蛋白表达检测

大肠杆菌表达体系为什么会出现无或低蛋白表达的结果？诱导前后蛋白存在毒性或者表达过程中密码子有偏向性，都可能造成蛋白不表达或低表达的结果。

抗原和抗体的高水平生产中，上游表达系统的合理选择和优化是核心技术。默克密理博Novagen的大肠杆菌/昆虫细胞/哺乳动物细胞表达工具各有特点，是特定蛋白表达的最佳选择。而蛋白抽提、纯化、浓缩/除盐/换液、复性、高通量操作等也可以通过选择MM的合适产品提高效率。

EMT即上皮间质转化，在此过程中，上皮细胞的极性丧失，迁移和运动能力增强，同时上皮表型丢失而逐渐获得间质表型。伴随表型变化，许多基因的表达发生了改变，上皮表型相关蛋白，如角蛋白、E-钙粘蛋白、紧密连接蛋白-1、闭锁小带蛋白等含量下降，间质表型相关蛋白，如波形蛋白、N-钙粘蛋白、α -平滑肌肌动蛋白、纤维连接蛋白等含量上升，同时一系列转录因子的表达也发生了变化。蛋白表达量的变化多通过Western Blot和免疫荧光及免疫组化的方式来检测，其中Western Blot可以使用组织和细胞实现蛋白的定性和半定量，免疫荧光可以使用细胞爬片检测细胞中蛋白的定位以及定性分析，免疫组化可以使用组织切片检测细胞中蛋白的定位以及定性分析，针对不同的样品类型，可以采用不同方式来检测EMT导致的蛋白表达变化。

简介在一段时间内同时检测几种不同信号的输出尤其在研究蛋白或化合物对细胞生长或基因表达作用方面很有帮助。在本应用指南里，我们利用SoftMax? Pro 7版本软件同时来检测细胞生长(光吸收)和蛋白表达(荧光)。在细菌中，lac操纵子是一种由编码?-半乳糖苷酶的启动子调控的基因群。将一个蛋白表达序列插入到含有lac操纵子的质粒中并转染细菌，可使这一转化细菌来表达感兴趣的蛋白。通常情况下，lac启动子是被变构抑制的，但是在异丙基-?-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)存在下，阻遏物从启动子序列释放引起感兴趣蛋白的的表达。相反，如果IPTG过量，细胞会转变为优先将胞内物质用于蛋白表达并且细胞生长也会受到阻碍。通过同时检测细胞密度和蛋白表达，我们展示了大肠杆菌(E.coli)是如何响应系列稀释的IPTG的。

优势：1.带细胞成像系统的功能模块扩展了微孔读板机的检测应用2.方便检测每个细胞或每孔的标签蛋白的表达水平3.按照一般微孔读板机的简单流程4.细胞可视化数据输出，增加了数据可信性

抗冻蛋白是一类在低温环境中能够保护细胞免受冰晶损伤的蛋白质。它们通过降低冰点和稳定细胞膜来发挥作用。细胞膜的流动性是细胞生理功能的重要指标，其变化直接影响细胞的代谢和信号传递。本文将探讨如何利用光照培养箱模拟低温环境，研究抗冻蛋白的表达和细胞膜流动性的变化。

新近研究表明，通过质谱法已建立了多种独特的血清多肽组表达模式库，而血清多肽组表达模式与临床症状密切相关。阐明血清中多肽组成的序列特征及其产生机制，将有助于将血清多肽组表达模式作为可靠的疾病标识而更加广为接受。我们采用一种高度优化的多肽提取方法和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术进行的研究表明，仅靠一套有限的血清多肽表达模式（一个特征），即可将3 种类型的实体肿瘤患者和未患癌的对照受试者准确地区分开来。61 个特征肽段的靶序列识别结果显示，这些肽又可分为密切相关的几个簇，大多数是由于造成肿瘤类型特异性差异的胞外蛋白酶活性影响了体内结合蛋白质的水解过程和补体的降解过程而产生的。这一特征肽段家族成员虽少、但功能极为强大，可精确预测前列腺癌样本的分级，其准确度与其他标准方法可比。总之，本研究表面，疾病的肽段标记物表达谱和蛋白酶活性的差异之间存在直接的相互关联，而且，本文中所描述的几种肽段表达模式在临床上有望用作癌症检出和分级的标记物，同时我们的发现对未来的肽段生物标记物的研究也具有重要的提示意义。

ClonePixTM 2系统提供了一种全新、快速评估哺乳细胞系GPCR靶蛋白表达水平的方法1. 用哺乳表达系统快速评估GPCR靶蛋白的內源表达水平2. 增加发现最优细胞反应器的可能性3. 减少细胞系/抗体开发的时间—避免有限稀释法

注意事项1. 所有培养都在加湿的 37℃ 5% CO2 培养箱中培养，除非有特殊说明。2. 与活细胞接触的器械和试剂都应该是无菌的，操作也必须无菌。3.细胞裂解液只含有非离子型去污剂，可能不能有效地抽提某些蛋白质。在这种情况下，需要含有 SDS 的缓冲液。

整合素是一种跨膜蛋白，在介导细胞黏附到细胞外基质（ECM）过程中发挥重要的作用。整合素在和配位体结合并发挥作用之前需要被激活。Kindlin和talin如何在非造血细胞中介入激活整合素这一过程的原理并不十分清晰。美国的科研人员发现缺少成纤维细胞，talin或kindlin都不能激活β1整合素，从而不能粘附到纤维粘联蛋白表面上；甚至不能由Mn2+介导的整合素粘连构象发生转变。使用Mn2+可以激活talin而不是kindlin缺陷细胞的部分整合素功能，使其活化和粘附在纤维粘连蛋白表面上。而具有方向性的粘附实际是由Kindlin直接诱导结合桩蛋白，可以反过来会粘附斑激酶（FAK）导致FAK活化并形成片状伪足。这一研究结果表明，talin和Kindlin协同激活整合素与纤维粘连蛋白的结合，并随后Kindlin会独自形成一个特别的信号位点，形成新的蛋白粘附位点。

肽图分析是蛋白质鉴定，特别是重组蛋白鉴定的最常用的方法。它通过酶解（一般使用胰蛋白酶）将蛋白质打碎形成肽段，然后以可重现的方式进行肽段的分离和鉴定。肽图分析是一种非常有用的方法，已成为生物技术领域中最有价值的工具之一，它能检测和监控单个氨基酸改变、氧化、去酰胺化，以及其它降解形式。它还能直接检测常见的单克隆抗体修饰变异，如 N 端环化，C 端赖氨酸处理，N- 糖基化，以及内含子表达等非预期的变异。肽图是蛋白质及其酶解产物的指纹图谱，它能提供待测蛋白质的全面信息。肽图分析包含四个主要步骤，蛋白质的分离和纯化；肽键的选择性酶切；多肽的色谱分离；多肽的分析和鉴定。对测试样品与参考标准品或对照样品进行同步的酶解和分析。肽图应该包括足够数量的肽段以进行有效的分析；它不仅要提供蛋白质鉴定所需的必要信息，还应尽可能地涵盖完整的蛋白质序列。

使用MST技术检测跨膜蛋白TRKB与脑胆固醇和抗抑郁药物的结合。其中跨膜蛋白TRKB并未纯化，直接将过表达GFP-TRKB的HEK293T细胞裂解后取上清。以GFP-TRKB融合蛋白作为荧光信号源，进行MST检测。

绿色荧光蛋白GFP的应用绿色荧光蛋白GFP的应用主要集中在利用其荧光性质的基础上作为一种标记物。1 绿色荧光蛋白GFP在分子生物学上的应用1.1 绿色荧光蛋白GFP作为报告基因 报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的DNA，如传统的荧光素酶（LUX）基因和β-葡萄糖苷酶（GUS）基因。绿色荧光蛋白GFP作为基因报告可用来检测转基因效率，把绿色荧光蛋白GFP基因连接到目的基因的启动子之后，通过测定GFP的荧光强度就可以对该基因的表达水平进行检测。目前，此方法无论在农杆菌介导或基因枪介导的植物遗传转化中还是在活细胞、转基因胚胎和动物中都已得到非常广泛的应用，特别是在活细胞基因表达的时空成像方面。 1.2 绿色荧光蛋白GFP作为融合标签绿色荧光蛋白GFP最成功的一类应用就是把绿色荧光蛋白GFP作为标签融合到主体蛋白中来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或者靶向标记某些细胞器。在多数情况下，绿色荧光蛋白GFP基因在N-或C-末端与异源基因用常规的分子生物学手段就可以接合构成编码融合蛋白的嵌合基因，其表达产物既保持了外源蛋白的生物活性，又表现出与天然GFP相似的荧光特性。GFP的这种特性为蛋白质提供了一种荧光标记，不仅可以检测蛋白质分子的定位、迁移，还可以研究蛋白质分子的相互作用以及蛋白质构象变化，并依靠荧光共振能量转移即FRET来进行检测。

人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)检测试剂盒人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)抗原、生物素化的人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人表皮角蛋白(EK)检测试剂盒人表皮角蛋白(EK)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人表皮角蛋白(EK)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人表皮角蛋白(EK)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人表皮角蛋白(EK)抗原、生物素化的人表皮角蛋白(EK)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人表皮角蛋白(EK)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)检测试剂盒人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)抗原、生物素化的人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人表面活性蛋白A(SP-A)检测试剂盒人表面活性蛋白A(SP-A)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人表面活性蛋白A(SP-A)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人表面活性蛋白A(SP-A)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人表面活性蛋白A(SP-A)抗原、生物素化的人表面活性蛋白A(SP-A)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人表面活性蛋白A(SP-A)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

?肌动蛋白是真核细胞骨架蛋白的重要组成部分，具有多种重要的细胞功能，包括细胞分裂、细胞极性、伤口愈合、肌肉收缩等。本篇文章介绍了一种改进的肌动蛋白表达和提纯方法，使用SPEX 冷冻研磨仪研磨法破碎酵母细胞，适用于所有配备分子生物学设备的实验室中，这将极大地促进肌动蛋白细胞骨架的升华和细胞生物学研究。

人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)检测试剂盒人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)抗原、生物素化的人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)检测试剂盒人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)抗原、生物素化的人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

重组人生长激素 (recombinant human growth hormone，rhGH) 主要用于治疗儿童及成人身材矮小，发育迟缓等病症。rhGHFc免疫融合蛋白是将rhGH基因与特异位点突变后的人抗体IgG4 Fc段用柔性linker连接，利用CHO-k1细胞进行表达。本应用中作者采用了尺寸排阻色谱柱TSKgel G2000SWXL建立了测定重组人生长激素Fc免疫融合蛋白含量。实验结果表明，利用SEC-HPLC进行蛋白含量检测比Lowry法更加灵敏高效，可缩短检测时间。该方法系统适用性、专属性、精密性良好，准确性较高，有利于为纯化工艺提供数据支持。

维生素E对三黄肉鸡免疫功能、组织α-生育酚沉积及脂蛋白酯酶、脂肪酸结合蛋白基因表达的影响

人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)检测试剂盒人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)抗原、生物素化的人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)检测试剂盒人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)抗原、生物素化的人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

采用锥虫蓝拒染法、四氮唑蓝比色法检测SAHA 对U266细胞增殖的影响。AllllexinV和PI染色后应用流式细胞仪检测SAHA 作用U266细胞的凋亡率，Hoechst33342染色法检测凋亡细胞的形态。Western-blot方法检测信号转导通路Ras/Raf/Mek/Erk相关蛋白的表达水平。

获取蛋白分子量和等电点，推算诱导蛋白分子量：方法一：Mr=115*1000/3=38*103Da（1个氨基酸的大约分子量为115）Mr=1*37=37kDa（1kb DNA对应333个氨基酸，大约37kDa）方法二：将氨基酸序列输入特定的软件中，获取蛋白的分子量和等电点性质。

所有光合生物都必须要应对过量光照来避免光合氧化胁迫。对于植物和绿藻来说，高光的最快响应机制就是非光化学淬灭（NPQ）。这一过程允许将过量能量以热量形式安全地耗散掉。PsbS蛋白是这一过程中的重要传感器。为了确定PsbS蛋白在莱茵衣藻Chlamydomonas reinhardtii的NPQ和光保护中的作用，艾克斯－马赛大学Tibiletti T等培养了可以表达藻类或拟南芥psbS基因的叶绿体转基因株。通过FluorCam开放式叶绿素荧光成像系统进行的NPQ成像分析最终表明，两种PsbS蛋白都可以增强莱茵衣藻野生型和npq4突变株的NPQ，但没有观察到明确的光保护活性。

差示扫描荧光法（DSF），也被称为thermal shift assay（TSA），是表征蛋白热稳定性的常用方法之一，广泛应用于蛋白配体互作表征，突变体、缓冲液、去垢剂筛选等领域。DSF可以通过荧光染料或蛋白内源荧光信号监测升温过程中蛋白构象的变化计算其熔解温度Tm（折叠蛋白与去折叠蛋白相等时的温度）。

多金属氧酸盐(polyoxometallates,POMs)由于结构的多样性以及其在分子尺寸、表面电荷分布、氧化还原电位、极性、酸性、溶解性及热稳定性等方面高度可调的分子特性，在材料，磁学，催化，尤其是医药科学等领域都有着广泛而重要的应用。肿瘤一直是威胁人类健康的一大顽疾。研究表明，组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylaseinhibitors，HDACi)可以通过改变组蛋白或转录因子的乙酰化状态诱导肿瘤细胞生长、分化或凋亡，具有明显的抗肿瘤活性。本论文首次将多酸类药物用于HDACi的筛选，从近400种POMs化合物中筛选出了五类13种与已知HDACi具有相同作用效果的多金属氧酸盐化合物。这五类POMs化合物分别是：1.夹心型钨锗酸盐化合物PA-304 PA-312 PA-313 PA-315 PA-317；2.三有机锡取代的钨锗酸盐化合物PA-320；3.过渡金属连接二钛取代的Keggin型钨磷酸盐形成的化合物PA-324 PA-331 PA-332PA-330；4.临床有机药物与Anderson型多阴离子形成的超分子化合物PA-301 PA-303；5.含Ti的三聚杂多钨锗酸盐化合物PA-334。实验中以PA-320为代表化合物，对其抗肿瘤活性做了初步的验证。绿色荧光蛋白质粒报告基因的荧光照片显示PA-320可以诱导绿色荧光蛋白发光增强，且发光的强度要强于已知临床组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA的作用效果。直观的说明PA-320可以刺激p21基因表达增加。逆转录PCR(RT-PCR)和DNA电泳的结果证实，不同浓度的PA-320处理的细胞，其细胞中p21基因的表达量与用临床组蛋白去乙酰化酶抑制剂BUA处理细胞后的作用效果相同。说明PA-320有和临床HDACi相同的作用功效，可以刺激p21基因的表达增加。据文献报道HDAC1对p21WAF1/CIP1基因的抑制作用最为显著。PA-320对瞬时转染的HDAC1-7的实验结果证实，在转染了HDAC1的同时加入一定浓度PA-320刺激后，p21WAF1/CIP1基因启动子报告基因的活性明显增强，HDAC1的活性明显受到抑制。瞬时转染HDAC实验证明多金属氧酸盐化合物PA-320可以很好的抑制HDAC的活性。MTT实验结果证实PA-320对Hela细胞，LNCaP细胞，293T细胞，SW620细胞四种癌细胞均有抑制作用。实验测得对四种癌细胞的IC50值分别为38.8679μg/ml，45.1477μg/ml，44.4783μg/ml和9.2771μg/ml。说明PA-320可以在相对较低的浓度下(100μg/ml)，PA-320的抑制浓度也是比较低的。说明PA-320对肿瘤细胞有很好的抑制效果。

重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白，是由人干扰素α2b和人血清白蛋白2种编码基因通过基因工程技术构建的毕赤酵母工程菌，通过诱导表达产生的胞外分泌蛋白。干扰素类重组蛋白药品是目前临床上广泛用于治疗乙型肝炎、丙型肝炎等顽症的有效药物。2015年版《中华人民共和国药典》对重组蛋白制品的纯度要求为不低于95.0%。本篇应用中，作者采用了离子交换色谱柱TSKgel Q-STAT建立了测定重组人血清白蛋白干扰素α2b 融合蛋白药物纯度的方法，经验证该方法适合 rIFNα2b-HSA纯度检测。