结合强度检测

手里有一些进行热喷涂的样品，想知道结合强度的大小。查阅有些文献，结合强度的大小单位为MPa ，有的则用N。估计方法不一样。求助大家给出一些较好的检测方法？并告知哪里能检测？谢谢

HB 5474-1991 热喷涂涂层剪切强度试验方法HB 5476-1991 热喷涂涂层结合强度试验方法谁有这两个行业标准啊，给上传一下，小弟感激不尽[em09509]

请问实验室内紫外消毒灯应该用什么方法来检测紫外线强度呢？有相应的检定规程吗？标准号是多少啊？

向各位高手求教有关表面强度检测的检测方法

请教：总荧光强度的定义是什么？或者说水中总荧光强度怎么检测？谢谢！！

[font=&][size=16px][color=#333333]点击链接查看更多：[url]https://www.woyaoce.cn/service/info-39081.html[/url]服务背景[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font]儿童餐具，是指给儿童用的专用餐具因为年龄的问题，需要针对这个年龄段做些特别的设计如颜色，导热性，化学物质挥发性握把的设计杯盖的设计辅助功能等根据年龄段的不同还要对不同年龄段的儿童设计不同的餐具。儿童餐具检测范围稻壳儿童餐具、儿童抗菌餐具、竹纤儿童维餐具、陶瓷儿童餐具、塑料儿童餐具、不锈钢儿童餐具、甘蔗纤维餐具、木头儿童餐具、密胺儿童餐具、聚乳酸儿童餐具、硅胶儿童餐具、木质儿童餐具、植物纤维儿童餐具等。[font=&][size=16px][color=#333333]检测内容[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font]儿童餐具检测项目扭矩测试、强度检测、刚性检测、跌落试验、重金属检测、撕裂强度测试、拉伸强度测试、视觉和触觉检查、甲醛释放量检测、物理机械性能检测、有机物挥发量检测等。[font=&][size=16px][color=#333333]服务背景[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font]儿童餐具，是指给儿童用的专用餐具因为年龄的问题，需要针对这个年龄段做些特别的设计如颜色，导热性，化学物质挥发性握把的设计杯盖的设计辅助功能等根据年龄段的不同还要对不同年龄段的儿童设计不同的餐具。儿童餐具检测范围稻壳儿童餐具、儿童抗菌餐具、竹纤儿童维餐具、陶瓷儿童餐具、塑料儿童餐具、不锈钢儿童餐具、甘蔗纤维餐具、木头儿童餐具、密胺儿童餐具、聚乳酸儿童餐具、硅胶儿童餐具、木质儿童餐具、植物纤维儿童餐具等。[font=&][size=16px][color=#333333]检测内容[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font]儿童餐具检测项目扭矩测试、强度检测、刚性检测、跌落试验、重金属检测、撕裂强度测试、拉伸强度测试、视觉和触觉检查、甲醛释放量检测、物理机械性能检测、有机物挥发量检测等。

口腔医学义齿修复过程中金瓷结合强度的测试方法。[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09503.gif[/img]

各位大虾，我是新进人员，正处于学习标准阶段，师父也出差了！我看到gb4706的第13章讲到泄露电流和电气强度，我想等师父回来，给他露一手，表明我很听话好学，没有偷懒呢，嘻嘻！ 泄露电流和电气强度的基本考察目的、判定方式我都看懂了，就是不知道怎么检测，主要是不知道该怎么连接！ 我们是有设备检测的，可是它的插脚，在测泄露电流的时候，该接器具的什么部位、电气强度的时候该接什么部位！ 标准上对于泄露电流这么写的：测量在电源的任一极与连接金属箔的易触及金属部件之间进行，并与绝缘材料的易触及表面相接触。 我实在看不懂，到底怎么想接呢？ 至于电气强度，貌似就没讲到该相接器具什么部位呢！ 盼答！ 各位大虾，我是新进人员，正处于学习标准阶段，师父也出差了！我看到gb4706的第13章讲到泄露电流和电气强度，我想等师父回来，给他露一手，表明我很听话好学，没有偷懒呢，嘻嘻！ 泄露电流和电气强度的基本考察目的、判定方式我都看懂了，就是不知道怎么检测，主要是不知道该怎么连接！ 我们是有设备检测的，可是它的插脚，在测泄露电流的时候，该接器具的什么部位、电气强度的时候该接什么部位！ 标准上对于泄露电流这么写的：测量在电源的任一极与连接金属箔的易触及金属部件之间进行，并与绝缘材料的易触及表面相接触。 我实在看不懂，到底怎么想接呢？ 至于电气强度，貌似就没讲到该相接器具什么部位呢！ 盼答！

请问各位老师，是否遇到这种情况，是怎么解决的？具体情况：第一天拉曼信号强度正常，第二天就信号下降一半还多，不管是光谱校正信号还是硅标样都是这样，激光强度等等其他参数都没变，难道是检测器突然出问题了？本人的检测器是液氮冷却的CCD检测器，想请问一下大家有没有遇到过这种情况？

想测32种溶剂，进样量不知大概多少合适，是不是可以通过峰强度来确定呢，比方说调谐最大强度60万，是不是可以进一个能达到四五十万强度的进样量就是合适的呢。。。之前进样检测器检测器饱和

关于icp检测的强度变低有什么因素影响？？今天检测读标液时发现强度度低很多，是什么原因影响的！

我目前用的仪器是： MicrOTOF and Autoflex (III) MALDI-TOF/TOF instruments , Bruker Daltonios。只能检测到单个和二聚的肽，其中二聚体的峰灵敏度和分辨率都不好（带5个电荷，）也可能是六聚体带15个电荷的峰，现在无法判断。 问题是如何能用这2 台仪器来检测非共价键结合的多肽六聚体？谢谢！

小弟新接触液相色谱，有个问题请教各位大虾，关于空间排阻色谱检测出的色谱图，横坐标是时间轴，越早出现的峰说明分子量越大，纵坐标是检测器强度，我想知道在定量的前提下，检测器强度可以体现出聚合物浓度的大小吗？？谢谢了

想用ICP-MS检测一蛋白质结合的金属离子，不知道蛋白要怎么处理，直接消解掉上样吗？

Agilent 1100今天我们做了紫外检测器的光强度测试结果报告里说最大和平均强度都通过了，最小强度没通过这个结果是什么意思？我们要不要采取什么措施？

对空白样乙腈做多次上机检测，发现其离子强度逐渐降低，检测前机器与离子漏斗都清洗过，出现问题后，换过色谱柱以及毛细管，均未得到解决，求助各位大神，这可能会是什么原因造成？

奶牛结核病的流行程度如何？检测都有哪些方法？有哪些优劣势？大家讨论下？我了解的检测方法有PPD、PCR、伽马干扰素ELISA试剂盒方法。

各位:我用着一套液相系统,检测器是RID-10A,问一下,基线上下波动多少为允许的,峰信号强度多大好 一些.我现在控制基线波动0.005mV内,信号强度50mV内,多数在10mV内,好不好?

点击链接查看更多：[url]https://www.woyaoce.cn/service/info-36637.html[/url]丁基橡胶腻子片检测剪切粘结强度样品名称 丁基橡胶腻子片 规格型号 1.5mm工程部位 贵阳市轨道交通 3 号线一期工程土建七标盾构区间检测项目 1.剪切粘结强度。检测依据 1.GB/T 13936-2014。剪切粘结强度≥0.06MPa；粘结拉伸剪切强度按照 GB/T 13936-2014 进行试验（试验速度 200mm/min）。粘结拉伸剪切强度制样及养护方法：将干净的金属片用无水乙醇擦拭干净，停放五分钟备用；将裁好的腻子片（尺寸25mm×12.5mm）贴在两个金属片之间，粘结后粘结面尺寸如标准中图1所示，将制好的试件放置在平整的平台上，用 2kg 的砝码等重物放在粘合处使其贴合更加密实，然后在 23℃室温环境下养护 24h 后进行试验。[img=中钢国检实力.jpg]https://img2.17img.cn/pic/kind/20210809/20210809083549_7294.jpg[/img]

短波UVC紫外辐照计专用于紫外线杀菌消毒辐照强度的测量，目前紫外线消毒技术应用在多个行业领域，包括现代防疫学、医学、食品消毒、纯水处理和光动力学等各方面的运用；利用特殊设计的高效率、高强度和长寿命的UVC波段紫外线照射流水，将水中的各种细菌、病毒、寄生虫、水藻以及其他病原体直接杀死，达到消毒的目的。 紫外线杀菌消毒是利用适当波长的紫外线能够破坏微生物机体细胞中的DNA或RNA的分子结构，造成生长性细胞死亡和再生性细胞死亡，达到杀菌消毒的效果。同时紫外线对核酸的作用可导致键和链的断裂、股间交联和形成光化产物等，从而改变了DNA的生物活性，使微生物自身不能复制，这种紫外线损伤也是致死性损伤。 但是在紫外线照射杀菌的过程中要求保证紫外线的辐照强度，紫外线辐照强度不稳定，会对消毒杀菌效果大打折扣。不能真正起到杀菌消毒的作用，关于紫外线辐射强度杀菌效果很多人存在一个误区，即认为当紫外线灯辐射强度不够时，增加紫外线照射的时间也能达到杀菌消毒的作用。这种想法是不合理的，就好像烧开水，温度没有达到98度是不能达到消毒的效果。 当然紫外线辐照强度也不是越高杀菌效果就越好，因为紫外线与人体接触时也会对人体皮肤及器官产生一定的不良影响，所以说紫外线辐射的强度一定要得以控制稳定，考虑到紫外线杀菌灯在使用的过程当中辐射强度会稍微减弱，所以要想紫外线杀菌消毒起到良好的效果，必须经常性关注紫外线辐射强度，也就是经常要使用到紫外线辐照计来进行检测确认。 所以说紫外线辐射照度计是紫外线强度检测必需配备的光学检测仪器，如今深圳市林上公司新制作一款UVC紫外辐照计，专用于检测UVC短波长紫外辐照强度的检测；紫外辐照计是一款宽谱功率测量仪，主要用于测量紫外线的辐射能功率密度，即每平方厘米的辐射能功率。单位为：微瓦/平方厘米（μW/cm2），探测器位于仪器的前端面，使用方便快捷，测量准确度高。 LS126C紫外辐照计专业用于测量UVC紫外线强度，即单位面积的UVC紫外线辐射能功率。仪器探头与主机采用高温导线连接，探头可在高温环境下使用。探头自带磁铁和可拆卸手柄，方便检测过程中的固定和操作。

紫外线灯杀菌是医院室内空气及物体表面消毒的常用方法，但是在医疗质量检查中发现，在紫外线消毒管理上存在一些认识误区和潜在的隐患，使紫外线灯杀菌效果受到很大的影响。特别是紫外线灯的辐射强度检测方面，需要定期使用紫外线辐照计对紫外线灯进行强度监测；了解和控制这些因素是确保紫外线消毒效果的关键。 必须时应该及时更换辐射强度不足的紫外线灯；一般情况下，紫外线灯杀菌效果与其辐射强度和照射时间直接相关，通常规定的照射是在30W紫外线灯辐射强度不低于70uW/cm2条件下，若紫外线灯辐射强度稍微偏低，适当延长照射时间可以对杀菌效果有一定的弥补。 紫外线灯强度小于70uW/cm2而不予及时更换，认为延长照射时间可以弥补辐射强度不足并无期限进行延长使用，这是一种误解。当监测中已经证明紫外线灯辐射强度低于规定的标准即应该及时更换。 在监测检查中发现，有的紫外线灯管累计使用时间已经找过10000h，但检测辐射强度扔大于70uW/cm2，而有的紫外线灯管使用累计不足300h，检测辐射强度已小于70uW/cm2，这并非紫外线灯管的质量问题。经调查发现，造成这种情况是实际消毒时间和登记不符，其目的是为了应付检查，没消毒却进行了登记，导致记录累计数多；在被感染管理检查中，往往把消毒记录作为衡量消毒质量的考核标准，这样有登记，证明消毒工作久做了，这显然很不够。 紫外线灯杀菌效果受环境因素影响明显，一般在环境温度20-40°C，相对湿度60%，灯管表面比较洁净下消毒效果有保障。在检查中发现，多少医院一年四季紫外线消毒时间恒定不变，显然消毒缺乏科学性，不管环境条件变化，机械地定时消毒，消毒质量不可靠。另外，由于目前悬吊式紫外线灯管固定安装在距地面2m的改的高度，不便于擦拭，多数医院的紫外线灯有积尘，影响消毒质量。 紫外线杀菌中存在的问题主要是人工操作的情况下发生，难以有效的监控质量，应该改进操作技术，使用数字式紫外辐照计，能实现在紫外线消毒中实现自动监控，紫外线灯管每次开启时间及照射累计时间的记录与存储。 同时，医院要建立健全院内感染管理综合制度和消毒管理制度，感染管理科对全院每支紫外线灯管建使用登记卡，实行统一管理，做到监测中不盲目换错一支灯管，不漏过1支辐射强度不达标的灯管，最大限度的保障消毒效果。对使用中辐射强度大于80uW/cm2的灯管可每两月使用紫外辐照计检测一次，辐射强度小于80uW/cm2每月检测一次。将检测的日期、编号、灯管规格、辐射强度、消毒时间累计数，以及使用中出现的问题等详细记录。

检测过程中强度逐渐降低，你会怎么做？是继续测下去，还是重头再来？还是。。。。

UV水质自动监测仪的检测结果会受环境光线光线强度变化的影响吗？

我的课题是钛合金电火花表面强化，涂层厚度100微米以下，一般在30-50左右请问：用何种方法测试涂层与界面的结合强度,哪里有这样的实验测试设备？谢谢！！youtao168@126.com

我正在找一种简单的能够在生产现场测定塑料小包装的封口强度的仪器，即产品已经包装好（1kg粉体包装袋），需要在现场检测封口强度是否能达到要求。请大侠们提供此方面的信息。。。

[align=center][size=24px]流式细胞仪监测适配体与靶细胞的结合[/size][/align][align=center]肖书棋 18122884967[/align][align=center][/align]本次说明是基于核酸适配体能与靶标进行特异性结合的原理，利用流式细胞仪监测适配体与靶细胞的结合状况，还能比较不同适配体与靶细胞之间的结合强度的比较；本次所使用的流式分析仪是BD FACSAria III。[font='times new roman'][size=16px]1.原理介绍：[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.1核酸适配体：[/size][/font]核酸适配体(Aptamer，Apt）：是一段寡核苷酸序列（ssDNA或RNA），是利用指数富集的系统进化技术（the Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX）在多样寡核苷酸序列的文库中，进行体外筛选得到。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026239049_1528_5413603_3.jpeg[/img][/align][align=center][size=13px]Aptamer结合靶标原理[/size][size=13px]图[/size][/align]如图所示，在合适的缓冲液环境下，单链寡核苷酸序列具有弯曲以及折叠成特定的三级空间结构的能力，该结构可以与靶分子特异性结合，SELEX技术就是应用该原理来进行选择的。将信息量巨大且随机的的寡核苷酸文库与靶标孵育，经过多轮的优胜劣汰和PCR扩增，最后得到能与靶标高亲和力性结合的寡核苷酸序列，即核酸适配体(Aptamer)。由于核酸适配体具有靶向特异性的特点，因此应用广泛；那么如何监测适配体靶向细胞亲和力的方法，就需要用到流式细胞术进行表征。[font='times new roman'][size=16px]1.2流式细胞仪原理：[/size][/font]流式细胞术能够快速检测细胞或者生物颗粒的特征，其检测灵敏，能够定性或者定量分析颗粒的参数，还具有细胞分选的功能，功能强大，分析参数多，实用性较强。流式细胞仪（flow cytometer，FCM）的设计应用了光学、细胞化学、电子学等技术，拥有较强大的细胞及微粒分析功能，在临床医学、免疫学、微生物学等等研究领域发挥着巨大的作用。流式分析可以检测细胞表面颗粒复杂程度、核酸以及蛋白质的含量、细胞表面积或者细胞表面的抗体、细胞受体等等，在多种研究领域起到重要作用。在本研究中应用流式分析细胞荧光强度的基本步骤原理是：（1）制备成单细胞悬液：将待测细胞预处理进行荧光标记后制成单细胞悬液，通过气压将流式管中的细胞悬液通过管道压进流动室，同时喷出的鞘液将细胞包裹，形成圆形的鞘流，细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过流动室检测区域。（2）形成光散射：激发光源侧向垂直射向单个细胞，含有荧光的细胞形成两种光：①前向散射光（forward scatter， FSC）：激光束照射细胞时，光束偏移量较小（10°以内），散射至前方，可用于检测细胞等粒子的表面信息，颗粒体积越大，信号越强。②侧向散射光（side scatter，SSC）激光束照射颗粒，产生偏移角度为直角的散射光，可反应细胞内含物的信息。（3）光信号转化成电信号：光信号导入到计算机中，依次形成电信号，再转化为数字信息。应用FlowJo软件处理数据，可以获得相应的散点图、直方图等形式，便于直观分析。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026241158_6946_5413603_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=13px]流式分析基本原理图[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]2.分析步骤：[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2.1细胞预处理：[/size][/font]通过流式分析预处理，可以使细胞在特定的环境，与带有FAM荧光的适配体进行特异性结合，通过平行实验使细胞与不同的适配体文库进行标记，最终表征其荧光强度，进行亲和力的分析与比较。如表所示，流式分析条件为：[align=center][size=13px]流式细胞分析条件探寻[/size][/align][table][tr][td][align=center][size=13px][color=#000000]孵育时条件[/color][/size][/align][/td][td][size=13px][color=#000000]孵育时体积[/color][/size][/td][td=2,1][align=center][size=13px][color=#000000]孵育时浓度[/color][/size][/align][align=center][size=13px][color=#000000]细胞浓[/color][/size][size=13px][color=#000000]度 [/color][/size][size=13px][color=#000000]单链DNA浓度[/color][/size][/align][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]第二次洗涤用液[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][size=13px][color=#000000]4 ℃，30 min,BB,摇晃[/color][/size][/align][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]500 μL[/color][/size][/align][/td][td][size=13px][color=#000000]2.5×10^6个/mL[/color][/size][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]125 nM[/color][/size][/align][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]PBS x 2[/color][/size][/align][/td][/tr][/table]流式分析的大致步骤为：消化细胞、细胞与文库孵育、润洗重悬、上样分析。最终确定，初始的细胞悬液浓度为5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font] 个/mL，初始文库的浓度为250 nM；孵育时体系的总体积为250 L，细胞浓度为2.5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL，适配体浓度为125 nM，环境为4 ℃、30 min，震荡。最后上样的细胞悬液体积为500 L，细胞浓度为2.5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.1材料准备：[/size][/font][/align][align=center][size=13px] 流式分析主要仪器与试剂[/size][/align][table][tr][td][align=center]名称[/align][/td][td][align=center]规格/型号[/align][/td][td][align=center]作用[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]流式细胞仪[/align][/td][td][align=center]FACSAria III[/align][/td][td][align=center]对细胞进行流式分析[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]可调式混匀仪[/align][/td][td][align=center]MX-S[/align][/td][td][align=center]混悬适配体悬液[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]震荡仪[/align][/td][td][align=center]MX-M[/align][/td][td][align=center]震荡孵育体系，防止细胞贴壁[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]制冷恒温金属浴[/align][/td][td][align=center]HX-20L[/align][/td][td][align=center]热击适配体，使核酸变性恢复到自由的无规则卷曲状态[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]显微镜[/align][/td][td][align=center]DMI1[/align][/td][td][align=center]观察细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]水浴氮吹仪[/align][/td][td][align=center]FY-DCY12S[/align][/td][td][align=center]加热试剂[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]电子天平[/align][/td][td][align=center]JA2003[/align][/td][td][align=center]称量药品[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]离心管[/align][/td][td][align=center]15 mL×10、50mL×10[/align][/td][td][align=center]分装试剂，装载需离心的细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]低吸附离心管[/align][/td][td][align=center]2 mL×20[/align][/td][td][align=center]装适配体悬液，减少适配体与细胞在管壁上的吸附[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]一次性使用吸管[/align][/td][td][align=center]3 mL×20[/align][/td][td][align=center]方便地吸取PBS[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]细胞刮刀[/align][/td][td][align=center]3010×1[/align][/td][td][align=center]刮下贴壁生长的细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]PBS[/align][/td][td][align=center]50 mL×2[/align][/td][td][align=center]ScienCell[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]Cell Dissociation Solution[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]消化细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.25%Trypsin-EDTA[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]Gibco[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1×PBS缓冲液[/align][/td][td][align=center]500 mL[/align][/td][td][align=center]润洗细胞，重悬细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]Cell Dissociation Solution[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]消化细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.25%Trypsin-EDTA[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]Gibco[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1×PBS缓冲液[/align][/td][td][align=center]500 mL[/align][/td][td][align=center]润洗细胞，重悬细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]无酶无菌水[/align][/td][td][align=center]500 mL[/align][/td][td][align=center]溶解适配体文库[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]DMEM高糖培养基[/align][/td][td][align=center]50 mL[/align][/td][td][align=center]停止消化[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]细胞[/align][/td][td][align=center]＞5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个[/align][/td][td][align=center]作为目的细胞进行流式表征[/align][/td][/tr][/table]①配置Binding buffer（结合缓冲液BB）：配置10 g/L BSA：称量0.1g BSA，溶于10 mL Washing Buffer，过膜；取上述溶液5 mL，加入到445 mL Washing Buffer中；再加入500 L鲑精DNA，混匀。②将U盘格式化，提前打开制冰机和金属浴（95℃）；③37℃水浴：将无酶消化液、ECM、PBS（1）放入37℃水浴。④4℃冰敷：向泡沫盒中加碎冰，离心管架、温度计，准备4℃孵育环境，放入PBS和BB预冷。⑤打开显微镜（酒精擦拭载物台）。⑥打开离心机：120 g，1 min，25℃。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]计数和文库预处理[/size][/font][/align]（1）细胞计数（20倍或者40倍显微镜）：①采用直接计数法，在显微镜中随机选择五个点进行计数取平均值，根据视野的面积以及T75培养瓶面积计算细胞总数，推出公式：Y为总细胞数；X为视野中细胞平均数；Y=27886.12X（20倍镜下）/Y=111111.11X（40倍镜下)。为了保证流式有足够的细胞，需要保证细胞总数＞5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL。②计算BB体积：V=Y/（2×10[font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font]）mL，用V体积的BB重悬细胞沉淀，可获得细胞浓度为5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL的初始细胞悬液。（2）文库预处理：①将粉末状适配体文库进行离心：4000 r，5 min，4℃；使适配体粉末聚集在离心管底部，防止打开离心管时干粉状适配体飞出。②按照说明用一定体积的无酶无菌水溶解适配体，使适配体母液浓度在5 M。③取100 L母液，并加入900 LBB，使适配体浓度在500 nM。④再去上述液体500 L，并用BB稀释至浓度为250 nM，最终得到250 nM的适配体文库悬液。⑤95℃热击3 min，热击后放在泡沫盒中冰敷。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞处理[/size][/font][/align]（1）消化：①PBS（37℃）润洗3次。②无酶消化液3 mL，消化9 min（等待期间准备好孵育用离心管；确认离心机参数为：120 rcf，1 min，25 ℃），吹打细胞使其从培养瓶表面脱落。直接转移至15mL离心管中，吹打混匀约20次（吹散细胞团，分离成单个细胞）。③显微镜观察确认细胞均从培养瓶上脱落，加入2-3 mL ECM至培养瓶中润洗，然后转移至上述离心管中，吹打终止消化。④离心：120 rcf，1 min，25℃。（等待期间各加入250 L待测文库至低吸附离心管中,注意要快速，吸取之前需要先混悬文库）。⑤离心之后小心倒出，用枪吸出剩下的ECM，加入2V L BB，重悬吸打混匀，获得5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL的细胞悬液。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞与文库结合[/size][/font][/align]①孵育：分别加入250 μL上述细胞悬液至250 μL ssDNA文库中，进行孵育：4℃，30 min，打开摇床第二格。②等待期间离心机调至4℃；用密封袋装好洁净的1000 L枪头准备流式上样用；2.2.2.5 润洗重悬细胞①取出孵育好的体系，进行离心：4℃，120 g，1 min（等待期间准备好4℃ PBS)。②倒掉上清液，用枪头小心吸出管口残留的上清液，每管加500 L PBS（4℃）用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]吸打重悬约20次。③再次离心4℃，120 g，1 min。④第二次重悬：重复①-③步骤。⑤每管加入500 L PBS重悬，忽略实验损失，最后得到理论细胞浓度为2.5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL的细胞悬液。[font='times new roman'][size=16px]2.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]送样分析[/size][/font]FAM荧光染色较弱，在预处理之后应尽快进行流式分析，流式分析上样程序复杂，需要正确进行开机，测样，关机的步骤，才能够得到准确的数据。[align=left]（1）准备工作：[/align][align=left]准备1000 mL[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]，1000 mL 洁净枪头，流式管，质控微球。[/align][align=left]①开启液流系统：由上至下打开流式细胞仪开关；再开启计算机，打开FACSDiva软件，在“Cytometer仪器框”中确认流式细胞仪已与电脑连接，启动液流之前，确认液流系统水平，进行补充鞘液、去离子水、乙醇以及漂水，并清空废液。[/align][align=left]在“Cytometer”菜单中，点击“Fluidics Startup（启动液流系统）”，按照提示进行操作：确定气路和液路是从乙醇桶连接到了鞘液桶上：将蓝色液路管接到过滤器下方，透明气路管接到鞘液桶上；确定闭合的喷嘴是在流动检测池上。[/align][align=left]②将70 m的喷嘴放入装有超纯水的烧杯中，超声30 s，用无尘纸蘸干；抽出闭合的喷嘴；插入70 m的喷嘴（红圈朝上）。[/align][align=left]③点击“×steam”，开启液流，出现水滴状，调整使上端横线位于第二个或者第三个水滴的尾部，下端横线位于第三个或者第四个液滴的中部，调整好后关闭液流。[/align][align=left]（2）做质控：[/align][align=left]①用CS&T微球，用之前一定将微球甩匀（保证取出的微球呈均匀体系）用涡旋震荡；取一支洁净的流式管加入333 L的鞘液，再加一滴微球（用之前用混悬仪混匀，正常的微球为浑浊状）。[/align][align=left]②打开液流系统，在“Cytometer”菜单下点击“CST”；展开Setup Control窗口：在Characterize菜单中中选择“Check Performence”；在Configuration流式设置中：喷嘴的大小：选择70m，点击左下角“set configuration”，再点击“OK”。[/align][align=left]③选择微球的Lot ID：与微球瓶身上编号对应：10549。[/align][align=left]④敲弹准备好的微球悬液使其混匀，进行上样，打开液流；确认激发光源没问题即可关掉页面并关掉液流。[/align][align=left]（3）上样：[/align][align=left]①新建样品，并勾选FITC、SSC、FSC的H、A、W、log数据项。[/align][align=left]②作图：建立散点图，横坐标为FSC-H，纵坐标为SSC-H；再建立一个图：横坐标：FITC-H，纵坐标为：Count。[/align][align=left]③打开液流至3，选择对应样品；吹打混匀并放置样品，点击“LOAD”上样。调整FSC和SSC的电压，使散点图的中的点都集中在所圈的门中。（若散点偏右，则FSC电压过大，调整FSC电压使其变小，若散点偏上，则调整SSC使其变小。）当调整合适时点击“RECORD”记录数据。[/align][align=left]④计数完毕，调低流速，点击“unload”，选择第二个样品并重复第③步。[/align][align=left]⑤上样完毕之后，保存数据。[/align][align=left]（4）关机步骤：[/align][align=left]①上一管clean液，高速冲2 min；再上一管去离子水，高速冲5 min；关闭液流，检查液路系统。[/align][align=left]②在“Cytometer”菜单中，选择“shutdown”，根据指示操作：取下70 m的喷嘴，超声清洗，安装闭合喷嘴（红色点朝上）。[/align][align=left]③把液路和气路连接到乙醇桶上，用乙醇冲洗（先拔气路再拔液路）。[/align][align=left]④装一管clean液，清洗上样针和流动池。[/align][align=left]完成上述步骤之后即可关闭界面。[/align][align=left][/align][font='times new roman'][size=16px]2.3数据处理：[/size][/font]将原始数据用Flowjo软件进行处理，得到散点图以及荧光强度直方图，接下来通过举例来说明数据如何分析：（1） 散点图分析：[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026242555_5228_5413603_3.jpeg[/img][size=13px]数据处理分析散点图[/size][/align]该图为散点图，可以看出大体分为两个集团，散点图有两个集团说明体系中有两种细胞粒子，并且在该图片的左下角粒子较少，说明细胞碎片较少，在预处理时较好地保护了细胞的完整性。散点图中可以区分出整个上样的体系中主要含有两种大小的细胞颗粒，在预处理的过程中，无酶消化液的消化能力较弱，并且细胞团密度较大，细胞间黏连较多，在最后孵育结束用PBS进行重悬的时候仍然能够肉眼可见有白色细微絮状物。FSC值越大，代表颗粒的体积越大；SSC值越大，代表颗粒内部的复杂程度越高。故可初步判断，G1门中的颗粒为未消化完全的细胞团，而G2门中的颗粒为分散的单个细胞。（2） 直方图分析：[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026243736_5071_5413603_3.jpeg[/img][size=13px]数据处理分析直方图[/size][/align]图中为G2门选中的样品的荧光强度，该图中有两个峰，横坐标10[font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font]附近所产生的荧光峰可以判定是残留的细胞碎片，可视为背景值，横坐标10[font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font]~10[font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font]附近的峰代表四个适配体分别与细胞结合所产生的荧光强度，SYL3C-Aptamer结合偏移量最大，荧光较强，且高荧光事件次数较多，说明SYL3C-Aptamer与单个细胞的结合能力最强，并且G2门中的颗粒大多数为消化完全的单个细胞，呈现出较好的特异性。总之，该组结果对比体现出，单个细胞靶点较多，适配体与单个细胞结合能力较高，通过荧光强度波峰的偏移所反映的适配体与细胞特异性结合能力的大小依次为SYL3C-Aptamer＞EP166-Aptamer＞CA2-Aptamer＞ARC1172-Aptamer。同时，由图中可以看出：10th-ssDNA pool与SYL3C-Aptamer在10[font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font]～10[font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font]荧光强度波峰较高，说明二者与单个细胞的结合能力较好，结合位点较多，呈现良好的特异性和亲和性。SYL3-Aptamer荧光波峰明显右移，与单个细胞的结合位点较多。[font='times new roman'][size=16px]三、总结[/size][/font]本次说明旨在利用带荧光的适配体靶向特异性结合目的细胞的原理，利用流式细胞仪监测适配体结合靶细胞能力的强弱，同时还可以应用于不同适配体靶向同一种细胞的结合能力强弱的比较。进一步利用流式细胞仪，还可以测定适配体的Kd值；还可以根据预处理的条件不同，与对照组比较，来测定适配体靶向细胞的受体是位于细胞膜表面还是细胞内，从而进一步测定适配体的生物学稳定性。同时，流式细胞仪还有很多方面的应用，例如鉴定细菌、检测细胞凋亡等，一些抗体-细胞复合物的结合情况也能够由流式细胞仪来进行监测。 在进行流式上样的过程中，预处理、上样以及数据处理阶段都有需要注意的细节，例如：本次所使用的细胞为贴壁生长的内皮细胞，故在细胞预处理时需要先消化细胞；在进行上样前，需要将样品进行吸打混匀，以免细胞沉积在流式管底部，导致未吸取到样品；在应用流式细胞仪的过程中，使用前的维护、质控流程十分重要，该流程会直接影响所得数据的稳定性；不同的流式细胞仪的维护程序稍有不同，本次说明中的使用方法只适用于BD FACSAria III，流式细胞仪具有强大的分析功能，其在细胞研究中具有重要的作用。[align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align]

我用的是岛津ICPS-7510型的icp，现在发觉它的激发光强度有些下降，大约比性能最佳时降低了30%，我觉得光强度降低主要是影响检测限或是灵敏度，不知道各位对此有什么看法啊

请问scan的时候检测器电压高低会影响各碎片的相对强度吗？会影响谱库检索的匹配度吗？还是只受灯丝的影响？

检测纳米线的PL光谱强度用什么仪器呢