伯乐电转染仪

2、脉冲过程1）脉冲波形脉冲波形主要分为两种：1、方波脉冲；2、指数递减波脉冲。方波脉冲是指：电压瞬间升至预设电压，保持电压放电，然后瞬间终止放电。一般哺乳动物细胞电转染时选择方波脉冲，有较高的转染效率和细胞存活率。指数递减波脉冲是指：先对电容充电，然后让电容完全放电，其电压变化呈指数递减。一般这种波形的脉冲电转染适用于细菌、酵母菌、昆虫细胞。2）脉冲时间脉冲时间的选定主要取决与脉冲波形。在方波脉冲中，脉冲时间可直接设定。在指数递减波脉冲中，脉冲时间是指电压衰减至初始电压1/3时所用的时间，等于电容（C）与电阻（R）的乘积，单位是ms。在参数优化中，增加电压应当降低脉冲时间，而减小电压则应当增大脉冲时间。3）脉冲次数一般而言，对于大多数细胞类型都选择单次脉冲。而在有些情况下可能会用到多次脉冲，因为低电压、短脉冲时间、多次脉冲可有效避免细胞损伤。多次脉冲建议中间间隔1min。

6、电转染试剂的选择电击会对细胞造成一定程度的伤害，在转染试剂的选择上要注意，应选择具有细胞膜修复成分的电转染试剂，如Entranster-E，将电击对细胞的损伤降到最低。

1、 电场参数电场是电转染的重要因素，细胞在电场的作用下，膜通透性增加或是形成小孔，以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此，一个适宜的电场强度至关重要。不同细胞系具有不同的最佳场强值，其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外，还可以采取较为简便的间接法。文献显示存活率在50%左右的电场参数为理想参数，故可间接测定存活率来确定最佳场强值。

4、 质粒因素从质粒浓度看，细胞密度为1*106/ml，DNA用量在2-5ug/ml转染效率最高。转染率在一定一定范围内随质粒浓度的上升呈线性增高，但是到达一个峰值后，随DNA用量增加而转染率逐渐下降，其原因可能为细胞吸纳DNA有一个饱和度，过量便会产生毒性，使存活率降低，不利于转染率提高。进行小分子量的分子转染时（siRNA/miRNA），应使用高电压、短脉冲时间。大分子量分子转染时（DNA），应使用低电压，长脉冲时间。从质粒的纯度看，用高纯度的DNA才 能提高电转的效率，且应注意以下几点：首先DNA／RNA应该超纯(A260／A2801．8)，其次应不含内毒 素，同时质粒应溶于双蒸水而不是TE缓冲溶液。

5、 温度 一般情况下，电转的过程是在室温下进行，但在 电击前后可对细胞进行冰浴处理。电击前冰浴的时间对转染率影响不大，但低温环境能够防止DNA被外源性DNA酶降解，并限制在电击中因Joule作用而产生的不良反应，因此，实验一般选择电击前冰浴5min。电击后冰浴，会影响DNA摄入，因为电击后冰浴可增强细胞收缩，细胞膜上的 电穿孔封闭较慢，延长外源性DNA摄入时间，从而提高其摄入量。在室温环境下，虽然细胞膜上的孔 封闭速度快，但在随后2h，质粒还可通过电内化进入细胞，因此摄人量不一定比4℃环境下低。而且，室温下细胞在5 min内即闭孔，在4℃的环境下穿孔状态可保持4h，穿孔封闭缓慢降低了存活率，同时细胞在低温下更容易受到损伤。因此，综合考虑摄人量和存活率，大部分文献倾向于电击后细胞仍在室温或37℃下保存。

3、细胞因素用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定期的细胞差，电转后，细胞膜的恢复能力强，而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源DNA.细胞悬液浓度一般为1*106/ml，当细胞生长密度大于3*106/ml，转染效率会下降。原因除了细胞老化外，细胞过密会使相邻细胞相互作用增大，甚至使细胞相互融合，从而导致电场的局部微扰，使电场环境无法均一化，细胞体积越大对电击越敏感，所需电场强度也越小。

伯乐电泳仪按启动显示E2怎么处理

请教各位，在用伯乐电泳仪时，显示E2后，电泳仪不工作，也不知道在哪出了问题？

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[b][color=#d40a00][size=4]俗话说“不想当将军的兵不是好兵。”如今有理想有抱负的年轻人都希望在职场中有升职的机会，他们一般都把自己比喻成千里马，期望着有一天伯乐的到来能看中自己这个千里马。可是在理化分析行业里绝大多数的年轻人都是搞纯技术的，往往不太注意行政管理方面的事，而一个完整的千里马应该是综合能力都比较强的人才。当伯乐来到之时作为千里马的你是否准备好了？伯乐是否给了你精神上的鼓励和政策性扶持？你是否得到伯乐的赏识（包括暗示）？当今现实生活工作中的你是否在物质上犒赏了伯乐大人？这里不仅考验你的智商同样也考验你的情商是否双重具备？新陈代谢、吐故纳新、长江后浪推前浪这是历史必然规律，你（千里马）准备好了吗？期待你的晋升和升职！[/size][/color][/b]

专家，你好！伯乐1575洗板机不储存修改的洗板程序怎么办？（新建的也不储存）。

[color=#444444]请问哪位大虾有伯乐1757洗板机的中文说明书可以分享阿，或者告诉我怎么保存程序也可以阿，我每次设的程序都无法调出，很头痛啊。多谢多谢！[/color]

[font=宋体]哺乳动物细胞表达系统具有促使蛋白正确折叠和实现复杂修饰的功能，表达的蛋白更近天然状态，能够运用于制药等活性要求高的领域。利用哺乳动物细胞表达系统生产蛋白通常有两种方式：瞬时转染与稳定转染（构建稳定细胞系），这两种方式在原理、操作流程、应用场景上均有所区别，本文主要就瞬时转染与稳定转染之间的区别做一介绍。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]瞬时转染与稳定转染实验原理的异同：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]瞬时转染与稳定转染都是将目的基因转染至特定哺乳动物细胞内，进而表达得到目的蛋白。不同的是瞬时转染的方式外源基因并没有转染到细胞的染色体上而是存在于游离的载体上，这样可以在短时间内获得基因的表达产物，但是随着细胞的不断分裂增殖外源基因最终会丢失，无法继续进行重组蛋白的生产；而利用细胞稳定转染则会将外源基因转染至细胞染色体上，目的基因不会随着细胞传代而消失，稳定转染的细胞株能够长期稳定的生产目的蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]实验操作的差别：[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]瞬时转染与稳定转染所用的质粒是不同的，瞬转的质粒不需要带有抗性，而用于稳定转染的质粒一定要带有特定的抗性以便于后续的克隆株筛选。另外，两者所用的培养基及实验试剂也有所区别。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]瞬时转染的操作比构建稳定细胞系的操作简单，构建好质粒后，经过细胞复苏、转染、细胞培养、蛋白纯化等步骤即可得到目的蛋白；而构建稳定细胞系需要先将构建好的质粒线性化，再导入培养好的哺乳动物细胞内，通过一定的转染方式实现质粒与细胞的融合，接着经过细胞池筛选、单克隆筛选、细胞传代培养等步骤才能得到稳定转染的细胞系。对稳定细胞系进行培养能够长期稳定的生产目的蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]瞬时转染与稳定转染优缺点对比[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]瞬时转染：[/font][font=宋体]优点：[/font][font=宋体]①能够快速生产得到微量至中量的重组蛋白[/font][font=宋体]②实验成本低[/font][font=宋体]③一个宿主可以带有多个拷贝，表达效率高[/font][font=宋体]缺点：无法长期生产得到重组蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]稳定细胞系构建：[/font][font=宋体]优点：能够长期稳定生产目的蛋白[/font][font=宋体]得到稳转株之后后续生产蛋白的成本大大降低[/font][font=宋体]能够对基因进行基因插入、基因敲除等编辑操作[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][b]稳定细胞系构建服务[/b][/url]，包含过表达细胞系构建服务和[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]稳定细胞株开发服务，详情可以参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service[/font][/font]

[font=&][color=#444444]求问伯乐 HPX-87H 柱子有替代品吗，分离酸、糖、醇类物质，Agilent ZORBAX SB-Aq这款柱子行吗[/color][/font]

伯乐CFX96装了HRM软件，对于数据的分析有两种方式：Normalize和Temperature shift，请问这两种方式都是什么？有什么不同？

伯乐的色谱柱国内哪里买得到

最近实验室买了一根伯乐HPX-87H，做有机酸检测，以前只用过C18，没什么大问题。但这个柱子似乎很娇贵。总是出现基线不稳，鬼峰等问题。求教大家有用过这个柱子的，谈谈都要注意哪些问题！不胜感激！

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美国伯乐BIO-RAD M680 酶标仪软件谁有，上传软件有效的就积分奖励，该软件的名称是 Microplate Manager，要求是5.5及以后的版本，我这里有5.0版本的Microplate Manager，在伯乐M680以前型号的机器上可以使用,有需要的可以交流。

请大家帮我推荐一款美国伯乐的酶标仪，总代理是哪个公司？

想买个伯乐的酶标仪，不知道一般现在是什么型号比较主流？680怎么样，是不是快要淘汰了呢？有没有升级版的~

各位高手:我手头用着一根伯乐 87-H 有机酸的分析柱，说明书是英文的(适用于伯乐系列的柱子),我试着将它翻译了,请高手们指导一下,望大家一起交流.压缩文件是原文,我扫描的.[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=104125]柱子的翻译译文[/url][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=104127]说明书原文[/url]

那位用过伯乐的FTS3000红外，IR图谱测定日期如何查看？

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法，其目的是要达到设置转染效率，影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒DNA的纯度、靶细胞的生长状态等，下面重点介绍向几种常用的转染技术：被用于作靶基因转染的细胞，其生长状态如何，将直接决定了基因转染效率。如为贴壁生长的细胞，一般要求在转染前一日，必需应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，细胞密度以铺满培养器皿的60%为宜，转染当日，在转染前4小时换一将近新鲜培养液。对于悬浮细胞，也需在转染前4小时换一次新鲜培养液。用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其了化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。应用酚-氯仿抽提法制备的质粒DNA一般难以达到此标准，目前大多采用进口的术提取纯化试剂盒。具体的基因转染技术有鳞酸钙介导的转染法、DEAE葡聚糖介导转染法、脂质体介导转染法及电击基因转导尘等。靶基因被导入细胞后，一般在转染后48小时，靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。如若建立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，最常用的直核表达基因载体的标志物有潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。

最近用伯乐的WIN-IR绘制红外图中遇到困难。因为这是个很老的软件，伯乐公司的人也找不到。求求万能的论坛！请问谁有WIN-IR的说明书？主要是调整红外图波数的比例，在软件中找不到相关的功能，听说要编写一个宏命令。如果哪位老师知道怎么做，还望不吝赐教，在此先谢谢了！

各位版友，我们要买Bio-rad (伯乐)的酶标仪，初步定的型号是M-680 或者iMark，但是不知道大家在使用中有没有什么问题出现？ [size=3][font=Times New Roman][back=#f546ff]涉及的方面具体如下，可以畅所欲言，看看列表里相关方面是否有问题：[/back] [/font][/size][font=Tahoma][size=3] [/size][/font] 见附表[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif[/img][back=#f564fe][color=#000000][size=3][b]方便的话，最好给我留个电话（在站内给我发个短信也行），方便交流！谢谢！ 给我留电话交流，可以转10个积分[/b][/size][/color][/back][color=#8f0197][/color][color=#8f0197][/color][color=#8f0197][/color][/back][/back][/back][/back]