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纯化平台
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纯化平台相关的方案
自动化液质联用样品前处理:通过安捷伦 AssayMAP Bravo 平台实现高通量溶液内酶解和多肽纯化
适用于液质联用 (LC/MS) 分析的蛋白质和多肽样品前处理的工作流程由于依赖于连续的手工操作而效率低下,导致试验方案缺乏通量、可扩展性和可转移性。这类工作流程通常依赖于技能非常娴熟的从业人员以达到可接受的重现性,或者在很多情况下,鉴于工作流程的特殊性,较大的差异是可被勉强接受的。为解决这些问题,可以采用安捷伦 AssayMAP Bravo 平台及其蛋白质组学工具套件实现 LC/MS 蛋白质组学工作流程常规样品处理工作的自动化,使 LC/MS 样品前处理具有可重现性、可扩展性、方案可移植性和易用性。本平台由顶级的液体处理器、一次性微量色谱柱和简单的用户可定制方案组成,可高通量地进行蛋白质酶解和多肽纯化。BSA 经酶解后纯化所得的分析性能数据表明 25 种 BSA 目标多肽的日间重现性良好, % CV 小于 5% 此外,我们还展示了用于多肽纯化的 AssayMAP RP-S 和 C18 反相柱的所有特性。
分析仪器在引物探针的纯化制备分离
分析级制备纯化 行业特点:大多数单次制备纯化量较少,可采用分析级纯化方案 半制备级纯化平台 适合大制备量核苷酸纯化,单次制备量可达200~2000 OD QC质检 HTCS核酸质谱检测系统(基于LTQ系列质谱) DEL-核酸质谱检测系统(基于LTQ质谱) 基因扩增 Realtime PCR----荧光定量PCR仪 核酸药物高端研究 Thermo LTQ-Orbitrap XL高分辨质谱系统
固相合成胸腺五肽的分离纯化与鉴定
目的建立胸腺五肽分离纯化、分析鉴定方法,有效提高胸腺五肽含量。方法将标准Fmoc方法固相合成的胸腺五肽以Sephadex G225凝胶柱使粗肽脱盐,以循环制备液相色谱仪进行粗肽纯化,以质谱法进行分子质量的鉴定。结果该法得到胸腺五肽的纯度为99102% ,分子质量测定值与理论值相符。结论建立了高效、简便的胸腺五肽分离纯化方法,为工业化生产提供了实验依据。
自动化液质联用工作流程:采用 AssayMAP 技术进行溶液内蛋白酶解、肽段纯化以及肽段的强阳离子交换分馏
液质联用鉴定肽段的样品制备,通常由多步骤工作流程组成,包括溶液内蛋白酶解、肽段纯化,以及肽段分馏。该过程通常需要根据样品特性及分析目的( 即定量或表征)定制为具体的应用方法。样品制备工作流程的自动化可提高样品处理能力、降低差异性,并且无需熟练操作人员执行重复工作。然而,自动化平台通常并不用于最初的分析开发,这是因为分析开发者很少具有开发复杂自动化方案的经验。相反,分析通常是采用湿式工作台相关技术进行开发,然后在自动化专家的帮助下移植到自动化平台。采用 AssayMAP 肽段样品制备解决方案,无需掌握专门的技术也能实现自动化操作。开发者可通过一个简单的软件用户界面和灵活的实验方案对关键实验变量进行完全控制,从而能够专注于科学分析研究。如今,分析开发者、科学家或技术员无需具备自动化专业知识也能实现可扩展、精确的自动化操作。采用 AssayMAP 平台,整个工作流程可直接在相同的硬件上进行开发,如需实现高通量样品前处理,也易于对硬件进行扩展,从而可减少或避免已有实验方案实现自动化所需的额外时间和资源。本文将介绍发现(鸟枪法)蛋白组学研究的一种常规液质联用工作流程,包括溶液内酶解、反相肽段纯化,以及肽段的强阳离子交换分馏 (SCX),所有这些操作均由 AssayMap Bravo 液体处理器完成。采用 SCX 小柱通过增加 pH 或离子强度对大肠杆菌蛋白裂解液进行逐步洗脱,在六个 SCX 馏分中鉴定出 15000 多条特定肽段序列,其中 64-67% 的肽段可专属性地在其中一个馏分中得到鉴定。
肽-类肽杂交体的反相快速色谱纯化
肽-类肽杂交体或“肽聚体”是寡聚合成的聚合物,其中一个或多个氨基酸被类肽亚单体取代。其关键结构特征是氨基酸的侧链从α -碳重排到肽键的相邻氮原子(参见图1)。通常,这类物质表现出与亲本肽相似的理化特性。肽-类肽杂交体的纯化可以通过具有出色回收率和分辨率的反相色谱法获得。通常,优化肽和类似化合物混合物的分离,最好是考虑调整参数,比如上样量和固定相的粒径。本应用将讲述,使用Teledyne ISCO的RediSep® C18反相色谱柱作为固定相,从肽副产物中分离出肽聚体。
Opentrons 核酸提取纯化工作站
Opentrons 核酸提取纯化工作站基于全自动磁珠提取原理,能够自动化进行核酸分离和纯化工作流程,单次最多可处理24 个样本。核酸提取工作站包括 OT-2 自动化移液平台、高精度移液器、磁珠纯化模块、热振荡仪(选配)、温控模块、 Opentrons 核酸提取应用协议和 Opentrons 专用吸头耗材。
风干武昌鱼中鲜味肽的分离纯化及二级结构分析
本实验采用电子舌测定鲜味,以及超纳滤、RP-HPLC从风干武昌鱼中分离纯化出纯度均一的鲜味肽,MALDI-TOF-MS、 氨基酸自动分析仪、 FTIR测定鲜味肽的分子质量、 氨基酸组成和二级结构, 探讨鲜味肽结构与风味的关系, 以为风干武昌鱼的标准化生产提供科学指导。
美国Amerlab亚沸酸纯化器的性能实测报告【附实验原始数据】
1)采用美国艾默莱Amerlab的亚沸酸纯化器,在第1次投入使用的情况下,纯化效果上丝毫不比使用很久的其他品牌逊色,杂质含量接近于超纯水。随着持续使用,AP100 plus自身会更加洁净,纯化后酸的杂质含量会更加低。2)在保证了纯化效果的基础上,AP100 plus的纯化速度惊人,是其他品牌的两倍。如果将纯化温度从105℃提高到115℃(仍然是亚沸状态),AP100 plus的纯化速度还能再提升40%,达到70ml/hr。
非对映异构体的分离纯化
在本应用案例中,样品来自某新药研发公司的合成实验室,为合成过程中得到的一对非对映异构体。常规的正相分离无法达到纯化目的,反相高压制备则由于其上样量限制和成本问题也不适合。因此,三泰科技的应用工程师尝试利用快速制备液相色谱仪SepaBean machine T配合SepaFlash C18反相分离柱对样品进行分离纯化,成功获得了满足纯度要求的目标产物,为此类非对映异构体的快速制备纯化提供了经济高效的解决方案。
强极性多肽样品分离纯化
常见的组成多肽的氨基酸有20种,根据其极性和酸碱性可以分为以下几组:非极性(疏水)、极性(不带电荷)、酸性以及碱性(参见图1)。在一条多肽序列中,如果组成该多肽的氨基酸大多为极性氨基酸(图1中粉红色标出部分),如半胱氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等,那么该多肽可能具有较强的极性,易溶于水。在对该类强极性多肽样品的反相色谱制备纯化过程中,若采用普通的C18分离柱,将会发生疏水坍塌现象(具体请参见三泰科技之前发布的应用案例——《疏水坍塌与AQ反相色谱柱的应用》)。而改良后的C18AQ柱可以很好的适用于强极性或强亲水性样品的分离纯化,在本案例中,利用某强极性多肽作为样品,在C18AQ柱上进行了分离纯化,获得了可用于下一步研究的目标产物。
测定血清纯化所得的抗体药物偶联物的药物/抗体比率——应用自动亲和纯化、LC/MS 分析和新型 DAR 计算软件
抗体药物偶联物 (ADC) 是一类新兴生物治疗药物,旨在通过将药物与单克隆抗体相连实现靶向给药。与小分子药物不同,ADC 不是单分子实体,而是一类异质性的抗体,每种抗体所携带的药物数量以及经历的翻译后修饰都各不相同。药物/抗体比率 (DAR) 是指 ADC 偶联的药物的平均数量。DAR 是 ADC 开发过程中需要优化和密切监测的关键质量属性,因为它将影响疗效和毒性。由于药物的释放,在血液循环中 ADC 的 DAR 将随时间发生变化。因此,制定一套测定药代动力学 (PK) 研究样品中 ADC DAR 的稳定解决方案非常关键。要确定 ADC DAR,首先必须纯化血清中的 ADC,然后使用 LC/MS 对其进行分析。通常该工作流程中的样品前处理和数据分析环节需耗费大量人力,因此易受变异性和人为误差影响。本应用简报介绍了一种用于测定血清样品中 ADC DAR 的解决方案,该方案采用 Agilent AssayMAP Bravo 平台对 ADC 进行自动亲和纯化;将 Agilent 1290 Infinity UHPLC 与Agilent 6550 Q-TOF 质谱仪联用,用于采集准确的完整蛋白分子量数据;并利用 Agilent MassHunter BioConfirm 和 DAR 计算器软件确定 ADC 质量和 DAR。该工作流程可节省人力、降低变异性以及减少产生与 ADC DAR 测定相关的人为误差的可能性,而且仅需很少的工作量即可扩展样品处理量。
红豆杉提取物的分离纯化
在本文中,三泰科技的研发人员利用快速液相制备色谱系统SepaBean machine配合SepaFlash C18反相分离柱对红豆杉植物提取物进行了分离纯化,获得了满足制备需求的目标产品,可用于后续的进一步科学研究中,为此类天然产物的快速制备纯化提供了经济高效的解决方案。
噻嗪类强极性碱性化合物的分离纯化
在本应用案例中,样品分子结构中含有噻嗪类母体结构,普通正相硅胶柱或反相C18 柱均不适合对其进行分离纯化,三泰科技的应用工程师利用SepaFlash HILIC ARG柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine成功对其进行了分离,获得了满足纯度要求的目标产物,为此类样品的分离纯化提供了便捷高效的解决方案。
天然产物的纯化
这是一个用Agilent 1100系列纯化系统AS和PS对红三叶中刺芒柄花素和其它植物性雌激素进行分析型和制备型分离的例子。分析型放大方法可用于在Agilent 1100系列纯化系统AS上分离复杂植物粗提物中的化合物。在这个方法的基础上,进行了按色谱峰收集馏分的制备型分离。• 为了获得更多的植物雌激素物质,使用了Agilent 1100系列纯化系统的馏分合并功能• 通过对馏分的再分析测定了所得化合物的纯度• 根据分析结果将方法放大• 为了在一次运行中得到更大量的目标化合物,在Agilent 1100系列纯化系统PS上用两种不同的色谱柱重复了纯化方法制备规模的结果与在分析型系统上得到的结果相当。
抗体的纯化实验
抗体在亲和层析试剂中所占地位日趋重要,所以纯化抗体的方法也倍受关注。抗体通常是从血清、杂交瘤上清或腹水中获得的。尽管直接使用未纯化的抗体溶液可进行一些免疫学实验,但是要获得满意的结果最hao使用纯化的抗体,特别是用于亲和层析的抗体。实际上,纯化的抗体也适用于免疫检测、免疫印迹、酶联试验(ELISA)或细胞染色等。
低聚糖类样品的纯化制备
在本应用案例中,样品为极性很强的某合成低聚糖类分子,在普通C18反相柱上保留很弱,此外,其紫外吸收非常弱,不适合利用UV检测器对其进行检测。针对样品的具体性质,三泰科技的应用工程师利用SepaFlash HILIC ARG柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean machine并与外接ELSD检测器联用,成功对样品进行了纯化制备,获得了满足制备需求的目标产物,为极性很强的低聚糖类样品的纯化制备提供了一种可行的方案。
谷氨酰胺衍生物类样品的分离纯化
在本应用案例中,样品为极性很强的谷氨酰胺类衍生物,不易溶于正己烷、乙酸乙酯等常用正相流动相,而其在普通C18反相柱上几乎没有保留。针对样品的具体性质,三泰科技的应用工程师利用亲水性的SepaFlash® C18AQ柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine,成功对样品进行了纯化制备,获得了满足制备需求的目标产物,为极性很强的谷氨酰胺类样品的分离纯化提供了一种可行的方案。
强大的自动化样品制备平台
FLEX系列多功能自动进样平台和其创新软件,实现了自动化的标曲配制,且程序简单、直观。自动化曲线配制的结果符合USEPA方法8270的要求,具有较高的准确度,精密度等,有效避免了认为误差。FLEX系列多功能自动进样平台还能用于内标的添加、样品稀释、样品衍生、混匀、加热、液液萃取等操作,还能放在GC或GC/MS上作为进样平台实现常规液体进样、顶空进样及固相微萃取进样等,最大化的提高自动化效率和数据重复性及准确性。
顺反异构体的分离纯化
本文中,合成人员在合成过程中得到了一对顺反异构体,通过减压蒸馏和重结晶的纯化方法无法达到纯度要求,基于这种情况,纯化人员尝试利用快速制备液相色谱仪SepaBean machine配合SepaFlash系列反相纯化柱对样品进行分离纯化。
苯甲酸类化合物的分离纯化
羧酸类化合物尤其是苯甲酸类化合物是许多活性药物成分(Active Pharmaceutical Ingredients, API)的关键中间体,例如解热镇痛药物阿司匹林等,具有广泛的应用价值。使用传统硅胶作为固定相的色谱柱来分离纯化这类化合物是一类难题。常州三泰科技有限公司的SepaFlash C18反相柱结合快速液相制备色谱系统SepaBean machine具有良好的分离性能。本文利用SepaFlash C18反相柱分离并纯化了两种强极性的苯甲酸类化合物(结构式如图 1所示),结果表明混合物样品得到了很好的分离,为此类具有一定极性与亲水能力的化合物的快速分离纯化提供了一种经济实用的解决方案。
FLASH色谱纯化实验小讲堂--纯化时样品溶解度问题的解决方案
在样品纯化过程中你是否遇到过五花八门的难点,这个问题对于做制备纯化的小孙来说有太多值得吐槽的地方,如样品极性太小正相模式不保留、样品极性太大硅胶固定相洗脱不下来、样品溶解度太差纯化过程析出或拖尾严重及洗脱不下来等情况。在分离纯化的过程中,难免会碰到溶解性比较差的物质,这类物质有时会对分离纯化造成一些负面的影响,如由于拖尾而影响分离度,甚至是直接析出导致管路堵塞,或者少量试剂不能完全溶解至澄清,而样品纯化之前一定要有解决溶解度的办法,否则带着问题上样纯化效果一定不会很理想。解决样品溶解度的问题没有固定答案,具体样品需要具体分析,本文主要和大家分享小孙在纯化过程中如何处理溶解度较差的样品。
蛋白质的纯化和鉴定
蛋白质的产率和纯度是衡量纯化是否成功的重要指标。除有效的色谱分离外,配置良好、可靠的仪器也能影响纯化的成功。制备型反相(RP)液相色谱由于具有高分离能力,经常被用做多肽和小分子亲水蛋白纯化流程的最后一步。虽然大家都知道反相液相色谱所用的溶剂条件会使蛋白结构变性,但也能通过调节适当的条件再使其复性,特别是小分子蛋白。Agilent 1100系列纯化系统是设计良好、合适的反相色谱的系统。
使用Biotage 快速纯化制备液相色谱进行哈茨木霉菌发酵液中Peptaib抗菌肽的分离纯化
从哈恣木酶发酵液分离鉴定出Alamethicin F50等各种天然产物,利用Biotage液相色谱,对各类产物进行了纯化制备。耐士科技作为Biotage中国区总代理,以最优质的服务提供Biotage全系产品。Biotage Isolera 系列是世界上最智能的快速纯化系统,它拥有自己独创的智能参数设置,共有3个系统,多种配置可选。可以让化学家们轻松地完成对从mg级到150g以上样品 的更好的分离。创新的TLC-to-gradient专利技术可以根据薄层层析色谱的数据自动产生适合样品的溶剂洗脱梯度,并建议适合该样品量的色谱柱。
药物代谢物的纯化和鉴定——安捷伦分析型纯化系统、安捷伦自动纯化软件和 Agilent 6540 精确质量四极杆飞行时间 (Q-TOF) 液质联用系统
药物代谢和药代动力学 (DMPK) 研究通常需要通过质谱 (MS) 鉴定药物代谢物,并在药物开发的后期阶段,通过 NMR 确认代谢物结构。为此,可能需要对代谢物进行纯化。在本应用简报中,将安捷伦自动纯化软件与 Agilent 1260 分析型纯化系统相结合对安非他酮药物代谢物进行纯化。使用通过 Agilent 6540 精确质量四极杆飞行时间 (Q-TOF) 液质联用系统和 Mass-MetaSite 软件采集到的高分辨率精确质量 MS 和 MS/MS 数据对代谢物进行鉴定。
等度纯化实验中的多次进样
制备液相色谱是目前药物开发中纯化化合物所选择的方法。大量粗品用通用方法得到纯化,采用短和快速梯度在约10分钟之内完成。虽然大部分化合物可以通过这些方法得到分离,但分离和纯化立体异构体或非对映异构体需要更长的运行时间,采用等度条件或非常平缓的梯度。在本应用报告中,我们报道了如何在一次运行中多次进样以提高样品产量,节省了宝贵的时间和流动相。
抗生素类杂质的制备纯化
本文中待纯化的样品来自某制药公司,为氨基多环糖类物质,结构类似于氨基糖苷类抗生素,其极性很大,易溶于水,其分子结构式示意图参见图1,粗品纯度约为88%(HPLC分析结果)。对于此类大极性化合物的分离纯化,根据我们之前的制备纯化经验,样品分子在普通C18分离柱上的保留很弱,因此,考虑采用C18AQ柱对其进行分离纯化。
大极性水溶性较好类样品的分离纯化研究
当大家在做分离纯化时遇到水溶性较好的样品首先会采用什么分离纯化方法进行分离呢?这里小编主要讲一些个人小经验,通常小编会优先选择C18 色谱柱进行尝试,因为该色谱柱具有更好的普适性,可解决80%左右的分离纯化任务,并且具有令人满意的分离度,因此成为最广泛应用的分离纯化方法,但它有自己的短板即采用高比例水相作为流动相时会导致疏水塌陷现象,使色谱柱瞬间保留能力下降甚至无保留作用,当遇到这种情况时小编一般会采用C18 AQ柱进行再次尝试。
Waters:通过SFC对芳樟醇进行手性纯化
1. Investigator SFC系统可实现简化的手性分离,还可用于纯化和回收芳樟醇等挥发性化合物,无需制备型气相色谱(GC)中必需的复杂样品捕集。2. SFC比GC具有更高的载样量和更短的运行时间。3. 超临界流体色谱(SFC)使用较低的色谱操作温度,这种温度更适合芳樟醇等挥发性和不稳定化合物,可提高风味物质和香味物质纯化中固有的低回收率。4. SFC手性纯化方法使用无毒乙醇和CO2作为流动相,这对于供人使用或消费的化合物纯化而言至关重要。5. Investigator SFC系统可通过使用重迭进样提升采集效率,从而提高通量。
薄层色谱-质谱-Flash 纯化联用,实现合成过程中反应监控和智能快速纯化化
本应用指南中,我们演示了Advion和Interchim技术的结合是如何加快化合物的合成、纯化和鉴定的。应用中配备了Advion expression?质谱仪(CMS),Plate Express TLC薄层色谱质谱接口,ASAP大气压固体分析探头,以及Interchim puriFlash?XS520plus纯化系统。
【ISCO】手动与自动化 Flash 色谱法: 合成(2S-3S)-环氧香叶醇的纯化
合成后的(2S,3S)-环氧香叶醇通过自动化 Flash 色谱法和手动玻璃柱色谱法进行了纯化。为了确定哪种纯化方法对化学家在专业和教学环境中更有益处,本文中我们对每种纯化方法的成功率、效率、质量和经济性进行了分析和比较。
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