双波长仪

请教：在高效液相的检测器中，有双波长、双通道与单波长、单通道等不同的类型，双波长与双通道是不是同一个概念？单波长与单通道是不是同一概念？双与单比较有什么优势？谢谢！

[color=#444444]HPLC液相色谱，要同时定量测定四种成分，但是其中有三种成分（儿茶素，原儿茶酸，没食子酸）的检测波长相接近大概在280左右，另一种成分（熊果酸）的检测波长大概在220左右，流动相为乙腈和水，单波长不能实现，想用双波长，请问大神们可以用双波长吗？双波长得出的结果图是两个，分析数据的时候怎么分析呀？？[/color]

最近听说有COD仪器有双波长功能，不知道这个双波长跟单波长的仪器主要有什么区别？测值有什么不同么？

在用酶联免疫法测定抗原或抗体时，不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式，并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择，对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解，并且实际工作中也出现了使用单波长检测导致抗HCV部分弱阳性的漏检。因此，本人就酶标仪在选择单、双波长使用方面谈谈个人的体会，供同道参考。一 材料和方法1.材料 由上海科华公司提供的乙肝表面抗原测定试剂盒；eppendorf 20-20ul的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]。2.仪器 上海科华公司的ST-360酶标仪和BIO-RAD 550酶标仪。3.方法 底物液配制：底物液A、B各5ml混合，加入微量酶标记物，再加入5ml终止液，呈微黄色，混匀待用；利用上海科华公司提供的乙肝表面抗原试剂盒的酶标板，用94孔中准确加入150ul配制好的上述底物液，另2孔中加入150ul已终止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶标仪上分别进行450nm单波长和450nm及655nm（无630nm）的双波长检测，在ST-360上分别进行450nm单波长和450nm及630nm的双波长检测吸光度各两次。二　结果　　1.分别对所得结果进行统计，发现单、双波长测定结果有较大的差异，双波长测定结果的CV值远小于单波长测定，结果见表1。2.对ST-360两次重复测定结果进行分析，结果基本一致，见表2。表1酶标板吸光度在两台酶标仪上的测定统计结果酶标仪 BIO-RAD550 ST-360 波长 450nm 450nm+655nm 450nm 450nm+630nm 最小值 0.125 0.126 0.130 0.131 最大值 0.154 0.139 0.153 0.141 均值 0.1356 0.1329 0.1399 0.1361 标准差 0.00671 0.00267 0.00467 0.00247 CV（%） 4.94 2.01 3.34 1.82 最大值/最小值 1.232 1.103 1.177 1.076 表2 ST-360酶标仪两次吸光度测定统计结果波长 450mnm 450nm+630nm 1 2 1 2 最小值 0.130 0.129 0.131 0.131 最大值 0.153 0.152 0.141 0.141 均值 0.1399 0.1391 0.1361 0.13711 标准差 0.00467 0.00495 0.00247 0.00229 CV（%） 3.34 3.56 1.82 1.67 三　讨论　　1.酶标仪与分光光度计、自动生化分析仪等的吸光度测定有所不同，一般分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路，但测定原理相同，都是使用朗伯-比耳定律，测定的都是样本的吸光度。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。2.酶标仪在用单波长测定吸光度时，除受到测定干扰（样本的浊度、干扰色等）和电路干扰（包括噪音、漂移、电压等）等因素外，受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中，由于液体表面张力的作用，液体的表面不是一个平面，而是形成一个凹面，从侧面看似凹透镜，这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响，光线在通过液体时，除正常被液体吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光线通过凹透镜那样），影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源，如果每次能在同一部位检测，吸光度的重复性将得到保证，但由于机械运动等造成的误差，不可能保证每孔都在相同部位被检测，因此造成了孔与孔之间有一定的差异。结果见表1，整块板单波长检测的CV在3%以上，吸光度最高值和最低值的相对误差达17%以上。3.在双波长测定中，减少了测定干扰和电路干扰，因此测定结果明显好转，结果见表1，整块板样本的CV在2%以下。ST-360在进行稳定性观察中，如表2所示，两次检测结果基本一致，这表明ST-360的稳定性较好。同时，从表1也可以看到，科华公司生产的ST-360与BIO-RAD 550的检测结果一致，两者的检测性能基本相同。4.由于液体表面张力的不同，导致单波长测定时的误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到最后加入底物和终止液后的液面情况，用加入表面活性剂的洗涤液清洗后，形成的液面更凹，对单波长检测的影响更大，并且与表面活性剂的浓度成正比。而且中性蒸馏水洗涤后，单、双波长检测的结果基本一致。5.在酶联免疫法测定抗原抗体中，由于所使用的底物不论是邻苯二胺（OPD）-H2O2，还是四甲基联苯胺（TMB）-H2O2，显色终止后，在630nm和655nm处的吸光度值都只有吸收峰处（492nm/450nm）吸光度值的1%以下，因此，利用双波长检测，不会影响检测灵敏度。建立在进行酶联免疫检测时，酶标仪比色应该首选双波长。这样可以提高临界值处标本的分析正确度，减少实验误差。

谁能帮忙解答下双波长分光光度法的干扰波长的选择依据？谢谢了！

我想请问一下，双波长测定中为什么浑浊的样品吸光度测出来反而比澄清的样品吸光度更低，理论上不是应该浑浊的血清样品吸光度比澄清血清样品吸光度高吗？在线等……

酶标仪使用时为什么要用双波长？而检定时又要用单波长？

岛津的紫外检测器能够进行双波长检测，请问，这个双波长检测可以怎样理解？为什么能够实现双波长检测？

我找到了一些双波长和三波长分光光度法的（新）方法，理论上是完全可行的，能用于很多谱线，这些方法不知现在有没有使用，因此特向各位同行请教，你们使用的相关方法有些什么？

在用双波长转换测定样品中不同物质时，在预设的波长转换时间点上，波长是瞬时转换还是逐渐转变。

各位高手：请问啥是双波长检测？怎么使用这个功能？

需要双波长飞点扫描分析仪 的用途、工作原理，一点都不懂[em09]

我们的待测组分在290左右有吸收，但是其中有干扰组分，它们在相同溶剂中的紫外光谱见附件，我想用双波长法进行测定，但是这参比波长该如何选啊？[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/05/201005211222_219971_1631142_3.gif[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/06/201006040840_222202_1631142_3.gif[/img]红色线是我的待测组分的二阶导数曲线，另外一条是干扰组分的！

请教高手：我现在使用一台cd60的双波长扫描仪，遇到的问题：在扫描过程极其不稳定，有时在样品点会出峰，但有时基本没有峰，想问是哪里出了问题？请不吝赐教

有台岛津的CS-9000的双波长飞点薄层扫描仪也不知道准不准，有方法检测吗？

rt，A300氨基酸分析仪可以双波长同时检测么？还是每次进样只能在一个波长下检测？求前辈帮忙~

最近公司的产品需要在紫外检测器下跑双波长，由于好奇心驱使，心中不免有个小小的疑问：双波长模式的原理是什么呢，哪位老师能详细讲解一下呢，在此先谢过各位老师了http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif

请教德国DESAGA双波长薄层扫描仪的有关知识,它的工作原理等相关资料在哪可以看到，希望高手指教本人联系方式：ziwen_hoo@sina.com

我用的UV1601作水质中的总氮，需要设置220和275两个波长，选择双波长后觉得应该在测定样品时在每个波长下出现一个数值，但是测定是只出现220nm的吸收值，不知道怎么办，请知道的同志们告诉我，谢谢谢谢

[size=3]以下的话均为本人实验过程中的切身体会，或许有不少错误，敬请各位专家不吝赐教！所谓的双波长：一个样品波长[/size][size=3][font=Times New Roman]λs，一个参比波长λ[size=1]R[/size]。在选择这两个波长点时，一般是先做光谱扫描，对斑点和空白区域进行光谱扫描。这样会出现两个光谱图。我的认识是最好是λR处斑点和空白的吸光度值重合，即吸光度值是一样的；而在λs处，斑点最好适合地大于空白的吸光度值。这样在做色谱扫描时，先以λR扫描时，色谱基线会是一条比较平稳的直线；以λs扫描时，到斑点处会显示良好的吸收峰。这是我对双波长的理解。但请大家看中国药典2005年版一部363页，关于元胡止痛片中延胡索乙素的薄扫含量测定，其两个波长分别是346nm和200nm，我对200nm存在较大的疑惑，200nm是一个临界点，能用吗？反正我们在做实验时，这两个波长是不合适的。[/font][/size]

现行标准中的双波长紫外分光光度法或者多波长分光光度法，具体做的过程中如何避免不必要的麻烦。比如生活饮用水国家标准GB/T 5750.5-2023中关于硝酸盐氮的测试，采用波长220nm和275nm进行校正吸光度的测试和计算。水质检测环境标准HJ 636-2012中也是类似的操作。另外一个叶绿素a的检测就更多波长的数据参与计算。目前双光束的紫外分光光度计可以多波长连续测试，但是不同波长的参比是不可能同时调零的，也就意味着需要每个波长都要调零后测试标准溶液和样品，如果样品的体积不够多，分多次测试的话就需要测试完倒回到原来的容器，直到最后测试完成才能倒去废液桶。请各位大咖给点儿意见或者建议。

如题：为什么某些物质我们采用双波长检测？大家来详细说说，双波长检测是用什么检测器啊？二极管阵列的？

http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/06/201506221344_550978_2524385_3.gif如题，光学装置是这样的话如何进行双波长检测，难道是光栅在两个波长来回转、

一直都是连着电脑应用软件来使用的，波长都是选择450nm。不知道如何设定双波长，请指教。

[em06] 怎样用双波长法测地表水中的锰啊，方法的用的2个波长各是多少啊啊啊啊[em61] [em07] [em49]

watersHPLC如何设定双波长

大家知道有国产的双波长紫外－可见检测器吗

[size=3][font=宋体]双波长：从光源发出的光经过两个单色器得到两束不同波长（[/font][font=宋体]λ1[/font][font=宋体]和λ2[/font][font=宋体]）的单色光，并借助切光器使[/font][font=宋体]λ1[/font][/size][font=宋体][size=3]和λ2交替通过同一洗手池，测定二波长下吸光度差值δA，求得待测组分含量的方法。[/size][/font][font=宋体][size=3]多波长紫外分光光度法[/size][/font][font=宋体][size=3]多波长分光光度法解决了单波长分光光度法中浊度背景干扰和共存物质的光谱干扰的问题。多波长分光光度法适用于浑浊样品，高浓度样品以及多组分混合物的定量分析。[/size][/font][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][size=3][font=宋体]特点：以样品溶液本身做参比，用两束单色光[/font][font=宋体]λ[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]和[/font][font=宋体]λ2[/font][font=宋体]交替入射到同一样品溶液中，测得的是差吸光度值δA=Aλ1-Aλ2[/font][/size][size=3][font=宋体]δA=Aλ2-Aλ1=[/font][font=宋体]（ελ2-ελ1）cL[/font][/size][font=宋体][size=3]因此用于定量分析，适用于单，多组分测定。[/size][/font][size=3][font=宋体] [/font][font=宋体]单组分测定一般选择待测组分的λmax为测定波长λ2，等吸收点波长或待测组分吸收曲线下端的某一波长作为参比波长λ1，然后测定差吸光度值（δA=Aλ2-Aλ1），求样品溶液中待测组分的含量或浓度。[/font][/size][size=3][font=宋体] [/font][font=宋体]如果样品溶液中有共存干扰吸收物质，则通过采用等吸收点法和系数倍率法等。[/font][/size]

双波长法做直链淀粉、支链淀粉测定时，曲线的峰没有明显的双肩，无法用等吸收法确定检测波长，哪位前辈做过，是什么原因？另外怎样观察直链淀粉或支链淀粉（均为纯品）已完全溶解？