屈折度仪

粪大肠菌群的曲折过程 从开始做粪大肠菌群这个项目以来，有过不少的疑惑。这些疑惑有的是对以前知识掌握不够，有的则是自己偷懒造成的，还有就是自己的语文水平不行，对方法的理解不到位。 第一次，按照方法要求，配制培养基，使用的电子天平，没什么话说。后来听说这个不用那么精确，就改用托盘天平称量，这时我就犯糊涂了，到底哪边放样品哪边放砝码呢？所以每次都拿电子天平再复称下，验证自己称错没，每次记得回去上网百度，每次回去又忘记了，这么简单的问题又不好意思问别人。 第二次，配制好培养基，没有按照要求调节pH，导致试验失败。后来把书好好看了一遍，原来是用Hcl或NaOH调节pH，牢记配制培养基的主要步骤为：配制、溶化、调pH、过滤、分装、灭菌、检验等。 第三次，前面的没有任何问题了，初发酵结束产气或者产酸（由紫变黄），开始复发酵，直接用玻璃棒蘸取EC培养液在阳性管。结果可以产气，但是操作还是错了。其实也知道这样不对，但是书和方法标准都没有加多少EC培养液，后来就上仪器论坛发帖求助，认识了苹果，不断请教，她不厌其烦的解答。幸好是女的，男的估计早烦了，呵呵。现在这个项目做的总算象样了。初发酵后用接种环蘸取5mlEC培养液到阳性管中，用酒精灯烧红后继续下一个。 接种环http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/10/201210151335_396629_2595817_3.jpg 上次再看方法说明，又犯迷糊了。方法上有这么一句话：接种后所有发酵管必须在30min内放进水浴中。因为我用的仪器是隔水式恒温培养箱，我就想到底我培养好了要不要放进水浴中呢？后来上网查了资料原来还可以用水浴锅培养，就想通了。 隔水式恒温培养箱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/10/201210151334_396628_2595817_3.jpg 自从上论坛后，掌握了很多以前不知道的东西。曾经帮领导打不确定度那本书，对粪大肠菌群有没有不确定度也有过疑惑，后来看到过类似的帖子，明白了原因。欢迎做水质生物检测的分享大家实验过程中的问题及解决方法，让新手少走弯路！

开始写这篇采购日记之前，先上一幅图片吧~http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203112244_353999_1608408_3.jpg 看到这幅图片，版友们可能会有很多疑惑：1、这些本本都是什么呀？答：仪器使用说明书2、这些说明书看上去都差不多，为什么会有这么多本？答：共有四本，因为都是同系列不同厂家的说明书，所以看上去都差不多~至于为什么会有这么多本。。。这就是接下来我将要为您讲述的我的曲折的仪器采购之路啦~N年前，由于实验需要，公司决定增加一台FP640火焰光度计，为了能使仪器尽快应用到试验中去，我将各厂家的仪器，在性能啊，使用啊，口碑啊等等方面做了大量的对比、调查工作（此处省略1000字），最后才将仪器的具体资料交给采购部门。然后，开始了漫长的等待（地区比较偏僻么，路漫漫其修远兮么~）一个半月以后，仪器终于在我们焦急的期盼中施施然到来了~它被装在一只木头箱子里，箱子四周被很负责任地打上了厚厚的木条。然而，当我们打开箱子时，却傻眼了：仪器并不是我们指定的厂家生产的么。。。采购部门说，采购过程中，有人特别介绍了这款仪器，说是性能特别优秀。。。我将信将疑看一看生产厂家的名称，居然是从来没听说过的。。。虽略有不悦，但是在采购部讲明了，仪器使用以后如果有问题，保证会换货的情况下，我们还是礼貌地将仪器留下了。不曾想，这一礼貌动作，造成了后来一段时间，我在论坛狂发求助帖却应助者稀少的悲惨局面，当时好像都是悬赏贴来得？啊啊，我可怜的积分啊。。。先上一幅图片，大家看看它长什么样子吧~（当时的仪器没拍照留存，这是被我私自扣留的说明书里的图片截图~）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203112245_354000_1608408_3.jpg收到仪器的第二天，我开始着手对这台仪器进行调试。然后发现，这台仪器从总体上来说还是很不错的，比如：空压机只要给它通上电，它就能立马开始工作，点火也没有问题。。。但，还是有两点瑕疵必须要解决好才能让仪器正常使用：一个是显示框中的读数始终难以稳定的问题，二个是数据的重现性不好的问题。毫无疑问，问题一为问题二的产生奠定了坚实基础。。。在经过论坛中发帖求助、多次致电厂家并根据其意见调试无效果（本文仅具体阐述购买仪器时的艰辛历程，故此处继续省略7000字~），又跟采购部无数次沟通协商以后，又一只装有FP640火焰光度计的箱子，于一个多月以后出现在我们眼前。。。我们实验室中的女将们，个个都很能干，只花费了七牛二虎之力，就撬开了包裹在箱子外层的木条，顺利地打开了木箱。安静地躺在木箱里的仪器让我欣喜：这不就是自己两个多月前提交的报告中所要求的那一台嘛~~然而，当仪器被搬离箱体，放置在操作台上的时候，我又傻眼了。。。

在GB/T 21915-2008食品检测中，突然出现峰型分叉，分裂，一步步开始了寻找峰型异常的艰难之旅[img]file:///C:/Users/maqy/Documents/WXWork/1688853676850491/Cache/Image/2019-08/登记表填写引导.jpg[/img]2018年2月27日准备做GB/T21915-2008 食品中纳他霉素的测定，按照国标中的方法配制流动相，标准品溶液，迫不及待地进样，满心期待，满以为顺顺利利，谁曾想，结果令人大跌眼镜，标准品的色谱峰居然“奇丑无比”，不相信？不信请您上眼：[align=center][img=,690,381]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910301035183040_8991_3389662_3.jpg!w690x381.jpg[/img][/align] 标准品分解了？还是标准品纯度不够？这种念头在我头脑里一闪念，但是这种念头立马就又被否定了。据我所知，纳他霉素这种食品添加剂是相当的稳定，有效期5年，还是进口标准品，并且从购买回来到现在是第一次使用，保存条件一直符合要求。 看看国标方法中的条件：流动相：甲醇+水+乙酸（60+40+5），C18色谱柱，标准储备液配制：称取标准品，甲醇溶解，没错啊！不死心，重新来过，依然如故，有点晕了。心思烦乱，同时又忙，先把这个事儿放一放，随后再说。 一转眼，7月5日，又想起来纳他霉素，把GB/T21915又翻出来，不死心，再试一次，不试还好，这一试，更害怕了，一个峰居然变成了两个：[align=center][img=,690,328]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910301035333580_88_3389662_3.jpg!w690x328.jpg[/img][/align] 难道真是纳他霉素分解了，这一次我横下一条心，一定要把事情搞清楚。新买一支标准品，进行实验。实验的结果，令我大惑不解，峰型和以前没什么差别，趴在桌子上想啊想。难道是“溶剂效应”？“溶剂效应”在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]上表现得非常突出，在反相色谱中，只要溶解样品的溶剂强度强于流动相的强度，样品峰峰型大部分情况下就会分裂，更经常的情况下会完整地分成两个峰。但是按往常的经验，在反相液相色谱中 ，这种“溶剂效应”一般还不至于这么明显，顶多峰会变成前沿峰！想到这，我好像看到了一线曙光，赶紧试一试。立马，将进样前的工作标准液所用溶剂由原来纯甲醇改成和流动相一样的比例，又一次迫不及待地进样，验证奇迹的时刻马上就要到了，我内心一阵激动，进样，一分一秒过去，峰出来了：[align=center][img=,690,357]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910301035575008_322_3389662_3.jpg!w690x357.jpg[/img][/align]近乎完美！真相大白，果然是由于该死的“溶剂效应”。我顿时感慨良多，真是山重水复疑无路，柳暗花明又一村，这次经历可真是蜿蜒曲折啊！众所周知，一般做过液相色谱或者是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]的人都会有这种经验，对于反相色谱来说，有机溶剂为强溶剂，水相为弱溶剂，当溶解样品的溶剂强于流动相的强度时，在液相色谱中一般会出现前沿峰，而在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]中，峰很容易就会劈裂成两个峰，但在液相中一般不会出现这种严重的情况，如果在样品能溶解彻底的情况下，尽量使用强度弱一点的溶剂，这样能使峰型更加尖锐，更加对称，柱效更高。对于纳他霉素这种物质来说，这种“溶剂效应”尤其明显，超过了一般的其他物质。 不过，这也是一件好事，正好也给大家提了个醒，“溶剂效应”不可小觑，如果大家也遇到纳他霉素，可要当心了哟，“牺牲我一个，幸福十亿人”，哈哈哈，有点夸张了。

你是否有遇到过这种情况，公司关于有害物质管理系统程序文件很齐全，内容很丰富，但实际执行却少之又少，形同虚设；当你在和供应商讲解相关知识时，供应商说XXX测试机构就是RoHS,或者说测163项，就符合客户的要求，是不是会觉得哭笑不得呢？在这几年的工作中，发现真正推行和执行有害物质系统是条很艰难的路，至少我是这么觉得，不算抱怨，只算是吐槽吧。个人觉得在有害物质管理体系执行方面，以下三点是基础，直接影响着执行效果，而这也是大家经常会面对的问题。一：公司高层的重视。在工厂，大多数人还是停留在RoHS指令，熟不知客户的要求远远严于RoHS指令，所以内部培训传达客人要求很重要，在组织培训过程中，你会发现高层的态度很重要。在高层人员变更之前，我们组织相关培训，高层会亲自出席，同时相关部门管理无论是出于高层的威信还是其他原因，也都很配合参加，记得人多的时候有100多人参加培训；而变更高层后，高层没有亲自参加，其它部门也很随意，同样的组织培训竟然只有20几个人参加。。。。，在理解客户要求方面已经落后了一步。二：市场部同事传达客户要求。正常逻辑，在新客户或新客户要求有变更时，市场部要做的是正确传达客人的有害物质要求，或是转发客人标准时，在我们理解客户特殊要求有异议的时候应及时起到沟通桥梁的作用，而实际上会有大多数市场部同事不知为什么不愿反馈信息给客人，这也导致在标准理解方面存在不清不楚的时候。三：采购部的态度。在工厂品质部相对是弱势的，而有害物质管理这方面往往也是属于品质部，很难有话语权，如果采购部也很弱势的话，那么在供应商管理方面也就很困难，如资料的索取，物料的追溯分析等。 源头控制不好，会是一个很大的隐患。总结：在如今有害物质指令法规种类多，限值严的情况下，不是一份简单的声明，或是一份测试报告就能解决问题的，需要一个系统的管理，而系统要做到真正被执行，困难重重。针对客户特殊要求，建议抽样测试，预先判断，否则会增大风险，但一些工厂为了节约成本，往往忽略这块，以致等客户抽样时发现不合格那就后悔都来不及了。总之，有害物质管理的执行是条漫长而曲折的路，最为推行和监督者更是任重道远。相关同行和版友如有好的建议和经验，欢迎分享。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508102030_559866_1678646_3.png

[b][color=#cc0000] 曲折的囧事——[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]维护二三事[/color] [color=#000099] 生活工作亦或是做事，有很多的方式渠道和途径，有曲线的有捷径的，而且经历收获、感受意境各有不同..[/color][color=#000099] 曲线之美值得欣赏，曲线之路别有风味，不同的境遇欣赏收获不同的风景；直线的距离最近省时省力事半功倍，但闻所见有几多简捷而不繁琐、聪颖而不模糊的时人时事呢——火车路是弯的，大桥是斜的，人生之路是坎坷的，就连当年的救国之路都是曲折的呢[/color][color=#000099] 呵呵...怎么讲起辩证的诡论来了呢，是诡辩还是吐槽？这不是我的专长，其实我想说的只是一些本能的习惯性的琐碎的曲折囧事——色谱仪器维护二三事。[/color][color=#cc0000][/color][color=#cc0000]囧事一： 配置不兼容麻烦事情多[/color][/b] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]GC9890A是属于一种低量程外置工作站的分析仪器，适用于配置外置N2000色谱工作站或者SD-2020色谱工作站原来的配置是这样的： 色谱仪配置——稳流阀-背压阀控制进样器，PEG-20M毛细色谱柱，FID检测器 数据处理系统配置——N2000工作站 （N2000工作站只适用于低配置的Windows XP系统或者Windows 7系统 32位处理器） 电脑系统配置：Windows XP[img=,690,505]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010503093964_6201_2960432_3.png!w690x505.jpg[/img][img=,690,508]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010504504103_2372_2960432_3.png!w690x508.jpg[/img] 现在呢，对本色谱仪排上了新用场，分析成分发生了变化，于是乎便配备新的色谱柱，当然色谱仪原壳原件还是必不可少的，需重新维护使用，对于数据处理系统因势就事也做了相应的配置。 色谱仪新配置——稳流阀-背压阀控制进样器，HT-WAX毛细色谱柱，FID检测器 数据处理系统配置——SD-2020色谱工作站（SD-2020色谱工作站适用于高配置的Windows 7系统 64处理器或者Windows 10 系统64位处理器）电脑系统配置——Windows 7 旗舰版 64位处理器[img=,690,366]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010506141407_7785_2960432_3.png!w690x366.jpg[/img][img=,690,392]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010508168819_9949_2960432_3.png!w690x392.jpg[/img] 说起处理系统与电脑的配置还真的是囧事一桩，由于对电脑与工作站的兼容性没有足够的认识，造成了购置的电脑（Windows 7系统64位处理器）与原来的工作站（N2000色谱工作站）不兼容的事情，电脑系统版本配置太高，工作站无法安装，怎么办呢？两个办法——要么换电脑系统要么换工作站。考虑到工作站的稳定性和系统的更新换代，最终决定更换工作站得以解决。[b][color=#cc0000]囧事二：仪器搁置太久维护检查麻烦多多[/color][/b] 色谱仪GC9890A原购于2015年，由于种种原因处于长期搁置状态，现在重新维护使用，其状况也就不可预料。首先对其进行设置—点火—老化程序升温：PEG-20M 30m*0.32mm*0.33um毛细柱老化方法，检查仪器状况是否正常。1：气路流量压力设置(仪器属于机械阀手工调节）载气:6.5圈（稳流阀入口总流量：30ml/min，稳流阀控制分流流量）清扫:6圈（针型阀控制清扫流量：3ml/min）背压阀（柱前压:0.075MPa，背压阀调整柱流量：1ml/min）尾吹:6圈（针型阀控制尾吹流量：30ml/min）氢气:4.5圈（针型阀控制氢气流量：30ml/min）空气:8圈（针型阀控制空气流量：300ml/min）2：参数设置柱箱温度:60℃进样器温度:230℃检测器温度:250℃3：程序升温设置初始温度:60℃初始时间:2min升温速率:15℃/min终止温度:230℃终止时间:60min最高保护柱温:240℃ 稳流阀-背压阀控制模式下，稳流阀控制入口总流量，背压阀调整柱头压（柱流量），同时针型阀控制隔垫吹扫流量，稳流阀的总流量=柱流量+针型阀隔垫流量+分流流量，在背压阀设定的情况下，针型阀固定了隔垫吹扫流量的时候，稳流阀的开度大小就决定了分流流量的大小。程序升温的时候，色谱柱阻力增大，在背压阀设定的柱前压的情况下，柱流量减小，在背压阀设定的柱前压的情况下，针型阀控制的隔垫吹扫流量不变，同时，也是在背前压的情况下，稳流阀控制的总流量不变，分流流量增大，分流比增大。老化色谱图[img=,690,345]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010510022524_3277_2960432_3.png!w690x345.jpg[/img]根据老化基线可以看出：仪器状况有问题，检查维护勿质疑——检查更换进样垫，检查更换衬管，柱头截取重新安装色谱柱。1：检查更换进样垫[img=,690,476]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010511089504_8563_2960432_3.png!w690x476.jpg[/img]2：检查更换衬管[img=,690,415]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010512145935_3204_2960432_3.png!w690x415.jpg[/img]3：截住头重新安装色谱柱[img=,690,418]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010513216485_6543_2960432_3.png!w690x418.jpg[/img]4：所用配件及工具[img=,690,483]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010514232676_7363_2960432_3.png!w690x483.jpg[/img][img=,690,388]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010515211304_9687_2960432_3.png!w690x388.jpg[/img]安装适应于分析新样品的色谱柱：HT-WAX 60mm*0.32mm*0.5um毛细管柱，进行程序升温老化，1：气路流量压力设置载气:6.5圈（稳流阀入口总流量：30ml/min，稳流阀控制分流流量）清扫:6圈（针型阀控制清扫流量：3ml/min）背压阀（柱前压:0.1MPa，背压阀调整柱流量：1.33ml/min）尾吹:6圈（针型阀控制尾吹流量：30ml/min）氢气:4.5圈（针型阀控制氢气流量：30ml/min）空气:8圈（针型阀控制空气流量：300ml/min）2：参数设置柱箱温度:50℃进样器温度:200℃检测器温度:240℃3：程序升温设置初始温度:50℃初始时间:3.5min升温速率:15℃/min终止温度:230℃终止时间:120min最高保护柱温:240℃老化色谱基线图[img=,690,252]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010516340263_1240_2960432_3.png!w690x252.jpg[/img]分析产品(乙醛工业品）色谱图1：气路流量压力设置载气:6.5圈（稳流阀入口总流量：30ml/min，稳流阀控制分流流量）清扫:6圈（针型阀控制清扫流量：3ml/min）背压阀（柱前压:0.1MPa，背压阀调整柱流量：1.33ml/min）尾吹:6圈（针型阀控制尾吹流量：30ml/min）氢气:4.5圈（针型阀控制氢气流量：30ml/min）空气:8圈（针型阀控制空气流量：300ml/min）色谱柱：HT-WAX 60mm*0.32mm*0.5um毛细管柱，柱温：50°C，进样器:200°C，检测器:230°C。进样量：0.15uL程序升温： 初温:50°C，初始时间:3.5min，升温速率:15°C，终温:100°C，终止时间:2min。 [img=,690,300]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907010517359309_9833_2960432_3.png!w690x300.jpg[/img][b][color=#cc0000]小结：[/color] [color=#000099]经过一番周折，从仪器的配置到仪器的检查维护，最终达到了仪器正常使用的要求，对样品准确分析，为生产提供可靠的服务，虽然过程有点曲折但收获也是多多，有言道：不同的风景不同的歌，不同的经历不同的收获。[/color][/b]

这会快十点半了，群里安静了，高楼也没人去盖了，我呢，也终于能静下心来写仪器采购之路了呵呵~接上回~上次说到经过协商，采购部在我们满眼的期盼中，又给弄来一只装有FP640火焰光度计的箱子，然后我们的女将们驾轻就熟地很快就打开箱子搬出仪器时，我又傻眼了~为什么我会又傻眼了呢？因为这台仪器雾化室下方的平台上，有一个明显的类似烧杯底部的圆圈圈。显然，这是被试剂腐蚀过的痕迹。也就是说，这台仪器，很可能是被人用过的。。说不定，还是人家报废的一台。。。思考再三，还是决定不将此事上报领导，耐着性子继续找采购沟通。。。采购很“低调”地听完我们的情况反馈，再次语气严肃地保证：这次你们再调试看看，如果不好，我一定还给重换！有保证就行！于是我就又回来调试仪器了——换个角度想：这类仪器以前从没接触过，它在我们眼里好神秘的，如果这台真的是别人淘汰的问题仪器，那我不是就可以随意拆卸它找找毛病了么？采购给我们提供了一次多好的免费学习的机会呀！而且拆坏了还不用赔的！调试过程继续省略7000字，直接说结果：这台仪器果然是有问题的，链接雾化室的压缩空气那一段的喷雾管堵塞，没有真空过来；吸样管顶端的那个针管也堵塞，无法吸取样品~就是这里面的针管：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/05/201205082255_365712_1608408_3.jpg想了一些办法来处理，比如拿水浸泡、用进样针往针管里吹空气、超声等等，最终只解决了空气喷雾管那段的堵塞问题，吸样管这边的堵塞，是一点效果都没有。想过要找细一点硬一点的铜丝之类的来通的，但是考虑到这台仪器毕竟还是可以退的，犯不着冒着把针管通断的危险来处理，就放弃了~情况继续反馈给采购。这次采购的响应速度很快，旧的还没拿走，几天以后就又给送过来一台同型号仪器。依然是旧的，依然是问题仪器。。但是这台仪器的针管是通的。采购说，我把两台都放你这里，你就两台都试试，哪个零件不行了，直接从另一台仪器上拆过来换。。于是，几天以后，一台一开机喷雾室就子拉拉喷雾的，测定数据重现性也很不错的FP640光度计就在我的手里诞生了。。。它是我花费无数个脑细胞，经过N次拆卸组装而成的仪器，我要无比骄傲地上图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/05/201205082316_365713_1608408_3.jpg这台仪器后来使用了大概两年半，期间除了数显中的读数有时有不稳定现象外，其它几乎没什么毛病。数据不稳定的时候，我们就拿手敲一敲数显窗，或者把后面的钾钠按钮多按几次，情况就会有所改观。情况没有改观的时候，就打电话给厂商。值得表扬的是厂商的态度很不错，不仅耐心细致帮助解决问题，还免费寄来钾钠按钮给我们更换，虽然更换后效果不佳~但是最后，我的耐心还是被一次次跳动的数字给磨没了，再也不愿意老是被这台仪器牵涉过多精力了。。于是，在一次事情灰常多灰常忙碌却依然要抽空解决数显不稳定问题的情况下，我终于果断决定换仪器了。。这次学聪明了，不仅给了采购仪器名称，型号，还给了仪器厂家的电话，地址，过程中不断跟踪，更严正声明：绝不接受问题仪器，否则后果自负！来看看后来购进的这台仪器~这是一台全新的仪器，真正意义上的全新~http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/05/201205082337_365714_1608408_3.jpg仪器调试是一次性成功的！使用了这台仪器已经一年多以后的我，现在终于可以很感慨地总结了：1、从此以后，我就过上了幸福平静的快乐生活http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09510.gif2、年轻时候的我，岂止是有一点点傻帽。。。

[align=center][font=calibri][color=#1f4e79][b][size=24px]====PART 1 充满疑惑的开始====[/size][/b][/color][/font][/align][align=left][size=16px]2020年3月27日，这天周五，我像往常一样我又开始了兴ku奋bi的做实验。这次是做土壤和沉积物中多环芳烃的方法验证，具体指HJ786-2014这个标准。因为有两个检测器需要验证需要单独验证，所以我觉得先用DAD检测器对十六种多环芳烃进行全光谱扫描（190-800nm），这样就能很快发现十六种目标化合物的保留时间。[/size][/align][align=left][size=16px]这里先说一下我当前的仪器条件：岛津LC-20AT四元低压液相系统，配合二极管阵列检测器（SPD-M20A）和荧光检测器（RF-20A），流动相准备了A乙腈B水C甲醇。流速控制在1ml/min。[/size][/align][align=left][size=16px]想法很美好，但是现实却很残酷。我设置好梯度洗脱程序，进了一针1mg/L的乙腈十六种多环芳烃（没加十氟联苯），设置好计时闹钟，就去办公室忙别的去了。。。[/size][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148295238_1900_3352385_3.png[/img][/align][align=left][size=16px]当我还沉浸在三针之内必定将方法优化好的错觉之中的时候，第一针完成的结果却给我沉重的一击。我数来数去发现只有十五个峰。我擦，人品这么差？？？？这十六种多环少说也做了十多次了，怎么这次这么奇怪？我那一个峰被老鼠吃掉了。[/size][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148296742_9176_3352385_3.png[/img][/align][align=left][size=16px]我一边让自己不要慌（其实慌得一批），一边开始排查原因：[/size][/align][table][tr][td][align=center][font=calibri][size=16px]排查原因[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font=calibri][size=16px]可能性[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][font=calibri][size=16px]1[/size][/font][/align][/td][td][align=left][size=16px]有物质没有分离，两个物质重叠在一起了，只要调整梯度洗脱的程序，必定能发现踪迹。（90%）[/size][/align][/td][td][align=center][font=calibri][size=16px]90%[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][font=calibri][size=16px]2[/size][/font][/align][/td][td][align=left][size=16px]本佛山吴彦祖人品不好，买的标准品少了一个物质。[/size][/align][/td][td][align=center][font=calibri][size=16px]10%[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=left][font=calibri][size=16px]3[/size][/font][/align][/td][td][align=left][size=16px]其他[/size][/align][/td][td][align=center][font=calibri][size=16px]？%[/size][/font][/align][/td][/tr][/table][align=center][size=16px]针对第一个猜想的原因，我设置了不同的梯度洗脱程序，用来观察每个峰是否有分离成为两个峰的迹象，以下是我试验的梯度程序和结果。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148297640_556_3352385_3.png[/img][/size][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148298314_1702_3352385_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148299143_2608_3352385_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148301019_776_3352385_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148301907_9912_3352385_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148303127_3501_3352385_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148304144_6566_3352385_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148305198_2929_3352385_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148306293_3487_3352385_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148307279_4600_3352385_3.png[/img][/align][size=16px]一通操作下来，发现并没有改变什么？还是只有十五个峰。。。。。于是我更加慌了。[/size][size=16px]于是我验证了每一个峰的峰纯度信息，发现这些纯度均为正数，也就是说每个峰代表了一个物质，不存在有两个物质重合的峰出现。[/size][align=center][font=calibri][color=#1f4e79][b][size=24px]====PART 02 不可思议的原因====[/size][/b][/color][/font][/align][size=16px]于是我将1mg/L的乙腈中十六种多环芳烃用GCMS走了一针样品，结果发现缺少“菲”。我将公司购买的同一批次的标准溶液又打开一只，发现还是缺少“菲”，这就说明这一批次的标准溶液均缺少这个物质。[/size][size=16px]这下真相大白了，但是也耽误了不少时间。然后上报领导并且联系供应商。供应商说之前没有遇到过这样的问题，然后就是答应按照之前购买的数目重新免费发新批次的标准溶液给我。但是耽误的时间再也找不回来了。[/size][size=16px]以下是经过gcms分析的图谱，其中缺少‘菲’。[/size][size=16px]（此处缺的图以后补上）[/size][align=center][font=calibri][color=#1f4e79][b][size=24px]====PART 03 意外的结局====[/size][/b][/color][/font][/align][size=16px]本以为这件事就此尘埃落定，我也能安心的开始做我的方法验证。但是现实再次给我出了个难题。[/size][size=16px]在4月21日16多环芳烃（DAD）分析过程中发现，十氟联苯的峰位置与HJ748-2016上表示的位置不一致。具体为：HJ748-2016多环芳烃中替代物十氟联苯的位置为第9位，介于（8—芘；9—十氟联苯；10—苯并(a)蒽）；而此次发现在该系统中，十氟联苯的位置在第八位[/size][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148308449_6976_3352385_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148309818_8978_3352385_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148310656_4372_3352385_3.png[/img][/align][align=center]附分析条件：时间程序（见图5）：A乙腈B水；检测器DAD；色谱柱：C18硅胶柱 250mm*4.6mm*5um，型号为Shim-pack GIST(Sμm C18）；流动相流速：1ml/min。[/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148311662_9970_3352385_3.png[/img][/align][align=center]同时我还发现了另一个现象？[/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148312386_2330_3352385_3.png[/img][/align][align=center][size=16px]我按照实际情况，将十氟联苯的位置稍作调整，开始了方法验证之旅。至于这个情况，只要不影响定量分析，不管了。[/size][/align][align=center][font=calibri][color=#1f4e79][b][size=24px]====PART 04 一波三折====[/size][/b][/color][/font][/align][size=16px]在我完成了二极管检测器的方法验证之后，切换为荧光检测器的时候，诡异的事情发生了。[/size][size=16px]先说一下准备用荧光检测器做十六种多环芳烃的验证环节的时候。首先找打了岛津公司网站上的应用案例，按道理来说，这种案例应该是比较具有参考性的，毕竟我想标准制定者再怎么水，作为一家仪器公司应该会实际去验证一下，给客户一个比较好的参考。[/size][size=16px]现实是我又一次错了。[/size][size=16px]让我们先看下岛津公司提供的相关应用案例。[/size][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148313089_4979_3352385_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148314182_5088_3352385_3.png[/img][/align][align=left][size=16px]根据上述时间程序，更改变参时间，匹配我自己的梯度洗脱方法。然后就得到了如下的图谱。[/size][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148314935_8950_3352385_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148315891_3337_3352385_3.png[/img][/align][align=left][size=16px]我有点想骂人了，又有点想哭。[/size][/align][align=left][size=16px]然后我又根据HJ784，重新给化合物分组，重新设置时间程序。[/size][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148317307_880_3352385_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148318508_5207_3352385_3.png[/img][/align][align=left][size=16px]发现第七个峰的积分出现问题，重新调整了变参时间。[/size][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006012148319261_9069_3352385_3.png[/img][/align][align=center][font=calibri][color=#1f4e79][b][size=24px]====part 05 新的问题====[/size][/b][/color][/font][/align][align=center][font=calibri][size=18px][color=#1f4e79][b]茚并（123-cd）芘和苯并（ghi）苝位置互换了。？[/b][/color][/size][/font][/align][align=center][i][b][size=18px]====引用文献====[/size][/b][/i][/align][size=16px]1. HJ784-2016 《土壤和沉积物 多环芳烃的测定 高效液相色谱法》[/size][size=16px]2. HPLC法检测土壤中的十六种多环芳烃 form 岛津中国官网[/size]

今天我去了趟香港的中央图书馆，有种震撼的感觉，一回来就想把我的感受与朋友们分享一下。先说个前言，因为这些我才走入了“她”。本人来香港也一周有余了，从一个office lady变成housewife，经过了初来的新鲜与休息之后，现在更多是无聊与恐惧啊，于是心理一直想着要报个班学习一下我的英语口语与听力。朋友介绍了British Council（英国文化属）的培训中心，该中心是在英国是个慈善机构，所以不是以赢利为目的，而是为了传播英国文化，说明其是个正规机构，而另一个吸引我的原因则是价格在我能够接受的范围之内，５７小时课程的收费在４２５０元。于是周一中午我到中心咨询报名事宜，见了中心的接待小姐，用我蹩脚的英语与其交流之后，我预约了下午３：４５的分级测试（中心规定报班之前要进行测试，建议你应该学习的级别）。在等待了数小时之后，终于轮到我测试。测试分为两个部分，第一部分是３０分钟的笔试，问题很简单，但是也有些比较晦涩的难理解的，我匆匆答完交卷，成绩没有我预想的好，２９（４０）分，经老师划分我属于level5，不知道这属于什么水平，随后就是口语测试了，一位女外国教师是测试员，我跟她有了一些简单的对话，由于紧张，平常也不经常说，所以表现可想而知了，她给我的评价是我的口语和听力比较弱，不如我的阅读，建议我读Level４的班。虽然心理有点难过，学了１０几年的英语了，水平还是不咋地，不过想想我不就是要学习嘛，所以也就释然了。拿了表之后，我就去前台准备交钱了。可是谁想，我要学的课程已经满员了，而下次开课的时间是明年２月，这一等就久了。于是跟工作人员说明我的情况，看看能不能变通一下，可是对方一个劲跟我说no，我想既然学不了listening&speaking的课程，那我就学reading&writing吧，总之不能在家呆着，我这么一说，对方告诉我：我只能报老师建议我学的课程，其他的我不能报。晕啊，当时就想怎么我想交钱还不能学呢，如果在内地，情况肯定就不一样了。但是同时我对这个机构的信任度也大大的提高了，他们对学员是极度负责的，我想明年２月我还会来报名。晚上回家跟lg一商量，觉得还是应该再找别的班，等２月了再报这个班。于是在网上一通寻找，终于找到一个在附近，而且收费仅１０００元（２０小时）的班，刚好马上开班，正合我的心意啊。第二天一早就打电话咨询，可是问题又有了，必须有香港的身份证才能报名，可是我还没有办，办下来班的开课了，于是报班又一次失败。不过偶然间我发现一个练习口语的好方法——打电话。经过了解才知道，我所选择的课程基本上都是香港各个大学或机构主办的持续教育课程，而香港政府对此是很支持的，如果是香港居民，他们报读这些课程是可以申请援助的，所以课程也比较受欢迎，而且要求也比较严格。身份证的办理还需时日，暂且也就放下了此事。可是我也不想每天呆在家里，在网上一通查询后，找到了离家较近的香港中央图书馆。今日下午，我就一个人欣然前往，本来只是去探探路的，没想到有了一翻不错的收获。第一个震撼是该图书馆进入是不需要任何证件的，可以随意出入，当然如果你要把书借回家的话，就需要办一个图书证；第二，每层的功能划分很明确，各类图书，各种报纸应有尽有；第三，特别的人性化，即使一家人前来也没有问题，二层的儿童阅览室，除了书籍之外，还专设有儿童游玩的区域，家长可以把孩子放在那，自己寻找感兴趣的书籍阅读；第三，每层都有供读者阅读的沙发，比较舒服，如果你想自习的话可以到带有桌子的地方，我就看见很多学生在那学习；第四，第５层设有多媒体资料阅览室、音乐视听室、电影视听室，设置有很多的电脑，您可以选择你喜欢的听或看；第五，也是最吸引我的是图书馆专门设有语言学习室，里面配备了先进的语言学习的多媒体软件，您可以在网络上学习图书馆提供的课程，也可以在旁边的资料室选择您想学习的课程（光碟）进行自主学习。经过一翻考察之后，我决定以后每天都到这来，在这里我可以找到我想要的一切。建议大家如果来香港一定要到位于铜罗湾的中央图书馆感受一下。下面给大家呈现几张图书馆内的照片。中央图书馆外观[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2007/11/200711072105_69351_1634115_3.jpg[/img]中央图书馆内部[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2007/11/200711072107_69352_1634115_3.jpg[/img]视听区[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2007/11/200711072107_69353_1634115_3.jpg[/img]书架上随意取阅的书籍[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2007/11/200711072113_69355_1634115_3.jpg[/img]

[b]研究多结构域蛋白阶段性去折叠[/b]很多生物大分子的功能与其构象和构象动力学密切相关，如蛋白质的生物功能需要其正确折叠成自然形态。错误折叠或者未折叠的蛋白会(部分)失活或者产生毒性，如错误折叠的蛋白与神经退行性疾病有关。研究蛋白如何正确折叠并改变构象以实现生物功能对理解其机制与疾病发生至关重要。单分子力谱(SMFS)是研究这些分子现象的理想工具，因为其具有独特的分离个体生物分子和实时观察构象变化及去折叠过程的功能。由于SMFS具有高敏感度和施加机械力的能力，可以直接操纵单个蛋白并通过测量其长度变化(亚nm级)观察构象改变。接下来我们使用LUMICKS开发的高分辨率光镊-荧光显微镜C-Trap演示了对钙调蛋白(CaM)的折叠过程的研究。[img=,500,110]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808021105519876_1986_981_3.png!w690x153.jpg[/img][img=,218,200]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808021106425366_604_981_3.png!w217x199.jpg[/img]1 多结构域蛋白的去折叠实验图解。具有3个结构域的蛋白通过DNA连接至两个被光所捕获的微球。2 通过改变光阱之间的距离可以对蛋白施力并检测断裂的发生。使用层流微流控和自动装载功能，N-端和C-端连接有DNA的单个CaM蛋白可被两个微球捕获(图1)。[img=,227,200]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808021108116955_1942_981_3.png!w220x193.jpg[/img]3 10 mM Ca2+浓度下CaM的力-拉伸距离(蓝色)和力-收缩距离(红色)。拉伸与收缩的速度为100 nm/s。微球直径为1.0 μm，光阱的刚度为0.284 pN/nm。[img=,500,161]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808021108223351_3734_981_3.png!w638x206.jpg[/img]4 10 mM Ca2+浓度下CaM的多个状态下的动态平衡。图为50 kHz(灰色)和200 kHz(红色)下记录的数据。在右侧直方图中可以看到两个清晰的峰即表现为蛋白最常处于的两个状态。第一个实验，在10 mM Ca2+条件下对CaM的机械拉伸与收缩行为进行了记录。首先对100 nm/s的速度下的拉伸与收缩的相关数据进行了记录(图3)。随着施加的力增加，可观察到两个去折叠的阶段，表现为力的突然下降，与两个螺旋-环-螺旋结构域的去折叠相符合。由此可以得出结论，基于C-Trap设备的力和距离的高分辨率(100 Hz时误差在0.2 pN以下和0.5nm以下)，去折叠的发生可以用力谱的力-距离曲线来确定。这种测量非常适合用于比较正常蛋白与发生了改变或损伤的蛋白的折叠的相关数据。接下来研究光阱位置固定时CaM的折叠、去折叠的动态平衡，对蛋白长度的变化进行测量并确定中间态的转变(图4)。对CaM分子施加7.5 pN的力，可以观察到三种状态之间的波动，反映了螺旋-环-螺旋亚结构域的折叠和去折叠，波动的数据图像与之前的研究1,2相符(图4)。仪器所获得的稳定的高质量数据为蛋白的折叠和去折叠之间的动态转变的检测提供了大量有效的信息。通过这种方法可以对不同状态的驻留时间和转变动力学进行测量。这些信息使得我们对特定蛋白的折叠、去折叠过程产生进一步的了解。对折叠和去折叠的动力学以及构象改变的研究表现了一种突破性的生物学和生物物理学研究方法。使用C-Trap光镊-荧光技术可以观察到折叠和去折叠现象还有动态平衡，使得科研人员可以研究去折叠的中间态并获得蛋白的结构与功能信息。对蛋白折叠和构象的进一步研究仰仗于C-Trap的高敏感度和多通道荧光单分子FRET功能，通过检测FRET效率信号与力的波动的变化来进一步检测蛋白构象，可以得到蛋白的机械性质与结构之间的关系。[b][/b]

仪器更换了衬管、色谱柱，开了工作站，更改了仪器配置（色谱柱），调用方法后加载，启动了系统，进样口、检测器温度以及柱温都升了上去，但是SPL1压力和流量上不去，显示CRA1吹扫气泄漏和CAR1 AFC泄漏错误。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607241808_601643_2668708_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607241808_601644_2668708_3.pnghttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gifhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif开始以为自己柱子没装好，开柱箱检查，发觉进样口有点松，加紧，无用！只能关机检查。由于之前坏过一次AFC，特别担心最近频繁开关机又坏了，就麻烦了！装柱子时就留意到装进样口端开口螺母不是很好装，感觉有点滑丝了。检查发现分离平板下的螺纹滑丝，换了新的分流平板，由于没有找到新的开口螺母，旧的也没有像分流平板滑丝那么严重，也能顺利装上去就没在意。又一次检查了衬管是否有裂纹，更换了O型圈，清洗了下进样口，重新开机，结果还是报一样的错误。有同事觉得可能柱子堵了，就更换了一根色谱柱试试。结果进样口压力上去了。然后又把柱子卸下来，切了一下之前使用的那根色谱柱，重新装机尝试。压力流量都正常，可达到设定值，但是点火时，发觉点不着，关了尾吹都不行，借助打火机也不行。只能再一次关机，拆喷嘴，清理检测器端。一系列维护工作后，开机验证，还是不行。由于那天忙着做重要实验的前处理工作，仪器维护交代给同事，隔三差五地看下进展。折腾了这么久，都没好，只能自己来动手。再次关机，卸柱子时发现同事把之前进样口端的开口螺母和检测器端的开口螺母调换了位置，这时候终于发觉所有问题的关键都出在开口螺母的一点点滑丝上，果断地更换后，仪器恢复正常。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607241809_601645_2668708_3.jpg此次的曲折维护，让我明白，仪器配件真的不能将就，滑丝不明显的将就让我们兜转了一大圈，反复排查了那么久。分流平板滑丝后更换，开口螺母也要相应地更换新的。人都不愿意将就，更何况精密仪器呢？