AKATA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤很简单的,比较适合初学者。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=113913]AKATA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤[/url]
牛奶蛋白质分析仪可以用于检测乳蛋白制品。以下是详细解释和相关信息: 功能与应用:牛奶蛋白质分析仪是一种专门用于分析牛奶及其制品中蛋白质含量的仪器。它基于先进的生化分析技术,如比色法、光谱法或电化学法等,能够准确、快速地检测样品中的蛋白质含量。 乳蛋白制品的检测:乳蛋白制品,如奶粉、酸奶、奶酪等,其蛋白质含量是产品质量和营养价值的重要指标。牛奶蛋白质分析仪可以有效地检测这些乳蛋白制品中的蛋白质含量,为生产厂家提供准确的质量控制手段。 优点与特点: 准确性高:牛奶蛋白质分析仪具有高灵敏度和高准确性,能够确保测量结果的可靠性。 快速便捷:该仪器操作简单,使用方便,可以快速得出测量结果,提高检测效率。 适用范围广:除了牛奶及其制品外,还可以用于其他含蛋白质样品的检测,如豆类制品、肉制品等。 在乳品工业中的重要性:随着乳品市场的不断扩大和消费者对乳制品质量要求的提高,牛奶蛋白质分析仪在乳品工业中的重要性日益凸显。它可以帮助乳品企业提高产品质量、降低生产成本,同时为消费者提供更加安全、健康的乳制品。 综上所述,牛奶蛋白质分析仪是一种功能强大、应用广泛的检测仪器,完全可以用于检测乳蛋白制品中的蛋白质含量。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405271615421543_8284_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]
不知有谁使用过这个机器,是否能提供DU530核酸/蛋白分析仪使用说明书,谢谢!
请教一下各位:用氨基酸分析仪能检测皮革水解蛋白吗?
纳米材料与结合蛋白的纳米材料,1.在荧光光度分析上会有什么不同[em01] ?2.蛋白的包覆会影响纳米材料的荧光峰吗?3.纳米材料的结合对蛋白的荧光峰会有影响吗?谢谢
牛奶蛋白质分析仪的原理主要基于光学测量技术,特别是光谱分析法。具体地说,它采用红外光谱法来测量牛奶中乳清蛋白和酪蛋白的含量。首先,将牛奶样品制成透明薄片,然后使用近红外光电传感器和光源对其进行扫描。牛奶中的蛋白质对特定波长的红外光有特定的吸收特性,通过测量这些吸收特性,可以分析出牛奶中蛋白质的种类和含量。此外,仪器会将牛奶光谱与事先建立的标准光谱进行比较,通过复杂的算法处理,从而得出各种蛋白质形态的含量。这种比较和计算过程确保了测量结果的准确性和可靠性。总的来说,牛奶蛋白质分析仪通过光学测量和光谱分析技术,能够快速、准确地测定牛奶中蛋白质的含量和种类,为乳制品生产、质量控制和科学研究提供了有力的支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404291701212298_2595_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]
糖尿病是一种慢性病,随着经济生活水平的提高和社会老龄化的加剧,近年来患者人数在全球包括中国逐年递增,目前已严重威胁到国民的健康。对糖尿病的监测也越来越受到国家和人们的重视。作为全球公认的糖尿病检测"金标准",糖化血红蛋白(HbA1c)能够稳定可靠地反映出受检人在检测前90天到120天内的平均血糖水平,不受抽检时间、空腹与否或胰岛素等因素的干扰,经过国际临床化学和实验室医学联盟(IFCC)的技术验证和推广使用,使得糖化血红蛋白检测已成为诊断糖尿病的一种趋势。我们国家也参考国际公认的HPLC-LC-MS/MS方法,已经基本建立了自己的糖化血红蛋白检测一级参考体系。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/10/201510221629_570638_1587_3.jpg糖尿病检测方法以及主流仪器分析使用最先进的流体技术和产品,为您打造最优秀的HbA1c分析仪项目难度以及如何解决各类流路问题糖化血红蛋白(HbA1c)分析仪市场情况以及前景分析立即报名参与讲座:http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/1689
http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/09/06/A1378379551.jpg 氨基酸是蛋白质的基础组成单位,通过研究蛋白质中氨基酸的性质和组成来预测蛋白质的结构和功能,蛋白质氨基酸残基组成分析主要是通过氨基酸分析仪来完成的,本文推荐了2个基于氨基酸组成进行蛋白质预测软件。基于氨基酸组成的蛋白质预测软件根据组成蛋白质的20种氨基酸的物理和化学性质可以辨析电泳等实验中的未知蛋白质,也可以分析已知蛋白质的物化性质。ExPASy工具包包涵的程序:AACompIdent:与把氨基酸序列在SWISS-PROT库中搜索不同,AACompIdent工具利用未知蛋白的氨基酸组成去确认具有相同组成的已知蛋白。该程序分析时需提交的相关信息包括:蛋白质的氨基酸组成、等电点pI和分子量(如果知道)、正确的物种分类及特别的关键词。此外,用户还需在六种氨基酸“组合”中作出选择,这影响到分析如何进行。例如,某种“组合”会把残基Asp/Asn(D/N)和Gln/Glu(Q/E)组合成 Asx(B)和Glx(Z);或者某种残基会在分析中被完全除去。对数据库中的每一个蛋白序列,算法会对其氨基酸组成与所查询的氨基酸组成的差异打分。由电子邮件返回的结果被组织成三级列表:第一张列表中的蛋白都基于特定的物种分类而不考虑pI和分子量;第二张列表包含了不考虑物种分类、pI和分子量的全体蛋白;第三张列表中的蛋白不但基于特定物种分类,并且将 pI和分子量也考虑在内。虽然计算所得结果各不相同,但零分表明了该序列与提出的组成完全相符。AACompSim:AACompIdent的一个变种,AACompSim提供类似的分析,但与前者以实验所得的氨基酸组成为依据进行搜索不同,后者使用SWISS-PROT中的序列为依据。有报道称,氨基酸组成在物种之间是十分保守的(Cordwell等,1995),并且通过分析氨基酸的组成,研究者能从低于25%序列相似性的蛋白之间发现弱相似性(Hobohm和Sander,1995)。因此,在“传统的”数据库搜索基础上辅以组成分析,能为蛋白质之间关系提供更多见解。PROSEARCH:PROPSEARCH也提供基于氨基酸组成的蛋白质辨识功能。用144种不同的物化性质来分析蛋白质,包括分子量、巨大残基的含量、平均疏水性、平均电荷等,把查询序列的这些属性构成的“查询向量”与SWISS-PROT和PIR中预先计算好的各个已知蛋白质的属性向量进行比较。这个工具能有效的发现同一蛋白质家族的成员。可以通过Web使用这个工具,用户只需输入查询序列本身。分子量搜索(MOWSE)分子量搜索(MolecularWeightSearch,MOWSE)算法利用了通过质谱(MS)技术获得的信息。利用完整蛋白质的分子量及其被特定蛋白酶消化后产物的分子量,一种未知蛋白质能被准确无误地确认,给出由若干实验才能决定的结果。由于未知蛋白无需再全部或部分测序,这一方法显著地减少了实验时间。MOWSE的输入是一个纯文本文件,包含一张实验测定的肽段列表,分子量范围在0.7到4.0Kda之间。计算过程基于在OWL非冗余蛋白质序列库中包含的信息。打分基于在一定分子量范围内蛋白中一个片段分子量出现的次数。输出的结果是得分最佳的30个蛋白的列表,包括它们在OWL中的条目名称、相符肽段序列、和其它统计信息。模拟研究得出在使用5个或更少输入肽段分子量时,准确率为99%。该搜索服务可通过向mowse@daresburg.ac.uk发送电子邮件实现。为获得更多关于查询格式的细节信息,可以相该地址发送电子邮件,并在消息正文中写上“help”这个词。蛋白质氨基酸组成分析用盐酸在110 ℃将蛋白或多肽水解成游离的氨基酸,用氨基酸分析仪测定各氨基酸的含量。采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法,对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。仪器基本结构同普通HPLC相似,但针对氨基酸分析进行了细节优化(例如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等等)通常细分为两种系统:蛋白水解分析系统(钠盐系统)和游离氨基酸分析系统(锂盐系统),利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸,速度较快,基线平直度好;锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸,速度较慢,基线一般不如钠盐系统好。分析效果:从目前已知的氨基酸分析方法比较来看,除灵敏度(即最低检测限)比HPLC柱前衍生方法稍低以外(HPLC:0.5 pmol;氨基酸分析仪:10 pmol),其他如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等方面,都优于其他分析方法。蛋白质氨基酸残基组成分析的主要步骤包括:首先是蛋白被水解为氨基酸,其次是采用离子色谱等方法进行游离的氨基酸含量和组成的分析。总之利用蛋白可以分析氨基酸,利用氨基酸也可以研究蛋白质。
蛋白质分析仪的校准
蛋白分析系统在我们选择蛋白分析工具的时候,通常是根据不同的蛋白来选择不同的分析手段,如凝胶电泳、化学荧光染色、质谱等等。但是目前已经研制出的蛋白分析工具的种类繁多,从这一方面也在一定程度上反映了蛋白分析的复杂性。以下是一些近期推出的蛋白分析系统,希望能帮助您轻松完成研究工作。
把蛋白完全水解成氨基酸,可以在pmol到nmol水平上分离和定量。虽然氨基酸的序列信息已经无法得到,但是组成蛋白的氨基酸种类及含量信息可以得到,利用氨基酸的指纹信息可以鉴定蛋白。
最近在做几个酸性蛋白的CIEF。贝克曼的方法比较适用于中性和偏碱性的蛋白分析,对于酸性蛋白分析效果不太理想。氨水迁移法比较适合酸性蛋白,但是据说很伤柱子,做不了几个样品。讨论一下,有没有人遇到同样的问题,是怎么优化方法的呢?我尝试调整占位剂的配比,暂时也没有得到理想的结果。
哪家正在使用三菱公司生产的全氮分析仪?我们检测原淀粉的蛋白,在使用过程中遇到一些问题。请和我联系。xiaohong_wang@cornchina.com
生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用项目完成人:桑志红 蔡 耘项目完成单位:国家生物医学分析中心 随着人们对糖蛋白参与生命活动机理的日益深入了解,对天然糖蛋白及重组糖蛋白类药物的分析越来越受到重视。重组糖蛋白类药物的质量控制更是直接关系到药物的疗效及至人类的健康。九十年代以来,随着带有反射功能的基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和纳升电喷雾串联质谱(nano-ESI-Q-TOF)等具有软电离方式的现代质谱 技术的发展,质谱以其高灵敏度和强有力的分析混合物的能力,提供了生物大分子的分子量、序列、一级结构信息以及结构转换、修饰等方面的信息,使糖基化分析有了重要的进展。 通常研究糖蛋白的方法是把蛋白链上的寡糖切下来,分别研究蛋白部分和寡糖部分的结构,因此无法研究与两部分共同相关的结构问题,也不能区分不同糖基化位点上切下来的寡糖。自90年代初,国外有人开始用质谱法研究糖蛋白的结构,同时描述了各个位点的不均一性。我们用建立的现代生物质谱技术研究糖蛋白一级结构的方法,将其应用与基因重组糖蛋白的结构分析。为糖蛋白结构分析及基因重组糖蛋白类药物的质量控制提供新的手段。一、 生物质谱研究糖蛋白结构方法的建立实验所用仪器为:1.德国BRUKER 公司的REFLEXIII型基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪,N2激光器,波长337nm,线性飞行距离150cm,加速电压2kv。2.英国Micromass 公司Q-TOF型电喷雾串联质谱仪。源温80°C,气体流速40L/h,枪头电压650V,检测频率2.4S,氩气碰撞池压力6*10-5mbar。1. 基质的选择,在MALDI-TOF-MS分析中,基质起着相当重要的作用。不同的基质对不同类的物质响应不同,a-氰基-4-羟基肉桂酸用于测定糖蛋白核糖核酸酶B效果相对较好。2. 糖蛋白分子量的测定,糖蛋白核糖核酸酶B由124个氨基酸组成,在34位Asn处连有一个高甘露糖型N-糖链。由于糖链的微不均一性,与普通蛋白质及核酸不同,其分子离子峰在MALDI-TOF-MS 质谱图上表现为一簇峰,各峰之间约相差一个糖基。正是由于这种微不均一性,使得其分子离子峰变宽,灵敏度降低。糖链分子量越大,峰越宽,灵敏度越低,所以一般只有糖链较短,蛋白的质量不太大的糖蛋白才能测定其平均分子量。用MALDI-TOF可直接测定糖蛋白核糖核酸酶B的平均分子量为 15208.6Da。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/03/201103211511_284179_1604317_3.jpg3. 糖含量的测定,采用O聚糖酶及内糖苷键酶F分别作用于核糖核酸酶 B,只有内糖苷键酶F能够是其分子量发生变化,表明核糖核酸酶B分子中不存在O-连接糖链存在着N-连接糖链。内糖苷键酶F切断N-糖链五糖核心最内侧的GlcNAc-GlcNAc糖苷键,得到含一个GlcNAc的肽链,减去GlcNAc,可以计算出准确的肽链分子量T=13695.6,与糖蛋白平均分子量之差为糖链的平均分子量G=1513.4,平均糖含量为:(糖链大小/糖蛋白分子量)×100%=9.95%。4. 糖基化位点的确定,研究糖基化类型及糖基化位点的策略:采用蛋白酶酶解与糖苷内切酶酶解相结合的方法,通过酶切前后含糖肽片的位移,结合网上数据库检索,可以确定糖基化类型和糖基化位点。以不同类型的糖苷内切酶作用于糖蛋白(N-糖苷键酶或O-糖苷键酶),在MALDITOF-MS 上观察其质量的变化,可以直接确定糖蛋白中是否含有响应类型的糖链,这是我们确定糖蛋白中糖苷键类型的基础。我们采用先将核糖核酸酶B还原烷基化,加Glu-C酶切,产物再用内糖苷肩酶F酶切,可观察到含糖肽段出现位移,将核糖核酸酶B的肽质量指纹图进行数据库检索,证实发生位移的肽段中含有N-糖链特异连接位点,由此确定34位Asn为糖基化位点。另外我们采用内糖苷键酶F及肽-N-聚糖酶F两种酶进行差位酶切法对含糖肽段进行验证,两种酶酶切后分子离子峰的差值除以GlcNAc的质量,结果就是N-糖基化位点的个数5. 质谱测定氨基酸序列, 我们对核糖核酸酶B肽质量指纹谱中的含糖肽段进行了串联质谱测定,首先在一级质谱图中选择离子4972.23,在串联质谱的碰撞活化室以氩气与其碰撞产生碎片,从碎片的质荷比推算出此肽片中的一段氨基酸序列,检索结果为核糖核酸酶B,从而判断其理论序列是否一致。6. 糖链结构的研究,凝集素对糖肽的亲和提取,进一步分析糖肽序列及糖链结构的关键是含糖肽段的提取。核糖核酸酶B中糖链为高甘露糖型,我们选用对其有特异性吸附的伴刀豆球蛋白对其进行提取利用这种简捷的亲和质谱的方法,对糖肽段进行了分析。建立了亲和质谱分析糖肽类物质的方法,为今后糖肽序列分析及糖链结构分析奠定了基础。二、基因重组糖蛋白人促红细胞生成素(rhEPO)的结构分析。 利用以上建立的方法,我们对样品重组人促红细胞生成素进行了分析,断定此样品为非完全糖基化,样品中只存在N-连接的糖链,无O-糖链。应用酶切法用肽-N-聚糖酶处理后,得到两个含糖肽段,进行数据库检索,测得38位及83位为N-糖基化位点,与文献报道相符,结果可靠。因此,该项课
维纶基牛奶蛋白纤维和维纶基大豆蛋白纤维定性分析的研究维纶基大豆蛋白纤维是迄今为止我国获得的唯一完全知识产权的纤维发明,在纺织行业得到了快递的发展,广泛的应用,但与维纶基大豆蛋白纤维一样由我国企业自主研发的维纶基牛奶蛋白纤维也申请到专利好几年了,但迟迟没有相关标准的出台,使这一我国自主研发的新型纤维得不到有效利用新型纤维的不断推出,为我们提供了更多的纤维原料,但同时由于国家标准的相对滞后,给检测工作者带来了很大的难题,下面就目前市场上两种新型蛋白复合纤维给予试验,进行定性分析。主要原理是在观察了维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维显微结构和燃烧性状后,研究两者在常用化学试剂中的溶解性。试验结果表明,维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维在88%甲酸和浓硝酸中都能够部分溶解;在沸腾水浴中,维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维能够完全溶解于75%硫酸和98%硫酸牛奶蛋白纤维是再生蛋白质纤维,是以牛奶为原料经脱水、脱脂、分离、纯化、浓缩制成牛奶酪蛋白,与高分子化合物共混、共聚制成纺丝液,再经湿法纺丝而成;牛奶酪蛋白与聚乙烯醇制得的纤维称为维纶基牛奶蛋白纤维;牛奶酪蛋白与纤维素共聚制得粘胶基牛奶蛋白纤维。牛奶蛋白纤维含有多种氨基酸,具有良好的亲肤性和吸湿导湿性,抗菌防蛀,服用性强,受到消费者的青睐。维纶基牛奶蛋白纤维呈浅黄色,是由牛奶酪蛋白和聚乙烯醇大分子共混、共聚、醛化、揉和、脱泡,湿法纺成的纤维,克服了合成纤维吸湿性差和天然纤维强度低的不足,其比电阻介于天然纤维和合成纤维之间,吸湿性也优于聚乙烯醇纤维,在直接染料、弱酸性染料、活性染料和中性染料中都有良好的上染能力。本文在观察维纶基牛奶蛋白纤维和维纶基大豆蛋白纤维显微结构和燃烧性状后,研究两者在常用化学试剂中的溶解性,为纤维检测提供参数。大豆蛋白纤维属于再生植物蛋白纤维类,是以榨过油的大豆豆粕为原料,利用生物工程技术,提取出豆粕中的球蛋白,通过添加功能性助剂,与腈基、羟基等高聚物接枝、共聚、共混,制成一定浓度的蛋白质纺丝液,改变蛋白质空间结构,经湿法纺丝而成. 其有着羊绒般的柔软手感,蚕丝般的柔和光泽,棉的保暖性和良好的亲肤性等优良性能,还有明显的抑菌功能,被誉为“新世纪的健康舒适纤维”。大豆纤维是以脱去油脂的大豆豆粕作原料,提取植物球蛋白经合成后制成的新型再生植物蛋白纤维,是由我国纺织科技工作者自主开发,并在国际上率先实现了工业化生产的高新技术,也是迄今为止我国获得的唯一完全知识产权的纤维发明。1 试验1. 1试验材料、仪器和试剂纤维细度成分显微分析仪,万分之一电子天平;SHA-C水浴振荡器;鼓风恒温烘箱; 索氏萃取器;酒精灯;具塞三角瓶若干。甲酸(88%);硫酸(75%);浓硫酸(98%);浓硝酸;1MOL/L次氯酸钠溶液;石油醚(馏程为40℃~60℃)。1.2试验方法显微结构试验:用纤维细度成分显微分析仪观察纤维的显微结构。 以下试验维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维同一方法分别做一次燃烧性状试验:点燃酒精灯,用镊子夹取10mg左右纤维束,徐徐靠近火焰,观察试样对热的反应情况。将纤维移入火焰,观察纤维的燃烧情况;然后离开火焰,观察纤维的燃烧情况,并用鼻子闻试样燃烧刚熄灭的气味。最后,待试样熄灭冷却,观察残留物灰分的状态。预处理:取纤维5g左右,用定量滤纸包好,置于索氏萃取器中,用石油醚萃取1h,每小时至少循环6次,待试样中的石油醚挥发后,把试样浸入冷水中浸泡1h,再在(65±5)℃的水中浸泡1h,浸泡过程中时时搅拌。水(mL)与试样(g)之比为100:1。然后抽吸脱水,晾干。溶解性试验:准确称取试样1g置于具塞三角瓶中,加入100mL化学试剂,在搅拌条件下观察不同温度下纤维和试剂随时间的变化情况。待一定时间后,洗涤,抽吸排液,烘干。2 试验结果2.1显微结构在显微镜下观察维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维的横截面呈腰圆形或哑铃形,纵向有沟槽,两种纤维在显微镜下几乎无差别,无法区分这两种纤维。2.2燃烧性状维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维靠近火焰时现象都是熔融并卷曲;进入火焰,熔融、卷曲并燃烧;离开火焰,燃烧,有时会自然熄灭。燃烧过程中散发出蛋白质燃烧时所特有的臭味。纤维燃烧的一端形成黑褐色硬块。两种纤维在燃烧情况下,火焰颜色,气味几乎无差别,无法区分这两种纤维。2.3溶解性取维纶基牛奶蛋白纤维与和维纶基大豆蛋白纤维分别置于88%甲酸、75%硫酸、浓硫酸、浓硝酸和1MOL/L次氯酸钠溶液中进行溶解性试验, 品名/溶液88%甲酸[/ali
大家好,氨基酸分析仪与蛋白质测序仪有主要区别在什么地方呢?目前实验室需要进行氨基酸的测序分析,究竟买一台蛋白质测序仪好呢,还是氨基酸分析仪好呢?价格大概有多少呢?这些仪器有没有国产的呢 QQ:2392795357
褚福亮,王福生, 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室 北京市 100039项目负责人 王福生, 100039 ,北京市丰台路26号, 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室. fswang@public.bta.net.cn电话:010-66933332 传真:010-63831870收稿日期 2002-08-15 接受日期 2002-09-03摘要新近广泛应用蛋白质芯片(ProteinChipâ Array)系统成功鉴定出了一些重要疾病(如肿瘤和危害性较大的传染病)新的、特异性的生物标记(biomarkers),后者不仅在生物医学的基础方面具有重要的科学价值,而且在临床疾病的诊断、治疗和预防发挥重要的指导作用,显示了良好的发展前景.本文就表面增强的激光解析电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)相关的原理、特点、在临床和基础研究中的应用新进展和未来的发展趋势做一综述.此外,我们就蛋白质谱分析技术在病毒性肝炎、肝硬化和肝癌等一系列肝病方面的应用策略和前景进行了分析.褚福亮,王福生. 蛋白质谱分析方法特点及其在蛋白组学研究领域中的应用.世界华人消化杂志 2002 10(12):1431-14350 引言人类基因组计划已经进入后基因组时代-即功能基因组时代[1],作为基因功能的直接体现者-蛋白质,及其之间的相互作用越来越引起基础和临床科学家们的关注[2-6] .因为要彻底了解生命的本质,只把基因测出来还是不够的,还必须要了解其在生物生长、发育、衰老和整个生命过程中的功能、不同蛋白质之间的相互作用以及他们与疾病发生、发展和转化的规律[7-14] .正因为如此,有关上述问题的蛋白质组学研究成了今天生命科学最重要的焦点之一[15] .为了阐明蛋白质在上述生命现象中的作用和相关机制,人们设计了许多新的方法技术,如:二维电泳、质谱分析、微距阵列、酵母双杂交和噬菌体展示等,这些方法在一些特定的情况下,虽然显示出了他们各自不同的优点,但是同样也存在着较大的局限性,难以开展大规模、超微量、高通量、全自动筛选蛋白质等方面的分析,因而设计更全面、同时研究多种蛋白质相互作用的技术,在功能基因组和蛋白组学的研究中建立一个更有效的技术平台,成为本领域中优先关注的问题[16] .近来,美国Ciphergen(赛弗吉)公司研制的ProteinChipâ Array的仪器,并建立了一种新的蛋白质飞行质谱-表面增强的激光解析离子化-飞行时间-质谱(surface-enhanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra, SELDI-TOF-MS),已取得可喜的进展,筛选出了许多与疾病相关的新型生物标志,不仅为临床疾病的诊断和治疗等提供了新的选择,而且在基础科学、新药研制和疾病预防等方面具有广泛的应用前景[16-18] .本文就SELDI-TOF-MS相关的原理、特点、在临床和基础研究中的应用新进展和未来的发展趋势做一综述.1 ProteinChipâ Array系统和SELDI-TOF-MS的特点1.1 蛋白质芯片系统的组成和原理 蛋白质芯片系统由三部分组成:蛋白质芯片、芯片阅读器和芯片软件.供研究用芯片上有6-10芯池,不同的芯片表面上的化学物质不同,芯片表面分为两大类:一类为化学类表面,包括经典的色谱分析表面,如:结合普通蛋白质的正相表面,用于反相捕获的疏水表面,阴阳离子交换表面和捕获金属结合蛋白的静态金属亲合捕获表面;另一类称为生物类,特定的蛋白质共价结合于预先活化的表面阵列,可以用来研究传统的抗体一抗原反应,DNA和蛋白质作用,受体、配体作用和其他的一些分子之间的相互作用[19] . 根据检测目的不同,可以选用不同的芯片,或者自己设计芯片.将样本和对照点到芯池上以后,经过一段时间的结合反应,用缓冲液或水洗去一些不结合的非特异分子,再加上能量吸收分子(energy absorbing molelule,EAM)溶液,使样本固定在芯片表面.当溶液干燥后,一个含有分析物和大量能量吸收分子“晶体”就形成了.能量吸收分子对于电离来说非常重要.经过以上步骤,就可经把芯片放到芯片阅读器中进行质谱分析. 在阅读器的固定激光束下,芯片上、下移动,使样本上每一个特定点都被“读”到.激光束的每一次闪光释放的能量都聚集在该区一个非常小的点上(focused laser beam,聚焦激光束).这样,每个区都含有丰富的,可寻址(addressable)的位置.蛋白质芯片处理软件精确控制激光寻读过程.当样本受到激发,就开始电离和解除吸附.不同质量的带电离子在电场中飞行的时间长短不同,计算检测到的不同时间,就可以得出质量电荷比,把他输入电脑,形成图像[19].Ball et al [20]采用一种称为人工神经网络(artifical neural network,ANN)的算法处理出现的成千上万的峰,鉴定出三个分子量为13 454、13 457和14 278的生物标记分子,使疾病预测率达到97.1 %.1.2 ProteinChipâ Array芯片和SELDI-TOF-MS的特点 新型蛋白芯片与以往的蛋白芯片不同之处:SELDI-TOF-MS,他是在MALDI(matrix-assisted laser desorption/inionation)[21,22]基础上,改进后实行表面增强的飞行质谱.SELDI-TOF-MS优于MALDI-TOF表现为他不会破坏蛋白质,或使样本与可溶的基质共结晶来产生质谱信号.对SELDI-TOF来说,可以直接将血清、尿液、组织抽取物等不需处理直接点样检测[40] 由于一部分非特异结合的分析物被洗去,因而出现的质峰非常一致,有利于后期分析[23,24] . 与二维电泳相比:二维电泳分析蛋白质的分子量在30 KDa以上时电泳图谱较清楚,对在组织抽提物中占很大比例的低丰度的蛋白质不能被检出;其次,二维电泳胶上的蛋白质斑点很大一部分包含一种以上的蛋白质;而且,二维电泳耗时长,工作量大,对象染色转移等技术要求高,不能完全实现自动化.而SELDI-TOF在200 Da-500 KDa区间都可以给出很好的质谱,对一个样本的分析在几十分钟内就可以完成[19],处理的信息量远远大于二维电泳;对于低丰度物质,即使浓度仅attomole(10-18)的分子,只要与表面探针结合,就可以检测到,这也是二维电泳所不具备的[24,25] . 对于微距阵蛋白芯片来说,需要一种不破坏折叠的蛋白质构象的固定技术,再与另外的蛋白质反应,经检测莹光来观察蛋白质之间的作用[26] .而基于SELDI-TOF-MS的ProteinChip分析蛋白质不需溶解、不需染色、廉价、针对性强. 因而蛋白质芯片仪具有以下优势:(1)可直接使用粗样本,如:血清、尿液、细胞抽提物等[27] .(2)使大规模、超微量、高通量、全自动筛选蛋白质成为可能;(3)他不仅可发现一种蛋白质或生物标记分子,而且还可以发现不同的多种方式的组合蛋白质谱,可能与某种疾病有关[28] (4)推动基因组学发展,验证基因组学方面的变化,基于蛋白质特点发现新的基因.可以推测疾病状态下,基因启动何以与正常状态下不同,受到那些因素的影响,从而跟踪基因的变化[2,14,15] . 其存在的问题:对于不同的样本,根据检测的目标采取或者设计几种芯片,理论上可以把所有的相同性质蛋白质捕获,但是实际上仍有少量的分子没与表面探针结合.使用SELDI-TOF-MS,仅能给出蛋白质的分子量,不能给出C端、N端的序列,也没法知道蛋白质的构型,因此需要将蛋白质充分纯化后,用蛋白酶消化芯片上的蛋白质,分析肽段,再用生物信息学方法鉴定蛋白质序列[18,24] .另外,在国内,该芯片费用较高,分析质谱需要大量后续工作支持.
牛奶蛋白质分析仪是一种专业的检测设备,主要用于对牛奶中的蛋白质进行快速、准确地分析。该仪器在乳制品行业中发挥着重要的作用,能够帮助消费者了解牛奶的质量和营养成分,同时也能为乳制品生产企业提供科学的指导,优化生产工艺,提高产品质量。 牛奶蛋白质分析仪的工作原理主要基于光谱分析技术,通过测量牛奶中蛋白质对特定波长光线的吸收来计算蛋白质的含量。该仪器具有操作简便、快速、准确等特点,可广泛应用于各类乳制品的生产、加工、质检等领域。 具体来说,牛奶蛋白质分析仪在乳制品生产线上具有以下应用: 原料奶检测:确保原料乳的质量符合生产要求,通过快速检测原料奶中蛋白质的含量,确保生产过程中的原料质量稳定。 加工过程控制:实时监测加工过程中蛋白质的变化情况,指导生产商及时调整工艺参数,确保产品品质。 产品质量检验:质检部门和乳制品企业可以利用牛奶蛋白质分析仪对市场上的乳制品进行抽检,判断其蛋白质含量是否符合国家标准。这有助于打击假冒伪劣产品,保障消费者的合法权益。 此外,牛奶蛋白质分析仪还可以检测牛奶中的其他营养成分,如脂肪、糖等,从而全面评估牛奶的营养价值。通过使用这种仪器,乳制品企业可以及时发现并解决生产过程中的问题,提高产品的竞争力,并保障食品安全。 总之,牛奶蛋白质分析仪是乳制品行业中不可或缺的重要检测工具,其在保障产品质量和消费者健康方面发挥着重要作用。如需更多信息,可以访问牛奶蛋白质分析仪生产厂商官网或咨询乳制品行业专家。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404291700285525_1260_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]
采用CEX分析蛋白电荷异质性,与主峰的相对保留时间差十分钟左右的是酸性或碱性峰么?通常情况下是不是酸性峰中性峰碱性峰三者挨着?谢谢
求购 质谱分析的蛋白标准品,MALDI-TOF-MS上用的。 分子量在400--30000da 的或者接近这个质量范围的,如有请联系我。直接给我这个留言就可以,谢谢!
维纶基牛奶蛋白纤维和维纶基大豆蛋白纤维定性分析的方法研究 维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维都是由聚乙烯醇和蛋白共混制得,所以化学性质及其相似,一直以来由于维纶基牛奶蛋白纤维没有相关的检测方法,检测机构对维纶基牛奶蛋白纤维出具的检测报告都是维纶基大豆蛋白纤维 维纶基大豆蛋白纤维的成分定量分析方法是先用次氯酸钠溶液溶解掉蛋白质,然后用盐酸溶解聚乙烯醇,同样维纶基牛奶蛋白纤维也是可以用这种方法进行溶解,下面看看常规的检测方法能不能分析出这两种纤维1.维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维,其纤维成分定性的基本方法:①.显微镜法: 在显微镜下观察维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维的横截面呈腰圆形或哑铃形,纵向有沟槽;②.燃烧: 维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维靠近火焰时现象都是熔融并卷曲;进入火焰,熔融、卷曲并燃烧;离开火焰,燃烧,有时会自然熄灭。燃烧过程中散发出蛋白质燃烧时所特有的臭味;③.溶解法:共同的维纶基,加上都是蛋白质,化学性质非常接近,在75%硫酸、浓硫酸、浓硝酸和0.1MOL/L次氯酸钠溶液中,溶解现象和状态都是一样的,都无法将两者定性2.个人通过研究和分析认为,只有通过两者氨基酸的组分不同进行定性,从而确定纤维牛奶中氨基酸的组成表”取自《乳与乳制品的生理功能特征》一书。“大豆蛋白质的氨基酸组成表”取自《大豆制品工艺学》一书。大豆蛋白质的氨基酸组成可以参考“全酸沉淀蛋白”的氨基酸组成,做为比较的依据。因为大豆蛋白纤维使用的是大豆分离蛋白,即是酸沉蛋白。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309121130_463904_2154459_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309121130_463905_2154459_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309121130_463907_2154459_3.jpg3.维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维的通过测其氨基酸的组成不同,可以定性出大豆蛋白与牛奶蛋白,如果是大豆蛋白复合纤维,然后用GB/T2910.101-2009大豆蛋白复合纤维和其他纤维的混合物-定量化学分析进行测试。完全溶解,则为维纶基大豆蛋白纤维,如果是维纶基牛奶蛋白纤维,也可以用此方法进行定量法定性,相关详细步鄹如下:3.1 试验3.1.1试验材料、仪器和试剂万分之一电子天平;SHA-B水浴振荡器;鼓风恒温烘箱;索氏萃取器,离心机,具塞三角瓶,1MOL/L次氯酸钠溶液,氢氧化钠,20%盐酸溶液等3.1.2目前行业内认为定性牛奶蛋白纤维的最好方法:牛奶蛋白纤维在2.5%NaOH 溶液下,100℃恒温加热30分钟,即可出现牛奶蛋白特有的现象。状态:在整个溶解的过程下,纤维体积膨胀渐呈冻胶状,颜色会从本色逐渐变成深红色,然后再有深红色褪色至浅黄色。此方法经试验,并不是所有的牛奶蛋白复合纤维都出现此特有现象,有时不是很明显,只能作为判断的一种辅助方法,不能作为定性的标准方法。3.1.3在显微镜下观察牛奶蛋白复合纤维或大豆蛋白复合纤维,能确定是其中的一种,然后用1MOL/L次氯酸钠溶液,常温下振荡溶解30分钟,此时,蛋白全部溶解,剩余纤维抽滤,冲洗干净,取少量纤维在显微镜下查看,初步判定为聚乙烯醇,然后燃烧,根据味道和燃烧现象,确定其为维纶基蛋白纤维3.2需要确定蛋白质纤维为何种纤维,经初步试验分析,常规方法无法准确定性,下面是维纶基牛奶纤维的专利拥有者在相关国家检测机构取得的检测报告http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309121131_463909_2154459_3.jpg以上报告可能确定是维纶和牛奶蛋白复合,但其报告检测依据个人不是特别认同,也咨询过相关人员,没有给予明确答复,检测的具体方法没有明确,国家并没有发布相关的检测标准,不能作为判断纤维的依据,所以目前情况下仍然不能使该纤维大面积推广使用。3.3个人认为,只有通过两者氨基酸的组分不同进
RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同(如复合物不需要固定,RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等等)。RIP技术下游结合microarray技术被称为RIP-Chip,帮助我们更高通量地了解癌症以及其它疾病整体水平的RNA变化。Millipore基于磁珠的RIP实验流程RIP 实验基本原理:1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。2. 防止非特异性的RNA的结合。3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。4.结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。延伸阅读:95%的人类基因组并不编码基因,而是产生大量的非编码RNA,真正编码蛋白质的基因只占人类总基因组的约2%。这些非编码RNA在生命的生长发育的各个阶段都发挥着重要的调节作用,与艾滋病、白血病、糖尿病、畸形等多种病变密切相关,并且参与着干细胞和表观遗传学调控。而RNA-蛋白复合物驱动了几乎所有细胞过程的基因表达的转录后调控,包括剪接(splicing)、出核转运(nuclear export)、mRNA 稳定性以及蛋白转译过程,因此,对基因调控的了解就有赖于确定这些过程中RNA的结合的变化。因此,RNA研究也被越来越多的科学家重视起来,目前已经成为生命科学研究中一个炙手可热的领域,而RIP技术也逐渐成为RNA研究领域的一项常规方法,帮助我们了解越来越受关注的转录后调控网络。
目的要求(1)了解克隆基因表达的方法和意义。(2)了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。实验原理克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理,同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统,其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统,表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。本实验中,携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在 37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属熬合亲和层析(MCAC)。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。试剂和器材一、试剂 LB液体培养基:Trytone 10g, yeast extract 5g, NaCl 10g, 用蒸馏水配至1000mL. 氨苄青霉素:100mg/mL 上样缓冲液:100 mM NaH2PO4, 10 mMTris, 8M Urea, 10 mM2-ME, pH8.0 Washing Buffer:100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8 M Urea, pH6.3 Elution Buffer:100 mM NaH2PO4, 10 mMTris, 8M Urea, 500 mM Imidazole, pH8.0 IPTG二、器材摇床,离心机,层析柱(1′10 cm)操作方法一、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导1. 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白的大肠杆菌BL21菌株于5mL LB液体培养基中(含100ug/mL 氨苄青霉素),37℃震荡培养过夜。2. 转接1mL过夜培养物于100mL(含100ug/mL 氨苄青霉素)LB液体培养基中,37℃震荡培养至OD600 = 0.6 - 0.8。取10ul 样品用于SDS-PAGE 分析。3. 加入IPTG至终浓度0.5 mmol/l, 37℃继续培养1-3h.4. 12,000rpm 离心10 min, 弃上清,菌体沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。二、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的分离、纯化1. NTA层析柱的准备:在层析柱中加入1mL NTA介质,并分别用8mL 去离子水,8mL上样缓冲液洗涤。2. 重组蛋白的变性裂解:在冰浴中冻融菌体沉淀,加入5mL上样缓冲液, 用吸管抽吸重悬,超声波破裂菌体,用振荡器等轻柔的混匀样品60min, 4℃ 12000rpm 离心 30 min, 将上清吸至一个干净的容器中,并弃沉淀。取10ul 上清样品用于SDS-PAGE 分析。3. 上清样品以10-15mL/h 流速上Ni2+-NTA柱,收集流出液,取10ul样品用于SDS-PAGE 分析。4. 洗脱杂蛋白:用Washing Buffer以10-15mL/h流速洗柱,直至OD280 = 0.01.分步收集洗脱液,约3-4h,取10ul洗脱开始时的样品用于SDS-PAGE 分析。5. 洗脱目标蛋白:用Elution Buffer洗柱,收集每1 mL 级分,分别取10ul样品用于SDS-PAGE 分析。
RT 咨询 迪马科技的蛋白分析柱子http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09501.gif最近想做蛋白的液相http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09502.gif能否推荐一款柱子呢保护柱 也说一下吧http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09505.gif我们是重组的胶原蛋白 蛋白的分子量在9万7左右 http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif想要柱子的范围在20万内 官人能不能推荐一款柱子 http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/emyc1010.gif
我的硕士研究课题是乳制品中非乳蛋白的检测,主要针对于研究植物水解蛋白和动物水解蛋白,想请教有谁做过皮革,羽毛等动物水解蛋白的蛋白质成分分析,这方面的文献很少,希望得到大家的帮忙!正在焦急中[em30] [em06] [em53]
求分析小分子蛋白(分子量5000左右)用的常用内标。谢谢各位先![em61]
请教一下该图为一角蛋白材料,请问能分析出有哪些氨基酸成分吗?根据文献内应含约17种,请问应如何分析?能否定量测出各种氨基酸含量?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/10/201210230158_398636_2032315_3.jpg
[font=宋体] 近年来,由于电子技术和电化学试纸技术的进步,国产POCT(Point of care test,即时检验,又称床边检验)仪器品种上市增多,血红蛋白浓度也可以方便地在家中用便携式仪器进行测量了,对于贫血病患者来说是一个福音。本文拆解优利特一款便携式血红蛋白分析仪,解析电路结构,为正确使用和维修提供帮助。[/font][font=宋体][b]一、仪器基本情况[/b] 广西桂林优利特医疗电子有限公司生产,型号URIT-12。直接显示人体内血红蛋白含量和血细胞压积,可快速完成检测。无需手动校正,不同批号试纸只需插入该试纸CODE卡,仪器自动更换代码。[/font][font=宋体]下图检测窗口的绿光,是内部520nm高亮LED发出的检测光:[/font][font=宋体][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010906317330_1037_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img] [/font][font=宋体]检测时的照片:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010907136257_5413_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]取出试纸片,背面的反应色块上是[/font][font=宋体][back=white]棕红色的反应物氰化高铁血红蛋白:[/back][/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010907341079_4231_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][b]二、仪器测量原理[/b][align=left][font=宋体] 仪器与专用试纸条配套使用,通过测量试纸条反射光强度,定量检测血液中血红蛋白([/font]HGB[font=宋体])浓度。其原理是:一次性试纸条上的化学品涂层中含有溶胞剂及反应化学物质,当被测指尖血滴到试纸上,溶胞剂破解红细胞后,反应物质与其中的血红蛋白发生反应,试纸颜色发生变化。试纸颜色变化深浅与血红蛋白浓度相关,在波长[/font]520nm LED[font=宋体]照射下,用硅光电池测量试纸条反应终点的反光强度,经[/font]MCU[font=宋体]数据处理后,显示为血红蛋白浓度值。[/font][/align][font=宋体] 试纸条上[/font][font=宋体]反应色块的[/font][font=宋体]主要反应物质:高铁氰化钾,表面活性剂曲拉通。曲拉通起到[/font][font=宋体]溶胞剂作用,让血红蛋白从红细胞中释放出来,与[/font][font=宋体]高铁氰化钾反应生成[/font][font=宋体][back=white]氰化高铁血红蛋白(棕红色),它是一种非常稳定的血红蛋白衍生物,血液中的各种血红蛋白成分均能被转化,其吸收峰为540nm左右。[/back][/font][font=宋体][b]三、拆机[/b][/font][font=宋体]取下仪器下面盖板,看见内部的“SET”键和PD(检测器):[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010912540877_8931_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]PD上面有一小块红外截止滤镜(泛红光),防红外干扰。旁边的小圆孔内是520nm高亮LED,工作时发出检测光:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010913209777_4784_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]仪器背面,有工厂出厂商标:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010915071431_3168_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]卸下电池盖,装有两枚日本原产maxell CR2032锂电池,电量高,比较耐用:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010915308198_5689_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]拆开试纸代码卡,内部只有一枚芯片:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010915529522_2600_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]芯片型号24C02,是I2C接口串行E2PROM存储芯片,内部写有试纸批号数据,供仪器自动校正使用:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010916176537_8204_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]仪器是卡口结构,用小刀拨开,取出电路板:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010916458952_4776_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010917212870_868_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010917475022_3461_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]电路板侧面的通讯孔、试纸代码插槽:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010918147194_539_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]电路板上元件分布,由于采用了MCU,元件不多,比较简洁:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010918440117_8499_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体][b]四、主要电子元件及功能[/b][/font][font=宋体]下面电路板上,U1是TI(美国德州仪器)公司的2432C,E2PROM存储芯片,存储试纸数据或检测结果,供MCU分析计算用或查询以往检测结果。U4是[color=black][back=white]TI [/back][/color]公司[color=black][back=white]贴片模数转换芯片[/back][/color]D571[color=black][back=white],[/back][/color][color=black][back=white]封装SOT23-6,将光电池输出的模拟电信号转变为数字信号,送入MCU[/back][/color]分析计算用。[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010919491011_8981_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]下面电路板上,U2是TI(美国德州仪器)公司的[color=black][back=white]M430FE427[/back][/color][color=black][back=white]微控制芯片(MCU),封装[/back][/color][color=#333333][back=white]TQFP-64[/back][/color][color=#333333][back=white],是主控芯片,内置本机程序及液晶显示屏驱动。[/back][/color]U3-ADNN是电源管理芯片。CRYSTA EAMD是晶振,为MCU提供时钟基准。[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010920361712_1183_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]卸下电路板与液晶面板固定螺丝,将二者分离开:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010921135797_2257_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]这一面没有元件,LCD与电路板用导电橡胶条连接:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010922114891_9083_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]红外截止滤镜片嵌在塑料板上,旁边的小圆孔是LED导光孔:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010923114231_1077_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]看见光源520nm高亮LED及PD(硅光电池检测器)的真面目:[/font][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010923331469_1690_1807987_3.jpg!w690x517.jpg[/img][font=宋体]该机电路原理框图如下:[/font][img=,690,394]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308010924008044_1154_1807987_3.png!w690x394.jpg[/img][font=宋体][b]仪器电路工作原理:[/b]开机前,插入试纸代码卡,按下开关键,仪器自动读取代码卡中的信息并向机器内部传输数据,屏幕显示代码值(应与试纸筒上的代码一致),然后自动关机,取下代码卡。再次按下开关键,根据屏幕提示,插入试纸片,仪器读取试纸片反应色块的白底后,判断为有效试纸,待屏幕出现滴血提示,取指尖血滴入试纸反应区,几秒钟后,待试纸反应区生成[/font][font=宋体][back=white]氰化高铁血红蛋白(棕红色),MCU发出读取检测头数据指令,520nm高亮LED对试纸反应色块发出闪烁光,试纸反应色块的反射光被PD(硅光电池检测器)接受,其电信号经模数转换后,送入MCU进行分析计算,结果由LCD液晶显示屏显示出来。其余按键用于查阅以前检测结果和进行时间、亮度等参数设置。[/back][/font][font=宋体][b]结束语:[/b]通过拆解,了解到[/font][font=宋体]该仪器属于单光束分光光度计。检测器(PD)采用硅光电池,光源采用[/font]520nm [font=宋体]高亮[/font][font=宋体]LED[/font][font=宋体],为固定波长吸光度测量方式。如果采用最新的[/font][font=宋体]智能光敏传感器[/font][font=宋体],[/font][font=宋体]在一块芯片上集成信号调理、模数转换、跨导运放等电路,[/font][font=宋体]会进一步简化电路,[/font][font=宋体]使仪器精度及可靠性大大提高,缩小与进口仪器的差距,性价比会得到进一步提升。[/font][font=宋体]用过的试纸片不能乱丢,应妥善处置。避免老人、小孩接触玩耍受到污染。[/font][font=宋体](由于不是厂家设计人员,难免没有错误,欢迎指正。)[/font]
[摘要] 质谱对于现代蛋白质化学研究是一项重要的技术。也可用于蛋白组分析,在同一时间监控上千种蛋白的表达情况。首先蛋白质混合物可以用双向凝胶电泳分开,再用质谱及随后的蛋白质数据库检索对单个蛋白进行鉴定和分析。最近几年,质谱领域取得了令人鼓舞的进展,使得全自动、高通量的蛋白检测成为可能。质谱也可以用来分析蛋白的转录后调节以及研究蛋白质复合体。本文将介绍目前蛋白组研究中质谱方法的应用并对其优缺点进行讨论。关键词: 质谱;二维电泳(2-DE);蛋白组分析MALDI-TOF1 前 言蛋白组学是研究生物特定组织或细胞内表达的所有蛋白质成分,蛋白质组的一门学科。蛋白组分析一般是用双向凝胶电泳(2-DE),质谱(MS)以及数据检索来完成。2-DE要回顾到20世纪70年代初[1],但是用质谱技术对蛋白质进行鉴定和分析是在近十年内才成为可能。其中最重要的一个原因是新的软离子技术即基质辅助激光解析电离(MALDI)[2]和电喷雾电离(ESI)[3,4]技术的发展和应用,以及样本制备技术和质谱仪的发展等。从数据库中获得成指数上升的序列信息也促进了质谱技术的发展。跟转录组学中的全自动DNA微阵列技术相比,蛋白组分析需要更多的手工操作,尤其在2-DE上会出现很多问题[5,6]。尽管存在很多困难,蛋白组学的重要性还是公认的。DNA微阵列技术是建立在对mRNA稳定水平的检测上,然而蛋白组学研究的对象是细胞中最活跃的因子——蛋白质。最近有研究证明,mRNA的表达和蛋白的水平并非具有相关性[7,8]。蛋白质有转录后修饰过程,并会以不同的形式出现。而这些修饰过程是相应的DNA测序技术所不能预测的。质谱技术在蛋白质修饰分析过程中具有重要的作用。2 质谱对蛋白质的检测质谱仪是由离子源,质量分析,离子检测器,以及数据检索等单元组成。首先,被分析的分子在离子源中被离子化,然后在质量分析器里根据不同的质荷比分开,再对分开的离子进行检测。随着MALDI和EIS的出现,质谱技术已经广泛用来分析蛋白质。质量分析器有很多种,最常用的方法是将飞行时间检测器(TOF)与MALDI或三级四级串联质谱仪联用,或者将四级杆-TOF,离子阱等连接到ESI上。蛋白组分析中,可以用两种不同的方法检测电泳分离后的单个蛋白质。最简单的方法叫做肽指纹谱测定(PMF)[9~13]。这个方法是用特殊的酶对2-DE分离后的蛋白质点进行降解,产生的肽从凝胶中分离出来后再用质谱分析和检测肽的分子量。数据库检测能够产生所有蛋白质理论上的PMF,把它们和质谱分析所获得的肽片进行比较就可以得出结果。第二种方法是在质谱仪中把凝胶分离后的肽分解成片段,产生局部的氨基酸序列(序列标签)。那么就可以用分子量或者序列信息进行数据库检索[14,15]。PMF一般用MALDI-TOF来实现,序列标签可以用串联质谱技术MS-MS进行检测[16~18]。用质谱检测蛋白的灵敏性可以精确到飞摩的水平,甚至已有报道其精确度可以达到阿摩水平[19]。3 用MALDI-TOF进行肽指纹谱分析凝胶分离后的蛋白质鉴定以及肽指纹谱分析是目前质谱实验室常规使用的方法。在进行MALDI分析之前需要最优化的凝胶上消化[20~22]和脱盐过程。胰岛素是最常用的凝胶消化酶,因为它在赖氨酸和精氨酸位点能够特异性切割蛋白质,产生分子量在600~2500Da之间的小分子肽,并能够从凝胶上有效的分离出来。MALDI-TOF是质谱技术中相对简单并很容易使用的一种方式,对样本中的盐和其他污染物有很高的耐受性,这点优于ESI。提取的肽片混合物中较小的片段可以直接沉积在靶板上做PMF分析,剩下的样本可以储存起来作为以后的ESI-MS分析。如果经凝胶分离后所有的肽全用来做MALDI分析,那么样本经脱盐以后将会取得更好的结果。脱盐的过程可以用商品化的试剂盒ZipTip(Millipore),或者在凝胶电泳仪的末端放置一个小的逆向塑料柱来实现[23,24]。PMF中非常重要的一个因素就是质谱测量分子量的准确度[25]。现代的MALDI-TOF仪都具有延迟取样反射器装置,用它们检测的肽段分子量可以精确到10~30ppm。这样的精确度使得4~5个肽段足以清楚的鉴定蛋白质的分子量。MALDI产生的大多数都是单电荷离子,所以它的图谱很容易解释。4 肽质指纹谱分析的自动化为了实现高通量蛋白检测,样本准备,质谱检测,资料分析和数据检索必须实现自动化操作。目前有些实验室用机器人对蛋白质进行自动化取点,凝胶上消化,样本脱盐以及对MALDI平板进行定点测定等。而且,现代化的MALDI-TOF仪完全能够让MALDI检测自动化。资料分析和数据检索过程同样可以自动化。在进行蛋白组分析时,如果在凝胶上不用单个分离就可以对所有蛋白质进行鉴定将是非常具有诱惑力的。为此,研究人员做了很多努力,由Hochestrasser及其同事建立了一套称作分子探测术的方法(molecular scanner)[26,27]。它是将整个2-DE胶上蛋白质样本同时酶解,并将酶解片段一起原位转移至另一张膜上,再直接用MALDI- TOF 质谱对膜上样本进行整体扫描,为实现蛋白质组学研究的自动化、规模化以及临床应用提供了一个崭新的思路和方法。这种思路的优点是显而易见的,不过按照目前的方法,要普及此种技术主要的难点是,质谱扫描一张图谱所需的时间过长,如用0.4mm的精度扫描一张4cm×4cm的膜需55个小时,这就意味着一张16cm×16cm的常用膜的扫描,至少需要36天不间断的工作和大约40G的磁盘空间存储如此庞大的原始数据。5 用ESI-MS/MS的方法创建序列标签只有当被消化的蛋白存在于已有的蛋白或基因组数据库中,并且能从MALDI分析器中得到四五个肽片的数据才能成功进行。如果在EST数据库中只有目的蛋白的部分序列,那么就需要知道肽片的序列信息。创建序列标签的优势在于,用肽的分子量和序列作为数据库检索对象比只用分子量作为检索对象具有更高的特异性。有了序列标签信息后,也可以用EST数据库进行检索[28]。通常来自于一个肽上的序列标签就足以鉴定蛋白质。同MALDI相比,纳升-ESI-MS/MS费时费力,而且在做ESI分析之前必须对样本进行脱盐处理。这些问题可以通过ESI-MS与HPLC联用得到解决。做ESI分析对样本浓度很敏感,用现代化的纳升-HPLC方法可以提供很高的局部肽片凝聚物,分离后的样本可以直接用于质谱分析,而不需要再分解。当分析混合物的时候,在质谱之前做LC分离尤其重要,因为它使得数据依赖的实验(DDE)成为可能,在DDE中,所有的离子都进入检测器进行测量,如果从HPLC到质谱之间出现一个峰的话,软件将自动从质谱转换到MS/MS模式并对产生的离子进行扫描。跟纳升-ESI相比,用这个方法可以从一份标本产生更多的MS/MS数据。Yates等已经详细叙述了如何进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS全自动蛋白检测的策略[29]。
[color=#444444]最近在做乳铁蛋白HPLC分析,标准品从sigma买的,纯度85%,用biobasic c4柱,流动相0.1%TFA的乙腈和0.1%TFA的水,梯度洗脱,280nm检测,没有检测到标准品色谱峰(1mg/ml),各位有经验的可以分享一下么?谢谢[/color]