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看到一篇文章,大体翻译了一下,觉得还蛮有意思。利用固定相优化液相色谱(POPLC)分离载体混合物Max KühnleUniversity of TübingenInstitute for Organic ChemistryAuf der Morgenstelle 1872076 Tübingen, Germany摘要:本工作介绍了五个不同的孕激素衍生物类固醇混合物可以利用固定相优化液相色谱(POPLC),在等度条件下阶段完成色谱法分离。它表明,类似的分离工作相,可以结合不同长度的,不同种类的固定相。以往的工作表明尝试在一根色谱柱上分离这五个化合物是难以成功的。本文基于Bischoff(比绍夫)提供的POPLC色谱柱完成的工作。化合物骨架:五个甾体类化合物结构:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207172108_378358_1466694_3.jpg方法参数:固定相:每一段柱子:150 x 3 mm,填料规格如下:ProntoSIL 100-5-C30ProntoSIL 100-5-CN 2ProntoSIL 100-5-Phenyl 2ProntoSIL 100-5-C18 SH 2ProntoSIL 100-5-C18 EPS 2POPLC组合:150 x 3 mmProntoSIL 100-5-Phenyl 2 (90 mm)ProntoSIL 100-5-C18 SH 2 (30 mm)ProntoSIL 100-5-C18 EPS 2 (30 mm)流动相条件:A: 甲醇B: 水等度: 60% A流速: 1 ml/min压力: 300 bar进样体积: 20 μl柱温: 20°C实验结果单独使用ProntoSIL 100-5-C18 SH2 分析的结果如下图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207172109_378359_1466694_3.jpg继续的实验表明,没有一种色谱柱可有完全将这5个化合物同时分开,苯基固定相,可以分离化合物a和b,但是对c、d、e的分析很差,其它填料可以分离c、d、e,但是对a和b无能为力。通过POPLC软件优化之后的,选取了90mm长苯基柱、30mm长C18 SH2和30mm长C18 EPS 2各一段,最终得到了5中甾体化合物的同时分离。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207172109_378360_
[color=#333333] 第一,正相色谱硅胶基质填料。正相色谱柱的固定相是由硅胶和其他具有极性官能团组成的键合相填料。其物质分离特点是极性较弱组合zui先被色谱柱冲洗出来。而且正相色谱所使用的流动相其极性要低于固定相,流动相通常使用正乙烷和二氯甲烷等。[/color][color=#333333] [/color][color=#333333] 第二,反相色谱硅胶基质填料。反向色谱柱的填料是以硅胶材料为主要物质,并与极性相对较弱的官能团组成的键合相。其物质分离特点是极性较强组合zui先被色谱柱冲洗出来,而极性弱的组分则会更强的保留在柱子上。反向色谱的流动相的极性相对较强,常配制有机缓冲液作为流动相。目前较为常用的反相色谱填料有C4(B)、C8(MOS)以及C18(ODS)等。[/color][color=#333333] [/color][color=#333333] 第三,聚合物填料。这种聚合物的填料一般是由聚甲基丙酸酯或者聚苯乙烯-二乙烯基苯组成。其特点是这种色谱柱的酸碱度适用范围相对较广,且疏水性很强,但它的柱效相对于硅胶基质的填料要低一些。一般将这种大孔的基质填料用于蛋白质的分离。[/color][color=#333333] [/color][color=#333333] 第四,其他无机填料。如石墨化碳对于酸碱度和温度没用严格的限制范围,一般可对一些几何导构体进行分离。此外还有氧化铝以及氧化锆等无机填料的应用。[/color]
现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对不同类型色谱柱填料的特点有一定的认识和了解。 一、硅胶基质填料1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。2、反相色谱反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。 二、聚合物填料聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1~14均可使用。相对与硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。 三、其他无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由于HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC,氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强,应用范围受到一定的限制,所以未能广泛应用,新型氧化锆填料也可用于HPLC,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH范围1~14,温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行中。