高效样品分析

通常进行高效液相色谱分析是优先考虑的是样品不必进行预处理，就可经溶样来进行分析，因此样品在有机溶剂和水溶液中的相对溶解性是样品最重要的性质。由于样品在有机溶剂中溶解度的大小，初步判断样品是非极性化合物还是极性化合物，进而推断用非极性溶解剂戊烷、己烷、庚烷等，还是极性溶解剂二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙腈等来溶解样品，并通过实验判断。若样品溶于非极性溶剂，表明样品为非极性化合物，通常可选用吸附色谱法或正相分配色谱法、正相键合色谱法进行分析。若样品溶于极性溶剂或相混溶的极性溶剂，表明样品为极性化合物，通常可选用反相分配色谱法或更为广泛应用的反相键合相色谱法进行分析。若样品溶于水相，可首先检查水溶液的pH值，若呈中性为非离子型组分，常可用反相（或正相）键合色谱法进行分析。若pH值呈弱酸性，可采用抑制样品电离的方法，在流动相中加入硫酸、磷酸调节pH=2~3，再用反相键合相色谱法进行分析。若pH值呈弱碱性，则可向流动相中加入阳离子型反离子，再用离子对色谱法进行分析。若pH呈强酸性或强碱性，则可用离子色谱法进行分析。对呈强离子型水溶性生物大分子的分析仍是高效液相色谱的特殊难题之一，近年随凝胶过滤色谱和高效亲和色谱的迅速发展，对解决像蛋白质、核酸等生物大分子的分析提供了有效的途径。来源：互联网

高效液相色谱其他柱子的分析的样品类型？c１８应用很广泛，其他柱子在分析什么样品时使用？请高手指教

请教：利用元素分析仪测定有机氧同位素时，需要几毫克样品，有何简易方法控制样品量的大小？，另外，有何简易，高效的装样方法？

高效液相色谱仪分析样品的预处理方法有过滤、离心、加速溶剂萃取、超临界流体萃取、固相萃取、固相微萃取、液相微萃取和衍生化等。[color=#cc0000][b]一、过滤[/b][/color]常用的滤膜材质有纤维素、聚四氟乙烯和聚酰胺。其中聚酰胺应用最广，是亲水材料，适合水溶液的过滤，不被HPLC常用溶剂所腐蚀，不含添加剂。加速溶剂萃取1、原理：加速溶剂萃取是在提高温度（50～200℃）和压力（10.3～20.6MPa）下，用溶剂萃取固体或半固体样品。2、特点：与传统萃取方式相比，加速溶剂萃取具有溶剂用量少、快速、对不同基体可用相同的萃取条件、萃取效率高、选择性好、使用方便、安全性好和自动化程度高等特点。[color=#cc0000][b]二、超临界流体萃取[/b][/color]超临界流体萃取是利用超临界流体对物质的特殊溶解性能原理而建立的萃取方法。超临界二氧化碳作为常用的萃取剂已被广泛应用于天然药物中非极性和弱极性有效成分的提取。[b][color=#cc0000]三、固相萃取[/color][/b]1、原理：固相萃取是通过采用选择性吸附和选择性洗脱对样品进行富集、分离和净化，可以将其近似地看作一种简单的液固色谱过程。2、固相萃取方法：（1）使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，然后选用适当强度溶剂冲去杂质，再用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化和浓缩的目的。（2）可选择性吸附干扰杂质，让被测物质流出。（3）可同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。　[b][color=#cc0000]四、固相微萃取[/color][/b]1、原理：固相微萃取是基于涂敷在纤维上的高分子涂层或吸附剂和样品之间的吸附－解吸平衡原理，集采样、萃取、浓缩和进样于一体的无溶剂的样品微萃取方法。2、常用固相微萃取方法：（1）直接固相微萃取：适用于气体基质和干净的水基质。（2）顶空固相微萃取：适用于任何基质，尤其是直接固相微萃取无法处理的脏水、油脂、血液、污泥和土壤等。（3）膜固相微萃取：通过选择性高分子渗透膜将样品与萃取头分离，进行间接萃取。渗透膜的作用是使萃取头不被基质污染，提高萃取的选择性。但由于样品中待分析物必须通过渗透膜才可以接触到萃取涂层，因此会延长萃取平衡时间。可用于悬浊液等较脏基质中非挥发性有机物的监测。（4）毛细管固相微萃取：将气体或液体样品通过内壁键合萃取剂的石英毛细管，使待分离组分从样品中萃取出来，具有富集倍数高和萃取平衡时间短等特点。3、优点：（1）集采样、萃取、浓缩和进样于一体，操作方便，测定快速高效。（2）克服了固相萃取回收率低，吸附剂孔道易堵塞的缺点。（3）无需任何有机溶剂，是真正意义上的固相萃取，避免了对环境的二次污染。（4）操作费用更加低廉。（5）仪器简单，适合现场分析。4、缺点：（1）纤维头价格较贵且易碎，使用寿命较短。（2）涂敷在纤维上的高分子涂层或吸附剂在使用过程中会有部分丢失。（3）纤维头具有记忆效应，存在交叉污染。（4）固相微萃取与HPLC联用时，需要专门的解吸装置，分析物解吸完全需要相当长的时间。[color=#cc0000][b]五、液相微萃取[/b][/color]液相微萃取是基于样品和微升级甚至纳升级有机溶剂之间的分配平衡原理，集采样、萃取和浓缩于一体的环境友好的样品微萃取方法，特别适合环境样品中痕量和超痕量污染物的分析。[i][b]1、直接液相微萃取[/b][/i]：（1）原理：利用悬挂在色谱微量进样器针头上的有机溶剂对样品溶液中的分析物直接进行萃取。（2）特点：直接液相微萃取是微型化的液液萃取，克服了传统液液萃取的诸多不足，仅使用微升级甚至纳升级的有机溶剂进行萃取，适应现代分析科学微型化发展的要求，属于绿色分析技术。但是存在许多缺点。[i][b]2、中空纤维液相微萃取：[/b][/i]（1）原理：以多孔的中空纤维为萃取溶剂的载体而进行微萃取。（2）特点：1）成本低，装置简单，易与GC、HPLC和CE联用。2）由于中空纤维的多孔性，增加了溶剂与样品的接触面积，提高了萃取率。3）由于微萃取是在纤维孔中进行，避免了直接液相微萃取中溶剂易损失的缺点。4）由于大分子和杂质等不能进入纤维孔，有固相微萃取和直接液相微萃取不具备的净化功能。5）中空纤维是一次性使用的，避免了固相微萃取中可能存在的交叉污染问题。[b][i]3、顶空液相微萃取：[/i][/b]（1）原理：把有机溶剂悬于样品溶液上方而进行微萃取。（2）特点：1）顶空液相微萃取中有样品溶液、有机溶剂和顶空相三相，分析物在三相中的化学势是推动分析物从样品溶液进入有机溶剂液滴的驱动力，可以通过不断搅拌样品溶液产生连续的新表面来增强这种驱动力。由于挥发性化合物从样品溶液到顶空相再到有机溶剂，比从样品溶液直接到有机溶剂的传质速度快的多，所以对于水中的挥发性有机物，项空液相微萃取比直接液相微萃取更快捷。2）直接液相微萃取在萃取样品时，不可避免的会在有机溶剂液滴外成一层稳定的扩散层，这样会阻碍分析物向有机溶剂液滴的扩散，而顶空液相微萃取克服了这一局限，且由于分析物在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]中的扩散系数是其在液相中的104倍，对于扩散系数较大的挥发性有机物，项空液相微萃取大大缩短了到达平衡所需的时间，同时还可以极其有效地消除样品基质的干扰，因此，一般情况下被优先采用。（3）应用：适用于分析物容易进入样品溶液上方空间的挥发性和半挥发性有机物。衍生化1、紫外衍生化：为使没有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外检测器检测，往往通过衍生化反应在这些化合物的分子中引入强紫外吸收的基团。2、荧光衍生化：荧光衍生化已广泛应用于醇、酸、糖、雌激素和生物碱等检测，其中在氨基酸样品检测中应用最多。3、电化学衍生化：使样品组分与衍生化试剂反应，生成具有电化学活性的衍生物，以便对电化学检测有较灵敏的响应。

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[align=center]高效液相色谱组分定性分析方法简述[/align]1、保留时间对照法（1）外标对照法 即在相同的色谱条件下，分别进样品溶液与高纯度的单一组分对照品溶液，这里推荐先进样品溶液，确定系统适应性没有问题了再进对照品溶液，对比两组分的保留时间，一般保留时间相对差异在5%以内，同时绝对误差在0.1min以内的认定为同一个物质，但仍遵守“同一组分保留时间肯定一样，但保留时间一样不一定是同一组分，保留时间不一样的肯定不是同一组分”的原则。（2）标准加入法 即在相同的色谱条件下，将高纯度的对照品加入样品溶液中再上机检测，与相同浓度未加对照品的样品溶液比较，峰高或峰面积应呈等比例增加的，可认定为是同一物质。此法比较适用于组分比较复杂，邻近有干扰组分峰时。上述方法尽量使用柱效高或长柱，峰高尽量小一些，甚至可以小到定量限浓度，一些在高响应下是单个峰的，在低响应时可能是两个峰，所以一定要注意峰形，只要峰形与对照品不一致，就要怀疑不是同一个物质。再严谨一点，还可以改变流动相组成、色谱柱、柱温等，样品中的组分峰应与对照品的组分峰有相同的变化。2、利用检测器选择性进行鉴别（1）DAD检测器波长扫描法 对于配有DAD检测器的还可以对比三维扫描图谱和峰纯度计算进行辅助定性。如果没有配DAD检测器，但有具波长扫描功能的可变波长检测器的，可以使用停泵扫描功能，查看扫描图谱进行鉴别。（2）质谱检测器鉴别法 该方法适用于联用有质谱分析仪的高效液相色谱仪，通过比较碎片峰进行比较鉴别。3、破坏法 将物质进行化学破坏，可以是酸、碱降解，也可以是衍生后再进行检测，看组分峰的变化。当然，此方法不适用于组分复杂的样品。

高效气相色谱仪热裂解进样分析是在一定条件下，高分子有机物遵循一定的裂解规律，即特定的样品能够产生特定的裂解产物和产物分布，采用高效气相色谱分析和鉴定裂解产物，可据此对原样品进行表征。一、基本原理： 将高分子样品置于裂解器中，在严格控制的操作条件下，使之迅速高温热裂解，生成可挥发的小分子产物，然后将裂解产物送入气相色谱仪中进行分离分析。因为裂解碎片的组成和相对含量与待测高分子的结构密切相关，每种高分子的裂解色谱图都有其特征，故裂解色谱图又称热裂解指纹色谱图。二、对裂解器的要求： 1、由于裂解温度不同，裂解产物不同，裂解温度控制要精确，可重复进行。 2、不同的物质需要不同的裂解温度，裂解温度要可调。 3、裂解器热容量大，升温速度快。 4、裂解器与接口的体积小，以减小死体积，防止色谱峰展宽。 5、对裂解反应无催化反应，防止歧化反应和二次反应。三、裂解器类型： 1、管式炉裂解器： 管式炉裂解器通常由一个外壁加热的石英管制成，采用电热丝加热，裂解温度在300～1000℃，恒温精度高。当炉温达到设定温度时，将样品置于铂金小舟内，用推杆将铂金小舟送人裂解炉，样品不与管壁接触。管式炉裂解器结构简单，可定量进样，操作方便，裂解温度连续可调。但升温速率不可调，死体积大，容易产生二次反应。 2、热丝裂解器： 热丝裂解器通常由直径0.2～0.5mm、长50mm左右的铂丝或镍铬丝绕成螺旋状而成，样品涂在金属热丝上，热丝用稳定电压加热到所需温度，可使样品裂解。热丝裂解器结构简单，加热时间短，二次反应少。但不易定量进样，一般只用于定性分析。 3、居里点裂解器： 居里点裂解器是一种高频感应加热裂解器，采用铁磁性材料作加热元件。将它置于高频电场中，会吸收射频能量而迅速升温，当达到居里点温度时，铁磁质变为顺磁质，不再吸收射频能量，温度稳定在居里点温度。当切断高频电源后温度下降，铁磁性又恢复。将样品附着在加热元件上，样品可在居里点温度裂解。不同铁磁质的居里点温度不同，通过调节铁磁质合金的组成可获得所需温度的加热元件。 4、激光裂解器。这是一种新型裂解器，随着技术的突破将逐步得到广泛应用。四、特点： 1、分离效率高： 热裂解气相色谱仪大都使用毛细管色谱柱，可以对复杂的裂解产物进行有效的分离，尤其是高分子有机物之间的微小差异，聚合物材料中的微量组分，都能在裂解色谱图上灵敏地反映出来，找到相应的特征。 2、灵敏度高： 热裂解气相色谱仪一般采用氢火焰离子化检测器，灵敏度很高。 3、样品用量少： 样品用量一般为μg至mg量级，对只能获得微量样品的检测很有利。 4、分析速度快： 典型的分析周期为30min。当裂解产物很复杂时，1～2h可以完成一次分析。 5、信息量大： 可以进行定性和定量分析，还可以进行裂解条件与裂解产物的关系、样品结构与裂解产物的关系、裂解机理和反应动力学的研究。 6、应用范围广： 适用于各种形态样品，不需要预处理，无论是粘稠液体、粉沫、纤维和弹性体等，还是固化的树脂、涂料和硫化橡胶等都可以直接进样分析。 7、易于普及： 裂解进样器结构简单，与气相色谱仪组合在一起就可以进行分离分析。 8、可以和各种光谱仪器在线联接： 凡是可以和气相色谱仪在线联接的光谱仪器，都可以和热裂解气相色谱仪在线联接。五、应用： 适用于分子量较大、结构复杂、难挥发和难溶解物质的分离分析。在药物分析中，可采用闪蒸技术分析中草药中的可挥发性成分。所谓闪蒸是指在样品裂解前，用较低的温度（低于样品的裂解温度）对样品快速加热，将挥发性成分蒸发出来，得到一张色谱图。然后在高温下对样品进行裂解，得到裂解色谱图。这样可获得样品中挥发性成分的重要信息，在样品定性鉴定中非常有用。

复杂样品是指组分种类多、含量差别大、已知信息少．几乎为一黑箱的复杂混合物。这样的样品在生物、环境、材料中占大多数．例如中药提取物或环境污染物．来源于自然界，常常含有从无机到有机、从离子性、强极性到非极性、从小分子到大分子、从位置异构体到对映体、从常量到痕量的上百种成分，而且这些成分大都是未知的．即使是曾被发现的成分，也很难获得纯品或对照品，与大量未知物混于一体，无异于未知化食物。复杂样品的分析，首先需要弄清组成这一样品体系的各种组成及其比例关系，了解组成这一体系的基本组分分布，在此基础上，还需对每一组成进行详细了解，如结构确定，为最终阐明组成一结构一功能提供依据(或根据组成一功能关系．先确定有效组成，再确定这些有效组成的结构)．因此，对复杂样品的分离分析，可按三个层次进行研究：(1)利用高效色谱进行复杂混合物的系统分离分析，获得基本组成色谱峰及其比例关系：(2)混合物组成成分的结构鉴定，这包括离线各种光谱、质谱的综合鉴定及色谱和各种技术的在线联用，尤其是联用技术不仅可以进行快速签定，而且由于减少了处理步骤，避免了处理过程造成的组分损失，因此具有更高的定量可靠性，对含量少的组分也可以进行定性(这些含量少的组分是比较难于得到纯品的)；(3)尽管高效色谱和各种光谱、质谱的联用技术可以极大地促进复杂混合物的分析，但应该看到联用技术—般要求色谱能分离获得纯色谱峰，才能较好地获得其光谱、质谱，进行较好的分析．由于样品组分复杂，在实际分离中即使采用多柱系统在最优化条件下，仍会有大量的不同程度重叠峰，因此，利用先进的算法和计算机，结合色谱和各种光谱、质谱规律，进行多维分析信号与信息的综合处理，解决重叠峰的解析和定性、定量，最终完成复杂样品的分析任务．

现我有一样品！用高效液相色谱对其进行分析！但出峰较晚！流动相用95％甲醇5％（0.02M磷酸盐缓冲液），出峰时间在8分钟，但峰型很差！请求大家帮帮忙好不好？帮我想想有没有其它的办法呢？！先谢了哦！

我用安捷伦1260高效液相。本人新手。请教一个问题。我在方法中设置了自动进样程序。如果进样单一样品，点击运行方法即可。但是如果我要进一个序列，我设置好序列表，再运行序列就不对了，仪器只抽取样品瓶1中的液体进行分析。这个是什么情况，我要怎么设置自动进样程序呢？运行方法和运行序列到底运行哪个啊？求帮忙！！

[size=4]药物残留分析因具有待测药物浓度低且波动范围大、样品基质复杂、干扰物质多、样品基质和待测组分的不确定性等特点，传统意义上的化学分析方法通常不能独立进行。样品前处理过程涉及很多因素，直接影响各项分析指标、成本和效率， 占用残留分析70％以上的工作量⋯ 。近1O几年来，兽药的种类和应用规模剧增，化学结构组成日益复杂，并日趋高效或低剂量化，特别是人们对长期摄入低水平兽药残留所致的各种慢性及远期效应的关注和国际间贸易等原因，使分析对象、样本数量和测定难度大大增加，经典的样品前处理方法通常繁琐复杂、操作时间长、选择性差，逐渐满足不了兽药残留分析的发展要求，一些新的样品前处理技术被应用到这个领域[/size]

中药是一个典型的复杂未知样品,其化学物质基础的阐明是中药现代化的关键科学问题之一。液相色谱是中药分析中应用最普遍的技术,也是进一步与质谱、核磁共振等联用的基本分离手段。本论文在总结了中药复杂体系的特点和分析中需要解决的问题后,提出了中药分析的思路,开展了线性梯度下的液相色谱保留值规律、峰形规律的研究,发展了快速获取液相色谱保留参数、峰形参数的方法,从而将未知样品快速转化为色谱已知样品。并以实际样品藏茵陈和黄芪为例,应用发展的方法建立了相应的液相色谱参数数据库,提供中药活指纹图谱的信息基础。同时,面向实际应用,发展了中药组分的目标优化方法。建立了液-质联用表征黄芪皂甙的方法,建立了高效液相制备色谱快速制备黄芪组分的方法并初步发现了具有诱导分化白血病细胞的组分。发展了用五次线性梯度快速、准确地获取液相色谱保留值方程的方法。以线性梯度a、c 值预测任意梯度下的溶质的保留时间,并发展了基于内标峰的校正方法。应用于藏茵陈和黄芪样品的色谱保留参数获取,对c-a 关系进行了考察。基于EMG模型和自动曲线拟合技术,首次建立了以线性梯度快速获取液相色谱液相色谱峰形参数和峰形规律的方法。以线性梯度峰形规律预测了任意梯度条...[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=31320]中药高效液相色谱分析方法发展的理论基础研究[/url]

提高分离能力和改进分离的选择性一直是分离科学中具有挑战性的研究工作，而高效液相色谱和高效毛细管电泳则是分离科学中最重要的两个工具。高效液相色谱由于具有较高的分离能力和很好的重现性，已成为生命科学、药物科学等领域不可缺少的分析手段。但是，近十年来，高效毛细管电泳以其分离效率高、分析速度快、所需样品少以及消耗低等优势，展示了其在分析领域中巨大的应用潜力，已成为高效液相色谱的有力补充和竞争对手。 本论文即选择高效毛细管电泳和高效液相色谱这两种旨在提高分离能力的工具，对中草药山豆根中的有效成分和乌拉尔甘草叶中的营养物质进行了优化分离。此外，将高效液相色谱也成功地应用于敦煌壁画的颜料分析。 本论文共由以下五章组成： 第一章 对高效毛细管电泳的理论、技术以及在中草药分析方面的最新应用进行了综述，共引用了142篇参考文献。 第二章以0.04M含50％甲醇的柠檬酸(PH=4.5)作为缓冲溶液，在电压为25kV、检测波长为208nm的条件下，用毛细管区带电泳(CZE)方式对山豆根中的有效成分进行了分离实验。在这种优化的条件下，其时间和峰面积的精密度分别为1.39％-2.14...[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=31318]毛细管电泳和高效液相色谱在中药分析中的应用[/url]

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]：[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数(溶解度)的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配使原来只有微小的性质差异产生很大的效果而使不同组分得到分离。液相：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上引用了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的理论。在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万)；同时，柱后连有高灵敏度的检测器可对流出物进行连续检测。 ?应用范围[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]:分离能力好、灵敏度高、分析速度快、操作方便等。受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法进行分析，一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。液相:高效液相色谱法只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此，不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于400以上)的有机物(些物质几乎占有机物总数的75%~80%)原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中能用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的约占20%而能用液相色谱分析的约占70~80%。 仪器构造（一）[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。1.柱箱:色谱柱是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过反复多次分配后得到分离从而达到分析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。由于色谱柱的两端分别连接进样器和检测器，因此，进样器和检测器的下端(接头)均插入柱箱。柱箱能够安装各种填充柱和毛细管柱，并且操作方便。色谱柱(样品)需要在一定的温度条件下工作，因此，采用微机对柱箱进行温度控制。并且由于设计合理，柱箱内的梯度很小。对于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶程序升温控制。且程序设定后自动运行无需人工干预，降温时还能自动后开门排热。2.进样器:进样器的作用是将样品送入色谱柱。如果是液体样品，进样器还必须将其汽化。因此，采用微机对进样器进行温度控制。根据不同种类的色谱柱及不同的进样方式，共有五种进样器可供选择:填充柱进样器毛细管不分流进样器附件；毛细管分流进样器附件；毛细管分流/不分流进样器；六通阀气体进样器；

对于手性化合物的高效液相分析，对于色谱柱和检测器有什么要求？需要什么样的色谱柱和检测器？

请问高效液相和质谱联用的特点，如何提高高效液相的分析度。

[color=#444444]高效液相色谱分析中标样响应值R（Xi）是什么意思？谢谢啦[/color][color=#444444] 标样浓度C（Xi） [/color][color=#444444]校正因子RF（Xi）= ——————————[/color][color=#444444] 标样响应值R（Xi）[/color][color=#444444]未知组分浓度Ci=RF（Xi）×样品响应值Ai[/color][color=#444444]这里的标样响应值R（Xi）是指标准曲线中浓度对应的纵坐标值吗？[/color]

[b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]与液相的概念[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url][/b][align=left][/align][align=left][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配使原来只有微小的性质差异产生很大的效果而使不同组分得到分离。[/align][b]液相[/b][align=left][/align][align=left]高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上引用了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的理论。在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而,使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时，柱后连有高灵敏度的检测器可对流出物进行连续检测。[/align][align=left][/align][align=center][b][/b][/align][b]应用范围[/b][align=left] [/align][b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url][/b][align=left][/align][align=left]分离能力好、灵敏度高、分析速度快、操作方便等。。。[/align][align=left]受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法进行分析，一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。。。[/align][align=left][/align][b]液相[/b][align=left][/align][align=left]高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此，不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400以上）的有机物（些物质几乎占有机物总数的75%～80%）。原则上，都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中能用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。[/align][align=left] [/align][b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]仪器构造[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url][/b][align=left]由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。[/align][align=left][b]1.柱箱：[/b][/align][align=left]色谱柱是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过反复多次分配后得到分离，从而达到分析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。由于色谱柱的两端分别连接进样器和检测器，因此，进样器和检测器的下端（接头）均插入柱箱。柱箱能够安装各种填充柱和毛细管柱并且操作方便。色谱柱（样品）需要在一定的温度条件下工作，因此，采用微机对柱箱进行温度控制，并且由于设计合理，柱箱内的梯度很小。[/align][align=left]对于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶程序升温控制。且程序设定后自动运行无需人工干预，降温时还能自动后开门排热。[/align][align=left][/align][align=left][b]2.进样器：[/b][/align][align=left]进样器的作用是将样品送入色谱柱。如果是液体样品，进样器还必须将其汽化。因此，采用微机对进样器进行温度控制。[/align][align=left]根据不同种类的色谱柱及不同的进样方式，共有五种进样器可供选择：[/align][align=left]填充柱进样器[/align][align=left]毛细管不分流进样器附件[/align][align=left]毛细管分流进样器附件[/align][align=left]毛细管分流/不分流进样器[/align][align=left]六通阀气体进样器[/align][align=left][/align][align=left][b]3.检测器：[/b][/align][align=left]检测器的作用是将样品的化学信号转化为物理信号（电信号）。[/align][align=left]检测器也需要在一定的温度条件下才能正常工作，因此，采用微机对检测器进行温度控制。[/align][align=left]根据各种样品的化学物理特性，共有五种检测器可供选择：[/align][align=left]氢火焰离子化检测器（FID）；[/align][align=left]热导检测器（TCD）；[/align][align=left]电子捕获检测器（ECD）；[/align][align=left]氮磷检测器（NPD）；[/align][align=left]火焰光度检测器（FPD）；[/align][align=left][/align][align=left][b]4.数据处理系统：[/b][/align][align=left]该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。[/align][b]高效液相仪器构造液相[/b][align=left][/align][align=left]高效液相色谱仪主要有：进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成。[/align][align=left][b]1.进样系统[/b][/align][align=left]一般采用：隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。[/align][align=left][/align][align=left][b]2.输液系统[/b][/align][align=left]该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47～4.4×107Pa流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、pH值或改用。。。[/align][align=left][/align][align=left][b]3.分离系统[/b][/align][align=left]该系统包括：色谱柱、连接管和恒温器等。。。[/align][align=left]色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管）内径为2～5mm，由优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，柱内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成），固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如，硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]中固定相的制备一样）或者用化学法偶联各种基因（如，磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。。。[/align][align=left][/align][align=left]因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性，例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。。。[/align][align=left][/align][align=left]另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小、微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。[/align][align=left][/align][align=left]这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60℃通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。[/align][align=left][/align][align=left][b]4.检测系统[/b][/align][align=left]高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种：[/align][align=left][b](1)紫外检测器[/b][/align][align=left]该检测器适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。[/align][align=left]其特点：使用面广（如，蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；灵敏度高（检测下限为10-10g/mL）；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。[/align][align=left][/align][align=left][b](2)示差折光检测器[/b][/align][align=left]凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测；糖类化合物的检测使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单，但是，灵敏度低（检测下限为10-7g/mL），流动相的变化会引起折光率的变化；因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。[/align][align=left][/align][align=left][b](3)荧光检测器[/b][/align][align=left]凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物（如，多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等。。。）的测定，其灵敏度很高（检测下限为10-12～10-14g/mL）痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。[/align][align=left][/align][align=left][b]5.数据处理系统[/b][/align][align=left]该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。[/align][b]高效液相色谱与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法优点和不足分析[/b][align=left][/align][align=left]只有20%样品可不经化学处理而能满意地用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分离，80%的有机化合物要用高效液相色谱分析。[/align][align=left][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]中流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用、而高效液相色谱的流动相不仅起运载作用，而且流动相对组分有一定亲合力，可以通过改变流动相种类和组成提高分离的选择性；另外，可作流动相的化合物多，选择余地广。[/align][align=left][/align][align=left]与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]相比，高效液相色谱仪的另一个优点是：样品的回收比较容易，只要开口容器放在柱子末端，就可以很容易地将所分离的各组分收集。回收是定量的，可以用来提纯和制备具有足够纯度的单一物质。[/align][align=left][/align][align=left]高效液相色谱不足的是，日前，检测器的灵敏度不及[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]。必须特别注意“柱外效应”对柱效率及色谱分离的影响。[/align][align=left][/align][align=left][color=#888888](内容来源：互联网)[/color][/align]

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=65126]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]分析技术与展望[/url]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]分析技术与展望高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]分析技术与展望袁洪福1，褚小立1，杜泽涵21 石油化工科学研究院2 军事医学科学院1.引言当前我国已经提出从资源消耗和能源消耗型社会向环保和节约型转变的重大发展战略，即生产与产品质量管理从粗放管理模式向优化与精确控制模式转变，而实现该目标应首先解决质量快速测定技术的问题，因此，发展高效分析检测技术也就成为值得我国相关政府部门，科学研究人员，和企业必须考虑的重要课题之一。其中，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]分析技术就是一种非常典型的高效分析技术。为此，以下将高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]分析技术及其发展对策进行介绍和讨论。

[font=黑体][size=4][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法和高效液相色谱法分析中不确定度的评定[/size][/font][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法和高效液相色谱法在标准曲线的绘制、标准样品的使用、测定结果的输出等方面极为相似，因而，评定其分析不确定度时具有相同的数学模型，且各不确定度分项的评定可以采用相似的评定方法。本文参照有关文献，以高效液相色谱法测定胺苯磺隆为例，对其不确定度的评定进行了讨论。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=61046][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法和高效液相色谱法分析中不确定度的评定[/url]

二甲基-4-吡啶基甲醇的高效液相分析方法，有哪位知道，不吝赐教

1 高效液相色谱法的特点高效液相色谱法是20世纪70年代急剧发展起来的一项高效、快速的分离分析技术。液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。在经典的液体柱色谱法基础上，引入了气相色谱法的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。这种柱色谱技术称做高效液相色谱法。它可用来作液固吸附，液液分配，离子交换和空间排阻色谱（即凝胶渗透色谱）分析，应用非常广泛。高效液相色谱法具有以下几个突出的特点。1.1 高压 液相色谱法以液体作为流动相（称为载液），液体流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。在现代液相色谱法中供液压力和进样压力都很高，一般可达到150~350×105Pa。高压是高效液相色谱法的一个突出特点。1.2 高速 高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液体色谱法少得多，一般都小于1h，例如分离苯的羟基化合物七个组分，只需要1min就可完成；对氨基酸分离，用经典色谱柱，柱长约170㎝、柱径0.9㎝、流动相流速30mL·h-1，需用20多小时才能分离出20种氨基酸，而用高效液相色谱法，只需1h之内即可完成。载液在色谱柱内的流速较之经典液体色谱法高得多，一般可达1~10mL·min-1。1.3高效 气相色谱法的分离效能很高，柱效约为2000塔板/米；而高效液相色谱法的柱效更高，约可达3万塔板/米以上。这是由于近年来研究出了许多新型固定相（如化学键合固定相），使分离效率大大提高。1.4高灵敏度 高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如紫外检测器的最小检测量可达纳克数量级（10-9g）；荧光检测器的灵敏度可达10-11g。高效液相色谱的高灵敏度还表现在所需试样很少，微升数量级的试样就足以进行全分析。高效液相色谱法由于具有上述优点，因而在色谱文献中又将它称为现代液相色谱法，高压液相色谱法或高速液相色谱法。气相色谱法虽具有分析能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子质量大（大于400以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75％~80％）原则上都可用高效液相色谱法来进行分离、分析。高效液相色谱法的基本概念及理论基础，如保留值、分配系数、分配比、分配度、塔板理论、速率理论等与气相色谱法是一致的，但有其不同之处。液相色谱法与气相色谱法的主要区别可归结于流动相的不同。液相色谱法的流动相为液体，气相色谱法的流动相为气体。液体的扩散系数只有气体的万分之一至十万分之一、液体的粘度比气体大一百倍，而密度为气体的一千倍左右。这些差别显然将对色谱过程产生影响。

[color=#444444]现在使用Waters UPLC Class 高效液相色谱，Empower 软件，在样品队列里有一个“稀释倍数”一列，想问一下，是不是我配浓度为1%的样品，稀释倍数选择1，然后进样的时候样品浓度就为0.5%了？[/color]

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=105424]高效液相分析方法验证 .rar[/url]

高效液相色谱分析法[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=177402]高效液相色谱分析法.rar[/url]

我分析高效氯氰菊酯，要求用正相柱但是我们的是反相柱，可以分析吗？这样流动相只能用甲醇或乙腈了吧，不能用正己烷吧？峰形除了顺序相反，还有什么差别吗？

紧急求助：请问如何分析高效液相色谱图啊？？？最近要写论文，做实验时得到的产物是用高效液相色谱仪分析的，得到的谱图我不知道怎么分析，希望能得到您的帮助，谢谢。