梯度型扩增仪

PCR扩增线粒体DNA(mtDNA)的序列分析正迅速成为法医测试中公认的手段。法医mtDNA应用关键性的第一步，是确定这些扩增产物片段大小、纯度和浓度是否适合序列分析。Agilent 2100生物分析仪和DNA 500 LabChip能够准确而精密地测定 DNA片段的大小和浓度。在这篇应用报告中，用生物分析仪在序列测定前快速而有效地分析了PCR扩增的DNA片段。

近年来细胞治疗领域取得的进步大大提升了对T细胞扩增技术的需求。T 细胞必须能够迅速扩增，才能在维持高存活率和T细胞属性的同时达到高细胞密度。

PCR扩增过程中，每一轮循环均检测一次荧光信号的强度。随着反应循环次数的不断增加，所扩增的目的基因片段呈指数规律增长，反应中产生的荧光信号强度与PCR产物的数量呈正比。仪器实时检测和采集的荧光信号，随着时间和循环数的不断增加，产生一条反映实时荧光信号强度变化的曲线，称为扩增曲线。扩增曲线以循环数为横坐标，荧光强度为纵坐标。

环介导等温扩增( LAMP) 技术是近年发展起来的一项新的快速核酸恒温扩增技术，具有高效、快速、特异、易检测、易操作等特点，自面世以来被科学家认为是能替代常规PCR 的一项扩增技术，非常适用于现场检测和基层检测。本文就LAMP 技术的原理、特点、进展及其在病原微生物检测中的应用进行了简要的概述。

引物设计：引物长度适当，18-24mers，并保证序列独特性，以降低序列在非目的片段中存在的可能性，但长度大于24核苷的引物并不意味着有更高的特异性，较长的序列可能会与错误配对序列杂交，反而降低特异性，而且长序列比短序列杂交慢，影响产量； 引物浓度：引物的浓度会影响特异性。最佳的引物浓度一般在0.1到0.5μM。较高的引物浓度会导致非特异性产物扩增

实验方法原理TA克隆 系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3' 末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3' T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点（MCS）中。 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。 T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步：首先，T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物；然后，酶-ATP复合物再结合到具有5' 磷酸基和3' 羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最hou产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。连接反应通常将两个不同大小的片断相连。因为DNA片断有两个端点，所以切割时出现两种可能，一种是单酶切，另一种是双酶切，这两种酶切方法在基因工程操作中都经常用到。对于单酶切来说，载体与供体的末端都相同，连接可以在任何末端之间进行，这样就导致了大量的自连接产物。为了减少自环的高本底，可对载体进行5' 除磷酸处理，原理是连接酶只能连接DNA片断的3' OH末端与5' 端，所以除磷后载体不会自环。一旦有外源片断插入时，由外源片断提供5' 端就能与载体进行连接。通过这种方法可大大减少由载体的自环造成的高本底。对于双酶切来说，无论载体与供体同一片段上都有不同的末端，这样就避免了载体与供体的自环，能使有效连接产物大大增加。双酶切的另一个特点是能将供体分子定向连接到载体上。 连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。因此采取折中的温度，即12-16℃，连接12-16h（过夜），这样既可最da限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。Taq DNA酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱基，可以与pGEM-T Easy Vector 末端游离的T碱基互补形成环状重组T质粒。

随着3D生物打印和人类诱导多能干细胞(hiPSCs)的出现，组织工程领域发展迅速，但由于缺乏功能丰富的厚组织，影响有限。绕过这一限制的方法之一是用含有 hiPSCs 的3D 生物打印组织。通过这种方式，iPSCs可以在实质细胞分化之前增殖并填充厚组织块。在这里 , 我们设计了一个灌注生物反应器，用于装载hipsc的3d生物打印室， 目的是在分化之前在 整个结构中增殖hipsc，以产生厚组织模型。生物反应器由数字光投影制成，经过优化，可 以在水凝胶室内部灌注而不会泄漏，也可以在外部提供流体流动，从而最大限度地提高整 个室壁的营养输送。经过7天的培养，我们发现在3ml min-1下间歇灌注(每15分钟15秒)，相 对于在静态条件下培养的类似腔室，工程组织中的干细胞集落密度增加了1.9倍。我们还观 察到，相对于静态对照，灌注结构的组织壁内的菌落分布更均匀，反映了培养基中营养物 质的均匀分布。在流体流动的作用下，hiPSCs保持多能性和增殖性，产生平均约1.0 dyncm-2 的壁剪切应力。总的来说，这些充满希望的结果在灌注干细胞水凝胶后支持多种组织类 型的产生，并改善了厚度，因此增加了功能和实用性。

核酸检测是新冠肺炎确诊的重要标准，也是精准医疗的基础，常被应用于传染病检测、遗传病诊断、肿瘤风险预测、食品安全检测、海关检疫、法医鉴定等领域。

PCR仪一般分为普通PCR仪、梯度PCR仪、原位PCR仪以及实时荧光定量PCR仪四类。普通PCR仪是指一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，能够应用于简单的目的基因退火温度的扩增。选购基因扩增仪的时候，可根据它的应用领域和特点，选择适用的仪器设备。

离子交换是温和条件下分离蛋白质混合物的一个非常有用的技术，最常见的是应用增加盐浓度的缓梯度溶液进行洗脱。pH 梯度洗脱使用频率较低（除专属应用外，例如色谱聚焦），并且需要复杂的缓冲液体系。尽管如此，如今的四元液相色谱系统完全能够利用常规缓冲盐实现 pH 梯度洗脱。本篇应用报告中，我们展示了 pH 梯度洗脱在分离单克隆抗体带电异构体时的优势。本文的工作使用了 Agilent Bio mAb 色谱柱、安捷伦 1260 Infinity生物惰性四元液相色谱系统和安捷伦缓冲液顾问软件。

近年来，聚丙烯酰胺脲梯度电泳成为研究蛋白质去折叠与再折叠的非常重要的实验技术之一。脲梯度电泳的基本原理是在常规的聚丙烯酰胺凝胶中加入非离子型变性剂-尿素，使其形成脲浓度梯度。电泳时将脲梯度置于垂直电泳方向，使同一蛋白质样品在连续变化的不同浓度的脲环境中电泳，蛋白质分子随脲浓度变化而发生的结构状态的变化，因而表现出不同的迁移率，最终在显色后的凝胶中呈现出反映蛋白质构象变化的二维图像。

离子交换是温和条件下分离蛋白质混合物的一个非常有用的技术，最常见的是应用增加盐浓度的缓梯度溶液进行洗脱。pH 梯度洗脱使用频率较低（除专属应用外，例如色谱聚焦），并且需要复杂的缓冲液体系。尽管如此，如今的四元液相色谱系统完全能够利用常规缓冲盐实现 pH 梯度洗脱。本篇应用报告中，我们展示了 pH 梯度洗脱在分离单克隆抗体带电异构体时的优势。本文的工作使用了 Agilent Bio mAb 色谱柱、安捷伦 1260 Infinity生物惰性四元液相色谱系统和安捷伦缓冲液顾问软件。

离子交换是温和条件下分离蛋白质混合物的一个非常有用的技术，最常见的是应用增加盐浓度的缓梯度溶液进行洗脱。pH 梯度洗脱使用频率较低（除专属应用外，例如色谱聚焦），并且需要复杂的缓冲液体系。尽管如此，如今的四元液相色谱系统完全能够利用常规缓冲盐实现pH 梯度洗脱。本篇应用报告中，我们展示了pH 梯度洗脱在分离单克隆抗体带电异构体时的优势。本文的工作使用了Agilent Bio mAb 色谱柱、安捷伦1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和安捷伦缓冲液顾问软件。

PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。

在分析方法考察过程中，化学家经常评估纯化过程化合物在不同色谱柱下的化学特性，例如，对于手性化合物的纯化，通常在高效液相色谱分析中筛选几种类型的色谱柱，尽管不同类型的色谱柱，有着很大的化学差异性，尽管ACCQ Prep制备色谱系统上可以安装、使用各种类型色谱柱，ACCQ Prep可以通过只需对一种类型的色谱柱单次校准计算出聚焦梯度，该校准不局限于单个色谱柱，通用校准也可以用于不同化学特性的色谱柱，只要分析型色谱柱有相同的尺寸和使用相同的梯度和流速，就允许快速和简便的色谱方法筛选。

在ACCQ HP150 系统使用自动聚焦梯度发生器，人们无需再花时间开发或优化闪式色谱聚焦梯度方法。从单次运行分析侦察的结果，由内置工具自动计算生成聚焦梯度， 以确定是否能够在CombiFlash NextGen 系统上有效运行特定的纯化，以及制备型 HPLC 的聚焦梯度的计算或闪式色谱的纯化。当使用 RediSep制备型HPLC色谱柱与 RediSep Gold相匹配的色谱柱，以确定样品纯化和计算闪式色谱聚焦梯度，在运行时间为7 - 12min内完成（取决于HPLC系统和所使用的色谱柱）。也可以使用分析型 HPLC 系统通过ACCQPrep 聚焦梯度生成器以计算快速色谱梯度（参见Teledyne ISCO 网站上的技术报告TN52）。

梯度功能材料(Functional Gradient Materials，FGM)是基于一种全新的材料设计概念而开发的新型功能材料。由于材料构成要素(成分、组织结构等)在几何空间上连续变化，从而得到性能在几何空间上也是连续变化的非均质材料，在复杂环境下使用时，要比性能均匀的材料具有更大优势⋯ 1。FGM 最初的目的是解决高性能航空航天飞行器对超高温材料的需求，目前FGM 的应用不再局限于航宇工业，已扩大到核能源、电子、光学、化学、生物医学工程等领域。

内核富镍而外层富锰的富镍梯度三元正极材料，兼具高比容量及良好的稳定性及循环性能。本文使用岛津场发射型电子探针，对Ni、Co、Mn元素在某富镍梯度三元正极材料颗粒截面上的面分布特征进行了表征，结果显示颗粒具有明显的层状结构，外层贫镍富锰层厚度约为0.5μ m，从外壳到核心，Ni含量逐渐升高，Mn、Co含量逐渐降低。相较于扫描电镜+能谱仪配置，岛津场发射型电子探针可在超大束流下仍能保持较细的束斑直径，可兼顾成像分辨率及元素分析高灵敏度，可对富镍梯度材料进行快速有效表征。

方法开发的最终目标是获得优秀的液相色谱方法，得到可靠且可重现的分析结果。许多因素都会影响方法重现性，包括但不限于：流动相添加剂、pH、梯度斜 率/时间、温度、色谱柱尺寸、填料粒径和形态，以及色谱柱的再平衡是否适合。 方法稳定性还受LC系统设计的影响。系统设计通常反映为系统或模块的性能规格，它概述了获得最佳性能的条件。例如，已知对于需要使用长时间缓梯度的方法或者那些要求单位柱体积的溶剂组成变化较小的方法，使用高压二元泵可以达到最佳性能。很多应用都需要使用长时间缓梯度。常见的应用领域包括生物分子分析（尤其是肽图分析1和游离寡糖分析2）以及天然产物分析（包括传统中药分析3）。在本应用纪要中，我们通过运行通用肽图分析方法比较了三套高压二元LC系统的性能， 并且着重比较了这三套系统的保留时间重现性。理想情况下，在持续数日乃至数年的分析中（具体取决于分析目的），LC系统应始终能够确保不同进样以及不同分析之间的性能一致。此次评估将凸显ACQUITY UPLC I-Class PLUS系统与其它厂家的系统相比，在运行长时间缓梯度方法时的卓越重现性。

在方法开发过程中，梯度优化不仅需要创建大量的分析计划，还需要人工干预，以便根据分析结果探索最佳条件。LabSolutions MD是一款支持方法开发的专用软件，具有独特的AI算法，可自动优化梯度条件，并通过设置分离度标准，自动搜索符合标准的梯度条件。本文介绍了自动优化梯度功能在儿茶素、茶黄素和没食子酸（15种化合物）同时分析中的应用。

将使用填充了大颗粒的大体积色谱柱的HPLC梯度方法转换至填充高效CORTECS 2.7 µ m颗粒的小体积色谱柱，可轻松缩短分析时间、节省溶剂与样品消耗量，最终节约成本。在转换HPLC梯度方法时，可通过适当调整方法条件和选择相当的色谱柱填料来避免对色谱分离性能的影响。下述应用纪要展示了针对阿巴卡韦相关化合物的典型HPLC梯度方法进行适当的方法转换。阿巴卡韦(Ziagen® )是一种核苷类逆转录酶抑制剂，被用于抗HIV的治疗。该样品由五种化合物组成，其中四种为主要成分阿巴卡韦的相关物质，如图1所示。此类检测常用的色谱柱为全多孔C18, 5 µ m, 4.6 x 150 mm色谱柱。通过转换为CORTECS C18, 2.7 µ m色谱柱，可大大缩短该梯度方法的分析时间，同时还能保持目标峰的选择性和分离度。

《蒸发光散射检测器及聚合物基质氨基柱对分析普鲁兰多糖的梯度分析》--通微的横发光散射检测器（UM 5000）为国内唯一自主开发，具有高灵敏度、低噪音、兼容梯度等优点，SHODEX聚合物氨基柱适用与糖类的亲水性恩熙，具有稳定性好，寿命长等优点。本实验结合两者的产品优势，全面提高了分析质量。普鲁兰多糖作为国家卫生部许可的食品添加剂产品之一，可在糖果、巧克力包衣、膜片、复合调味科和果蔬汁饮料中用作被膜剂和增稠剂。同时也已广泛应用于医药、食品、轻工、化工和石油等领域。

《蒸发光散射检测器及聚合物基质氨基柱对分析普鲁兰多糖的梯度分析》--通微的横发光散射检测器（UM 5000）为国内唯一自主开发，具有高灵敏度、低噪音、兼容梯度等优点，SHODEX聚合物氨基柱适用与糖类的亲水性恩熙，具有稳定性好，寿命长等优点。本实验结合两者的产品优势，全面提高了分析质量。普鲁兰多糖作为国家卫生部许可的食品添加剂产品之一，可在糖果、巧克力包衣、膜片、复合调味科和果蔬汁饮料中用作被膜剂和增稠剂。同时也已广泛应用于医药、食品、轻工、化工和石油等领域。

本应用纪要展示了针对阿巴卡韦相关化合物的典型HPLC梯度方法进行适当的方法转换。此类检测常用的色谱柱为全多孔C18, 5 μm色谱柱。通过转换为CORTECS C18, 2.7 μm色谱柱，可大大缩短该梯度方法的分析时间，同时还能保持目标峰的选择性和分离度。

近年来，重金属盐被广泛的用于生物大分子的平衡等密度离心分离。本文将系统的介绍使用CsCl, Percoll, Nycodenz，metrizamide进行自形成密度梯度的方法

采用4台高速相机和LaVision的DaVis8.2.0软件平台，构成一套时间分辨拉格朗日视角3D3C粒子跟踪测速系统。对拖曳水池中的翼型进行了实验测量，并进行了基于运动方程作为物理约束的拉格朗日数据梯度估算。

本文采用一种新型双梯度液相色谱结合固相萃取建立了一种简便、快速、准确测定环境水体中百菌清的液相色谱方法。该方法大大简化了国标方法和EPA测定方法的复杂性，同时在普及性极高的HPLC-UV仪器上实现了高灵敏度检测，可作为环境水体检测上述农药的常用方法。

梯度淋洗可以改善色谱峰的分离和缩短色谱总的分析时间。梯度淋洗分为高压梯度淋洗和低压梯度淋洗。多思梯度是低压梯度淋洗的一种，可以实现二元、三元、四元及多元梯度淋洗。多思梯度不仅可以改变淋洗液的同种组分的不同浓度，还可以实现不同组分的不同浓度的改变。多思加液器的加液精度高达计量管的万分之一，可以代替高压泵进行加液#采用多思梯度淋洗技术可以得到稳定的基线和良好的重复性。

本文使用新型离子交换色谱柱ProPac Elite WCX 5 μ m 4.0mmX150 mm色谱柱和CX- 1Buffer缓冲液，进行pH梯度高分辨率分析非对称型双特异性抗体和对称型的IgG类抗体,使用MAbPac SCX-10 RS 5um 4.6 mmX50 mm色谱柱和CX-1 Buffer缓冲液，进行pH梯度高分辨率分析片段型双特异性抗体。解决了等电聚焦电泳和其他色谱分离模式不能分离的杂质异构体。给双特异性抗体的QC方法控制提供参考。

通过高分辨率显微CT对具有梯度功能的NiTi记忆合金进行扫描，无损可视化了其外观形态和内部缺陷，结合其他分析手段揭示了缺陷形成的机理。