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免疫组化分析

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  • 免疫组化和免疫分型有何区别

    [font=宋体]在生物学和医学领域,免疫组化和免疫分型是两种常用的实验技术,它们各自具有独特的应用和优势。虽然这两种技术都涉及到免疫学的原理和方法,但它们在实验目的、操作过程、结果解读等方面存在显著的差异。本文将对免疫组化和免疫分型进行详细的比较和讨论,以揭示它们之间的区别。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]定义区别:[/font][/b][font=宋体][font=宋体]免疫组化([/font][font=Calibri]Immunohistochemistry[/font][font=宋体])是一种利用免疫学原理,通过特异性抗体与细胞或组织中的抗原进行反应,进而通过染色或标记等方法来定位和检测抗原的技术。其主要应用于组织切片或细胞涂片的染色,以观察和研究抗原在细胞或组织中的分布、定位及表达情况。免疫组化技术可以帮助我们了解细胞或组织的类型、功能状态以及病理变化,对于疾病的诊断、预后评估以及药物研发等方面具有重要意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫分型([/font][font=Calibri]Immunophenotyping[/font][font=宋体])是一种通过检测细胞表面或细胞内的特定抗原,来识别和分析细胞类型的技术。该技术主要应用于对免疫细胞(如淋巴细胞、巨噬细胞等)进行分型,以了解其在免疫系统中的功能和作用。免疫分型技术可以帮助我们深入了解免疫系统的结构和功能,揭示免疫细胞在疾病发生和发展过程中的作用,为疾病的诊断和治疗提供新的思路和方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]实验目的区别:[/font][/b][font=宋体]免疫组化主要关注抗原在细胞或组织中的定位和表达情况,而免疫分型则侧重于对免疫细胞进行分型和功能分析。从操作过程来看,免疫组化通常需要对组织或细胞进行切片、固定、染色等步骤,而免疫分型则可能涉及到细胞的分离、培养、流式细胞术等操作。从结果解读来看,免疫组化的结果主要表现为抗原在细胞或组织中的分布和表达模式,而免疫分型的结果则提供了关于免疫细胞类型、比例和功能状态的信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]应用领域区别:[/font][/b][font=宋体]免疫组化在病理学、肿瘤学、神经科学等领域有广泛应用,可以帮助医生进行疾病的诊断和预后评估。而免疫分型则更多地应用于免疫学、血液学、感染病学等领域,有助于深入了解免疫系统的功能和疾病发生机制。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]综上所述,免疫组化和免疫分型是两种具有不同特点和应用领域的实验技术。虽然它们都涉及到免疫学的原理和方法,但在实验目的、操作过程、结果解读以及应用领域等方面存在显著的差异。因此,在实际应用中,我们需要根据研究目的和需求选择合适的技术手段,以获取准确、可靠的实验结果。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url],详情关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 免疫组化(IHC)与免疫荧光(IF)检测的区别及服务推荐

    [font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光技术[/b][/url]([/font][font=Calibri]Immunofluorescence technique [/font][font=宋体])是在免疫学、生物化学和荧光成像系统基础上建立起来的检测技术。技术原理是根据抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异结合,以荧光标记抗体示踪组织或细胞内相应抗原。免疫荧光技术因特异性强、灵敏度高和操作简便的优势广泛应用于免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等生物学和医学。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化,是应用免疫学基本原理[/font][font=宋体]——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术[/font][font=Calibri](immunohistochemistry)[/font][font=宋体]或免疫细胞化学技术[/font][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]区别:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化和免疫荧光都经过免疫原,原理相似,只是显色剂不同,免疫荧光是免疫组化技术之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫组化是应用免疫学的基本原理,即抗原和抗体特异性结合的原理,通过化学反应确定组织细胞中的抗原,使标记有抗体的显色试剂显色,并对其进行定位、定性和相对定量研究。在免疫组化过程中,常用的显示剂包括荧光素、酶、金属离子或同位素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫荧光是一种不会影响抗原和抗体活性的荧光色素,被标记在抗体或抗原上,然后与其对应的抗原或抗体结合,在荧光显微镜下呈现特异性的荧光反应。免疫荧光是免疫组化技术之一,具有特异性强、灵敏度高、速度快的特点。但相对结果判断的客观性不足,技术程序复杂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化与免疫荧光的真正目的均为明确病理诊断,以便患者获得精准治疗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有专业的技术人员和共聚焦显微镜等仪器平台,为客户提供高质量的免疫荧光检测服务,包括对细胞爬片、石蜡切片、冷冻切片和组织芯片等进行免疫荧光单染、双染、及多重染色等。可以为客户提供免疫荧光([/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体])检测服务和石蜡切片免疫组化([/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体])检测服务,有需求的朋友可以来义翘官网进行查询,详情参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font]

  • 免疫组化是什么技术?免疫组化方法及优点

    [font=Calibri][font=宋体]免疫组化技术,运用免疫学的基本原理[/font][font=Calibri]——[/font][font=宋体]抗原抗体反应,即抗原与抗体之间的特异性结合。通过化学反应,使标记在抗体上的显色剂(如荧光素、酶、金属离子、同位素)显现颜色,从而确定组织细胞内的抗原(多肽和蛋白质)。该技术不仅对这些抗原进行定位,还能进行定性和相对定量的研究。这种技术被称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][/font][font=Calibri][font=宋体]。[/font][/font][font=Calibri][font=宋体]免疫组化,简而言之,是免疫学、组织学和化学的完美结合。它利用免疫学方法对组织进行标记,再通过化学方法进行染色,从而标记出组织中的特定蛋白或一组蛋白。这项技术目前在临床病理诊断中得到了广泛应用,并衍生出了多种技术变种,如免疫细胞化学、免疫组织荧光等,为生物医学研究提供了强大的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、免疫组化技术的基本原理[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]应用免疫学及组织化学原理,对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来,以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物,制备特异性抗体,再用这种抗体(第一抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体,并用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合,将抗原放大,由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的,因此,还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来(常用显色剂[/font][font=Calibri]DAB[/font][font=宋体]显示为棕黄色颗粒)。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]通过抗原抗体反应及呈色反应,显示细胞或组织中的化学成分,在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质,如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、免疫组织化学染色方法[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法);与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、按结合方式可分为抗原—抗体结合,如过氧化物酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗过氧化物酶([/font][font=Calibri]PAP[/font][font=宋体])法和亲和连接,如卵白素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶复合物([/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体])法、链霉菌抗生物素蛋白[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶连结([/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体])法等,其中[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法是最常用的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、几种常用免疫组织化学方法的原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫荧光方法[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫酶标方法[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫酶标方法是继免疫荧光后,于[/font][font=Calibri]60[/font][font=宋体]年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是:定位准确,对比度好,染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种标记方法,且随着方法的不断改进和创新,其特异性和灵敏度都在不断提高,使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的当属[/font][font=Calibri]PAP[/font][font=宋体]法、[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]法、[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、免疫胶体金技术[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如葡萄球菌[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]蛋白[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]等作为探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]四、免疫组化技术的优点[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、特异性强 免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性,因此,免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示,如角蛋白([/font][font=Calibri]keratin[/font][font=宋体])显示上皮成分,[/font][font=Calibri]LCA[/font][font=宋体]显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、敏感性高 在应用免疫组化的起始阶段,由于技术上的限制,只有直接法、间接法等敏感性不高的技术,那时的抗体只能稀释几倍、几十倍;现在由于[/font][font=Calibri]ABC[/font][font=宋体]法或[/font][font=Calibri]SP[/font][font=宋体]法的出现,使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合,这样高敏感性的抗体抗原反应,使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、定位准确、形态与功能相结合 该技术通过抗原抗体反应及呈色反应,可在组织和细胞中进行抗原的准确定位,因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察,这样就可以进行形态与功能相结合的研究,对病理学研究的深入是十分有意义的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]石蜡切片免疫组化([/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]IHC[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b])检测服务[/b][/url],更多详情可以关注:[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service[/font][/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

  • 免疫组化的概念和常用方法介绍

    一、定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。二、原理 根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应,前者再用标记辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如链霉亲和素等)结合,最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分,在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。三、分类 1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较常用的方法;聚合物链接,如即用型二步法,此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。四、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1)免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广。2)免疫酶标方法 免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。 本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是:定位准确,对比度好,染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。 免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种标记方法,且随着方法的不断改进和创新,其特异性和灵敏度都在不断提高,使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。3)免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。五、被检测的物质 组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原,如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激 素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。六、特点 1)特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性,因此,免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示,如角蛋白(keratin)显示上皮成分,LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时,才会出现交叉反应。2)敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段,由于技术上的限制,只有直接法、间接法等敏感性不高的技术,那时的抗体只能稀释几倍、几十倍;现在由于ABC法或SP三步法的出现,使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合,这样高敏感性的抗体抗原反应,使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。3)定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应,可在组织和细胞中进行抗原的准确定位,因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察,这样就可以进行形态与功能相结合的研究,对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。七、从蛋白水平检测角度,免疫组化技术与Western blotting、ELISA的异同 1)Western blotting:蛋白质免疫印迹,也是利用抗体抗原反应原理,结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比,定量可能更加准确;当然Western blotting也可定性和定位(通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量,进而间接反映它们的定位),但敏感性远远低于免疫组化技术。2)ELISA:酶联免疫吸附试验,也是利用抗体-抗原-抗原结合反应原理来检查体液或组织匀浆中蛋白含量的检测。与免疫组化技术相比,定量最准确,是分泌性蛋白检测首选方法之一。

  • 常见免疫组化难题集锦

    10 um厚切片) 和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂,在膜上打孔。(2)其作用原理:Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内,故在细胞免疫组化时尤为推荐使用,这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。(3)Triton X-100既是一种表面活性剂,也有抗氧化作用4、封闭血清的选择原则是什么? (1)膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体,造成后续结果的假阳性!(2)封闭血清一般是和二抗同一来源的,血清中动物自身的抗体,预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合,否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合,会造成背景。(3)也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能与一抗来源一致。

  • 莆田市第一医院罗氏全自动免疫组化染色试剂采购项目

    [quote][b]项目概况[/b]莆田市第一医院罗氏全自动免疫组化染色试剂采购项目(重新招标) 招标项目的潜在投标人应在莆田市公共资源交易中心网获取招标文件,并于2022年12月27日 10点20分(北京时间)前递交投标文件。[/quote][font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号:PTXH2022009-2项目名称:莆田市第一医院罗氏全自动免疫组化染色试剂采购项目(重新招标)预算金额:200.0000000 万元(人民币)最高限价(如有):200.0000000 万元(人民币)采购需求:[table][tr][td][align=center]合同包[/align][/td][td][align=center]品目号[/align][/td][td][align=center]货物(服务)名称[/align][/td][td][align=center]主要技术规格[/align][/td][td][align=center]数量[/align][/td][td][align=center]最高限价[/align][align=center](人民币:万元)[/align][/td][td][align=center]投标保证金(人民币:元)[/align][/td][td][align=center]是否办理进口产品审批手续[/align][/td][td][align=center]备注(是否核心产品)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]1-1[/align][/td][td][align=center]罗氏全自动免疫组化染色试剂[/align][/td][td][align=center]详见招标文件第五章招标内容及要求[/align][/td][td][align=center]1批[/align][/td][td][align=center]200[/align][/td][td][align=center]20000[/align][/td][td][align=center]是[/align][/td][td][align=center]是[/align][/td][/tr][/table]合同履行期限:详见招标文件本项目( 不接受 )联合体投标。

  • 多重荧光免疫组化(TSA):原理、优势与实操关键

    [font=宋体][font=宋体]多重荧光免疫组化([/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术)是一种基于酪胺信号放大技术的染色方法,利用抗原抗体反应对样本中的多种蛋白标志物进行荧光染色标记。这种技术能在同一组织切片上实现多个靶标蛋白的共染色,最多可同时标记数十种蛋白,从而揭示组织微环境中的复杂信息。通过荧光图像分析,我们可以进行定量分析、细胞分型、以及空间关系分析等多方面的深入研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]一、技术原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]酪酰胺信号放大([/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体])技术利用辣根过氧化酶([/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体])对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记。在[/font][font=Calibri]H2O2[/font][font=宋体]环境下,荧光标记的酪胺分子被[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]催化激活,产生大量酶促反应,使荧光素与抗原紧密结合部位沉积,实现信号放大。[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术通过循环使用不同荧光染料,可在一张组织切片上实现多种蛋白的共染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、优势[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术能够显著增强荧光放大信号,其增强幅度大约是普通荧光的[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]倍,使得检测更为敏感和准确。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②在[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术中,一抗抗体的种属来源不受限制。不同于普通荧光免疫组化共染的要求,[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术每一轮染色后可以将上一轮的一抗和二抗洗掉,对后续染色无影响。这意味着同一种属来源的一抗并不会影响实验结果,为实验提供了更大的灵活性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③在[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术的实验过程中,无需严格避光。这是因为荧光素具有较高的稳定性,不易淬灭。即使在实验操作过程中没有采取避光措施,也不会对实验结果产生影响。更为便利的是,染色后的玻片可以保存数月之久而不发生淬灭,方便后续重新扫描和分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、注意事项[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①在准备染料时,要确保完全溶解并混合均匀。若试剂含有有机溶剂并出现沉淀,需先行过滤。[/font][font=宋体]②实验过程中,要防止切片干燥并注意避光,以保持荧光染料的稳定性,防止其淬灭,从而提高实验的准确性和可靠性。[/font][font=宋体]③选择高特异性的第一抗体是关键,它能更准确地识别目标蛋白,减少非特异性染色,从而提高实验的敏感性和特异性。[/font][font=宋体]④选择荧光染料时,要根据第一抗体的表达量来搭配。表达量高的应与弱光搭配,而表达量低的应与强光搭配,以平衡不同抗体间的荧光强度,使实验结果更准确可靠。[/font][font=宋体]⑤在实验前,务必制定详细的方案,包括确定染色顺序、修复条件和每一种抗体所搭配的荧光染料。通过合理的方案设计,可以确保实验的顺利进行,提高实验的一致性和可重复性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]多重荧光免疫组化服务[/b][/url],详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font]

  • 多色荧光免疫组化(mIHC)技术的核心分类与特色

    [font=宋体]多重免疫组化(荧光)染色技术,以其高精度描绘肿瘤微环境中肿瘤与免疫细胞状态的能力,为肿瘤的精准诊断提供了不可或缺的参考信息。该技术不仅深入揭示了免疫细胞亚群的比例和分布,还特别关注免疫细胞与肿瘤细胞间的空间关系,这些关键信息对于肿瘤预后评估和免疫治疗策略制定具有重大意义。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]还可通过与组织芯片、转录[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]蛋白组测序、单细胞测序等技术相结合,去完成各项高通量检测技术的验证任务。根据不同的原理,有不同的方法。下面我们就来一起来了解下这[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]类常用的技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]染色去除技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]作为[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]常用的方法之一,染色去除技术在不同的平台上被开发出来用于研究肿瘤组织样本。该技术的基本原理是清除样品中的一种标记后,再用一种新的不同标记对样品进行染色,并重复该过程,并实现在单个样品中检测多种抗原,不同的染色去除技术如图[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]荧光基团失活技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]荧光基团失活技术([/font][font=Calibri]Fluorophore inactivation technologies[/font][font=宋体])的技术原理与荧光去除技术的原理大体相似。差别在于,它不是通过改变[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]条件,变性、光漂白来去除荧光,而是通过化学灭活来消除荧光基团。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在该技术原理基础上开发的芯片式成像深度分析系统([/font][font=Calibri]ChipCytometry[/font][font=宋体]),是一种基于成像的细胞术平台,结合了多重标志物显微成像和流式数据分析法,从根本上实现了对传统方法的各类局限的突破,并可以对细胞和组织切片的生物标志物的表达和空间分布进行成像可视化检测分析。德国柏林[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]勃兰登堡再生医学中心也借助该技术完成了人胎盘冷冻切片中原位检测间充质干细胞([/font][font=Calibri]MSCs[/font][font=宋体])多种表面标志物如[/font][font=Calibri]CD73/CD90/CD105/CD45/CD34/CD19[/font][font=宋体]的表达及空间分布分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]多重信号放大技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]为了克服检测低表达抗原的局限性,随着科技的发展,多重信号放大技术应运而生。该技术包括基于多重修饰半抗原、酰胺信号放大([/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体])和纳米晶体量子点等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其中,[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]是常用的多重信号放大技术之一。[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]是在传统的免疫组化染色基础上,基于信号分子沉淀原理,在[/font][font=Calibri]H2O2[/font][font=宋体]存在时,抗体上标记的[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]将荧光物质标记的底物酪胺([/font][font=Calibri]t[/font][font=宋体])转化为具有短暂活性的中间状态([/font][font=Calibri]t*[/font][font=宋体]),然后被激活的底物分子迅速与相接蛋白分子的富含电子区域(酪氨酸残基)进行稳定的共价结合;由于相接蛋白(抗原、[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]等)都含有大量的酪氨酸结合位点,所以会富集大量信号,使得信号被有效放大。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]经过多轮不同种类荧光物质标记的底物酪胺的染色,即可在一张样本上实现多色免疫荧光标记。[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术的优点是,可通过共价结合的方式将荧光信号结合到目标样本上,不易丢失,且经[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]放大后信号更强。缺点则是由于荧光信号的交叉作用,针对一份样本染色种类较多时,容易出现串色的情况(这一点[/font][font=Calibri]ChipCytometry[/font][font=宋体]技术倒是做的很好),也因此,多色标记的数量受到了限制,最多仅能做到在一张样本切片上进行[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]色的荧光染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4.DNA[/font][font=宋体]条形码技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]条形码技术([/font][font=Calibri]DNA Barcoding Technologies[/font][font=宋体])是利用标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]片段([/font][font=Calibri]DNA barcode[/font][font=宋体])在物种种内的特异性以及种间的多样性而创建的一种新的生物身份识别系统,该技术利用[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的特性,可以达到扩展[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]能力的目的。基于[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]条形码技术开发的[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]技术种类较多,这里我们简单介绍下,空间多靶标分析技术([/font][font=Calibri]Digital Spatial Profiling[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]DSP[/font][font=宋体])是一种基于紫外光可切割的寡核苷酸标签,可与抗体或[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]杂交探针耦合,来检测蛋白质与[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的高复杂度空间信息的分析方法。该技术使用紫外线将抗体上的高聚寡核苷酸标签解耦,并从组织表面提取,使样品可以重复使用。寡核苷酸条形码再经过定量分析,并反应组织的空间原位信息,可以帮助研究者在复杂的疾病或是组织中快速、精准地量化其异质性,有助于生物标记的发掘及疾病致病机理的深入研究。[/font][font=Calibri]DSP[/font][font=宋体]已被成功用于分析接受检查点阻断治疗的黑色素瘤患者的肿瘤特征,并证明基线免疫浸润与治疗反应之间存在相关性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]质谱流式细胞技术[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]质谱流式细胞技术([/font][font=Calibri]Mass Cytometry[/font][font=宋体])是利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术。它既有传统流式细胞仪高速分析的特点,又具有质谱检测的高分辨能力。[/font][/font][font=宋体]与传统[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞技术[/b][/url]的差别在于:[/font][font=宋体]第一、传统流式使用各种荧光基团作为抗体的标签,质谱流式则使用各种金属元素作为标签;[/font][font=宋体][font=宋体]第二、传统流式使用激光器和光电倍增管作为检测手段,质谱流式则逐个通过[/font][font=Calibri]ICP[/font][font=宋体]质谱检测装置,对每个细胞中各种金属标签进行定量检测,进而得知每个细胞中各目标蛋白的含量。应用该技术所引申出的[/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]成像质谱流式技术([/font][font=Calibri]Imaging mass cytometry[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]IMC[/font][font=宋体]),其实是将免疫组化方法与经过充分验证的[/font][font=Calibri]CyTOF[/font][font=宋体](质谱流式)技术完善融合,可以生成细胞标志物、转录产物以及转导信号等多种因子的组织结构图像。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供的[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]TSA[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]法多重荧光免疫组化服务[/b][/url],有一系列屏蔽自发荧光干扰的手段,配合激光共聚焦显微镜的拍摄条件,提供更优质的图像质量,收获更特异的染色结果。更多多重染色服务详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 免疫组化抗体(IHC)的实践应用与常见问题详解

    [font=宋体][font=宋体]免疫组化法([/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体])是使用抗体检测组织切片(例如肝脏、胰腺或心脏)中细胞蛋白质(抗原)的过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]当组织样本被送到实验室进行疾病检查时,有几个细节不易确定。几种疾病或疾病亚型在显微镜下可能看起来相似或看起来具有相似大小的细胞,但具有不同的行为和必要的治疗,区分它们的最佳方法是检测这些细胞上作为标记的特定分子。免疫组化法([/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体])是一种使用抗体(匹配分子)的技术,用于寻找、识别附着在细胞上的标记物。在显微镜下可以看到抗体本身,这有助于技术人员进行精确识别。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化法([/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体])已广泛应用于医学中,特别是癌症诊断。淋巴瘤是依赖于[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]进行正确诊断和治疗决策的癌症之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]免疫组化常见问题:[/font][font=宋体][font=宋体]问题一:我应该使用[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]还是[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]进行抗原修复?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]固定过程可能会掩盖抗原,导致抗体结合无法进行。这种掩盖可以通过一种称为抗原修复[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗原去掩蔽的技术来逆转,该技术可以通过加热([/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体];热诱导抗原修复)或蛋白酶([/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体];蛋白水解诱导抗原修复)介导。后者使用蛋白酶[/font][font=Calibri]K[/font][font=宋体]、胰蛋白酶和胃蛋白酶等酶。[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]方法通过降解掩盖表位的肽而起作用。然而,[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]也可能导致样品形态或抗原本身的改变。因此,[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]的使用频率低于[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体],后者通过恢复表位的二级和三级结构而起作用。[/font][/font][font=宋体]为了确定是否应该进行抗原修复以及采用哪种方法,应遵循以下指南:[/font][font=宋体]进行文献检索,以确定其他研究人员如何可视化您感兴趣的抗原。[/font][font=宋体]检查抗体供应商是否推荐了特定的抗原修复方案。[/font][font=宋体][font=宋体]如果没有特定的协议可用,我们建议使用[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]而不是[/font][font=Calibri]PIER[/font][font=宋体]协议。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]对于[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体],总是使用中性抗原修复缓冲液,如[/font][font=Calibri]AbD Serotec[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]BUF025A[/font][font=宋体],并与未进行抗原修复的样品进行比较。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]如果中性染色溶液没有产生良好的染色效果,则应测试碱性或酸性抗原修复缓冲液。除了[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值外,其他需要优化的参数是温度和持续时间。理想情况下,尝试各种[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值、温度和时间组合。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]为了排除由[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]过程引起的伪影,始终包括一个控制样品,该样品在没有[/font][font=Calibri]HIER[/font][font=宋体]步骤的情况下进行染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]问题二:如何选择[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]实验的抗体,单克隆抗体还是多克隆抗体?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体和多克隆抗体的抗体特性决定了其优缺点。单克隆抗体是针对单个表位的同种免疫球蛋白。抗体是由一个动物的单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的,因此在免疫化学上相似。多克隆抗体是针对同一抗原的各种表位的异质抗体混合物。抗体是由动物的不同[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的,因此在免疫化学上不同。多克隆混合物中的抗体可能具有略微不同的特异性和亲和力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果蛋白质靶标具有相同的氨基酸序列,单克隆抗体更合适。一旦抗原因各种原因发生构象变化,如蛋白质相互作用、翻译后修饰、温度、[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值、固定、盐浓度等,单克隆抗体和抗原的联合作用将受到严重影响。由于多克隆抗体具有多个表位,不受蛋白质构象变化的影响,一般来说,在一定范围内的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]和盐浓度内,多克隆抗体之间的抗原结合比单克隆抗体更稳定。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]问题三:一抗的孵育时间多久?[/font][/b][font=宋体][font=宋体]一抗的孵育时间与温度[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]抗体浓度有关。一般情况下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃的条件下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]孵育[/font][font=Calibri]1-2[/font][font=宋体]小时左右。在室温的条件下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]孵育[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]小时左右。在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃的条件下[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]孵育[/font][font=Calibri]18-24[/font][font=宋体]小时左右。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]石蜡切片免疫组化([/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b]IHC[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service][b])检测服务[/b][/url],更多免疫组化的问题可以上义翘神州网咨询![/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

  • 免疫组化标准操作规程(SOP)

    关键词免疫组化,抗原,一抗,二抗目的:蛋白物质的定性、定位检测。背景知识:20世纪30年代,随着生物化学的发展和电子显微镜技术的应用,组织化学迎来了复兴时代。自从E. Takamatsu(高松英雄)和G. Gomori 1939年同时证明了硷性磷酸酶的组织化学方法,以后的30年间,酶组织化学得到了飞速发展,高松证明了磷酰胺酶、ATP酶;Gomori设计了酸性磷酸酶、脂酶、酯酶等组织化学证明法。 此间,金属盐法,硫化钴法,偶氮色素法,偶氮色素四唑盐法(tetrazolium salts method)以及磷酸化酶组织化学证明法等相继问世。特别是H. Scheldon和D. Brandes等人把电镜与酶组织化学结合起来,以金属沉淀法观察了酸性磷酸酶和硷性磷酸酶,奠定了电镜酶组织化学(electron microscope enzyme histochemistry)基础。后来A. M. Seligman(1967)提出锇黑化法(Osmification method)进一步阐述了电镜组织化学的基本原理和反应过程。 1950年A. H. Coons等人提出了荧光抗体法,从而把免疫学引入组织化学实验中,后来P. K. Nakane,S. Avrameas 和L. A. Sternberger等人以辣根过氧化物酶为标记物对酶进行观察,创立了酶标抗体法,从而为组织化学开辟了新途径。 随着分子生物学的发展,1969年人们把分子杂交技术应用到组织切片和细胞标本上,开始探索原位杂交技术,经过30年不断应用、完善和发展,特别是探针制备与标记物两大关键技术的突破,目前原位杂交技术已广泛应用于遗传学、病毒学、神经内分泌学、病理学、免疫学和发育生物学等各个领域,显示出巨大的应用潜力。 现代组织化学已经渗透和应用于生命科学的许多学科,经过近几十年的发展,产生了许多分支,如核酸与核蛋白、蛋白质与氨基酸、脂类与脂蛋白、碳水化合物与粘蛋白及粘多糖、无机物组织化学、酶组织化学电镜组织化学、荧光组织化学、免疫组织化学、同工酶组织化学、定量组织化学、原位杂交组织化学和放射自显影技术等。总之,现代组织化学的概念已经远远超过了原有范围,无论从理论、内容、技术手段、研究范围都比过去更广泛、更深入。 原理:理论基础是基于利用放射性核素和其他标记物(荧光素,酶, 重金属离子等)作为示踪剂,通过免疫亲和(抗原-抗体特异性结合)和核酸杂交(碱基配对特异性连接)途径,在组织切片或细胞涂片上,原位显示生物大分子的动态变化而建立的一门染色技术。 主体内容(一)、仪器设备1)18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉;2)水浴锅 (二)、试剂 1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。2)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬酸三钠 3g,柠檬酸 0.4g。3)0.5mol/L EDTA缓冲液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA•2H2O,用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。4)1mol/L的TBS缓冲液(pH8.0):在800ml水中溶解121gTris碱,用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml。 5)酶消化液: a、0.1%胰蛋白酶液:用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液:用0.1N的HCl配制。6)3%甲醇-H2O2溶液:用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。7)封裱剂:a、甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液(pH9.0~9.5)等量混合; b、油和TBS(或PBS)配制。 8)TBS/PBS pH9.0~9.5,适用于荧光显微镜标本;pH7.0~7.4适合于光学显微镜标本。 [font='Helvetica Neue', Hel

  • 【转帖】免疫组化常用溶液的配制!

    免疫组化常用溶液的配制 1、 PBS:取PBS溶于1000ml的蒸馏水中,混匀,测pH值应在7.2~7.4之间,若偏离此范围,请用0.1N的HCL或NaOH调整。2、 TBS:  2.1 Tris 缓冲液配方:(0.5M pH7.6)  Tris (三羟甲基氨基甲烷) 60.57g   1N HCL 约420ml  双蒸水 加至1000ml  Tris缓冲液配制方法:  先以少量双蒸水 (300~500ml)溶解Tris,加入HC1后,用HC1(1N)或NaOH(1N)将pH调至7.6,最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液,4℃冰箱中保存。  2.2 TBS配方:  Tris-HCI 缓冲液(0.5M pH7.6) 100ml  NaCI 8.5~9g(0.15mol/L)  双蒸水 加至1000mlTBS配制方法:  先以少量双蒸水溶解NaC1,再加入Tris-HC1缓冲液,最后加双蒸水至1000ml,充分摇匀。3、 枸橼酸盐缓冲液 (Citrate buffer):  3.1 储存液:  A. 0.1M枸橼酸溶液:称取21.01g枸橼酸 (C6H8O7H20) 溶于1000ml蒸馏水中。  B. 0.1M枸橼酸钠溶液:称取29.41g枸橼酸钠 (C6H5Na32H20)溶于1000ml蒸馏水中。  3.2 工作液:  取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中,溶液pH 值应为6.0±0.14、 胰酶 (Trypsin):  4.1 胰蛋白酶消化液:  常用浓度为0.125%,即使用前将一滴试剂1胰酶浓缩液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合(1:3稀释),则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整,浓度范围可以从0.05% (1:10稀释)至0.25% (1:1稀释)。  4.2 胰蛋白酶:取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中,溶解即可。5、 胃酶 (Pepsin):  0.4%胃蛋白酶,用0.1mol/L HCL配制。6、 DAB (3.3-二氨基联苯胺):  6.1 DAB Kit:使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中,即可获得1ml DAB工作液,简单易用。  6.2 DAB:6mgDAB溶于10mlTBS (0.05M pH7.6),再加入0.1ml浓度为3%的H2O2,过滤掉沉淀物,即可。7、 AEC:4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中,加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液(pH5.2),然后加入0.15ml 3%H2O2,过滤掉沉淀物。8、 Triton X-100 (聚乙二醇辛基苯基醚)  免疫细胞化学中,Triton X-100常用浓度为1%和0.3%,但通常是先配制成30%的Triton X-100储存液,临用时稀释至所需浓度。  8.1 30%Triton X-100的配制:  Triton X-100 28.2ml  0.1M PBS (pH7.3) 或 0.05M TBS (pH7.4) 72.8ml双蒸水 加至1000ml配制方法:取Triton X-100 及PBS(或TBS)混合,置37~40℃水浴中2~3小时,使其充分溶解混匀。用前取该储备液稀释至所需浓度 8.2 Triton X-100 工作液的配制:Triton X-100是一种非离子型表面活性剂(或称清洁剂),分子量为646.86 (C34H62O11)。它能溶解脂质,以增强抗体对细胞膜的通透性。1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本,0.3%的Triton X-100则常用于稀释血清,配制BSA等。9、 甲醇-H2O2溶液吸取30%的H2O2 0.1ml,加入100ml纯甲醇中,充分混匀即可,使H2O2终浓度为0.3%。

  • 【资料】生化分析仪概述

    功能及特点  自动生化分析仪是将生化分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、保温、比色、结果计算、书写报告和清理等步骤的部分或全部由模仿手工操作的仪器来完成。它可进行定时法、连续监测法等各种反应类型的分析测定。除了一般的生化项目测定外,有的还可进行激素、免疫球蛋白、血药浓度等特殊化合物的测定以及酶免疫、荧光免疫等分析方法的应用。它具有快速、简便、灵敏、准确、标准化、微量等特点

  • 100万!潍坊医学院附属医院免疫组化二抗试剂(024)采购项目

    [font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号:sdhryw2024024项目名称:潍坊医学院附属医院免疫组化二抗试剂(024)采购项目采购方式:竞争性磋商预算金额:100.000000 万元(人民币)最高限价(如有):100.000000 万元(人民币)采购需求:[table][tr][td][align=center]序号[/align][/td][td][align=center]名称[/align][/td][td][align=center]控制价(元)人份[/align][/td][td][align=center]预估年用量(人份)[/align][/td][td][align=center]预算金额[/align][align=center](元)[/align][/td][td][align=center]备注[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]DAB染色液[/align][/td][td][align=center]41[/align][/td][td][align=center]20000[/align][/td][td][align=center]820000[/align][/td][td][align=center][font=inherit]可采进口[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]苏木素染色液[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]20000[/align][/td][td][align=center]60000[/align][/td][td][align=center][font=inherit]可采进口[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]返蓝染色液[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]20000[/align][/td][td][align=center]60000[/align][/td][td][align=center][font=inherit]可采进口[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]切片标签[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]20000[/align][/td][td][align=center]60000[/align][/td][td][align=center][font=inherit]可采进口[/font][/align][/td][/tr][/table]合同履行期限:详见文件本项目( 不接受 )联合体投标。[font=inherit]二、申请人的资格要求:[/font]1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定;2.落实政府采购政策需满足的资格要求:详见文件3.本项目的特定资格要求:1.货物属国家强制且已开办注册登记业务的,供应商须按照《医疗器械注册与备案管理办法》(国家市场监督管理总局令第47号)的规定提供所投产品《医疗器械注册证》(如有附表,需提供附表)。供应商为制造商的,须提供《医疗器械生产许可证》;供应商为代理商的,须按照《医疗器械经营监督管理办法》(国家市场监督管理总局令第54号)的规定提供医疗器械经营许可证或经营备案凭证;2.若提供产品为进口产品的须提供产品授权(授权可追溯);3.单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同供应商,不得参加同一合同项下(同一包号)的政府采购活动;[font=inherit]三、获取采购文件[/font]时间:2024年03月05日 至 2024年03月11日,每天上午9:00至12:00,下午13:00至17:00。(北京时间,法定节假日除外)地点:济南市历下区经十路13777号中润世纪广场18栋603、sdhryw@163.com方式:在获取竞争性磋商文件时间内按照网络报名方式获取竞争性磋商文件:供应商按报名登记表规定内容登记注册报名信息,会同公司有效资质、产品有效资质、竞争性磋商文件制作费汇款底单(转账必须公对公转账并备注24-024标书费+包号)发送至sdhryw@sina.com,邮件名称命名为:“项目编号,名称-包号-包名称-供应商单位名称”,并电话通知招标代理机构项目联系人查阅。开户单位: 山东华仁永旺招标有限公司 、开户银行: 中国工商银行济南高新支行 、帐 号: 1602023609200296250售价:¥200.0 元(人民币)[font=inherit]四、响应文件提交[/font]截止时间:2024年03月21日 09点00分(北京时间)地点:山东省潍坊市奎文区北宫东街262号(北宫街佳乐家)潍坊君尚假日酒店6楼会议室[font=inherit]五、开启[/font]时间:2024年03月21日 09点00分(北京时间)地点:山东省潍坊市奎文区北宫东街262号(北宫街佳乐家)潍坊君尚假日酒店6楼会议室[font=inherit]六、公告期限[/font]自本公告发布之日起3个工作日。[font=inherit]七、其他补充事宜[/font]无[font=inherit]八、凡对本次采购提出询问,请按以下方式联系。[/font]1.采购人信息名 称:潍坊医学院附属医院地址:潍坊市奎文区虞河路2428号联系方式:李主任0536-30811802.采购代理机构信息名 称:山东华仁永旺招标有限公司地 址:山东省济南市历下区经十路13777号中润世纪广场18号楼603联系方式:徐经理0531-885892373.项目联系方式项目联系人:徐希鹏、王贵民电 话:  0531-88589237

  • 【分享】自动生化分析仪的原理、构成及使用

    一、自动生化分析仪的功能及特点 自动生化分析仪是将生化分析中的取样、加试剂、混合、保温、比色、结果计算、书写报告等步骤的部分或全部由模仿手工操作的仪器来完成。它可进行定时法、连续监测法等各种反应类型的分析测定。除了一般的生化项目测定外,有的还可进行激素、免疫球蛋白、血药浓度等特殊化合物的测定以及酶免疫、荧光免疫等分析方法的应用。它具有快速、简便、灵敏、准确、标准化、微量等特点。 二、自动生化分析仪的分类 自动生化分析仪有多种分类方法,最常用的是按其反应装置的结构进行分类。按此法可将自动生化分析仪分为流动式和分立式两大类。 所谓流动式自动生化分析仪是指测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反应在同一管道流动的过程中完成。这是第一代自动生化分析仪。过去说得多少通道的生化分析仪指的就是这一类。存在较严重的交叉污染,结果不太准确,现已淘汰。 分立式自动生化分析仪与流动式的主要差别是每个待测样品与试剂混合间的化学反应都是分别在各自的反应皿中完成的,不易出现较差污染,结果可靠。

  • 生化分析仪的基本测定方法

    生化分析仪的基本测定方法。生化分析仪属于光学式分析仪器,它基于物质对光的选择性吸收,即分光光度法,单色器将光源发出的复色光分成单色光,特定波长的单色光通过盛有样品溶液的比色池,光电转换器将透射光转换为电信号后送入信号处理系统进行分析。即利用光电比色的原理来分析样本中的生化指标。生化分析仪常用的分析方法有A终点分析法;B连续监测法;C比浊测定法;D离子选择电极法;E电泳法;F均相酶免疫分析法等

  • 多重免疫荧光染色步骤和原理

    [font=宋体][font=宋体]多重荧光免疫组化技术[/font] [font=Calibri](Multiplex immunohistochemical[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]mIHC) [/font][font=宋体]也称作酪氨酸信号放大 [/font][font=Calibri](Tyramide dignal amplification[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]TSA) [/font][font=宋体]技术,是一类利用辣根过氧化酶 [/font][font=Calibri](Horseradish Peroxidase, HRP) [/font][font=宋体]对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这一技术基于酪胺信号的放大效应,实现对单个细胞或组织样本上多个目标靶点的同时检测。这为全面研究细胞组成、细胞功能以及细胞间的相互作用提供了强大的工具。通过多重荧光免疫组化技术,科学家们可以更深入地了解细胞的奥秘,揭示生命现象的复杂性。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]mIHC [/font][font=宋体]实验原理及流程[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]TSA [/font][font=宋体]技术采用 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]标记的二抗,[/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]催化加入体系的 [/font][font=Calibri]TSA [/font][font=宋体]衍生荧光染料,生成活化荧光底物,活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合,将信号共价结合到抗原上。之后用热修复洗去非共价结合的抗体,再换下一种一抗来第二轮孵育,换另一种荧光素底物,如此往复就可实现多重标记。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]原理:[/font][/b][font=宋体][font=宋体]带有染料标记的底物酪胺[/font] [font=Calibri](T) [/font][font=宋体]分子在过氧化氢氧化环境下,被抗体或探针固定的 [/font][font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]转化为具有短暂活性的中间状态 [/font][font=Calibri](T*)[/font][font=宋体],然后被激活的中间态分子 [/font][font=Calibri](T*) [/font][font=宋体]迅速与相接蛋白分子的富含电子区域 [/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]酪氨酸残基[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]进行稳定的共价结合,未被标记的酪胺分子将被洗脱,借此实现对抗原的特异性染色。由于相接的蛋白 [/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]包括 [/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体],抗体,目标抗原[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]都含有大量的酪氨酸结合位点,所以目标抗原处会富集大量标记分子,使信号被有效放大 。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]多重免疫荧光染色的步骤包括样品制备、抗原诱导、抗原解露等。[/font][/b][font=宋体]具体如下:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①样品制备:根据细胞或组织的不同,选择不同的处理方式。对于细胞样品,需要固定和渗透化处理以保持其形状和蛋白质结构。对于组织样品,需要切片并进行染色前的去脂处理。[/font][font=宋体]②抗原诱导:如果目标标记物是蛋白质,那么需要选择适当的抗体来识别目标蛋白质。抗体可以人工合成或从动物体内提取。[/font][font=宋体]③抗原解露:对于细胞样品,可以利用活液解离细胞,并将细胞固定在载玻片上。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]IHC [/font][font=宋体]与 [/font][font=Calibri]mIHC[/font][font=宋体]区别与联系[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][b]免疫组化[/b][/url],是应用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原,对其进行定位、定性的研究。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]简单来说,[/font][font=Calibri]mIHC [/font][font=宋体]属于 [/font][font=Calibri]IHC [/font][font=宋体]的升级版本![/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Tips[/font][font=宋体]:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]相同点:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]能够完整显现组织原位形态信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不同点:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]常规免疫组化的分析属于定性分析,其判断大多依赖于经验,其分析结果会有差异。而多重荧光免疫组化属于定量分析,其利用软件可对组织中的细胞进行精准的结果分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]常规免疫组化受传统染色成像的限制,靶标少于 [/font][font=Calibri]3 [/font][font=宋体]个,无法完整分析组分信息。而多重荧光免疫组化可实现多因子共定位,可以获取更多的生物信息,且样本需求量较少。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供的[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]TSA[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]法多重荧光免疫组化服务[/b][/url],有一系列屏蔽自发荧光干扰的手段,配合激光共聚焦显微镜的拍摄条件,提供更优质的图像质量,收获更特异的染色结果。[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

  • 免疫学检测形成的原因有哪些?免疫学检测包括哪些?

    [font='calibri'][size=13px]免疫学检测形成的原因有哪些?免疫学[/size][/font][font='calibri'][size=13px]检测包括哪些?[/size][/font]免疫学检测形成的原因:免疫学检测是基于免疫系统对外来物质或抗原的反应而产生的,可分为体液免疫学检测和细胞免疫学检测两大类。体液免疫学检测是通过血液、唾液、乳汁等体液样本中的免疫球蛋白、补体、免疫复合物等成分的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时,免疫系统会产生相应的抗体和细胞因子等免疫反应,这些免疫反应产物可通过体液免疫学检测方法进行检测。细胞免疫学检测是通过检测机体内的免疫细胞和免疫分子的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时,免疫系统会产生相应的抗原提呈细胞,并引导记忆细胞和效应细胞的产生,这些记忆细胞和效应细胞可以在特定情况下识别和消灭病原体或肿瘤细胞,这些细胞和效应细胞本身也可以被检测出来。总之,免疫学检测的目的是通过检测机体的免疫反应,了解机体的免疫状态,为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的依据。免疫学检测包括哪些?免疫学检测是指通过各种方法检测机体对病原体或某些生物物质的免疫反应程度,以及机体内的免疫细胞、免疫分子和免疫活性物质的含量及其分布等情况的一种医学技术。免疫学检测广泛应用于各种疾病的诊断、治疗和预防,包括感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤免疫学诊断等。以下是一些常见的免疫学检测项目:体液免疫学检测:主要包括免疫球蛋白的测定,如IgA、IgM、IgE等;补体检测,如总补体溶血活性、补体C1、C2等;免疫复合物检测,如抗体-抗原复合物、补体-抗体复合物等;细胞免疫学检测:主要包括T细胞亚群分析、B淋巴细胞分化抗原检测、自然杀伤细胞抗体检测、T细胞活化抗体检测等;抗体检测:如抗药抗体、中和抗体等;细胞因子检测:如白细胞介素-2、-4、-6等;自身抗体检测:如抗核抗体、抗胰岛素抗体等;感染免疫检测:如病毒特异性抗体、细菌特异性抗体等。总之,免疫学检测是一种非常重要的医学技术,可以帮助医生判断机体的免疫状态,为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。免疫学检测是根据抗原、抗体反应的原理,利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原,可定性、定位和定量的检测。依托自主研发生产的优质抗体、蛋白试剂、先进的实验仪器以及经验丰富的技术人员,义翘神州建立了全面的免疫学检测平台,包括ELISA、Western Blot、IHC、IF、Flow Cytometry、IP/Co-IP、Biacore、Octet等检测技术。义翘神州免疫学检测服务包含:①WB/Sally Sue高通量检测服务②[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service]流式细胞检测服务[/url]③免疫组化检测服务④多重免疫荧光和免疫组化服务⑤免疫荧光检测服务⑥HE染色及特殊染色服务⑦ELISA/ELISpot检测服务⑧IP/Co-IP检测服务⑨TMA芯片定制服务更多详情可以查看:https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service

  • 【资料】自动生化分析仪的原理、构成及使用

    自动生化分析仪的原理、构成及使用一、自动生化分析仪的功能及特点 自动生化分析仪是将生化分析中的取样、加试剂、混合、保温、比色、结果计算、书写报告等步骤的部分或全部由模仿手工操作的仪器来完成。它可进行定时法、连续监测法等各种反应类型的分析测定。除了一般的生化项目测定外,有的还可进行激素、免疫球蛋白、血药浓度等特殊化合物的测定以及酶免疫、荧光免疫等分析方法的应用。它具有快速、简便、灵敏、准确、标准化、微量等特点。 二、自动生化分析仪的分类 自动生化分析仪有多种分类方法,最常用的是按其反应装置的结构进行分类。按此法可将自动生化分析仪分为流动式和分立式两大类。所谓流动式自动生化分析仪是指测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反应在同一管道流动的过程中完成。这是第一代自动生化分析仪。过去说得多少通道的生化分析仪指的就是这一类。存在较严重的交叉污染,结果不太准确,现已淘汰。 分立式自动生化分析仪与流动式的主要差别是每个待测样品与试剂混合间的化学反应都是分别在各自的反应皿中完成的,不易出现较差污染,结果可靠。 三、自动生化分析仪的构成 因为自动生化分析仪是模仿手工操作的过程,所以无论哪一类的自动生化分析仪,其结构组成均与手工操作的一些器械设备相似,一般可有以下几个部分组成: 1、样品器:放置待测样本、标准品、质控液、空白液和对照液等。 2、取样装置:包括稀释器、取样探针和输送样品和试剂的管道等。 3、反应池或反应管道:一般起比色皿(管)的作用。 4、保温器:为化学反应提供恒定的温度。 5、检测器:如比色计、分光光度计、荧光分光光度计、火焰光度计、电化学测定仪等。不同仪器配置不同。 6、微处理器:是分析仪的电脑部分,又叫程序控制器。控制仪器所有的动作和功能,使用者可通过键盘与仪器“对话”,同时电脑还能接受从各部件反馈来的信号,并作出相应的反应,对异常情况发出一定的指示信号。分析软件和分析结果一般贮存在磁盘中,可共查询。 7、打印机:可绘制反应动态曲线和打印检验报告单等。 8、功能监测器:显示屏就是其中一部分,可查看反应状态、人机“对话”的情况、当前仪器工作状态、分析结果等。 四、流动式自动生化分析仪 流动式自动生化分析仪又可分为空气分段系统和非分段系统。前者是流动式分析仪中最典型的一种。 (一)空气分段系统 这种分析仪的特点是通过比例定量泵挤压弹性样品管、空气管和试剂管(通称“泵管”),将样品依次连续地吸入并沿样品管输送,另一方面由空气管吸入的气泡将由同样原理吸入并在试剂管道中连续流动的试剂分成均匀的节段,样品流和试剂流在连续向前流动的过程中相遇、混合、透吸(必要时)、保温、反应及被测定。整个分析过程是液流在管道中连续流动的过程中完成的。 (二)非分段系统 非分段系统是靠试剂空白或缓冲液来间隔每个样品的反应液,这样,在管道中连续流动的液体不被分段。非分段系统可再分为流动注入系统和间隙系统。 1、流动注入系统:该系统的组成与空气分段系统相似,但某些结构和工作原理有所不同,空气分段系统是利用气泡分段来防止管道中各反应液在流动过程中的交叉污染,而流动注入系统则是通过将样品依次注入连续流动的试剂流管道中来达到防止交叉污染的目的的。 2、间隙系统:该系统的结构、组成和工作原理与流动注入系统相似,但其特点是每一次进样都必须在前一样品的分析过程结束后(包括管道的清洗)才能开始,而不能连续地依次进样,每次进样间有一时间间隙,故有人称为不连续流动式分析仪。 五、分立式自动生化分析仪 分立式为第二代自动生化分析仪,它与流动式的主要差别是每个待测样品与试剂混合间的化学反应都是分别在各自的反应皿中完成的。 称为第三代自动生化分析仪的离心式自动生化分析仪,也应属于分立式。因为在离心式分析仪中,每个待测样品都是在离心力作用下,在各自的反应槽内与试剂混合,并完成化学反应,继而被测定的。离心式分析仪属于“同步分析”,在离心力的作用下,各待测样品几乎同时与试剂混合、反应并被测定后打出报告;而其它分析仪是“顺序分析”,即各待测样品依次与试剂混合、反应先后被测定。 袋式自动生化分析仪也应属于分立式,它是用试剂袋代替反应管和比色皿,测定时每个待测样品在各自的试剂袋内进行反应并被检测。还有一种称为“干式自动生化分析仪”也属于分立式。它的主要特点是采用固相化学技术,即将试剂固相于胶片或滤纸小片等载体上。测定时使一定量的待测样品分布于一张试纸片上,一定时间后用反射光度计测定。 分立式自动生化分析仪,是目前各实验室普遍使用的自动生化分析仪,一般都可以任意选择测定项目,故称为任选式自动生化分析仪。下面将重点介绍任选式自动生化分析仪。 六、任选式自动生化分析仪的主要部件 (一)加样系统 1、样品转盘:可放置小型样品杯数十只。有的分析仪可直接用盛样本的试管,有的还附有条形码阅读装置,能识别样本试管上的条形码信息,不需给样本编号,也不必输入病人资料即可打印出该病人的化验报告。 2、试剂室(仓):不同的分析仪试剂室可容纳的试剂盒数量不同,一般可容纳20多种试剂。有的试剂室带有冷藏装置,带有条形码识别装置的试剂室试剂可以任意放置试剂盒位置。 3、取样装置:有的分析仪取样本和取试剂公用同一采样针,由内部的分流阀控制取样本和取试剂;有的仪器有两套取样装置,分别取样本和取试剂。采样针前端有液面传感器防止空吸或采样针外壁液体挂淋,采样臂中有预温装置。如果采用多试剂分析方法,将占用试剂室中试剂盒位置,会减少测定项目。 (二)比色系统 1、光源:大多数分析仪使用卤素钨丝灯,工作波长325~800nm。有的分析仪使用氙灯,工作波长285~750nm。 2、比色杯:有分立式比色杯、分立式转盘式比色杯、离心式比色盘、流动池。干式生化仪不需要比色杯,袋式生化仪由试剂袋经挤压自动形成比色杯。比色杯光径6-7mm,少数为10mm。 比色杯中的反应液需要恒温,有37℃、30℃、25℃三档可选择,有的固定为37℃。多数用吹入恒温空气的方式,也有用恒温水浴或半导体温控装置的。为了保证比色杯中反应液有±0.1℃的精确度,分析仪的环境温度必需保持18~30℃,室温波动不宜超过2℃。 3、单色器:(1)干涉滤光片(2)光栅 4、检测器:(1)光电倍增管,已很少用。(2)列阵固态光敏二极管。(三)供排水系统 自动生化分析仪中有很多供水管道与电磁阀。只读存储器中软件参数控制电磁阀与输液泵供给各个部件的冲洗与吸液,最后排出机外。随机存储器内的分析参数控制电磁阀与注射器的步进电机,供应样本、试剂和稀释用水。有的生化仪还能自动冲洗比色杯供反复使用。(四)数据处理系统 每个项目的检测结果暂时储存在随机存储器中,待某个样本所需的项目全部检测完毕,由微机汇总打印出综合报告单。微机的存储器中可以存储相当数量的病人数据与逐日的室内质控数据,随时可以按指令调出,在荧光屏上显示或打印,也可存储在软盘中长期保存,随时调阅。 七、任选式自动生化分析仪的分析顺序 每份样品可以任选试剂室内预置试剂盒的一项或全部项目的检测。微机按输入的指令,安排项目检测次序,一般先做孵育时间长的终点法,后做监测时间短的速率法,以便恒速打印综合报告单。当指定样本进入待测位置时,微机指令试剂盒进入试剂取样位置,按所测项目的参数由加样系统定量取样,同时比色杯按微机的指令到达指定位置加样。生化仪的分析速度与仪器加样周期的时间有关。加样周期的时间越短分析仪的速度越快。双试剂法占用两个加样周期,分析速度减半。 八、任选式自动生化分析仪的主要分析参数 1、试验代号 14、连续监测时间 2、试验名称 15、标准液数量 3、试验方法 16、标准液浓度 4、试验类型 17、重复校标次数 5、温度 18、计算因子(F值)6、波长:可选择主波长和次波长。 19、计量单位 7、反应类型 20、小数点位数8、终点法零点读数 21、底物耗尽 9、样本量与稀释水量 22、线性度 10、试剂量与稀释水量 23、试剂吸光度上限与下限 11、样本空白 24、线性范围 12、孵育时间 25、参考范围 13、延迟时间 26、等等等等

  • 免疫学检测优缺点有哪些?免疫学检测方法分享

    [font='calibri'][size=13px]免疫学检测优缺点有哪些?免疫学检测方法分享[/size][/font]免疫学检测优缺点介绍:免疫学检测具有快速、简便、高灵敏度和特异性等优点,因此在医学诊断和治疗中广泛应用。但是,免疫学检测也存在一些缺点,例如价格较高,对于某些特定的毒素可能无法检测,并且检测过程中可能会受到多种因素的干扰,例如操作不规范、实验条件不严格等。总之,免疫学检测具有很多优点,但也存在一些缺点,需要在实验设计、操作规范和质量控制等方面加强管理,以提高检测的准确性和可靠性。免疫学检测方法包括以下几种:①抗原抗体反应的相关检测,主要是免疫组化、免疫荧光、血凝抑制、放射免疫等。其中,免疫组化是应用标记的特异性抗体,在组织细胞原位,通过抗原抗体反应和酶底物的显色反应,对细胞中的抗原进行定位、定性的检测方法,是比较常用的一种方法。②免疫细胞的检测,主要包括细胞毒试验、FCM流式细胞术等。其中,细胞毒试验常用于肿瘤的免疫移植、排斥反应和病毒感染等方面的研究。③酶联免疫吸附试验(ELISA),是目前应用最广泛的免疫检测方法。该方法是将二抗标记上酶,抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来,根据酶作用底物后的显色颜色变化来判断试验结果,其敏感度可达ng水平。④免疫金胶体技术、胶体金技术等,是将二抗标记上胶体金颗粒,利用抗原抗体间的特异性反应,最终将胶体金标记的二抗吸附于渗滤膜上,此方法简单、快速、广泛应用于临床筛查。义翘神州建立了全面的免疫学检测平台,义翘神州免疫学检测服务优势:? 拥有成熟的免疫检测体系;? 大量优质的蛋白和抗体产品支撑;? 先进的实验仪器,经验丰富的技术员;? 优良的实验环境,完善的实验平台,为您提供最优质的服务。同时包括ELISA、Western Blot、IHC、IF、Flow Cytometry、IP/Co-IP、Biacore、Octet等检测技术。更多免疫学检测服务尽在https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service

  • 全自动化学发光免疫分析仪的原理以及临床应用

    全自动化学发光免疫分析仪的原理以及了临床应用。全自动化学发光免疫分析仪采用光电比色原理来测量体液中某种特定化学成分的仪器。是用于检测肿瘤标志物、贫血、甲状腺、孕筛查等项目,是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术,目前应用的自动化分析仪是分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、保温、比色、结果计算、书写报告和清理等步骤的部分或全部由模仿手工操作的仪器来完成,大大提高了工作效率及准确性。

  • 细胞爬片免疫组化染色操作步骤

    http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/09/A1379405357_small.jpg1. 取出细胞爬片,迅速置入冷丙酮固定 20~30 分钟。 2. 蒸馏水浸泡 5 分钟,2 次。3. 打孔液浸泡 5 分钟。4. 蒸馏水浸泡 5 分钟,2 次。注:第 3、4 步仅用于检测细胞内抗原,检测细胞膜抗原时不用。5. 正常血清封闭:从染片缸中取出切片,擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 (保持组织呈湿润状态,)滴加正常山羊或兔血清 (与第二抗体同源动物血清)处理,37 ℃,15 分钟。附:正常血清配制 ( 或按试剂盒规定的浓度配制):按 1:20比例,用PBS配制,每张切片需要量按 50 μl+5 μl (10%抛洒量) 计算。6. 滴加第一抗体:用滤纸吸去血清,不洗,直接滴加第一抗体,37 ℃ 2 小时(也可置于 4 ℃冰箱过夜) 。7. PBS:5 分钟,2 次(置于摇床) 。8. 滴加生物素化的二抗,37℃,40 分钟。9. PBS:5 分钟,2 次(置于摇床) 。10. 滴加三抗 (SAB 复合物) ,37 ℃,40 分钟。11. PBS:5 分钟,2 次(置于摇床) 。12. DAB 显色,镜下观察,适时终止(自来水冲终止) 。附:DAB 的配制储备液(DAB 25 mg/ml)的配制:DAB 250 mg + PBS 10 ml,待完全溶解后分装成 1 ml,100 μl,50 μl ,20 μl 等,-20 ℃,冻存。② 工作液:DAB 储备液 20 μl + PBS 1000 μl + 3% H2O2 5 μl。13. 自来水(细水)充分冲洗。14. 苏木素复染,室温,30 秒,自来水冲洗。15. 自来水冲洗返蓝,15 分钟。16. 梯度酒精脱水:80%,2 分钟 95%,2 分钟 100%,2 次,5 分钟。17. 二甲苯透明:I ,II (二甲苯)各 5 分钟18. 封片:加拿大树胶(或中性树胶)封片。

  • 全自动生化分析仪交叉污染的小看法

    1、全自动生化分析仪的交叉污染与操作不规范相关在实际工作中,实验室工作人员往往为了节约成本,提高经济效益,常将不同批号的试剂混用,这将直接导致检验结果失控。生化分析仪对水质要求很高,优质的去离子水主要用于仪器的清洗程序,耗水量大,要定期检测水质;当水机的产水电阻小于1.0MQ 时,要及时更换离子交换树脂或活性炭。否则会因水质的不合格引起Ca、P 及CO2 等项目检验结果的偏差。2.全自动生化分析仪的交叉污染与日常维护相关在日常检验工作中,仪器的维护保养至关重要;要定期对试剂针、样品针及搅拌棒清洗保养(用1N 次氯酸钠清洗效果好)。通过多年使用生化分析仪,要有专人负责维护,避免多人维护的不确定性。坚持日常维护,按照仪器说明书的维护要求做好每日、每周和每月的维护。再着应签定维修合同,由维修工程师定期来维护保养,力求做到生化分析仪的最佳运行状况,以减少由于清洗不彻底带来的携带污染。

  • 冰冻切片的免疫组化染色

    1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存),厚度为 5~6μm。2. 载玻片可不打底,裱片后,立即用电吹风吹干。3. 如不马上染色,可密封后- 20℃保存。4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。5. PBS 洗 2 次,每次 5 分钟,( 必要时应用 0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔)6. 3% H2 O2灭活内源性过氧化物酶,20 分钟,避光;7. 用 PBS 洗 2 次,每次 5 分钟;8. 正常血清封闭:从染片缸中取出切片,擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 (保持组织呈湿润状态,)滴加正常山羊或兔血清 (与第二抗 体 同源动物血清)处理,37℃,15 分钟。附:正常血清配制 ( 或按试剂盒规定的浓度配制):按 1:20比例,用 PBS 配制,每张切片需要量按 50μ+5μl (10%抛洒量) 计算。9.滴加第一抗体:用滤纸吸去血清,不洗,直接滴加第一抗体,37℃ 2 小时(也可置于 4℃冰箱过夜) 。10.PBS:5 分钟,2 次(置于摇床) 。11.滴加生物素化的二抗,37℃,40 分钟。12.PBS:5 分钟,2 次(置于摇床) 。13.滴加三抗 (SAB 复合物) ,37℃,40 分钟。14.PBS:5 分钟,2 次(置于摇床) 。15.DAB 显色,镜下观察,适时终止(自来水冲终止) 。附:DAB 的配制① 储备液(DAB 25mg/ml)的配制:DAB 250mg + PBS 10ml,待完全溶解后分装成 1ml,100μl,50μl ,20μ l 等,-20℃,冻存。② 工作液:DAB 储备液 20μl + PBS 1000μl + 3% H2O2 5μl16.自来水(细水)充分冲洗。17.苏木素复染,室温,30 秒,自来水冲洗。18.自来水冲洗返蓝,15 分钟。19.梯度酒精脱水:80%,2 分钟 95%,2 分钟 100%,2 次,5 分钟。20.二甲苯透明:I ,II (二甲苯)各 5 分钟21.封片:加拿大树胶(或中性树胶)封片。

  • 【资料】化学发光免疫分析

    [size=4]化学发光免疫分析  [/size][url=http://baike.baidu.com/view/1401709.htm][size=4]化学发光免疫分析[/size][/url][size=4](chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。[/size]

  • 化学发光免疫分析

    化学发光免疫分析放射免疫分析法有很高的灵敏度,但存在着放射性防护和同位素污染等问题。近年来,许多非放射性同位素标记的免疫分析方法相继出现。其中,在化学发光反应及抗原-抗体特异性识别基础上建立起来的一种新的非放射免疫分析技术--化学发光免疫分析法,由于这种方法具有灵敏度高,特异性强,精密度好,线性范围宽,仪器设备简单,试剂价格低廉,方法稳定、快速等优点,已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测。  化学发光免疫分析包括三大类型:即标记化学发光物质的化学发光免疫分析;标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析。下面以偶合放大化学发光酶联免疫分析法检测人血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为例。  (一) 原理  尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H2O2反应体系产生化学发光,但由于该体系的检测灵敏度不够高,不能满足酶联免疫测定的要求。因此,为了提高体系的检测灵敏度,可将HRP催化H2O2氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H2O2的化学发光反应相偶合,建立偶合放大化学发光酶联免疫分析法。这里,酶的活性是基于下列发光反应进行检测的:  HRP         luminol+H2O2───→产物+hν                 产 物                  ↑       Eosin+H2O2 ──────┘               HRP 二) 操作步骤  1. 包被抗体 在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚,再加入300μl用0.05M,PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体,同时设空白对照,置4℃过夜。  2. 洗涤 用抽滤针头吸干管内液体,加入Tris-HCl-Tween20洗涤3次,每次加2ml,放置3~5min,用抽滤针头吸干管内液体。  3. 加待检血清和阳性标准品 用PBS-Tween20缓冲液不同倍数稀释HBsAg阳性标准品或待检血清,每管加入300μl。同时设阴性对照;空白对照管只加抗体稀释液。置37℃孵育2h。  4. 洗涤 同2。  5. 加酶标抗体  用含小牛血清的PBS-Tween20缓冲液稀释HRP标记的抗HBsAg抗体,每管加入300μl,空白对照管只加用于稀释酶标抗体的稀释液。置37℃孵育2h。  6. 洗涤 同2。  7. 化学发光测定 给每管加入300μl底物溶液,置37℃保温20min。犎;后将小试放入LKB-1250 lumimeter中,并置于测量位置,加入300μl 5.0×10-4M luminol。记录仪记录化学发光强度。  8. 同时用ELISA方法进行对照,结果测量采用DG3022型酶联免疫检测仪。  结果判定(1) 定性 按下列公式判别阴、阳性:          L样品-L空白     ┌≥2.1 为阳性   S/N = ──────── = 商│       L阴性对照-L空白    └<2.1 为阴性   (2) 定量 以不同稀释度的HBsAg阳性标准品的化学发光强度为纵坐标,不同稀释倍数为横坐标,作出剂量反应曲线(标准曲线),犜r待测样品中HBsAg的含量就可由测量的化学发光强度换算得到。

  • 【转帖】放射免疫分析试剂!

    1、标准品  标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。  按实验要求,将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液,用于制作标准曲线。2、标记物  标记抗原应具备:①比放射性高,以保证方法的灵敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期尽可能长,标记一次可较长时间使用,这对来之不易的抗原尤其重要;④标记简便、易防护。  要准确测量B与F的放射性,必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量,在使用125I时达5000~15000cpm。3、抗体  应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体,用于放射免疫测定。  根据稀释曲线,选择适当的稀释度,一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂  以2%加膜活性炭溶液为例,2%加膜活性炭溶液的配制:  活性炭2g(杭州木材厂生产,森工牌732型)  右旋糖酐T200.2g  加0.1mol/L PB 至100ml  电磁搅拌1h,然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液  放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种,要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。  目前最常用的缓冲液有下列几种:①磷酸盐缓冲液;②醋酸盐缓冲液;③巴比妥缓冲液;④Tris –HCl缓冲液;⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。  在缓冲液中,除必须有弱酸及弱酸的盐成分外,还应根据不同检测项目加入下列物质:①保护蛋白:常用的有牛血清白蛋白或白明胶,浓度为0.1%~0.2%,用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂:多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂:如测定心钠素等肽类激素时,要加入适量的抑肽酶,用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解;又如测定cAMP、cGMP时,需加入EDTA• 2Na,抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂:在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时,必须加阻断剂,使和蛋白质相结合的激素,变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白:采用二抗作B与F分离剂时,要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时,用PEG沉淀剂分离B、F,必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。  在神经肽的RIA时,常用PELH缓冲液,(按1000ml,pH7.6):  0.1mol/l PB        980.0ml  0.3mol/L EDTA• 2Na     10.0ml  0.2%洗必泰溶液       10.0ml  溶菌酶           1.0g

  • 基于阻抗方法实时无标记细胞分析系统--肿瘤免疫治疗以及病毒学研究中的应用

    [font=&][size=16px][color=#343a40] 肿瘤免疫治疗是一种利用人体免疫系统来战胜肿瘤的治疗方案。成功与否的关键就在于免疫系统能否被激活到足够去特异性地杀死肿瘤的程度。在临床实验前,人们需要借助体外实验先行评估治疗方案的效力。 Axion BioSystems公司革命性地推出了使用生物电感应技术的Maestro Z/ZHT平台,完美具备评估体外效力的必要条件。它能在免除标记物影响的同时,在长达几天的时间中,以非侵入的方式对细胞的健康和活动开展监测,并自动且实时地获得多至384个样本的完整实验信息。其秘诀就是通过埋设在微孔板底部的高灵敏度电极来进行生物电阻抗的测试。这种技术能够追踪微小的细胞变化,从而能够揭示出远低于其它技术最低检出限的生物学信息。[/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=#343a40][b]--利用Maestro Z/ZHT评估T细胞对胶质母细胞瘤的杀伤效力(car T治疗):[/b][/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=#343a40][b]人体免疫系统中的效应T细胞,对肿瘤细胞有着高特异性和与生俱来的细胞毒性,在未来的脑胶质瘤治疗中被人们寄予很高的期望。Maestro Z的阻抗测试有着高灵敏、无标记及无损的特点,能够实时监测肿瘤细胞的增殖和T细胞介导的细胞溶解等过程,在体外评估免疫治疗的效价方面有着突出的优势。美国乔治亚大学的科学家们借助Maestro Z平台,对不同条件活化后的T细胞,开展了恶性胶质母细胞瘤杀伤效力的对比评估。详情点击:[url=http://www.axionbio.cn/page_1.html]CAR-T治疗 (axionbio.cn)[/url][/b][/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=#343a40][/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=#343a40][b]--利用Maestro Z 评估药物对COVID-19病毒感染力的中和作用:[/b][/color][/size][/font][color=#343a40][b][font=&][size=16px]病毒学研究的重点就在于开发抗病毒药物用于预防和治疗病毒感染。其中的挑战在于筛选到能够选择性抑制病原体复制并对宿主没有损害的化合物。病毒导致的细胞病变效应(CPEs)常常和靶细胞在形态、胞间贴合度、附着力及活力等方面的变化相关联。研究者可在体外联合使用宿主细胞、病原体和药物来模拟三者在体内的互作,借助 Maestro Z 定量CPE引起的阻抗变化。轻松实现在筛选药效的同时,完成安全性的初步评沽。[b]详情点击:[/b][url=http://www.axionbio.cn/page_4.html]page_4 - (axionbio.cn)[/url][/size][/font][/b][/color][font=&][color=#343a40][b][font=&][/font][/b][/color][/font]

  • 【转帖】放射免疫分析试剂!

    1、标准品  标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。  按实验要求,将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液,用于制作标准曲线。2、标记物  标记抗原应具备:①比放射性高,以保证方法的灵敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期尽可能长,标记一次可较长时间使用,这对来之不易的抗原尤其重要;④标记简便、易防护。  要准确测量B与F的放射性,必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量,在使用125I时达5000~15000cpm。3、抗体  应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体,用于放射免疫测定。  根据稀释曲线,选择适当的稀释度,一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂  以2%加膜活性炭溶液为例,2%加膜活性炭溶液的配制:  活性炭2g(杭州木材厂生产,森工牌732型)  右旋糖酐T200.2g  加0.1mol/L PB 至100ml  电磁搅拌1h,然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液  放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种,要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。  目前最常用的缓冲液有下列几种:①磷酸盐缓冲液;②醋酸盐缓冲液;③巴比妥缓冲液;④Tris –HCl缓冲液;⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。  在缓冲液中,除必须有弱酸及弱酸的盐成分外,还应根据不同检测项目加入下列物质:①保护蛋白:常用的有牛血清白蛋白或白明胶,浓度为0.1%~0.2%,用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂:多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂:如测定心钠素等肽类激素时,要加入适量的抑肽酶,用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解;又如测定cAMP、cGMP时,需加入EDTA2Na,抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂:在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时,必须加阻断剂,使和蛋白质相结合的激素,变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白:采用二抗作B与F分离剂时,要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时,用PEG沉淀剂分离B、F,必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。  在神经肽的RIA时,常用PELH缓冲液,(按1000ml,pH7.6):  0.1mol/l PB        980.0ml  0.3mol/L EDTA2Na     10.0ml  0.2%洗必泰溶液       10.0ml  溶菌酶           1.0g

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