凝胶色谱分析

哪位大虾知道做凝胶色谱分析需要哪些设备？

SEC/GPC凝胶渗透色谱分析的工作原理[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=91284]SEC/GPC凝胶渗透色谱分析的工作原理[/url]

分离亲水气单胞菌外毒素的 功能高分子凝胶色谱填料 摘要 由丙烯 酰胺 和甲叉丙烯 酰胺 在水 油悬 液中共 聚得 到聚丙烯 酰胺凝胶 Z S P， 并用 I R、 溶 剂吸收 实验等对合成 的 Z S P的结构进 行了确证 。以商 品葡聚糖凝 胶色谱 S e p h a d d e x — G1 0 0为对 照 ， 研究 了 ZS P 一 1 0对 中华鳖致 病的亲水气单 胞菌外毒素蛋 白的分 离性能 ， 结果 表明经 S e p h a d e x — G1 0 0和 Z S P一 1 0提纯的外毒素蛋白均保留了生物活 ( 毒) 性 ， 纯度高 。 从 S DS — P AGE分析结果 ， 可以 认为经提纯的毒素蛋 白是分 子量 为 3 2 KDa的纯品。与 S e p h a d e x — G1 0 0凝胶相 比， 聚丙 烯酰胺凝胶 色谱填料 Z S P一 1 0对 蛋 白质 的回收率更 高， 且成本低廉 ， 不易染菌 ， 是具有 良好 的应 用前景 的蛋 白 质分离色谱填料。 关键词 ： 亲水气 单胞菌外毒素 聚丙烯酰胺凝胶 1 前言 在生物技术制取蛋 白质 的多级纯化过程中， 液相色谱被指定为一个必须步骤 ， 这表明操作条件温和、 又具有分子水平分离能力的液相色谱为开创现代生物大分子化学树立了一个里程碑。在液相色谱 中， 无论是哪一种层析方法 ， 分离介质 的性能都是分离效果 的首要决定 因素。目前所使用的多糖类蛋白色谱分离存在的普遍存在易染菌、 回收率低 、 成本高等问题 。开发高效的蛋 白分离介质受到国内外学者的广泛关注。蛋白分离层析介质 的发展趋势可以认为是对以天然大分子为母体 的层析介质不断地进行合成工艺改进 ， 提高性能 ， 使老产品更新换代； 同时大力开发以合成高聚物为骨架 的具有优异性能的新一代产品。 亲水气单胞菌在 自然界尤其在水体环境中分布甚广， 属弧菌科， 能引起人和动物的多种疾病n ， 特别是水生动物暴发性传染病 ， 此病在我 国东南各地广泛流行 ， 尤 以水温较高的夏秋季为剧， 导致水生养殖鱼类大量死亡， 给渔业生产造成重大经济损失 矗 。 亲水气单胞菌在习惯上被认为是条件致病菌 ， 随着细菌本身的研究的深入 ， 这一认识正在被修正 。已有报道该菌的 O抗原、 菌毛及一些表 面的非特异性粘附因子与该菌的致病性有关“ 。 然而， 更多的报道指出致病侏能产生细胞外毒素 ， 而毒素与致病关系密切 ~ 7 。 但是关于毒素的种类和性质诸说不一 ， 未有定论。 我们用自制的凝胶色谱介质对 中华鳖致病的亲水气单胞菌素进行了分离。 2 实验部分 2 ． 1 菌种 亲水气单胞菌菌株从广东省东莞市某养殖场患病的中华鳖中分离鉴定， 取材选取濒死新 2 ． 2 细菌培养 亲水气单胞菌菌株接种合成培养基 中， 摇床培养 3 5 ℃， 1 0 0 r ／ mi n， 2 4 h。 培养物经 4_ C， 1 O 0 0 0 r ／ mi n离心 3 0 mi n ， 取上清液。 将此上清液对小 白鼠( 体重 1 8 ~2 2 g ) 腹腔进行注射( 剂量为 0 ． 4 ml ／ 只) ， 确证其生物活性 。 2 ． 3 聚丙烯酰胺凝胶色谱填料 Z S P的合成在 甲 苯 和 三 氯 甲烷 溶 剂 中加 入 少 量Twe e n 一 8 0和 1 9 ／ 6 聚乙烯醇 ， 滴加丙烯酰胺和甲又丙烯酰胺水溶液 ， 5 0 V水浴恒温 ， 滴加完毕待分散均匀后加入适量过硫酸铵， 待反应完成后 ， 撤去水浴 ， 体系 自然冷却至室温， 减压抽滤 ， 真空干燥 ， 筛选出 2 0 0 ~3 0 0目产物备用。 2 ． 4 红外分析： 采用布鲁克 EQUI NOX 5 5傅里叶变换红外光谱仪 ， 波数范 围为 4 0 0 ~4 0 0 0 c m～， 样品采用 KB r压片法进行测试。 2 ． 5 溶剂吸收实验 将干燥至恒重 的 0 ． 1 ～0 ． 2 g Z S P聚合物凝胶置于一特制的底部带有多孔玻璃砂板的试管中， 在室温下置于溶剂 ( 水) 中浸泡 2 4 h。试管用橡胶盖密封 ， 放到一离心管内， 用 2 0 0 0 ~4 0 0 0 r ／ mi n离心 1 5 mi n除去过量的溶剂 ， 将带 有溶胀剂的树脂的试管迅速转移到密闭的烧瓶中称重。溶剂吸收量用 1 g干树脂 吸收的溶剂重 量来表 示 。 2 ． 6 毒素的提纯 2 ． 6 ． 1 硫酸铵盐析 用 Na OH调节细菌培养物上清液至 p H 6 ， 再加入硫酸铵至 7 O 的饱和度 ， 4 ℃静置 4 h， 1 0 0 0 0 r ／ mi n， 4 ℃离心 3 0 mi n， 去上清液， 沉淀溶于洗脱缓冲液 中， 对相同缓冲液透析过夜 ， 将透析后的样品用 P EG2 0 0 0 0进行浓缩 ， 即为粗提毒素。 2 ． 6 ． 2 S e p h a d e x G一 1 O 0凝胶过滤 将粗提 毒素 于 4 ℃装 S e p h a d e x G1 0 0柱( P h a ma c i a产品， 1 ． 6×5 0 c m， 平均液及洗脱液均为 5 0 mmo l ／ L Tr i s — HC1 ， p H 7 ． 8 ) ， 流速为 1 2 ml ／ h， 每管收集 4 ml ， 用紫外检测仪 2 8 0 n m进 行检测， 合并生物活性部分 ， 冻干浓缩。 2 ． 6 ． 3 Z S P 一 1 0凝胶过滤 将 粗 提 毒 素 于 4 n C装 交 联 度 为 1 O 9 ／ 5 的Z S P 一 1 0 柱 ( 自制 ， 1 ． 6 ×5 0 c m， 平衡液及洗脱液 均 为 0 ． 2 mo l ／ I Na Ac — HAc ， p H5 ． O ) ， 流速为1 2 ml ／· h， 每管收集 4 ml ， 用紫外检测以 2 8 0 n m进行检测 ， 合并生物活性部分， 冻干浓缩 。 2 ． 7 SDS— PAGE采 用 La e mml i 不 连续 S DS — P AGE系统 ， 按常规方法在小型蛋白电泳仪上进行 1 0 0 V恒压电泳约 3 h。 所用分离胶浓度为 1 2 9 ／ 6 ， 浓缩胶浓度为 4 9 ／ 6 ， 用考马斯兰法染色。 2 ． 8 小 白鼠毒性试验小 白鼠体重 1 8 ～2 2 g， 每组 2只， 分别腹腔注射 0 ． 4 ml 毒素样品。 3 结果与讨论 3 ． 1 I R分析 图 1 聚丙烯酰胺凝胶填料的 I R谱图 图 1是 聚 丙烯 酰胺 凝 胶 渗 透色 谱填 料 而引起的。 3 1 8 8 c m 处的强峰是 N— H伸缩振动Z S P 一 1 0的红外谱图。3 3 9 4 c m 处宽而强的峰是 吸收峰。 2 9 3 2 c m 和 2 7 8 1 c m 处的强峰是 CH 一OH伸缩振动的谱带 ， 由样 品中残留水分存在 基团中不对称和对 称 C— H伸缩振动峰。1 4 0 0 c m～， 1 3 0 0 c m～， l l 0 0 c m 和 1 0 0 0 c m。附 近的峰 是 C— N伸缩振动和一 NH变形振动引起的。6 2 7 c m 处的峰是 N— H面外变形吸收峰。 3 ． 2 Z S P树脂的吸水率 图 2是 Z S P树脂吸水率一交联度曲线。 很明显， 在交联度为 5 ～2 0 的范围内树脂 的吸水率与交联度成正 比。 由此可推测， 在所合成 的聚合物中交联点的分布是 比较均匀的。 O0 5 ．o o％ I o． 00 ％ l 5 ． O0 ％ 2 0． o( 2 5 |t ) 儡 空娃度 图 2 Z S P树脂吸水率一 交联度 曲线 3 ． 3 毒素的纯化 粗提毒素经 S e p h a d e x- -Gl O 0凝胶色谱柱 纯化后 回收率为 1 8 ． 8 3 ， 经交联度为 1 0 的聚 丙 烯 酰 胺 Z S P 一 1 0柱 纯 化 后 回 收 率 为 6 8 ． 0 5 ， 洗脱液蛋峰分别为图 3和图 4 。 毒素的 S e p h a d e x — G 1 0 0层析 3 ． 4 SDS— PAGE 经 S e p h a d e x—G 1 0 0和聚丙 烯酰胺 Z S P一 1 0柱纯化后的毒素进行 S DS — P AGE， 考马斯兰 图 5 S e p h a d e x纯化 S DS — P AGE 行 M： 分子量标准 ， 行 A： 粗提毒素 ． 行 B： 提纯毒素 1 0天左右即会滋生霉菌， 不能再重复使用。而 Z S P 一 1 0 在 同样的条件下可保存半年。 提纯毒素 经浓缩后注射小 白鼠， 2 4 h后小 白鼠死 亡， 可 以认为两种凝胶色谱柱均保留了外毒素蛋白质 的生物 活性 。 图 6 ZS P 一 1 0纯化 S DS — PAGE 行 M： 分子量标准， 行 A； 粗提毒素 ， 行 B ： 提纯毒素 结论 1

高分子工业材料及生物高分子分析是近年来新兴的课题。凝胶色谱是分离分析高分子组成及鉴定其性能的最好方法。高分子材料中填充各种助剂、乳化剂、分散剂等物的分离，色谱技术也独具特点。 　　①控制高分子产品质量　在生产工艺中，可利用凝胶色谱测定聚合物小分子杂质。如用凝胶色谱测定环氧树脂中未聚合的双酚A，用C18柱分离小分子环氧化合物，小分子聚苯乙烯或不能成膜的聚脂等，用以鉴定聚合物的质量。　　②测定聚合物的分子量分布宽度　分子量大小和分子量分布宽度是衡量聚合物质量的一种重要指标，用凝胶色谱可以测定。　　③高温凝胶色谱测聚合物的老化、降解现象及分级。如测定聚乙烯分子量应为四万左右，通过分析可将分子量1000以下的聚乙烯蜡分开。还可用来观察高密度聚乙烯的氧化过程，观察聚苯乙烯、环氧树脂、聚磺酸脂、尼龙及聚醚聚砜等的降解情况。　　④测定高分子材料的适用性　日常食品的高分子材料包装的很多，如果测定食品中有高分子材料，则说明这种高分子材料不适于做食品和包装。

使用凝胶色谱仪的一些注意事项：　　溶剂准备：使用HPLC纯溶剂，如有必要，进行过滤。保证溶剂的相溶性，避免使用对不锈钢有腐蚀性的溶剂。　　溶剂脱气：超声脱气。　　样品准备：过滤样品，确保样品中不含固体颗粒，用流动相溶解样品。　　色谱柱的保护：　　(1) 防止气体进入色谱柱。凝胶柱是不允许气泡进入的，否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。因此，为了防止气泡进入色谱柱，一定要使用经过脱气的流动相，并且要严格按照下列步骤来安装色谱柱。a.拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝，观察是否有溶剂渗出；b.如有溶剂渗出，即可将色谱柱接到管路上，以避免气泡的进入；c.如无溶剂渗出时，表明色谱柱的此端已经进去空气了，此时，可将色谱柱的出口端接到进样阀上，以流动相来反方向冲洗色谱柱，以便将柱内的空气排除。最好以0.2ml/min的小流量来冲色谱柱，如果溶剂的流速太快或者是压力突然的上升都将会导致柱性能的降低；d.如果流出的溶剂里不含有气泡，说明柱内的气体已经被排出了，再将色谱柱以正确的方向接好，这样气泡就进不到色谱柱里面了。　　(2) 色谱柱的清洗。为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中，在每次的样品分析工作完成之后，都应及时地清洗色谱柱。首先要用对被测样品洗脱能力强的溶剂来洗脱色谱柱，以分析工作中常用的反相色谱分析法为例，因其先流出的物质是极性大的物质，此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来，洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。如果流动相是缓冲溶液，则应先用蒸馏水来冲洗色谱柱，以冲掉柱内的盐，然后再用合适的溶剂来冲洗。　　凝胶滤过色谱法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝胶柱常用缓冲溶液做流动相，用完之后当然要用蒸馏水来冲洗。如果是连续操作，可以将缓冲溶液置于柱内过夜，但最好是维持小流速(＜0.5ml/min)以防止缓冲盐的析出，如果流动相中含有卤化物，即使是停一夜，也必须要用蒸馏水将色谱柱冲洗干净，以防止它们对柱体的腐蚀。　　(3) 色谱柱的存放。如果色谱柱暂时不用，存放时要注意以下几点：a.几天之内的短期放置，凝胶柱则用蒸馏水来冲洗，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。b.如果色谱柱长期不用，仅用上述方法来处理就不行了，这时应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱，凝胶柱则不能用水了，因柱内如果有微生物的生长则会使柱效降低，此时应用0.05%的NaNs水溶液(防腐剂)来冲洗色谱柱，再将色谱柱封严。色谱柱长期放置时，一定要将色谱柱的两端封严，以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象，因这可导致柱效的严重降低。c.色谱柱应贮存在室温下，如果放置于0℃以下的环境里，柱内就会结冰，这也将导致柱效的降低。　　(4)不要高温使用。　　(5)不要高压冲洗柱子　　对仪器的维护和保养进行记录。

[color=#444444]我们现在在分析水溶性样品的凝胶色谱柱（分析聚乙二醇类样品），用得是shodex的为型号OHpak SB-802.5和OHpak SB-803 HQ的凝胶色谱在，我们想自制相当的液相柱，请问可以自制吗？填料和空柱哪能买到呐？[/color]

凝胶色谱的资料又积攒了不少，接力前辈，汇总一下，方便查找。要注意帖子的回复，里面也有宝藏哦~~【原创】凝胶色谱的应用 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20061228/685978/【资料】GPC分析的聚合物可以选择的良溶剂方案 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101214/2999859/【资料】最近凝胶色谱相关的文献资料http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100401/2476606/ 【资料】GPC高级课程培训－柱选择 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110519/3315288/【资料】《凝胶渗透色谱操作手册》北京大学化学院 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101228/3045365/【分享】凝胶色谱的讲义 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101106/2908677/【资料】凝胶色谱柱操作 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101105/2907744/【分享】凝胶色谱仪标准操作规程(SOP) http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101012/2855479/【原创】多功能凝胶色谱仪（GPC）测聚合物分子量分布 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100510/2546330/【资料】凝胶色谱法的基本理论 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100406/2483413/下面是前辈整理的资料：2010.4【资料】凝胶色谱 和 超临界流体色谱 资料汇总http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100411/2493256/2006年【公告】凝胶色谱版的知识点汇总！ http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20061215/669019/

[b]凝胶色谱的应用[/b]：1、[b]分子量的测定[/b]根据凝胶色谱的原理，样品物质在凝胶色谱柱中的洗脱性质与该物质的分子大小有关。因此选用不同的凝胶色谱柱后，能方便地测定物质的分子量。用此法测定分子量时，可以在各种PH值、离子强度和温度条件下进行。所测定的物质可以是天然状态，也可以是变性后的。实际应用中，可先选用一系列已知分子量的标准样品在同一色谱条件下进行色谱分离分析，并以保留体积（或保留时间）对分子量的对数作图，在一定分子量范围内得到一直线（标准曲线），而后根据待测定物在同一条件下的保留体积（或保留时间），从标准曲线上查得/计算出其分子量。目前用本法测定分子量的应用范围非常广泛。[u]高分子物质的分子量及其分布的测定[/u]：特别是近年来，随着各种高分子材料的问世，人们对高分子科学的不断探索，高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要，成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。例如：常见的聚苯乙烯塑料制品，其分子量为十几万，如果聚苯乙烯的分子量低至几千，就不能成型；相反，当分子量大到几百万，甚至几千万，它又难以加工，失去了实用意义。科研和生产上通过控制高聚物的分子量及其分布宽度指数D（D=Mw/Mn）、分子量微分分布曲线、分子量积分分布曲线来生产出性能最佳的高聚物产品。同样，除了快速测定分子量及其分布以外，凝胶渗透色谱还广泛被用于研究高聚物的支化度，共聚物的组成分布及高聚物中微量添加剂的分析等方面。如果配以在线的绝对分子量检测器（如：LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等），凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。[u]蛋白质分子量的测定[/u]：现代蛋白质药物的研究中，凝胶色谱法测定分子量是蛋白质分子量的快速测定方法之一。一般选用标准分子量蛋白质（如：铁蛋白、醛缩酶、牛血清白蛋白、卵清蛋白、胃蛋白酶、核糖核酸酶，这就是一组分子量从300KD到14KD的标准品）。

凝胶色谱法GPC[b]分析原理：[/b]样品通过凝胶柱时，按分子的流体力学体积不同进行分离，大分子先流出[b]谱图的表示方法：[/b]柱后流出物浓度随保留值的变化[b]提供的信息：[/b]高聚物的平均分子量及其分布根据所用凝胶的性质，可以分为使用水溶液的凝胶过滤色谱法(GFC)和使用有机溶剂的凝胶渗透色谱法(GPC)。

凝胶色谱仪的原理?是基于分子筛原理，利用不同分子量的物质在凝胶孔隙中的渗透速度不同来实现分离。具体来说，当样品进入凝胶色谱柱时，较大的分子（体积大于凝胶孔隙）会被排除在粒子的小孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的小孔，通过的速率要慢得多；中等体积的分子可以渗入较大的孔隙中，但受到较小孔隙的排阻，介乎上述两种情况之间。 凝胶色谱仪的工作机制可以进一步解释为：样品通过凝胶柱时，按分子的流体力学体积不同进行分离，大分子先流出，而小分子则会在色谱柱中滞留更长时间，最后流出。这种分离机制使得凝胶色谱仪能够根据分子量差异对各组分进行分离。 此外，凝胶色谱仪的检测系统包括通用型检测器、示差折光仪检测器、紫外吸收检测器、粘度检测器等多种检测器，适用于所有高聚物和有机化合物的检测。 凝胶色谱仪的应用包括水性和油性高分子聚合物的分子量大小及分子量分布检测，以及糖类、醇、脂肪酸、脂类的定性定量分析。

各位朋友们，我的课题是分离检测陈酿红酒中的聚合色素。在色素检测的领域，常规的是HPLC（MS），采用C18反相色谱。但只是对单体花色苷和寡聚花色苷有好的效果。聚合度提升（花色苷，黄酮类物质的互相聚合物）导致色谱分离效果下降，显示出的是一大块不能分开的大峰（hump）。这是现在问题的瓶颈所在。因为聚合色素的分子量一般都在1000以上，所以想试一试凝胶色谱的分子筛效应筛选，但是我之前没有做过分子筛，对之很不熟悉。所以想请各路朋友探讨一下方法的可行性。下面是我针对凝胶色谱的几个疑问，希望有经验的朋友帮我解答：、1，凝胶色谱是一个配备有特殊检测器和别的装置的大型仪器吗？还是只是色谱柱是凝胶色谱柱？如果将HPLC（MS）的色谱柱更换为凝胶色谱柱，是不是就达到了凝胶分离的效果，操作上可不可行？2，因为聚合色素的结构复杂，同分异构体也会很多，我自认将其每个分离纯化出来都是不可能的工作。而且，因为凝胶色谱的分离只能达到将不同水力半径的物质分离的目的所以，其最终的分离效果如何仍然未知，望有经验的朋友指点一二，不胜感激！3，我认为，聚合色素分离的关键在于色谱柱，只有符合聚合色素物理化学特性的色谱柱才能解决分析检测的能力。希望有详细介绍和讲解色谱柱技术的朋友不吝分享一下资源，小弟QQ邮箱为543351984@qq.com，万分感激！

凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要[url=http://baike.baidu.com/view/435064.htm]有机溶剂[/url]，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称[url=http://baike.baidu.com/view/1395520.htm]分子排阻色谱法[/url]。凝胶色谱法主要用于[url=http://baike.baidu.com/view/328669.htm]高聚物[/url]的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物，又可分为凝胶过滤色谱（GFC）和[url=http://baike.baidu.com/view/1966792.htm]凝胶渗透色谱[/url]（GPC）。 GFC一般用于分离水溶性的大分子，如[url=http://baike.baidu.com/view/728282.htm]多糖类[/url]化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。凝胶渗透色谱法主要用于有 机溶剂中可溶的高聚物 ([url=http://baike.baidu.com/view/237319.htm]聚苯乙烯[/url]、聚氯已烯、[url=http://baike.baidu.com/view/11277.htm]聚乙烯[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/591731.htm]聚甲基丙烯酸甲酯[/url]等)相对分子质量分布分析及分离，常用的[url=http://baike.baidu.com/view/65842.htm]凝胶[/url]为交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布，同时根据所用凝胶填料不同，可分离油溶性和水溶 性物质，分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。近年来，凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。化学结构不同但相对分子质量相近的物质，不可能通过凝胶色谱法达到完全的分离纯化的目的。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对勿子质量分布测试。目前已经被[url=http://baike.baidu.com/view/24503.htm]生物化学[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/2461.htm]分子生物学[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/264316.htm]生物工程学[/url]、[url=http://baike.baidu.com/view/2011973.htm]分子免疫学[/url]以及[url=http://baike.baidu.com/view/7490.htm]医学[/url]等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。

水相凝胶色谱与普通凝胶色谱的区别？请高手多多指教，有相关资料更好，谢谢！

使用凝胶色谱仪的一些注意事项：溶剂准备：使用HPLC纯溶剂，如有必要，进行过滤。保证溶剂的相溶性，避免使用对不锈钢有腐蚀性的溶剂。溶剂脱气：超声脱气。样品准备：过滤样品，确保样品中不含固体颗粒，用流动相溶解样品。色谱柱的保护：(1)防止气体进入色谱柱。凝胶柱是不允许气泡进入的，否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。因此，为了防止气泡进入色谱柱，一定要使用经过脱气的流动相，并且要严格按照下列步骤来安装色谱柱：a.拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝，观察是否有溶剂渗出；b.如有溶剂渗出，即可将色谱柱接到管路上，以避免气泡的进入；c.如无溶剂渗出时，表明色谱柱的此端已经进去空气了，此时，可将色谱柱的出口端接到进样阀上，以流动相来反方向冲洗色谱柱，以便将柱内的空气排除。最好以0.2ml/min的小流量来冲色谱柱，如果溶剂的流速太快或者是压力突然的上升都将会导致柱性能的降低；d.如果流出的溶剂里不含有气泡，说明柱内的气体已经被排出了，再将色谱柱以正确的方向接好，这样气泡就进不到色谱柱里面了。(2)色谱柱的清洗。为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中，在每次的样品分析工作完成之后，都应及时地清洗色谱柱。首先要用对被测样品洗脱能力强的溶剂来洗脱色谱柱，以分析工作中常用的反相色谱分析法为例，因其先流出的物质是极性大的物质，此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来，洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。如果流动相是缓冲溶液，则应先用蒸馏水来冲洗色谱柱，以冲掉柱内的盐，然后再用合适的溶剂来冲洗。凝胶滤过色谱法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝胶柱常用缓冲溶液做流动相，用完之后当然要用蒸馏水来冲洗。如果是连续操作，可以将缓冲溶液置于柱内过夜，但最好是维持小流速(＜0.5ml/min)以防止缓冲盐的析出，如果流动相中含有卤化物，即使是停一夜，也必须要用蒸馏水将色谱柱冲洗干净，以防止它们对柱体的腐蚀。(3)色谱柱的存放。如果色谱柱暂时不用，存放时要注意以下几点：a.几天之内的短期放置，凝胶柱则用蒸馏水来冲洗，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。b.如果色谱柱长期不用，仅用上述方法来处理就不行了，这时应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱，凝胶柱则不能用水了，因柱内如果有微生物的生长则会使柱效降低，此时应用0.05%的NaNs水溶液(防腐剂)来冲洗色谱柱，再将色谱柱封严。色谱柱长期放置时，一定要将色谱柱的两端封严，以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象，因这可导致柱效的严重降低。c.色谱柱应贮存在室温下，如果放置于0℃以下的环境里，柱内就会结冰，这也将导致柱效的降低。(4)不要高温使用。(5)不要高压冲洗柱子对仪器的维护和保养进行记录。来源：互联网

请教本人想用凝胶色谱法分析褐藻胶（褐藻酸钠）的分子量，据说褐藻胶对凝胶柱损伤大，做十几个样品柱子基本就废了，是这样吗？请高人指点！

(1)异常峰形在进行凝胶色谱实验的时候经常会碰到一些峰形异常情况，这些异常峰形究竟如何引起，如何解决这些峰形异常情况并使实验顺利进行，是摆在每个实验者面前的一个问题。通过多年的实验积累，我们掌握了一些关于这些异常峰形出现的规律，找到了一些解决方法，并汇总理论上 ， 凝胶色谱实验中的样品在填料上是完全没有保 留的， 可实际上样品和填料之间可能会存在一些相互作用 ， 这就要求我们在使用不同凝胶色谱柱时不仅要注意流动相的应用范围， 还要注意填料对样 品的吸附。一旦填料对样品有吸附， 就超出了凝胶色谱的分离机理的范畴。 一般的凝胶色谱冲洗的方法： 所有凝胶色谱柱的清洗方法是将凝胶色谱柱的进口和出口反接， 用与分析时相同的流动相 以试验流速的 8 0 ％的流量进行冲洗。这个方法可 以将一部分吸附在柱子里 的杂质 冲洗掉， 但不能保证百分之百的冲洗干净。 对流动相的要求 采用有机相做流动相时， 要求最好使用分析纯的有机试剂， 一般情况下用 0.22um的过滤器过滤一下就可 以。对于水相 GP C， 要求使用二次重蒸水 ，0.22um的滤膜过滤。

我想请教下,凝胶色谱柱是怎么分类的,具体都是分析什么样品.填料一般都是什么样的,我分析生物样品用什么的比较好.求高手指点.

[B][center]凝胶渗透色谱（GPC/SEC）技术（一） [/center][/B] 一、 凝胶渗透色谱的概述 1. 凝胶渗透色谱的简单回顾凝胶渗透色谱[GPC（Gel Permeation Chromatography）][也称作体积排斥色谱(Size Exclusion Chromatography)]是三十年前才发展起来的一种新型液相色谱，是色谱中较新的分离技术之一。利用多孔性物质按分子体积大小进行分离，在六十年前就已有报道。Mc Bain用人造沸石成功地分离了气体和低分子量的有机化合物，1953年Wheaton和Bauman用离子交换树脂按分子量大小分离了苷、多元醇和其它非离子物质。1959年Porath和Flodin用交联的缩聚葡糖制成凝胶来分离水溶液中不同分子量的样品。而对于有机溶剂体系的凝胶渗透色谱来说，首先需要解决的是制备出适用于有机溶剂的凝胶。二十世纪60年代J.C.Moore在总结了前人经验的基础上，结合大网状结构离子交换树脂制备的经验，将高交联度聚苯乙烯凝胶用作柱填料，同时配以连续式高灵敏度的示差折光仪，制成了快速且自动化的高聚物分子量及分子量分布的测定仪，从而创立了液相色谱中的凝胶渗透色谱技术。2. 凝胶渗透色谱的应用三十多年来，凝胶渗透色谱的理论、实验技术和仪器的性能等方面有了突飞猛进的发展。尤其是随着新型柱填料的诞生、高效填充柱的出现(目前其理论塔板数已超过10000/米)以及计算机的普及，凝胶渗透色谱在工业、农业、医药、卫生、国防、宇航以及日常生活的各个领域得到了广泛的应用。特别是近年来，随着各种高分子材料的问世，人们对高分子科学的不断探索，高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要，成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。例如：常见的聚苯乙烯塑料制品，其分子量为十几万，如果聚苯乙烯的分子量低至几千，就不能成型；相反，当分子量大到几百万，甚至几千万，它又难以加工，失去了实用意义。科研和生产上通过控制高聚物的分子量及其分布宽度指数D(D=Mw/Mn)、分子量微分分布曲线、分子量积分分布曲线来生产出性能最佳的高聚物产品。另外，除了快速测定分子量及其分布以外，凝胶渗透色谱还广泛用于研究高聚物的支化度，共聚物的组成分布及高聚物中微量添加剂的分析等方面。如果配以在线的绝对分子量检测器（如：LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等），凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。凝胶渗透色谱作为一门新兴的科学，随着各种新型检测器的出现（如UV、FT-IR、LS、Viscometer等），它的应用范围也逐步从生物化学、高分子化学、无机化学等向其它领域渗透，成为化学领域内必不可少的分析手段。

我有一台安捷伦LC-10AT液相色谱带紫外检测器，现在是用C18柱，想买一根凝胶色谱柱用来分析多聚物，不知能否用这个紫外检测器分析。若能，请问用什么流动相，是不是按分子量从大到小出峰。若不能，请说明原因。

我有一台安捷伦LC-10AT液相色谱带紫外检测器，现在是用C18柱，想买一根凝胶色谱柱用来分析多聚物，不知能否用这个紫外检测器分析。若能，请问用什么流动相，是不是按分子量从大到小出峰。若不能，请说明原因。

[color=#444444]目前正在实验室做课题需要用到凝胶色谱，请教大家，测酪蛋白溶液(里面还含有一些乳化剂)溶剂是纯水，凝胶色谱要用得流动相和柱子分别是什么？[/color]

我们在GPC凝胶色谱数据工作站分析肝素纳遇到点问题，如何在色谱峰分割按面积算？

我先把本板快的知识与大家的问题归归类，大家看看那些是需要留住让后来人看看学习的。大家认为没有必要留驻的帖子（连接），用站内短消息与我联系。[b]另外如果大家发现有我整理的内容里有任何问题，都可以用站内短消息与我联系。另外如果大家对凝胶色谱版块的建设有任何建议或意见可以发新帖或跟帖[/b][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060912/552188/]真希望凝胶版可以旺起来！[/url][b]我都会根据情况给予一定的奖励。[/b]谢谢大家！！[b]整理一下本板块的知识点：[/b]如何学习凝胶色谱啊？[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20050228/129987/[/url]凝胶色谱技术：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20031110/18764/[/url]凝胶层析法技术简介：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060421/401834/[/url]凝胶层析的知识（基本原理，凝胶类型与选择，凝胶的处理）：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20070110/704521/[/url]《色谱法》电子书：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20050105/114592/[/url]《仪器分析》课件--色谱法：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20040508/46902/[/url]色谱中的一些符号：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20040107/24878/[/url]色谱术语：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20041012/84241/[/url]凝胶色谱（电子书）：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060416/396030/[/url]凝胶色谱手册（英文著作，515页）：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20051220/305998/[/url]凝胶色谱的讲义第一章（1）：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20051102/265886/[/url]凝胶色谱（GPC）电子教材：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20041220/109533/[/url]GPC操作规程：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060328/376128/[/url]凝胶色谱仪检定方法：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20050928/245321/[/url]GPC是指凝胶色谱仪?[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060919/560251/[/url]高温GPC：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20060605/448959/[/url]GPC软件-现场培训教材：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20061120/634044/[/url]需要介绍GPC组成方面的资料：[url]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20061106/617390/[/url][em61]

一、 凝胶渗透色谱的概述 1. 凝胶渗透色谱的简单回顾凝胶渗透色谱[GPC（Gel Permeation Chromatography）][也称作体积排斥色谱(Size Exclusion Chromatography)]是三十年前才发展起来的一种新型液相色谱，是色谱中较新的分离技术之一。利用多孔性物质按分子体积大小进行分离，在六十年前就已有报道。Mc Bain用人造沸石成功地分离了气体和低分子量的有机化合物，1953年Wheaton和Bauman用离子交换树脂按分子量大小分离了苷、多元醇和其它非离子物质。1959年Porath和Flodin用交联的缩聚葡糖制成凝胶来分离水溶液中不同分子量的样品。而对于有机溶剂体系的凝胶渗透色谱来说，首先需要解决的是制备出适用于有机溶剂的凝胶。二十世纪60年代J.C.Moore在总结了前人经验的基础上，结合大网状结构离子交换树脂制备的经验，将高交联度聚苯乙烯凝胶用作柱填料，同时配以连续式高灵敏度的示差折光仪，制成了快速且自动化的高聚物分子量及分子量分布的测定仪，从而创立了液相色谱中的凝胶渗透色谱技术。2. 凝胶渗透色谱的应用三十多年来，凝胶渗透色谱的理论、实验技术和仪器的性能等方面有了突飞猛进的发展。尤其是随着新型柱填料的诞生、高效填充柱的出现(目前其理论塔板数已超过10000/米)以及计算机的普及，凝胶渗透色谱在工业、农业、医药、卫生、国防、宇航以及日常生活的各个领域得到了广泛的应用。特别是近年来，随着各种高分子材料的问世，人们对高分子科学的不断探索，高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要，成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。例如：常见的聚苯乙烯塑料制品，其分子量为十几万，如果聚苯乙烯的分子量低至几千，就不能成型；相反，当分子量大到几百万，甚至几千万，它又难以加工，失去了实用意义。科研和生产上通过控制高聚物的分子量及其分布宽度指数D(D=Mw/Mn)、分子量微分分布曲线、分子量积分分布曲线来生产出性能最佳的高聚物产品。另外，除了快速测定分子量及其分布以外，凝胶渗透色谱还广泛用于研究高聚物的支化度，共聚物的组成分布及高聚物中微量添加剂的分析等方面。如果配以在线的绝对分子量检测器（如：LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等），凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。凝胶渗透色谱作为一门新兴的科学，随着各种新型检测器的出现（如UV、FT-IR、LS、Viscometer等），它的应用范围也逐步从生物化学、高分子化学、无机化学等向其它领域渗透，成为化学领域内必不可少的分析手段。

耗材配件栏目，想在液相色谱柱的分类里，添加凝胶色谱柱，现做以下调查，请大家多多支持，多多关注。耗材配件：http://www.instrument.com.cn/Consumables/ 液相色谱柱：http://www.instrument.com.cn/Consumables/P1903.htm1、是否希望增加凝胶色谱柱的分类，是否方便查找？2 、对液相色谱柱的分类，有何建议？3、市面的凝胶色谱柱，现在都有哪些厂家？4、各家都有什么主推的特点？5、。。。。。。

[color=#454545]我们在GPC凝胶色谱数据工作站分析肝素纳遇到点问题，如何在色谱峰分割按面积算？[/color]

凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography、GPC)) 　 http://chemlab.gzhu.edu.cn/gzhugfz/fenxishouduan/4.jpg　1964年，由J.C.Moore首先研究成功。不仅可用于小分子物质的分离和鉴定，而且可以用来分析化学性质相同分子体积不同的高分子同系物。(聚合物在分离柱上按分子流体力学体积大小被分离开）　1.基本原理1.1.分离原理：让被测量的高聚物溶液通过一根内装不同孔径的色谱柱，柱中可供分子通行的路径有粒子间的间隙（较大）和粒子内的通孔（较小）。当聚合物溶液流经色谱柱时，较大的分子被排除在粒子的小孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的小孔，通过的速率要慢得多。经过一定长度的色谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面（即淋洗时间短），相对分子质量小的在后面（即淋洗时间长）。自试样进柱到被淋洗出来，所接受到的淋出液总体积称为该试样的淋出体积。 当仪器和实验条件确定后，溶质的淋出体积与其分子量有关，分子量愈大，其淋出体积愈小。（1） 体积排除 （2） 限性扩散 （3） 流动分离 1.2.校正原理：用已知相对分子质量的单分散标准聚合物预先做一条淋洗体积或淋洗时间和相对分子质量对应关系曲线，该线称为“校正曲线”。聚合物中几乎找不到单分散的标准样，一般用窄分布的试样代替。在相同的测试条件下，做一系列的GPC标准谱图，对应不同相对分子质量样品的保留时间，以lgM对t作图，所得曲线即为“校正曲线”。通过校正曲线，就能从GPC谱图上计算各种所需相对分子质量与相对分子质量分布的信息。聚合物中能够制得标准样的聚合物种类并不多，没有标准样的聚合物就不可能有校正曲线，使用GPC方法也不可能得到聚合物的相对分子质量和相对分子质量分布。对于这种可以使用普适校正原理。1.2.1.普适校正原理:由于GPC对聚合物的分离是基于分子流体力学体积，即对于相同的分子流体力学体积，在同一个保留时间流出，即流体力学体积相同。两种柔性链的流体力学体积相同： 1M1=2M2k1M1α1+1=k1M2α2+1　两边取对数：lgk1+(α1+1)lgM1=lgk2+(α2+1)lgM2即如果已知标准样和被测高聚物的k、α值，就可以由已知相对分子质量的标准样品M1标定待测样品的相对分子质量M2。　2.实验部分直接法：在测定淋出液浓度的同时测定其粘度或光散射，从而求出其分子量。间接法：用一组分子量不等的、单分散的试样为标准样品，分别测定它们的淋出体积和分子量，则可确定二者之间的关系。2.1.仪器：GPC仪的组成：泵系统、（自动）进样系统、凝胶色谱柱、检测系统和数据采集与处理系统。1.1.泵系统：包括一个溶剂储存器、一套脱气装置和一个高压泵。它的工作是使流动相（溶剂）以恒定的流速流入色谱柱。泵的工作状况好坏直接影响着最终数据的准确性。越是精密的仪器，要求泵的工作状态越稳定。要求流量的误差应该低于0.01mL/min。 2.1.2.色谱柱：GPC仪分离的核心部件。是在一根不锈钢空心细管中加入孔径不同的微粒作为填料。每根色谱柱都有一定的相对分子质量分离范围和渗透极限，色谱柱有使用的上限和下限。色谱柱的使用上限是当聚合物最小的分子的尺寸比色谱柱中最大的凝胶的尺寸还大，这时高聚物进入不了凝胶颗粒孔径，全部从凝胶颗粒外部流过，这就没有达到分离不同相对分子质量的高聚物的目的。而且还有堵塞凝胶孔的可能，影响色谱柱的分离效果，降低其使用寿命。色谱柱的使用下限就是当聚合物中最大尺寸的分子链比凝胶孔的最小孔径还要小，这时也没有达到分离不同相对分子质量的目的。所以在使用凝胶色谱仪测定相对分子质量时，必须首先选择好与聚合物相对分子质量范围相配的色谱柱。2.1.3.填料（根据所使用的溶剂选择填料，对填料最基本的要求是填料不能被溶剂溶解）：交联聚苯乙烯凝胶（适用于有机溶剂，可耐高温）、交联聚乙酸乙烯酯凝胶（最高100℃，适用于乙醇、丙酮一类极性溶剂）多孔硅球（适用于水和有机溶剂）、多孔玻璃、多孔氧化铝（适用于水和有机溶剂) 2.1.4.柱子：玻璃、不锈钢2.1.5.检测系统：通用型检测器：适用于所有高聚物和有机化合物的检测。有示差折光仪检测器、紫外吸收检测器、粘度检测器。2.1.6.示差折光仪检测器：溶剂的折光指数与被测样品的折光指数有尽可能大的区别。2.1.7.紫外吸收检测器：在溶质的特征吸波长附近溶剂没有强烈的吸收。2.1.8.选择型检测器：适用于对该检测器有特殊响应的高聚物和有机化合物。有紫外、红外、荧光、电导检测器等。2.2.操作：2.2.1.溶剂的选择： 能溶解多种聚合物；不能腐蚀仪器部件；与检测器相匹配。2.2.2.把激光光散射与凝胶色谱仪联用，在得到浓度谱图的同时，还可得到散射光强对淋出体积的谱图，从而计算出分子量分布曲线和整个试样的各种平均分子量2.2.3.激光光散射实验中必须对样品严格除尘，溶液中的灰尘会产生强烈的光散射，严重干扰聚合物溶液光散射的测量。溶液除尘是光散射成败的关键。首先是溶剂除尘，配置测试样品的溶剂应进行精馏，并经过0.2μm超滤膜过滤后方可使用。配好的溶液也要用0.2μm的超滤膜过滤。另外，测试中所用的器械，如：注射器等，使用前要用洗液浸泡，清水强力冲洗

5009.19第一法做有机氯净化是用凝胶色谱净化，我们没有全自动凝胶渗透色谱系统，选择手动的话问题就来了，Bio-Beads S-X3聚苯乙烯凝胶100g大概三千块钱，按标准要求装一个要多少克凝胶？装的凝胶色谱柱过完一个样还可以继续过另外的样品吗？自己装的凝胶色谱柱可以用多久？麻烦做过的前辈给点指导····