圈),而光镜的物镜则是玻璃磨制而成的光学透镜。电镜中的电磁透镜共有三组,分别与光镜中聚光镜、物镜和目镜的功能相当。 ③成像原理不同。在电镜中,作用于被检样品的电子束经电磁透镜放大后打到荧光屏上成像或作用于感光胶片成像。其电子浓淡的差别产生的机理是,电子束作用于被检样品时,入射电子与物质的原子发生碰撞产生散射,由于样品不同部位对电子有不同散射度,故样品电子像以浓淡呈现。而光镜中样品的物像以亮度差呈现,它是由被检样品的不同结构吸收光线多少的不同所造成的。 ④所用标本制备方式不同,电镜观察所用组织细胞标本的制备程序较复杂,技术难度和费用都较高,在取材、固定、脱水和包埋等环节上需要特殊的试剂和操作,最后还需将包埋好的组织块放人超薄切片机切成50~100nm厚的超薄标本片。而光镜观察的标本则一般置于载玻片上,如普通组织切片标本、细胞涂片标本、组织压片标本和细胞滴片标本等。 电子显微镜由电子流代替可见光,由磁场代替透镜,让电子的运动代替。光子“数码显微镜”实际上就是在光学显微镜的基础上加了一个数码成像装置,可以将显微镜所成的像,在电脑屏幕上直接显示出来(Intel就推出过一款类似儿童玩具的“数码显微镜”),其基础还是光学显微镜,和电子显微镜的成像原理是有根本区别的。在这里我们要区别清楚分辨率和放大倍数的问题。细微物体在放大成像时,其最高分辨率取决于所反射的光波的波长,波长越短,分辨率就越高,电子显微镜是利用了波长比普通可见光短得多的X射线成像,当然具备很高的分辨率,而普通“数码显微镜”的放大倍数可以很大,但分辨率是无法提高的。 光学显微镜的分辨率与光波的波长有关。对于接近和小于光波波长的物体光学显微镜就无能为力了。电子运动的波长比光波波长短的多,就可以看到更细小的物体。光学显微镜是由一组光学镜头组成的放大成像系统,而电子显微镜由电子流代替可见光,由磁场代替透镜,让电子的运动代替光子,这样就可以看到比光学系统能看到的更小的物体。 所谓“数码显微镜”实际上就是在光学显微镜的基础上加了一个数码成像装置,可以将显微镜所成的像,在电脑屏幕上直接显示出来(Intel就推出过一款类似儿童玩具的“数码显微镜”),其基础还是光学显微镜,和电子显微镜的成像原理是有根本区别的。在这里我们要区别清楚分辨率和放大倍数的问题。细微物体在放大成像时,其最高分辨率取决于所反射的光波的波长,波长越短,分辨率就越高,电子显微镜是利用了波长比普通可见光短得多的X射线成像,当然具备很高的分辨率,而普通“数码显微镜”的放大倍数可以很大,但分辨率是无法提高的。
机械管长度的光学显微镜的物镜转换器被安装时,如果目标的开口,插入目镜(目镜)的观测管的顶部边缘之间的距离被定义为。在图1中示出的图形定义的机械管的长度为一个典型的透射光显微镜的光路(红线)。[img=,351,346]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905300929395762_9408_2206495_3.jpg!w351x346.jpg[/img][color=#000000]多年来,几乎所有著名的显微镜制造商设计自己的目标为有限管长度[/color][color=#000000]。设计人员进行的假设下,试样,在焦点被放置在一个“小”比前面的物镜的焦平面的距离。的目标,然后收敛(被聚焦)目镜插入目镜膜片上面的电平,位于10毫米以下的显微镜观察管的开口的顶部边缘-试样的放大图像投影(见图1和图2)。[/color][color=#000000][/color][color=#000000]管长度现在已经标准化,以皇家显微学会(RMS)160毫米有限校正透射光显微镜的建议。目标设计为160毫米管长度有限显微镜上刻“ 160[/color][color=#000000] “(毫米)枪管上,在我们的讨论中所概述的[/color][url=http://www.olympusmicro.com/primer/anatomy/specifications.html][color=#000000]客观规范和鉴定[/color][/url][color=#000000]。眼和目标的定位是相反的在金相,基本上是倒的,如在图2中示出的反射光显微镜。请注意,图1和图2中所示的两个例子中,“管”是不在一条直线上的光波从目标发送到与镜像分束镜的目镜(目镜)。这是与大多数现代的显微镜,特别是那些配备三目头的显微摄影的情况下。[/color][color=#000000][/color][color=#000000][img=,351,395]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905300929398842_108_2206495_3.jpg!w351x395.jpg[/img][/color][color=#000000][color=#000000]一些较旧的显微镜有机械管长度160毫米标准偏离。显微镜由莱茨仪器产生持续后RMS标准已被纳入由其他制造商制造,长170毫米的管长度。我们提醒显微镜谁试图插入显微镜不同的管长度设计成一个机械管长度设计的目标。当目标和管的长度不匹配时,图像质量经常遭受由于[/color][url=http://www.olympusmicro.com/primer/anatomy/aberrations.html][color=#000000]球面像差[/color][/url][color=#000000]的引入,因为光管的长度[/color][color=#000000]发生变化。光电管的长度被定义为目标的后焦平面与中间体或主图像上面的固定光阑的目镜之间的距离。当该管的长度被改变,偏离设计规范,球面像差的引入在显微镜和图像遭受光学质量的劣化。中使用显微镜160毫米的管长度为170毫米的管长度而设计的一个客观的情况下,修正目标设计成将导致其下像差补偿。与此相反的是真实的,当使用160毫米的目标在170毫米管长度显微镜。[/color][color=#000000][/color][color=#000000]具有有限的管长度显微镜系统中,每当的配件,如偏振中间件,DIC的渥拉斯顿棱镜,或荧光照明器,被置于光路中的物镜和目镜之间的背部,机械管的长度越长超过160毫米。当试样被重新聚焦,然后可以引入像差。其结果是在一个有限的系统中,每个这样的小东西必须包含光学元件的表面上使管的长度,返回到第160毫米。此类设备通常导致一个不良的增倍镜和降低图像的整体强度。也有产生“鬼影”的危险 - 会聚光线通过分光镜的反射光配件的结果。[/color][color=#000000][/color][color=#000000]正如我们已经看到从上面的讨论,在现代显微镜的管体包含一个复杂的组装,光传输从客观到目镜透镜,反射镜和分光镜。几乎所有的显微镜制造商正在设计自己的显微镜来支持无限远校正[/color][color=#000000]目标。这些目标的投影影像,无穷大(没有共同的描述是相当准确地表述为新出现的平行光线)的试样。为了使观看的图像成为可能,在显微镜的主体管,或在反射光显微镜的垂直照明灯本身必须包含一个管透镜。此透 镜具有作为它的主要功能,目镜膜片的平面,即所谓的中间像平面处的图像形成。目镜,目镜“着眼于”真实,倒立,放大的图像,并在平时的第二阶段复式显微镜的放大倍率放大图像。[/color][color=#000000][/color][color=#000000]无限远校正系统是特别有价值的,因为他们消除“鬼影”(聚光通过倾斜的平面玻璃表面造成的),往往伴随着旧形式的仪表。这样的系统具有的优点是更容易设计,也使插入费用较少的附件中的“平行”的光路。这种先进的新显微镜光学系统能够支持复杂的光学组件集群的目标和镜筒之间的光学路径。这是特别有用的技术,如共聚焦,偏光,DIC,荧光显微镜,以获得最佳效果,必须采用专门的透镜系统。[/color][/color][color=#000000][color=#000000][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000]在现代的无限远校正系统,在管透镜是一个多元素的光纤(即使有增加的“无限远光路空间,以防止引入的彗差或像散)在观察管内置到并密封。在本设计中,可以容纳多达两个中间附件没有附加的光学修正图像,在“无限空间”(参见图3)之间的目标和管透镜。鬼影消除上面讨论。配件更容易设计,避免了不必要的额外的放大系数。图3中所示的光路是一个无限远校正的显微镜系统的示意性表示。图3的左手侧示出的物镜和目镜膜片平面的前焦面的联络点。右侧显示“无限空间”的目标和管透镜放入光路中间附件。[/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000][/color][img=,340,476]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905300929409247_5930_2206495_3.jpg!w340x476.jpg[/img][color=#000000]图4中所示的示意性的无限远校正系统表示附加的光学组件可以被插入到光路中。图4(a)是表示由台下聚光照明一个载玻片上的标本的无限远校正系统的图解表示。通过图像形成的光线通过物镜聚焦到目镜管透镜形成平行光束。配件可插入的平行光束没有进一步的光学矫正所示,在图4(b)所示,其示出了渥拉斯顿棱镜和几个偏振器插入通路。图4(c)示出的平行光束的分束器插入的插入。此分束器转移到外部附件在正确的位置的平行光束的光。[/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000][img=,401,514]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905300929404322_6483_2206495_3.jpg!w401x514.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000]无限远校正目标进来了广泛的倍率,从1.5倍到200倍,以及色差和球面校正,从简单的消色差透镜的planachromats和精密planapochromats的各种素质。大多数,但不是全部,被设计可用于干法,也就是空气的目标和试样之间的空间中的。习惯显微镜明视场系列螺纹拧入物镜转换器(见图5)。用于明/暗视野观察的目标通常有更广泛的的直径螺纹和需要更宽的开口,用于连接这些目标(这些目标,被称为新[/color][color=#000000],BF / DF[/color][color=#000000],或B / D[/color][color=#000000]目标)物镜转换器。[/color][color=#000000][/color][color=#000000]在较长的工作距离从标本比平常一些反射光的目标是设计的重点,这些目标被标记桶的客观长工作距离(LWD[/color][color=#000000])或ULWD[/color][color=#000000](超长工作距离)。制造商通常指定要用于反射光的利用Nomarski差分干涉对比研究的目标系列,例如,奥林巴斯的情况下,适当的串联MS“[/color][color=#000000]系列为明视场目标的新S[/color][color=#000000]在明/暗视野系列计划[/color][color=#000000]。这些目标有时客观桶上标有网卡[/color][color=#000000]或指定应变减少。[/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000][img=,345,244]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/05/201905300929406812_4874_2206495_3.jpg!w345x244.jpg[/img][/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000]无限远校正目标都刻有一个无穷大符号(∞)。产生了由物镜的放大倍数是物镜的焦距除以管透镜的焦距的商数。例如,在[url=http://www.olympus.com/][color=#000000]Olympus显微镜[/color][/url]系统具有焦距为180毫米的管透镜,9毫米焦距目标将目镜膜片的平面上投影了20倍放大的图像。与180毫米的管透镜,它是可以低至1.25X的放大倍率,同时仍保持45毫米的距离parfocalizing设计目标。[/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000][/color][/color][/color]
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1显微镜的光学原理图 ................................................................................................................... 12显微镜观察方式一 明视野观察(Bright field, BF) .............................................................. 13显微镜观察方式二 暗视野观察(Dark field) ....................................................................... 14显微镜观察方式三 相差镜检法(Phase contrast, PH) ...................................................... 25显微镜观察方式四 微分干涉镜检术(DIC) ......................................................................... 36显微镜观察方式五 偏光显微镜(Polarizing Microscopy, POL) ....................................... 47显微镜观察方式六 霍夫曼调制相衬(HMC) ....................................................................... 58显微镜观察方式七 荧光显微镜(Fluorescence Microscopy, FL) .................................... 69显微镜观察方式八 塑料DIC(Plas DIC) ............................................................................ 710物镜 ............................................................................................................................................ 711消色差物镜(Achromatic) ...................................................................................................... 812复消色差物镜(Apochromatic) ............................................................................................. 813平场消色差物镜(Plana chromatic) ..................................................................................... 814平场复消色差物镜(PF, Planapochromatic) ....................................................................... 815半复消色差物镜(Semi Apochromatic) ............................................................................... 816放大率(Magnification) .......................................................................................................... 817视场数 ........................................................................................................................................ 918物镜参数:数值孔径 ................................................................................................................. 919物镜参数:焦深 ....................................................................................................................... 1020物镜参数:齐焦距离 ............................................................................................................... 1021物镜参数:工作距离 ............................................................................................................... 1122物镜参数:分辨率 ................................................................................................................... 1123覆盖差 ...................................................................................................................................... 1124齐焦合轴 ..................................................................................................................................
【岩相显微镜】指导科学配煤炼焦的利器【岩相显微镜】指导科学配煤炼焦的利器。煤岩学是将煤作为可燃岩石进行研究的一门学科。煤中镜质组反射率随煤的蜕变程度增高而增大,因而可作为断定煤种的根据。鞍钢鲅鱼圈自2008年4月开工以来,沿用着传统的配煤办法,即使用洗精煤的灰分、硫分、挥发份和胶质层最大厚度的叠加性、粘结指数等,将不一样煤进行配煤优化。鲅鱼圈配煤计划中焦肥煤份额一直稳定在77%~78%,配煤本钱高。持续添加焦肥煤份额,焦炭质量仍得不到晋升。2012年3月鞍钢鲅鱼圈购进了蔡司岩相显微镜设备,开端由传统配煤向岩般配煤方向转化,改进了焦肥煤份额。作为炼焦工作者,重要的是在应用领域用好岩相显微镜设备,把握剖析办法,去辅导洗精煤的入料办理、监督来煤质量、将理论模仿配煤、手艺配煤检测与实测配煤质量比照,做好平常配煤检测,检测焦炭质量等就可为公司降本增效发挥作用。当前的主焦肥煤份额比使用岩相显微镜配煤之前已下降了3个百分点,仅三个月本钱就下降450万元。
显微镜(microscope)简称光镜,是一种将肉眼无法看清楚的微生物体进行光学放大成像的常用仪器。在生命科学、材料科学、基础科学及众多的微观领域中都离不开显微镜。1590年.荷兰的Han,父子始创放大10倍显微镜。175.8年,Dollond制成消色差透镜,提高了显微镜放大倍数。1873年,德国科学家Abbe设计成近代显微镜。1953年.上海江南光学仪器厂国产显微镜诞生,并陆续生产了荧光、相衬、偏光等专用显微镜。生物及医用显微镜可分为光学放大及电子放大两大类。前者按用途可分为普通型、特种型、高级型显微镜和手术显微镜。普通型生物显微镜仅供一般用途使用,通常的农用与医用显微镜、倒税显微镜均属这一类。特种型生物显微镜可作某些专用的观察和研究。暗场生物显微镜、荧光显微镜、偏光显微镜、相衬和干涉相衬显微镜等均属于这一类。高级型生物显微镜系指大型多用途的生物显微镜.研究用生物显微镜和万能研究用生物显微镜等属于这一类。一、显微镜放大成像系统显微镜光学系统由物镜和目镜两部分组成。因为被观测的物体本身不发光,而要借助于外界照明,故显微镜需要有一个照明系统,这些部分都是由较复杂的透镜组成,尤其物镜更为复杂。下图是显微镜成像的光路原理图,图中的物镜和目镜均用薄透镜表示。http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-93-1.jpg显微镜成像原理显微镜的物体AB处于物镜的2倍焦距之内一倍焦距之外,它首先通过物镜成一放大的倒立实像A'B',且使之位于目镜的物方焦平面上或焦平面以内很靠近的地方,然后目镜将这一实像再次成一个正立虚像A"B"于无限远或人眼明视距离之外,以供眼睛观察。显微镜对物体进行2次放大,因此与放大镜相比,具有更高的放大倍率,能观察到肉眼所不能直接观察的微小物体,分辨更细小的细节。在这里目镜相当于放大镜,只不过这时放大镜的物是物镜所成的像而已。由于物镜所成的像是实像.因而可在实像处(即目镜的物方焦平面处)安放各种用途分划板.供对准或测量用。二、显徽镜的放大率与分辨本领1.显微镜的分辨本领 分辨本领主要指接物镜分辨被检查物体细微结构的能力,也就是说在显微镜下判别的最小微粒的大小或两点之间最短距离及某物点最小直径的限度,便叫做显微镜的分辨本领.或称为鉴别率。通常用d表示:http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-14-1.jpg式中.A表示波长;n sins (NA)表示数值孔径。 从式中可知,显微镜的分辨率主要取决于光的波长和数值孔径这两个因素。d值越小,分辨本领也就越强,越能看清物体的细微结构。鉴别率计算单位是Um. 显微镜的鉴别率的提高只有两个办法: (1)增大物镜的数值孔径(镜口率)。从图可以看出,影响数值孔径(n sina)的因素有两个:其一为物体上某点射人物镜光锥角(镜口角)的一半(sina);其二为检品与物镜间媒质的折射率n。即数值孔径为NA = n sine镜口角半数最大能到900,故si na的最大值为1.00,这时物镜的焦距最短而曲度也很大,制造上是极为困难的。即使能办到,在干燥系中的镜口率只有1 x sin90“(控气n二1)。若再增大镜口率便只有从媒质着手,所以便有水、甘油,石蜡油和香柏油等浸润均匀媒质的应用,确实改进了镜口率不少.它最高可到1.40。如果用澳萘液可达1.67左右,更接近盖片和透镜的折射率。http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-51-1.jpghttp://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-44-1.jpg (2)缩短光源的波长:采用紫外线作光源,波长可到0.1Um,这样放大倍数比自然光放大的倍数大3-4倍,普通紫外线光波在0.2 Um左右,即使能产生出0.1 Um波长的紫外线.一般透镜也将把它吸收干净.无法利用。显微镜的最大数位孔径可达1.5 Um左右,在这种情形下: http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-33-1.jpg即在这种显微镜里,仍可分辨的两点间最短距离差不多等于所用光波波长的1/30假定绿光的光波的波长http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-23-1.jpg那么显微镜能分辨的最短距离为:http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-89-1.jpg 则这台显微镜的最高分辨距离也超不过。.182 Um。肉眼在明视距离(250 mm)能分辨的两点之间最短距离为0.1 mm,约为上述d值的560倍.因此I台光学显徽镜的放大率有100()倍也就足够了。这是因为光的本性及光的绕射现象就限制了显徽镜的放大极限。凡是光波超过微粒直径的2倍时,光线就很方便地绕过微粒而继续前进,所以普通干燥系显微镜的最大鉴别率只能达到光源波长的1/2,直径小到0.2 5m的微粒就无法被光学显微镜发觉。虽然后来应用浸润系方法,如油镜,提高了折射率,其鉴别率也只不过能提高到光源波长的1/3而已。而且还要用最好的透镜才能达到。
使用时显微镜时应注意以下几点:(现仅以金相显微镜的使用方法为例作为说明)1、条件许可情况下,建议您的试验室应具备三防条件:防震(远离震源)、防潮(使用空调、干燥器)、防尘(地面铺上地板);电源:220V±10%,50HZ;温度:0°C—40°C。2、金相显微镜调焦时注意不要使物镜碰到试样,以免划伤物镜。3、当载物台垫片圆孔中心的位置远离金相显微镜物镜中心位置时不要切换物镜,以免划伤物镜。4、亮度调整切忌忽大忽小,也不要过亮,影响灯泡的使用寿命,同时也有损视力。5、所有(功能)切换,动作要轻,要到位。6、关机时要将亮度调到最小。7、非专业人员不要调整照明系统(灯丝位置灯),以免影响成像质量8、更换卤素灯时要注意高温,以免灼伤;注意不要用手直接接触卤素灯的玻璃体。9、关机不使用时,将物镜通过调焦机构调整到最低状态。
共聚焦显微系统(LSCM)诞生至今,短短二十多年里,已经成为了科学研究的重要工具。在我国生命科学研究领域,也发挥着巨大的作用。如何更好利用激光共聚焦技术,推动生命科学研究,受到了学术界的广泛关注。 激光共聚焦显微镜作为光学显微镜的重大改进,与传统场式(widefield)照明显微镜相比有许多独特的优点, 它可以控制焦深、照明强度,降低非焦平面光线噪音干扰,从一定厚度标本中获取光学切片。可以在不改变普通荧光显微镜的制片方法的前提下,观察到非常清晰的高质量图像,并且通过共聚焦显微镜可以十分方便的观察活的细胞或组织。 它的诞生,大大提高了科学研究的效率。目前共聚焦显微镜在国内的应用已经相当广泛,在越来越多的国家级科研院所与高校实验室,都能看到科研工作者忙碌在共聚焦显微镜前的身影。以下为奥林巴斯品牌类显微镜:智能激光扫描共聚焦显微镜——FV10iFV1000MPE:只关注多光子荧光成像FluoView™ FV1000共聚焦显微镜DSU转盘扫描显微镜奥林巴斯FluoView™ FV300(已停产)大家了解多少?欢迎讨论用后感想。
本文来自显微镜之家转贴显微镜之家融合了各种进口国产显微镜的集中展示,集显微镜知识/咨询/动态等于一体的显微镜之家 http://goldroom.zhan.cn.yahoo.com/登陆指导!光学显微镜一般由载物台、聚光照相系统物镜、目镜和调焦机构组成。载物台用于承放被观察的物体,利用调焦旋扭可以驱动调焦机构,使载物台作粗调和微调的升降运动,使被观察物体调焦清晰成像,它的上层可以在水平面内沿作精密移动和转动,一般都把被观察的部位调放到视场中心。聚光照明系统由灯源和聚光镜构成,聚光镜的功能是使更多的光能集中到被观察的部位。照明灯的光谱特性必须与显微镜的接收器的工作波段相适应。物镜位于被观察物体附近,是实现第一级放大的镜头,在物镜转换器上同时装着几个不同放大倍率的物镜,转动转换器就可让不同倍率的物镜进入工作光路,物镜的放大倍率通常为5~100倍。物镜是显微镜对成像质量优劣起决定性作用的光学元件,常用的有能对两种颜色的光线校正色差的消色差物镜;质量更高的还有能对三种色光校正色差的复消色差物镜;能保证物镜的整个像面为平面,以提高视场边缘成像质量的平像场物镜。高倍物镜中多采用浸液物镜,即在物镜的下表面和标本片的上表面之间填充折射率为1.5左右的液体,它能显著的提高显微观察的分辨率。目镜是位于人眼附近实现第二级放大的镜头,镜放大倍率通常为5~20倍,按照所说的所能看到的视场大小,目镜可分为视场较小的普通目镜和视场较大的大视场目镜(或称广角目镜)两类。载物台和物镜两者必须能沿物镜光轴方向作相对运动以实现调焦,获得清晰的图像.用高倍物镜工作时,容许的调焦范围往往小于微米,所以显微镜必须具备极为精密的微动调焦机构。显微镜放大倍率的极限即有效放大倍率,显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距,分辨率和放大倍率是两个不同的但又有联系的概念。当选用的物镜数值孔径不够大,即分辨率不够高时,显微镜不能分清物体的微细结构,此时即使过度地增大放大倍率,得到的也只能是一个轮廊虽大但细节不清的图像。聚光照明系统对显微镜成像性能有较大影响,但又是易于被使用者忽视的环节。它的功能是提供亮度足够且均匀的物面照明,聚光镜发来的光束应能保证充满物镜孔径角,否则就不能充分利用物镜所能达到的最高分辨率。为此目的,在聚光镜中没有类似照相物镜中的,可以调节开孔大小的可变孔径光阑,用来调节照明光束孔径,以与物镜孔径角匹配。改变照明方式,可以获得亮背景上的暗物点(称亮视场照明)或暗背景上的亮物点(称暗视场照明)等不同的观察方式,以便在不同情况下更好地发现和观察微调结构。
激光共聚焦显微镜系统的原理和应用激光扫描共聚焦显微镜是二十世纪80年代发展起来的一项具有划时代的高科技产品,它是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置,利用计算机进行图像处理,把光学成像的分辨率提高了30%--40%,使用紫外或可见光激发荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,在亚细胞水平上观察诸如Ca2+ 、PH值,膜电位等生理信号及细胞形态的变化,成为形态学,分子生物学,神经科学,药理学,遗传学等领域中新一代强有力的研究工具。激光共聚焦成像系统能够用于观察各种染色、非染色和荧光标记的组织和细胞等,观察研究组织切片,细胞活体的生长发育特征,研究测定细胞内物质运输和能量转换。能够进行活体细胞中离子和PH值变化研究(RATIO),神经递质研究,微分干涉及荧光的断层扫描,多重荧光的断层扫描及重叠,荧光光谱分析荧光各项指标定量分析荧光样品的时间延迟扫描及动态构件组织与细胞的三维动态结构构件,荧光共振能量的转移的分析,荧光原位杂交研究(FISH),细胞骨架研究,基因定位研究,原位实时PCR产物分析,荧光漂白恢复研究(FRAP),胞间通讯研究,蛋白质间研究,膜电位与膜流动性等研究,完成图像分析和三维重建等分析。一.激光共聚焦显微镜系统应用领域:涉及医学、动植物科研、生物化学、细菌学、细胞生物学、组织胚胎、食品科学、遗传、药理、生理、光学、病理、植物学、神经科学、海洋生物学、材料学、电子科学、力学、石油地质学、矿产学。二.基本原理传统的光学显微镜使用的是场光源,标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰;激光扫描共聚焦显微镜利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面的每一点扫描,标本上的被照射点,在探测针孔处成像,由探测针孔后的光点倍增管(PMT)或冷电耦器件(cCCD)逐点或逐线接收,迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像,这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面,克服了普通显微镜图像模糊的缺点。三.应用范围:细胞形态学分析(观察细胞或组织内部微细结构,如:细胞内线粒体、内质网、高尔基体、微管、微丝、细胞桥、染色体等亚细胞结构的形态特征;半定量免疫荧光分析);荧光原位杂交研究;基因定位研究及三维重建分析。1.细胞生物学:细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构和分布变化2.生物化学:酶、核酸、FISH(荧光原位杂交)、受体分析3.药理学:药物对细胞的作用及其动力学4.生理学:膜受体、离子通道、细胞内离子含量、分布、动态5.神经生物学:神经细胞结构、神经递质的成分、运输和传递、递质受体、离子内外流、神经组织结构、细胞分布6.微生物学和寄生虫学:细菌、寄生虫形态结构7.病理学及临床应用:活检标本诊断、肿瘤诊断、自身免疫性疾病诊断、HIV等8.遗传学和组胚学:细胞生长、分化、成熟变化、细胞的三维结构、染色体分析、基因表达、基因诊断四.激光共聚焦显微镜在医学领域中的应用A.在细胞及分子生物学中的应用1.细胞、组织的三维观察和定量测量2.活细胞生理信号的动态监测3.粘附细胞的分选4.细胞激光显微外科和光陷阱功能5.光漂白后的荧光恢复6.在细胞凋亡研究中的应用B.在神经科学中的应用1.定量荧光测定2.细胞内离子的测定3.神经细胞的形态观察C.在耳鼻喉科学中的应用1.在内耳毛细胞亚细胞结构研究上的应用2.激光扫描共聚焦显微镜的荧光测钙技术在内耳毛细胞研究中的应用3.激光扫描共聚焦显微镜在内耳毛细胞离子通道研究上的应用4.激光扫描共聚焦显微镜在嗅觉研究中的应用D.在肿瘤研究中的应用1. 定量免疫荧光测定2. 细胞内离子分析3. 图像分析:肿瘤细胞的二维图像分析4. 三维重建 E.激光扫描共聚焦显微镜在内分泌领域的应用1. 细胞内钙离子的测定2. 免疫荧光定位及免疫细胞化学研究3. 细胞形态学研究:利用激光扫描共聚焦显微镜 F.在血液病研究中的应用1. 在血细胞形态及功能研究方面的应用2. 在细胞凋亡研究中的应用 G.在眼科研究中的应用1. 利用激光扫描共聚焦显微镜观察组织、细胞结构2. 集合特殊的荧光染色在活体上观察角膜外伤修复中细胞移行及成纤维细胞的出现3. 利用激光扫描共聚焦显微镜观察视网膜中视神经细胞的分布以及神经原的树枝状形态4. 三维重建H. 激光扫描共聚焦显微镜在肾脏病中的应用可以系统观察正常人肾小球系膜细胞的断层扫描影像及三维立体影像水平,使图像更加清晰,从计算机分析系统可从外观到内在结构,从平面到立体,从静态到动态,从形态到功能几个方面对系膜细胞的认识得到提高。
相差显微镜 •1940年荷兰学者F.Zernik巧妙地应用光的衍射和干涉原理提高标本细节的折光率的差异,创造了相差显微镜(phase contrast microscope)。从此非常简便而有效地观察体外培养细胞的生长过程,记录细胞分裂周期中的染色体的移动。近年来细胞学家和生物学家所拍摄的生活细胞生长、分裂过程的非常出色的记录影片,都是利用相差显微镜的优秀性能完成的。因此相差显微镜、倒置相差显微镜已成为细胞学、细菌学、寄生虫学、免疫学和海洋生物学的实验室必备仪器。 •相差显微镜是用于观察组织培养中活细胞形态结构的。活细胞无色透明,一般显微镜下不易分辨细胞轮廓及其结构。 •相差显微镜的特点是将活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用,转换为光密度差异(明暗差),使镜下结构反差明显,影像清楚。 相差显微镜的优点http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161815_278026_2961690_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161816_278027_2961690_3.jpg 相差显微镜成像光路http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161817_278028_2961690_3.jpg 相差显微镜的部件 •相差显微镜的关键性部件为位相板(phase plate)、环状光阑(anular diaphragm)和中心调节望远目镜(centring telescope)。 环状光阑 •环状光阑是在玻璃片上喷涂金属薄膜借以挡光,只留下环形透光窄缝的光阑。它能使来自反光镜的直射光只能从环状部分通过,形成一个空心圆筒状的光柱,经聚光器并照射到标本以后,就产生两部分光,一部分是直射光,另一部分是经过标本后产生的衍射光,这两部分光经物镜内相板的作用而改变了光的相位和振幅。 •在相差聚光器下面装有一个转盘,盘上镶有宽狭不同的环状光阑,在不同光阑边上刻有10×、 20×,40×等字样,这表示当用不同放大倍数的物镜时,必须配合相应的环状光阑。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161819_278029_2961690_3.jpg 相板 •相板安装在物镜的后焦平面上,带有相板的物镜称为相差物镜(蔡司厂用红色“PH”表示)。 •相板上有一灰色的环状圈,称为共轭面。面上涂有吸光物质,直射光从这部分通过,并吸收了约80%的直射光,以降低它的透光度。在共轭面的内,外侧部分称为补偿面,面上涂有减速速物质,使衍射光的相们发生改变,因此这两者相结合就能分别改变直射光和衍射光的振幅和相位。 相板分类 •A型位相板 凡是共轭面即环形相板上涂有吸收层的相板均为A型。A型相板又分为二型: •(1)A十型位相板:这是在共扼面上既涂吸收层又涂有电解质的相板。这种相板能吸收其共轭面的60一90%直射光,而透过其20一40%。市场出售的位相板型号分类时,都以数字表示其透射率和推迟位相的数据(图10-12,表10—1)。 •(2)A一型位相板是共扼面上涂有吸收层。同时在补偿面上涂有电解质。 •B型位相板凡是在补偿面上涂有吸收层而在共轭面上有电解质的位相板,均属此类。 •(1)B十型位相板是在补偿面上涂有吸收层共轭面上有电解质的相板。 •(2)B一型位相板是在补偿面上涂有吸收层加电解质的相板。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281441_279896_2961690_3.jpg 对焦望远目镜 对焦望远目镜(centring telescope)又叫合轴望远镜或校正望远目镜。这是一种场透镜和接目透镜之间的距离可变的目镜。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281443_279897_2961690_3.jpg 相差显微镜的成像原理 •从波动光学的角度可把物体细节即生物标本的细节,看成是成像光束的障碍物。它可以改变相干光束的振幅、位相和光强分布。 •从变换光学的频谱转换角度,可把物体细节看成是不同空间信息的集合物。它可改变光信息的空间频谱。 •在显微镜下标本细节的光密物质、光疏物质和无结构的介质的折射率不同,因此相干光束通过光密物质(t)时,必然产生衍射,使光程延长,推迟位相(图10—21P)。这时衍射光(P)和直射光(S)之间的位相出现d/λ差异。但是标本的吸收程度近似,所以振幅未变即光强末变。这种直射光和衍射光到达像平面重叠成像时,其合成波的振幅与通过无结构介质的直射光的振幅几乎近似,即其光强相似。这就是未染标本在普通显微镜下反差很小的基本原因(图10—22)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281447_279898_2961690_3.jpg 暗相差 •在被检物的折射率大于介质的情况下,透过共轭面的直射光被吸收80%后亮度变暗,衍射光在通过被检物后其相位己推迟1/4波长,再在位相板的补偿面的电解质又推迟了1/4波长。由于这两束光的相位不同(差1/2波长),其合成波的振幅为两者之差,所以光线就更加暗。 •与此同时,通过无结构介质的衍射光的光程只被补偿面的电介质推迟l/4波长。这就造成通过光密物质的光强远比通过无结构介质(背景)的光强减衰得多。相差显微镜下标本细节的反差加大丁。光密结构比背景暗得多了。这种反差叫暗反差也叫正反差。 明相差 •如果相板的共轭面上涂的是减速物质,推迟直射光1/4波长,而补偿面涂的是吸光物质,结果就是直射光与衍射光的相位相同(衍射光通过物体时相位推迟了1/4波长),其合成波的振幅为两者之和,结果物体是明亮的而背景是暗的,这称为明相差或负相差。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281450_279899_2961690_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281450_279900_2961690_3.jpg 相差显微镜实验方法和步骤 •安放相差装置取下原有聚光器和物镜,分别安上相差聚光器和相差物镜,并将转盘转到“0”标记的位置。用10×相差物镜调光。 •调节光源。 •合轴调节取下原有目镜,换上合轴调整望远镜。上下移动望远镜筒,至能看清物镜中的相板环为止。 •放回目镜取下合轴调整望远镜,放回目镜即可进行观察。更换不同放大倍数的相差物镜时,每次都要按上述方法重新调节。
最近在了解高温观察用激光共焦扫描显微镜,看了很多有关采用CLSM观察的高温熔化、凝固和固态相变的观察,感觉很不错。但是我在论坛里看见采用激光扫描共焦显微镜拍摄的很多三维组织图像照片,这种激光共焦扫描显微镜和宝钢、首钢的那种高温观察用的激光扫描共焦显微镜是不是不一样啊??激光共焦扫描显微镜是不是也分好几种啊,请专家解惑,我刚刚接触,不是很了解。另外高温观察用激光共焦扫描显微镜大概多少钱啊,在哪里买呢,谢谢大家
现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像,故又常 被称为复式显微镜。它们由机械装置和光学系统两大部分组成。在显微镜的光学系统中,物镜的性能最为关键,它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中,油镜的放大倍数最大,对微生物学研究最为重要。与其他物镜相比,油镜的使用比较特殊,需在载玻片与镜头之间加滴镜油,这主要有如下二方面的原因: 1. 增加照明亮度 油镜的放大倍数可达 100Χ,放大倍数这样大的镜头,焦距很短,直径很小,但所需要的光照强度却最大。从承载标本的玻片透过来的光线,因介质密度不同(从玻片进入空气,再进入镜头),有些光线会因折射或全反射,不能进入镜头,致使在使用油镜时会因射入的光线较少,物像显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失,在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率( n=1.55 )相仿的油镜(通常用香柏油,其折射率 n=1.52)。 2. 增加显微镜的分辨率 显微镜的分辨率或分辨力 (resolution or resolving power)是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。从物理学角度看,光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制,分辨力D可表示为:D=λ/2N.A,式中λ= 光波波长; NA= 物镜的数值孔径值。 光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围( 0.4--0.7 μ m ),而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率,可表示为:NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。它取决于物镜的直径和焦距,一般来说在实际应用中最大只能达到 120 O ,而 n为介质折射率。由于香柏油的折射率( 1.52 )比空气及水的折射率(分别为 1.0 和 1.33)要高,因此以香柏油作为镜头于玻片之间介质的油镜所能达到的数值孔径值(NA 一般在1.2-1.4)要高于低倍镜、高倍镜等干镜( NA 都低于1.0)。若以可见光的平均波长 0.55μm来计算,数值孔径通常在0.65左右的高倍镜只能分辨出距离不小于0.4μm的物体,而油镜的分辨率却可达到 0.2 μ m 左右。