三溴化磷检测

点评 | 朱锦芳（NIH）2022年5月23日，上海交通大学基础医学院生化与分子细胞生物学系童雪梅教授课题组及其合作团队，上海市免疫学研究所李斌研究员课题组和复旦大学附属华山医院/脑科学转化研究院杨辉研究员，在Nature Metabolism杂志在线发表题为 Non-oxidative pentose phosphate pathway controls regulatory T cell function by integrating metabolism and epigenetics 的研究论文，揭示非氧化磷酸戊糖途径（非氧化PPP）对调节性T（Treg）细胞代谢模式及细胞功能的调控机制。Nature Metabolism同期发表伦敦帝国理工学院Margarita Dominguez-Villar博士为该研究撰写的News & Views特评，认为该文章发现非氧化PPP在Treg细胞活化和功能调控中的中心地位（a central regulator）。表达特征转录因子Foxp3的Treg细胞是一类具有免疫抑制功能的CD4+ T细胞亚群，维持机体免疫系统稳态，防止免疫过激诱发自身免疫病。已知葡萄糖酵解、脂肪酸氧化和氨基酸分解代谢等都参与 Treg 细胞功能调控。PPP是一条不产生ATP的葡萄糖分解代谢途径，由生成NADPH的氧化PPP和产生5-磷酸核糖的非氧化PPP组成。非氧化PPP包括4个代谢酶催化的5步可逆反应，可以通过改变代谢物流向来满足细胞的功能需求。非氧化PPP是否参与免疫细胞如Treg细胞的代谢与功能调控尚不清楚。转酮醇酶TKT是非氧化PPP中催化两步可逆反应的代谢酶。童雪梅团队已发现TKT在肝脏、脂肪和肠道中调控糖脂代谢平衡的重要作用（Li M et al, Cancer Research, 2019 Tian N et al, Diabetes, 2020 Tian N et al, Cell Death & Disease, 2021）。在本研究中，研究人员通过构建Treg细胞特异性敲除TKT的小鼠模型，深入探究非氧化PPP是否和如何调控Treg细胞代谢及功能。他们研究发现，Treg细胞特异性敲除TKT的小鼠出生3周后发生严重自身免疫性疾病，并且在断奶之后相继死亡，其表型与缺失Foxp3基因的小鼠相似。进一步研究发现，敲除TKT在不影响Treg数目和转录因子Foxp3 水平的情况下，阻断Treg细胞的免疫抑制功能。为了排除炎症反应的影响，研究者根据Foxp3基因位于X染色体和雌鼠X染色体选择性失活的特点，构建了在同一只鼠中既有TKT缺失又有TKT正常表达的Treg细胞嵌合小鼠模型。该小鼠Treg细胞的转录组和表观遗传组分析表明，TKT缺失导致Treg细胞中87.9%的差异表达基因被下调，染色质可及性降低。这些被下调的基因几乎全部为效应性Treg特征性基因，表明非氧化PPP对调控Treg细胞免疫抑制功能是必需的。研究者进一步发现，TKT缺失导致Treg 细胞NADPH 减少和氧化应激增加，葡萄糖进入线粒体氧化减少，脂肪酸氧化增加，氨基酸分解代谢显著增强，分解代谢重构使线粒体功能受损。同时，被氧化应激和线粒体损伤诱发的还原性TCA循环使α-酮戊二酸/琥珀酸及α-酮戊二酸/富马酸比率降低，DNA甲基化增加，抑制Treg细胞特征性功能基因表达，导致其免疫抑制性功能丧失。文章也发现非氧化PPP中的另外一个代谢酶——转醛醇酶（TAL），对维持效应性Treg特征性功能基因表达也不可或缺。此外，在自身免疫性病人外周血 Treg细胞中，TKT水平显著降低。综上所述，此研究首次揭示非氧化PPP对于调控Treg细胞中糖、脂和蛋白质分解代谢稳态、维持代谢物依赖的表观遗传修饰和功能基因表达有关键作用，即非氧化PPP可以通过整合三大营养物质代谢和表观遗传修饰控制Treg细胞功能。这项研究将为通过调控Treg功能防治自身免疫性疾病和其它免疫相关疾病提供新策略新手段。非氧化 PPP 通过整合代谢组和表观遗传组调控Treg细胞功能上海交通大学医学院博士生刘琪、阿拉巴马大学伯明翰分校博士生朱方明和上海市免疫学研究所博士生刘鑫男是该研究论文的共同第一作者。此项研究得到复旦大学生物医学研究院叶丹研究员、海军军医大学附属长征医院风湿免疫科徐沪济主任、上海交通大学附属仁济医院沈南主任、上海交通大学基础医学院徐天乐教授、清华大学药学院胡泽平研究员、阿拉巴马大学伯明翰分校胡晖教授等合作实验室的大力协助。通讯作者为童雪梅教授、李斌研究员和杨辉研究员。专家点评朱锦芳Jeff Zhu (Chief, Molecular and Cellular Immunoregulation Section, NIH)调节性T细胞（Tregs）在维持免疫耐受和免疫稳态中发挥关键作用，并且参与调节感染和癌症中的各种免疫反应。一方面，Treg功能的丧失通常与自身免疫和过度炎症有关；另一方面，肿瘤微环境中激活的Treg往往会抑制肿瘤免疫。因此，了解Treg的产生、激活及其获得抑制性功能的机制不仅将拓展基础免疫学认知，而且将为各种免疫相关疾病提供新颖有效的临床疗法。不同的代谢途径在控制Treg和效应性辅助型CD4+ T（Th）细胞的发育和分化中作用不同。经典观点认为，Tregs更倾向于脂肪酸氧化，而效应Th细胞主要利用葡萄糖作为能量来源。在本项工作中，童雪梅团队及其合作实验室共同发现，非氧化磷酸戊糖途径（非氧化PPP）在控制Treg细胞激活和抑制功能中起着关键作用。非氧化PPP是葡萄糖分解代谢的一个分支，它在Treg和效应性Th细胞中的功能尚不清楚。令人惊奇的是，在Treg中敲除非氧化性PPP中的重要酶—转酮醇酶（TKT），小鼠会产生致死性自身免疫病。Treg细胞特异性 TKT 缺失导致其失去免疫抑制功能，却不影响其发育和Foxp3蛋白表达。机制上，童雪梅及其合作团队发现TKT缺失诱导线粒体氧化应激和还原性TCA循环，导致α-酮戊二酸（α-KG）水平降低。α-KG作为重要的表观遗传辅助因子，能调控组蛋白和DNA去甲基化酶的功能。TKT缺失时，Treg中众多基因的DNA甲基化增加，染色质可及性下降。并且，α-KG补充能够改善由Treg特异性TKT 缺失引起的自身免疫反应。此外，在临床自身免疫性疾病患者外周血Treg中，TKT水平被下调。Treg获得抑制功能需要被激活，TKT缺失诱发的自身免疫反应是由活化Treg特征性基因表达减少所导致的。由于Treg细胞群体的异质性，单细胞分析可以为TKT如何调节Treg激活和表观修饰提供一个更清晰的解释。然而，该研究发现在大约1000个激活态Treg特征基因中，只有124个受到TKT缺失的影响，却诱发了显著的小鼠自身免疫病表型，表明这个小的基因群体包含对Treg功能至关重要的效应分子，例如IL-10和TIGIT等。因此，本项研究发现令人印象非常深刻。本项工作不仅促进我们全面认识Treg细胞激活和功能的机理，而且在未来治疗人类疾病方面具有潜在重要转化价值。原文和特评链接：https://www.nature.com/articles/s42255-022-00575-z，https://www.nature.com/articles/s42255-022-00574-0

p style=" text-indent: 2em text-align: justify margin-top: 10px " 青岛普瑞邦生物工程有限公司一直是以耗材供应商的身份被广大用户所熟知，为用户提供了很多关于毒素标准品和免疫亲和柱的检测方案，并获得了用户的认可。2018年，普瑞邦推出多款针对食品安全的前处理仪器，包括配置仪、均质器、免疫亲和柱操作仪，柱后衍生系统等，从耗材供应商转变为仪器供应商。 /p p style=" text-indent: 2em text-align: justify margin-top: 10px " 在中国仪器发展年会期间，仪器信息网编辑在青岛普瑞邦展位前采访到青岛普瑞邦生物工程有限公司研发工程师于华林先生，详细内容请点击视频观看： /p script src=" https://p.bokecc.com/player?vid=86742B73DF3E9D9F9C33DC5901307461& siteid=D9180EE599D5BD46& autoStart=false& width=600& height=490& playerid=5B1BAFA93D12E3DE& playertype=2" type=" text/javascript" /script p style=" text-indent: 2em text-align: justify margin-top: 10px " 于华林先生表示，在十多年为客户服务的过程中，普瑞邦深刻体会到毒素行业检测人员的不易，特别是在前处理方面。为了解决用户前处理中的问题，普瑞邦与多所院校的老师，以及实验室的专家合作，耕耘数年，终于在2018年，推出了多款针对食品安全前处理的仪器。 /p p style=" text-indent: 2em text-align: justify margin-top: 10px " 于华林先生还为编辑介绍了普瑞邦的几款前处理产品，包括可以实现自动均质，保证标准曲线的自动均质仪；全封闭的免疫亲和柱操作仪，可以基本上做到毒素行业的人员与毒素的零接触；集合了光衍生和化学衍生系统的多功能衍生仪，实现两种系统自动切换，还可以搭配任何一款液相色谱。 /p p style=" text-indent: 2em text-align: justify margin-top: 10px " 于华林先生还表示，2019年普瑞邦会专注于前处理仪器的探索，相信在与广大用户的接触中，会不断完善产品。不断努力服务于食品行业、饲料行业、农业行业的广大用户，尽量减少他们前处理工作的时间，以自动化仪器代替手工，让检测人员轻松愉快地进行检测工作。 /p p br/ /p

一件贵重的珠宝玉器，需要一张真实的鉴定证书，才能确保收藏价值。然而，广东省广州市华林玉器市场内的一些珠宝玉器鉴定检测机构，在未取得计量认证的情况下出具虚假检测报告，严重破坏了第三方检测机构的公正性。近日，针对这种乱象，广州市荔湾区质监局开展专项整治行动，立案查处了7家无计量认证的珠宝玉器鉴定检测机构。 　　广州市华林玉器市场已有400多年历史，5个大型馆区加上6条步行街，集聚了4000多家珠宝玉器批发和零售商户，占广州玉器交易总量的9成以上，庞大的规模使其成为国内最大的珠宝玉器市场，在全国和海外市场都具有一定的影响力。 　　据了解，荔湾区质监局在接到一宗投诉后发现，一位消费者在华林玉器市场购买的1副手镯，经市场内的一家名为&ldquo 中检质技(北京)金银珠宝质量检验中心广州荔湾第二分中心&rdquo (以下简称中检质技第二分中心)鉴定为&ldquo A货&rdquo ，但该消费者又经另一有资质的权威部门鉴定却被认定为&ldquo B货&rdquo 。这一线索引起荔湾区质监局高度重视。 　　经执法人员调查发现，随着广州华林玉器市场规模和交易量的不断扩大，珠宝玉器检测机构进入该市场的越来越多，一件价格数十万元的玉器，检测费用仅数十元，严重违背市场检测价格。执法人员在调查中还发现，按照规定，珠宝玉石鉴定证书必须与实物是一一对应，即一件珠宝玉石只能对应一张鉴定证书，而且证书上必须有该件货品的图片及重量，然而，有些鉴定机构为商家出具的证书，多款翡翠却使用同一证书。而中检质技第二分中心竟然在没有取得计量认证证书的情况下，在华林市场开展了检测业务已经3个多月。 　　为此，荔湾区质监局对整个华林玉器市场及周边的鉴定检测机构进行排查。一方面以中检质技第二分中心案件查处为突破口，经过排查和梳理，初步掌握华林玉器市场现有珠宝玉器检测机构12家，涉及分支机构15个 另一方面，通过长达2个月的明察暗访，从市场各家档口查起，从每家摆卖的珠宝玉器出具的珠宝玉石鉴定证书入手，倒查其源头，发现未取得计量认证证书的机构有7家。 　　记者在荔湾区质监局了解到，被查获的7家未取得计量认证证书的鉴定检测机构中，基本都是冠以国字号的外来机构，大多数以分支机构(办事处)名义开展业务。为逃避查处，在执法过程中，这些鉴定检测机构以各种理由拒绝检查，拖延了进场时间，大量的票据、账簿从电脑中被清除。荔湾区质监局通过调查消费者、员工、收货单位、调取缴税发票等手段，锁定了这7家无证鉴定检测机构的违法事实。 　　目前，荔湾区质监局通过专项整治，向鉴定检测机构、市场管理方通报了华林玉器市场出现检测机构低价竞争、鱼龙混杂的问题，检测机构出具检验报告更加慎重，实物检定报告明显减少，行业之间的相互监督行为多了，经营方、市场管理方、监管方三方合力规范珠宝玉器市场鉴定检测机构的机制正在初步形成。