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细胞周期分析

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细胞周期分析相关的论坛

  • 一种新的细胞周期分析方法.PDF

    [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=29258]一种新的细胞周期分析方法.PDF[/url][em51] [em51] [em51]

  • 细胞周期的测定原理与操作步骤

    一、原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞 计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞 如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/08/27/A1377590583.jpg二、仪器、用品与试剂1. 仪器、用品：同常规细胞培养2. 试剂：BrdU(1.0 mg/ml)，甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液三、操作步骤1. 细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使最终浓度为10 μg/ml。2. 44小时加秋水仙素，使每ml中含0.1 μg。3. 48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。4. 常规染色体制片。5. 染色体玻片置56 ℃水浴锅盖上，铺上2×SSC 液，距紫外灯管6 cm处紫外照射30分钟。6. 弃去2×SSC液，流水冲洗。7. Giemsa液染色10分钟，流水冲洗，晾干。8. 镜检100个分裂相，计第一、二、三、四细胞期分裂指数。9. 计算：细胞 周期(Tc)=48/(小时)附：（1）BrdU配制: BrdU 10 mg十双蒸水10ml 4 ℃下避光保存。（2）2×SSC配制: NaCl 1.75克，柠檬酸三钠，2H2O 0.88克，加水至100 ml，4 ℃保存。

  • 流式细胞仪检测细胞周期及正常范围

    [b][font=宋体][font=宋体]细胞周期[/font][font=Calibri]cell cycle [/font][/font][/b][font=宋体]是指从一次细胞分裂形成子细胞开始到下一次细胞分裂形成子细胞为止所经历的过程，它反映了细胞增殖的速度。在临床上，有很多研究证明，细胞周期分析对人肿瘤的诊断预后具有很高的价值。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一个完整的细胞周期包含间期和分裂期（[/font][font=Calibri]M[/font][font=宋体]期）两个阶段，间期又分为[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成前期（[/font][font=Calibri]G1[/font][font=宋体]期）、[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成期（[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期）和[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成后期（[/font][font=Calibri]G2[/font][font=宋体]期），处于不同时期的细胞的[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量存在差异。一般认为，[/font][font=Calibri]G 1 [/font][font=宋体]期细胞具有增殖活性，参与细胞周期循环，是二倍体细胞；[/font][font=Calibri]S [/font][font=宋体]期细胞，[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量逐渐增加，从二倍体变成四倍体，随后进入 [/font][font=Calibri]G 2 [/font][font=宋体]期，最终进入 [/font][font=Calibri]M [/font][font=宋体]期。检测细胞周期常用的方法是检测[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量，可以选择能与[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]结合的荧光染料（如[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]等），再根据细胞各个时期[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量不同从而荧光强度不同的方法，分析各个阶段的细胞比例。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]流式细胞仪[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]染色法检测细胞周期的原理[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由于细胞周期各时相的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]不同[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]通常正常细胞的[/font][font=Calibri]G1/G0[/font][font=宋体]期具有二倍体细胞的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量[/font][font=Calibri](2N),[/font][font=宋体]而[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期具有四倍体细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量[/font][font=Calibri](4N),[/font][font=宋体]而[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期的[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量介于二倍体和四倍体之间。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]（碘化丙啶）为插入性核酸荧光染料，能选择性嵌入核酸[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]双螺旋的碱基之间与之结合，结合量与[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的含量成正比关系，其荧光强度直接能反映细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]因此[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]通过流式细胞仪[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]染色法对细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量进行检测时[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]可以将细胞周期各时相区分为[/font][font=Calibri]G1/G0 [/font][font=宋体]期[/font][font=Calibri],S [/font][font=宋体]期和[/font][font=Calibri]G2/M [/font][font=宋体]期[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过定量测定[/font] [font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量来分析细胞周期是流式细胞术最早的应用之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流式细胞周期（[/font][font=Calibri]cell cycle[/font][font=宋体]）检测结果分析常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量（横坐标）来分析的：[/font][font=Calibri]G0[/font][font=宋体]期：静止期，有丝分裂完成后，脱离细胞周期暂时停止分裂的一个阶段，胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量保持二倍体；[/font][font=Calibri]G1[/font][font=宋体]期：[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成前期，从有丝分裂到[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]复制前的一段时期，此期主要合成[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]和核糖体，胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量保持二倍体；[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期：[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成期，在此期，合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]及组蛋白，胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量介于[/font][font=Calibri]G1[/font][font=宋体]期与[/font][font=Calibri]G2[/font][font=宋体]期之间；[/font][font=Calibri]G2[/font][font=宋体]期：[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成后期，是有丝分裂的准备期，合成[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]及蛋白质，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成终止，胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量为四倍体；[/font][font=Calibri]M[/font][font=宋体]期：细胞分裂期，胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量为四倍体；[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]流式细胞检测正常范围[/font][/b][font=宋体]流式细胞检测的正常范围通常依赖于被检测细胞或生物粒子的类型以及所测参数的性质。一般而言，正常的细胞数量、细胞大小、细胞形态、细胞内物质的浓度和分布等参数都在一定的范围内。这些正常范围通常是通过对比大量健康个体或样本的流式细胞检测结果而得出的。例如，正常血细胞的计数和比例，各种免疫细胞的分布，以及细胞内的荧光强度等，都有相应的正常范围。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url]，同时还提供完善的[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]流式单[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]细胞分选平台[/b][/url]，详情关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 荧光显微镜及流式表征西达本胺诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期

    荧光显微镜及流式表征西达本胺诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期

    荧光显微镜及流式表征西达本胺诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期流式细胞术检测到明显的细胞凋亡,随着加药浓度的升高,细胞凋亡数量增多,早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞 的 数 量 都 随 之 上 升 (图 a).测 得 实 验 组 凋 亡 率 分 别 为 12.32% ±0.84% (P 0.05),15.63%±0.91%(P0.001),与对照组相比,有统计学意义(图b).与此同时通过 EdU 实验检测(图c)其细胞周期的变化,随着加药浓度的增高,Hoechst蓝色荧光染色细胞数目减少,即活细胞数减少,药物对细胞杀伤作用显著 EdU 绿色荧光染色细胞数减少,即进入 DNA 复制期的细胞数量减少.表明西达本胺可以明显促进 HCT-15细胞凋亡、抑制其增殖且阻滞细胞周期.[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/06/202306302205203559_379_5389809_3.png[/img]

  • 流式细胞术详解 9-11章节

    九. 流式细胞术在血液学中的应用 DNA倍体分析及细胞周期分析 在细胞周期内,DNA含量随细胞内时相发生周期性变化,正常情况下,大多数细胞处于休止期(Go), G1期细胞虽有DNA合成，但DNA含量仍为2N，为二倍体细胞,;处于活跃的DNA合成期(S期)的细胞DNA含量为2N-4N;正经历细胞分裂(G2/M期)的细胞含有最大量的DNA(4N)。细胞经固定后用PI(Propidium Iodine 碘化丙啶)等荧光染料染色即可上机测定。但标本需先经RNA酶处理以排除RNA干扰。FCM可在测量大量细胞(数分钟可测定105个细胞)后给出DNA分布直方图,见图12.10.正常人外周血DNA示意图，图中第一个峰(G1)是DNA含量为2N 的细胞峰, 第二个峰是DNA含量为4N 的细胞峰,两峰之间是DNA含量为2N-4N的处于活跃的DNA合成期(S期)的细胞。用厂家提供的Multicycle[/f

  • 西达本胺通过信号通路调节促进癌细胞凋亡

    西达本胺通过信号通路调节促进癌细胞凋亡在我国，西达本胺已获批作为PTCL临床用药。西达本胺属于苯酰胺类化合物，是我国自主研发的首个亚型选择性口服HDACI，国家食品药品监督管理局已批准其用于临床试验，其选择性抑制I类HDAC1、2、3亚型和II类HDAC10亚型，可抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡，阻滞周期、引发DNA损伤，还可以增强抗肿瘤免疫反应。与其他抗肿瘤药物相比，西达本胺疗效好、选择性高、不良反应少。西达本胺可激活死亡受体途径和线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡，其中最为主要的是线粒体凋亡途径，该途径受Bcl-2家族介导的细胞色素C释放通路调控。抗凋亡蛋白Bcl-2表达受到抑制，促凋亡蛋白Bax表达上调，使线粒体膜电位降低，细胞色素C释放到细胞质中，Caspase途径被激活，细胞发生凋亡。例如：西达本胺增强B淋巴瘤细胞组蛋白H3、H4 乙酰化水平，使线粒体膜电位降低随后激活Caspase 3，促进细胞凋亡；在肾癌中，它可以下调Bcl-2表达，上调Bax表达，随着药物浓度增加引起786-O 细胞凋亡。西达本胺可以调控ROS水平。HDACI可以上调ROS水平，导致DNA双链损伤。研究证明，西达本胺作用于白血病细胞后，诱导细胞内ROS产生，细胞凋亡增加[17]。此外，在胰腺癌细胞系中，西达本胺明显增强细胞内ROS的产生，上调γH2AX（DNA双链断裂的标志物）表达水平，诱发细胞DNA损伤。西达本胺通过调控细胞周期蛋白（Cyclin）、细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent kinases，CDKs）以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（Cyclin-dependent kinases inhibition，CDKI）的表达阻滞细胞周期。例如，西达本胺使MM细胞系P21、P27的表达量增高，CDK4、CDK6、Cyclin D2表达量下降，阻滞MM细胞系于G1期[19]。在NK/T细胞淋巴瘤中，西达本胺上调P21表达，下调Cyclin E表达，诱导细胞发生G0/G1期阻滞，从而抑制细胞的增殖。

  • 厂商活动：智能触控细胞状态分析仪首次试用体验之真心英雄第二关

    厂商活动：智能触控细胞状态分析仪首次试用体验之真心英雄第二关

    传统流式细胞仪繁琐的实验步骤是否一直困扰着您？它结果输出的不方便是否也影响着您的实验效率？大量用于流式细胞仪上机样本的得到是否也让您很烦躁？现在这些都将成为过去式……MuseTM智能触控细胞状态分析仪——一款新型基础型流式细胞仪可以成功的解决您的这些问题。以细胞活力分析为例，MuseTM只需三步即可搞定：细胞悬液内加入Muse检测试剂，室温孵育5分钟，上机检测——内置的Pad触控式操作系统让您只需动动手指就可以直接读数。采用的独特微毛细管液流系统，样本需要量只有传统流式细胞仪的1/10，为您节省大量宝贵的实验样本。另外，MuseTM智能触控细胞状态分析仪创新的微毛细管液流设计摒弃了传统流式细胞仪必须依赖鞘液的流体动力学聚焦原理，最大程度的保护细胞不受到高速鞘液流冲击的影响，保持上机前的细胞状态。精湛的紧凑型光路设计可以为您分析直径范围在2-60μm的广泛样本，让您的细胞状态分析实验与众不同。预置的多套实验方案以及高品质的预包装试剂盒，让您无需为复杂的试验参数设定头痛不已，获取与分析变得能够轻松掌握。在快速细胞计数，细胞活力分析，细胞凋亡分析，细胞周期等分析领域，MuseTM智能触控细胞状态分析仪定会为各位老师带来不同凡响全新的实验体验。想切身感受这炎热的夏天里MuseTM智能触控细胞状态分析仪为您实验带来的小清新吗？赶快报名，免费的试用在等着您哦•••活动期间，凡是参与试用的用户均可获得昊诺斯8GU盘或瑞士军刀背包一个（奖品以实物为准）。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307231142_453122_1622715_3.jpg真心英雄活动第二关试用报名网址：http://www.instrument.com.cn/custom/SH100700/20130522/free.shtml另外，您也可以致电北京昊诺斯科技有限公司市场部产品负责人孙健13710746995 sunjian@herosbio.com（因为区域划分，活动仅限北京区域、山西及内蒙古，具体问题欢迎来电垂询）。

  • 流式细胞仪检测细胞增殖方法有哪些？

    [font=宋体][font=宋体]在生物学和医学研究中，细胞增殖是一个关键过程，对于理解生命活动的基本规律以及疾病的发病机理具有重要意义。随着科技的发展，流式细胞仪作为一种高效、灵敏的分析工具，广泛应用于细胞增殖的检测。流式细胞仪通过快速分析单个细胞，可以对细胞周期、细胞增殖活性、细胞凋亡等多个方面进行研究。本文将探讨流式细胞仪在检测细胞增殖方面的主要方法，包括但不限于溴脱氧尿苷（[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]）掺入法、细胞周期蛋白检测法以及细胞大小分析法等，以期为读者提供全面的技术应用概览。流式细胞仪检测细胞增殖方法：[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]（氚离子）掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]原理：是在细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时，用[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]脱氧胸腺嘧啶核苷代替普通的脱氧胸腺嘧啶核苷掺入新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中，增殖的细胞因为掺入[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]而具有放射性，通过定量检测样品细胞的放射性大小而反映细胞的增值活性[/font][/font][font=宋体][font=宋体]缺点：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）使用的是具有放射性的同位素，操作较为复杂，同时需要采取放射性保护措施 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）低比例高活跃增殖和高比例低活跃增殖可能得到的是相同的结果，用此方法无法进行鉴别 [/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）此方法无法进一步得到具有活性的增值细胞用于下一步的研究 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]） 此方法时间较短，无法检测加入前细胞的增殖情况，而且检测到放射性只能说明细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成，而不能提供合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的细胞是否进入增殖阶段的信息[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、相对计数法[/font][/font][/b][font=宋体]原理：将对照组和各实验组控制在相同条件下直接计数然后比较计数结果得到增殖结论[/font][font=宋体]注意点：[/font][font=宋体][font=宋体]对照组与实验组每种细胞所加浓度必须相同，每组至少设置[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔，这样每个孔可以得到[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]个细胞数，将[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔取平均值后就是这个组的结果。如果同时需要得到每孔目标细胞增殖后的绝对参数，在每孔细胞中加入[/font][font=Calibri]1*105PE[/font][font=宋体]标记的人工微球作为内参[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]收集各组的细胞于[/font][font=Calibri]EP[/font][font=宋体]管中，注意必须尽量将各组的所有细胞都收集起来。标记需要计数细胞的标志表型的荧光素偶联抗体，[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃静置[/font][font=Calibri]30min[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗涤一次，洗去游离的抗体[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、示踪染料标记法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]示踪染料与细胞结合的方式：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）能够与细胞内的蛋白质上的氨基发生非特异性的共价结合 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）能够非特异性地嵌入细胞膜的脂质双分子层中与细胞发生非共价性结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原理：示踪染料的荧光信号都很强，当细胞分裂时，母细胞内的染料会被平均分配到子细胞中，细胞荧光信号会被减弱一半，所以通过检测减弱的、发射示踪染料荧光信号的细胞比例就可以判断细胞增殖的强弱。当荧光强度减弱到标记时的[/font][font=Calibri]1/2[/font][font=宋体]以及以下的细胞都是增殖后的细胞，这些细胞所占比例越高则代表细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]标记方法：[/font][font=宋体][font=宋体]①纯化增殖反应的目标细胞，将细胞的浓度调整为[/font][font=Calibri]1*106/ml[/font][font=宋体]，加入[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体]，其标记浓度为[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]微摩尔[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]升。置于[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃水浴中标记[/font][font=Calibri]15min[/font][font=宋体]，在标记过程中每隔一段时间混匀细胞一次[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②加入预冷、含有血清的培养基终止标记，在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃冰箱中静置[/font][font=Calibri]5min[/font][font=宋体]，离心沉淀[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③用培养基再洗涤一次，尽量洗净未结合的游离的[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体]，然后将目标细胞静置在增殖体系中[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]EdU[/font][font=宋体]掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]5-[/font][font=宋体]溴脱氧尿嘧啶核苷是胸腺嘧啶核苷的类似物，其特点是胸腺嘧啶环上[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]位[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]连接的甲基被溴取代，在细胞增殖[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时可以与内源性的胸腺嘧啶核苷竞争掺入到新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中，而[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体可以特异性的识别[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]，不与胸腺嘧啶核苷结合，所以可以用于检测细胞增殖[/font][/font][font=宋体][font=宋体]适用范围：适用于体内检测目标细胞的增殖，一般将[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]掺入小鼠的应用水中或经腹腔注射，经过一段时间后，取出目标细胞制成单细胞悬液然后用多聚甲醛固定细胞，后用打孔剂皂苷在细胞膜上打孔，最后标记荧光素偶联抗[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体，目标细胞的[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]阳性细胞就是增殖的细胞，阳性比例越高，增殖越活跃。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、其他方法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]细胞周期法检测细胞增殖：流式细胞术能够检测细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的含量，所以可以检测细胞周期。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期的细胞，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的量处于二倍体和四倍体之间[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]处于[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期时，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]量为四倍体。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期和[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期的细胞比例越高说明细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]检测细胞增殖：[/font][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]（增殖细胞核抗原），在细胞核合成且只存在于细胞核内，是[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]聚合酶的辅助蛋白，所以与细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的合成关系密切，是反映细胞增殖状态的良好指标[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Ki-67[/font][font=宋体]检测细胞增殖：是一种与细胞增殖特异相关的核抗原[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CD71[/font][font=宋体]检测细胞增殖：是转铁蛋白受体，表达于细胞的表面，该受体广泛表达于各种恶性肿瘤细胞表面，正常细胞表达较少，与肿瘤细胞的增殖密切相关[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url]，更多关于流式细胞仪检测细胞增殖详情欢迎咨询，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 流式细胞术可以检测什么？

    [font=宋体]流式细胞术，作为一种先进的生物技术，已经在生物医学研究中占据了举足轻重的地位。这种技术以其高精度、高速度以及多参数同时检测的能力，广泛应用于细胞生物学、免疫学、肿瘤学等多个领域。流式细胞术不仅可以对单个细胞进行多参数定量分析和分选，还能够对细胞内部的蛋白质、核酸、细胞受体以及细胞表面抗原等进行检测。因此，它在疾病诊断、药物筛选、细胞功能研究等方面具有广泛的应用前景。本文将对流式细胞术的检测原理、应用领域以及发展前景进行详细介绍，旨在为读者提供对这一技术全面而深入的了解。流式细胞术可以检测什么？下面是具体检测信息及应用：[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]细胞表型检测[/font][/font][/b][font=宋体]免疫细胞表型是流式细胞术最突出应用。[/font][font=宋体][font=宋体]通过检测免疫细胞群的表面或细胞内标志物，对其进行鉴定和表征。流式细胞术能够精确鉴定和分类免疫细胞群，例如[/font] [font=Calibri]T [/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]B [/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]NK [/font][font=宋体]细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板和粒细胞等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]研究人员可以识别和量化异质群体中的各种免疫细胞亚群。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]临床医生可以诊断和监测各种血液系统疾病、进行免疫免疫评估（[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]大类免疫细胞构成与肿瘤预后）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]细胞活力检测[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]流式细胞术能够定量测量群体内和体外培养的活细胞和非活细胞。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]通过使用选择性标记活细胞或死细胞的荧光染料，流式细胞术可以提供精确可靠的活力测定，有助于确定细胞活力百分比。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]流式细胞术可以根据特定的标志物或染料区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞，从而更详细地了解细胞的健康和状态。通过将活力染料与细胞表面抗原、细胞内蛋白或功能测定的标记物相结合，研究人员可以在特定细胞类型或实验条件下获得有关细胞活力及其发生机制的全面信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]最常用的活性检测染料[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]死细胞：碘化丙啶（[/font] [font=Calibri]propidium iodide[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]）和[/font][font=Calibri]7-AAD[/font][font=宋体]，与[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]结合，但只能进入膜受损的细胞，使死细胞发出荧光。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]凋亡细胞：[/font][font=Calibri]annexin V[/font][font=宋体]：对磷脂酰丝氨酸具有强结合亲和力的蛋白质，在细胞凋亡的早期阶段暴露在质膜的外表面[/font][font=Calibri]annexin V+PI[/font][font=宋体]是常用区分凋亡细胞和坏死细胞的组合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞：[/font][font=Calibri]calcein AM[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CFDA[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]carboxyfluorescein diacetate[/font][font=宋体]）、[/font][font=Calibri]FDA [/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]fluorescein diacetate[/font][font=宋体]） ：进入活细胞，但只有在与细胞内酶相互作用时才会发出荧光[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞体内增殖：[/font][font=Calibri]CFSE(CFDA-SE)[/font][font=宋体]穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中，它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]细胞周期分析[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]从流式细胞术的早期开始，细胞周期分析就成为有价值的应用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]原理是基于荧光和核酸的量之间的关系。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常用核酸结合染料：碘化丙啶（[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]），[/font][font=Calibri]Hoechst[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]DAPI[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]7-AAD[/font][font=宋体]，溴化乙锭等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流式细胞术细胞周期分可以有很多方面的应用，例如，[/font][font=Calibri]DNA/Ki67[/font][font=宋体]测定可以将表型选择与细胞周期分析相结合，用于监测[/font][font=Calibri]p53[/font][font=宋体]细胞周期停滞，评估抗癌活，多药耐药性等。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]离子通道测定[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]钙作为关键的第二信使，在许多细胞信号通路中起着至关重要的作用。它在免疫细胞活化中尤为重要，包括[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞和[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞。[/font][/font][font=宋体]此外，钙信号传导还参与肥大细胞脱颗粒、神经元兴奋性、突触传递和神经递质释放至关重要。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞脱颗粒的早期测量值是通过使用钙离子载体[/font][font=Calibri]A23187[/font][font=宋体]的流式细胞术确定的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常用荧光染料：[/font][font=Calibri]fluo-3 [/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]indo-1[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]虽然[/font][font=Calibri]Ca2+[/font][font=宋体]通道测量是最常见的应用之一，但其他离子如镁、钾、钠和氢也可以使用流式细胞术进行监测。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]细胞功能检测[/font][/font][/b][font=宋体]最早的检测是细胞酯酶。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]使用响应氧化态变化的活性染料检测粒细胞的氧化电位。例如，氢乙啶（[/font][font=Calibri]hydroethidine[/font][font=宋体]）用于中性粒细胞呼吸爆发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二乙酸二氯荧光素（[/font][font=Calibri]dichlorofluorescein diacetate[/font][font=宋体]），已被用于吞噬细胞功能研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]效应细胞杀伤功能，是流式细胞术的另外一个重要应用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞因子是免疫细胞功能的重要执行分子，对科学研究，免疫细胞治疗，临床诊疗都及其关键。基于流式细胞术开发的多重细胞因子检测，已经有广泛应用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]蛋白质工程[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]流式细胞术和分选传统上不是蛋白质工程中最常用的技术之一。然而，近年来，在该领域的应用越来越多。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流式细胞术被用于酶学蛋白质研究，包括细胞色素[/font][font=Calibri]P450[/font][font=宋体]、葡萄糖氧化酶、几丁质酶、纤维素酶、过氧化物酶、酯酶、转移酶、β半乳糖苷酶、硫代内酯酶等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白质工程，包括在基因水平上引入突变（随机或特异性），以创建由数千到数百万个单个蛋白质变体组成的文库（如上图），使用流式细胞术[/font] [font=宋体]每天能够分析多达[/font] [font=Calibri]10^8[/font][font=宋体]–[/font][font=Calibri]10^9 [/font][font=宋体]个克隆，并对具有所需特性的克隆进行分类。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]哺乳动物细胞和细菌细胞分选[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞分选是流式细胞的重要应用之一，哺乳动物细胞相对成熟，不做赘述。细菌细胞方面的应用，也逐渐开始建立。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]与耗时的传统琼脂铺板检测方法相比，流式分选可以快速检测和分选悬浮液中的单个细菌细胞。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]尽管细胞分选仪具有高性能，但它们在微生物学中的应用一直受到限制。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这主要是由于微生物体积小，因此很难将它们与培养基中的细胞碎片或背景颗粒区分开来。另一个潜在的问题是，通常没有细菌菌株特有的抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]限制细胞分选仪在细菌检测和分选中的适用性的其他因素主要与分选仪硬件功能本身有关，在流式细胞术仪器的早期，数量有限的激光器和检测器，限制一次只能使用一种或两种荧光染料。随着最新仪器的发展，多激光器和检测起的仪器被开发：包括赛默飞世尔的[/font][font=Calibri]Bigfoot[/font][font=宋体]光谱细胞分选仪，[/font][font=Calibri]BD FACSAria III[/font][font=宋体]分选仪，索尼[/font][font=Calibri]MA900[/font][font=宋体]细胞分选仪和贝克曼库尔特的[/font][font=Calibri]MoFlo Astrios EQ[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]此外，部分致病性细菌，需要在[/font][font=Calibri]BSL2[/font][font=宋体]以上的实验环境下进行，现在部分流式细胞术带有[/font][font=Calibri]BSL 2 hood[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]8.[/font][font=宋体]液滴微流体[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]液滴微流体是一个相对较新的领域，专注于皮升体积中含有细胞或[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的离散液滴的形成，操作和分析，应用于生物学、化学、材料科学和医学。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在生物学中，液滴微流体可实现单细胞分析、生物分子的高通量筛选、细胞异质性研究和药物发现。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流式细胞术分析是研究单细胞的强大技术，可提供有关各种参数的宝贵信息。然而，它的测量仅限于直接连接到细胞的分子，例如表面或细胞内标记物，限制研究由细胞分泌或由[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]分子产生但不物理附的分子。液滴微流体提供了一种克服这一限制的新方法。将细胞或[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]封装在单个液滴中会产生离散的区室，从而能够分析由封装实体释放或产生的化合物。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]9.[/font][font=宋体]下一代生物制剂[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生物制药已经占据了药物市场的重要份额，包括治疗性蛋白质（[/font][font=Calibri]65%[/font][font=宋体]），疫苗（[/font][font=Calibri]20%[/font][font=宋体]）等。通过测序（[/font][font=Calibri]NGS[/font][font=宋体]）进行单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞库分析和克隆扩增鉴定，直接从人类幸存者克隆免疫球蛋白基因，分离出高亲和力中和抗体，加快了单克隆抗体药物的研发，然而，这种方法比较昂贵，且依旧需要后续的功能验证等。新策略可使用流式细胞术、[/font][font=Calibri]MACS[/font][font=宋体]或微流体将单细胞分离与功能筛选相结合，降低开发成本并消除失败的候选药物，是流式细胞术新的应用开发方向。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url]，拥有[/font][font=宋体][font=宋体]①具有 [/font][font=Calibri]20,000 [/font][font=宋体]次以上流式抗体筛选鉴定经验及多年流式诊断抗体研发经验，在实验方案设计、样品制备、数据分析等方面确保科学性、准确性和可靠性[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]②拥有 [/font][font=Calibri]1,000 [/font][font=宋体]余株自产精品流式抗体，覆盖细胞膜、胞内、核内及分泌抗原；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③自产 [/font][font=Calibri]Annexin V/7-AAD [/font][font=宋体]凋亡检测试剂盒，并储备多种流式检测常用试剂，大大节约购买试剂的等待时间和实际费用；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④可以提供近 [/font][font=Calibri]200 [/font][font=宋体]种细胞系选择，省去细胞样本寄送过程中的风险，并可以免费提供健康人外周血细胞对照品。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

  • Cell：发现细胞中mRNA自我摧毁机制

    美国叶史瓦大学艾伯特-爱因斯坦医学院研究人员发现细胞利用第一个已知的机制控制mRNA的存活。这些关于mRNA的发现可能对逆转癌症不受调控的细胞分裂提供启示。2011年12月22日，该研究发表在《细胞》期刊上。该研究通信作者Robert Singer博士说，“我们研究的mRNA分子命运类似希腊悲剧。它们的命运在诞生那一刻就被决定了。”该研究是利用Singer博士之前开发出的高级显微镜技术在酵母细胞中开展的，该技术也是第一次允许科学家在单个细胞中实时观察单个分子。制造蛋白的指令编码在基因的DNA序列上，而基因则是位于每个细胞核染色体中。但是要制造蛋白，基因的DNA编码必须拷贝或者说转录到mRNA分子上，然后mRNA从细胞核迁移到细胞蛋白制造工厂所在的细胞质。因为一旦mRNA存在，它就能够作为模板制造蛋白。因此科学家长期以来就怀疑当一种蛋白水平积累到危害的程度时细胞必须存在降解mRNA的方法。Singer博士说，“细胞在这个时候会以某种方式摧毁的mRNA，但是没有人知道这是如何发生的。”在他们寻求这种机制时，Singer博士和他的同事们集中注意在两种基因SWI5和CLB2，它们编码的蛋白调节细胞周期---细胞分裂期间复杂的一系列步骤，首先复制它的遗传物质，然后将遗传物质均匀地分配到两个子细胞中。为了合适地规划细胞周期，SWI5和CLB2基因编码的蛋白水平必须得到精致控制，这就意味着这两种基因制造的mRNA将是有目的降解的首要候选物。引人注目的是，研究人员发现这些mRNA事实上携带着最终将自己摧毁的分子“自我摧毁定时器(self-destruct timer)”。当基因被转录时，称作启动子区域的基因部分起着打开基因的作用，这样DNA将被拷贝到mRNA上。这些艾伯特-爱因斯坦医学院研究人员发现SWI5和CLB2启动子区域也有其他作用：它们招募一种蛋白 Dbf2p，这样当mRNA分子被合成时，Dbf2p就与它们结合。这些mRNA--由 SWI5和CLB2基因转录而来而且携带Dbf2p蛋白---就使得它们从细胞核运输到细胞质。在细胞质中，蛋白Dbf20p通过与Dbf2p连接在一起以便搭上mRNA分子，而且这两种蛋白一起就导致这些mRNA分子快速降解。Singer说，“我们的发现表明蛋白水平必须得到仔细控制，制造蛋白的基因含有启动子区域，正是该启动子区域在mRNA分子刚产生的时候就决定着它们死亡的命运，而且启动子区域是通过招募蛋白Dbf2p---mRNA合成和它的最终降解之间常见因子---来标记新制造的mRNA来行使的。 Dbf2p在mRNA诞生开始就与mRNA附着在一起，然后在接收到指示不应当制造更多蛋白的信号后作出应答，从而下达摧毁mRNA的命令。”Singer说，尽管这些观察都是与酵母细胞相关，但是他相信这种控制人mRNA降解的过程“将也是非常类似的”，可能用于对抗癌症。他注意到，“人们一旦获得对控制细胞周期和细胞分裂的机制新认识，就可以提出针对性的治疗方法来调节癌症中不受控制的细胞分裂。”

  • 敲低ODC1对DLBCL细胞增殖、周期、凋亡的影响

    敲低ODC1对DLBCL细胞增殖、周期、凋亡的影响

    [font='times new roman'][size=18px]敲低[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]ODC1[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]对[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]DLBCL[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]细胞增殖、周期、凋亡的影响[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]敲低[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]ODC1[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]对[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]DLBCL[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]细胞系增殖的影响[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]是一种基于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]WST-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]WST-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]瓒[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，生成的甲[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]瓒[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]物的数量与活细胞的数量呈正比，因此可以直接进行细胞增殖和毒性分析。[/color][/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310082309292993_3451_4239500_3.png[/img][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]法测生长曲线实验结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显示，实验组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Pfeiffer-shODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值明显[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]低于对照组。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表明敲低[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]抑制了[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞的生长增殖。[/color][/size][/font][align=center][font='times new roman'][color=#000000]图[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]ODC1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]低表达对[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]Pfeiffer[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]对照组和实验组细胞增殖的抑制情况。应用[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]Graphpad[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] prism5 [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]作图所示（[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]*[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] 0.05,**[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]0.01,***[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]P[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] 0.001,[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表示与对照组相比，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]敲低组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]OD[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]值减小具有统计学意义）。[/color][/font][/align][font='times new roman'][size=18px]敲低[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]ODC1[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]对[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]DLBCL[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]细胞系凋亡的影响[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]流式结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]所示，与对照组相比，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]实验组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Pfeiffer-shODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]早期[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]凋亡[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和晚期凋亡均[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显著增加。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表明敲低[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]促进了[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞的凋[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]亡。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]a[/color][/size][/font][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]b[/color][/size][/font][align=center][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img][/align][align=center][font='times new roman'][color=#000000]图[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] a [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]流式细胞术结果图[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] b [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]早期和晚期凋亡柱状图[/color][/font][/align][font='times new roman'][size=18px] [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]敲低[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]ODC1[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]对[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]DLBCL[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]细胞系线粒体凋亡途径关键蛋白的影响[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]提取对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Pfeiffer[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对照组及实验组细胞总蛋白，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检测敲低[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Pfeiffer[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞凋亡的影响，因此我们检测了[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] Caspase [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]信号通路相关蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] BCL-2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]BAX[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Cytochrome c[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Caspase 3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved Caspase 3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved PARP[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。结果如图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3-3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]所示，与对照组相比，实验组的抗凋亡蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] BCL-2 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达下调，促凋亡蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] BAX [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显著上调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] Cytochrome c[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved Caspase 3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]cleaved PARP [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显著上调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Caspase 3 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达下调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PARP [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]无明显变化。这些结果表明，在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DLBCL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞中，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]敲低[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] ODC1 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]诱导[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Pfeiffer[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞凋亡，且诱导凋亡的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]机制可能是激活了[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] Caspase [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]凋亡途径。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px]敲低[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]ODC1[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]对[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]DLBCL[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]细胞系周期的影响[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]提取对数生长期的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Pfeiffer [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对照组及实验组总蛋白，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Western blot [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]检测敲低[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]对[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Pfeiffer[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞周期的影响。结果如图显示，在细胞系[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Pfeiffer[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]中，与对照组相比，实验组[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] Cyclin B1 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表达上调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Cyclin A2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的表达下调，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]说明敲低[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODC1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]后，细胞阻滞于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]G2 /M[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]期[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。[/color][/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310082309294706_2597_4239500_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman'][color=#000000]图与对照组相比，实验组[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] Cyclin B1 [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]表达上调，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]Cyclin A2[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]的表达下调，[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]说明敲低[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] ODC1 [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]后，细胞阻滞于[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000] G2 /M [/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]期。[/color][/font][/align]

  • 【原创大赛】西达本胺对SCLC细胞系在体外水平的作用及机制

    [size=16px]西达本胺对[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系在体外水平的作用及机制[/size][size=16px]西达本[/size][size=16px]胺属于苯[/size][size=16px]酰胺类化合物，是我国自主研发的首个亚型选择性口服[/size][size=16px]HDAC[/size][size=16px]I[/size][size=16px]，国家食品药品监督管理局已批准其用于临床试验[/size][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][size=16px]其选择性抑制[/size][size=16px]I[/size][size=16px]类[/size][size=16px]H[/size][size=16px]DAC1[/size][size=16px]、[/size][size=16px]2[/size][size=16px]、[/size][size=16px]3[/size][size=16px]亚型和[/size][size=16px]I[/size][size=16px]I[/size][size=16px]类[/size][size=16px]H[/size][size=16px]DAC10[/size][size=16px]亚型，可抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡，阻滞周期、引发[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]损伤，还可以增强抗肿瘤免疫反应。与其他抗肿瘤药物相比，西达本胺疗效好、选择性高、不良反应少。[/size][size=16px]西达本胺可激活死亡受体途径和线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡，其中最为主要的是线粒体凋亡途径，[/size][size=16px]该途径[/size][size=16px]受[/size][size=16px]B[/size][size=16px]cl-2[/size][size=16px]家族[/size][size=16px]介[/size][size=16px]导的细胞色素[/size][size=16px]C[/size][size=16px]释放通路调控。抗凋亡蛋白[/size][size=16px]B[/size][size=16px]cl-2[/size][size=16px]表达受到抑制，促凋亡蛋白[/size][size=16px]Bax[/size][size=16px]表达上调，使线粒体膜电位降低，细胞色素[/size][size=16px]C[/size][size=16px]释放到细胞质中，[/size][size=16px]C[/size][size=16px]aspase[/size][size=16px]途径被激活，细胞发生凋亡。例如：西达本[/size][size=16px]胺增强[/size][size=16px]B[/size][size=16px]淋巴瘤细胞组蛋白[/size][size=16px]H3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H4 [/size][size=16px]乙酰化水平，使线粒体膜电位降低随后激活[/size][size=16px]C[/size][size=16px]aspase[/size][size=16px] [/size][size=16px]3[/size][size=16px]，促进细胞凋亡；在肾癌中，它可以[/size][size=16px]下调[/size][size=16px]Bcl-2[/size][size=16px]表达，上调[/size][size=16px]Bax[/size][size=16px]表达[/size][size=16px]，随着药物浓度增加引起[/size][size=16px]786-O [/size][size=16px]细胞凋亡[/size][size=16px]。[/size][size=16px]西达本[/size][size=16px]胺可以[/size][size=16px]调控[/size][size=16px]R[/size][size=16px]OS[/size][size=16px]水平。[/size][size=16px]H[/size][size=16px]DACI[/size][size=16px]可以上调[/size][size=16px]R[/size][size=16px]OS[/size][size=16px]水平，导致[/size][size=16px]D[/size][size=16px]NA[/size][size=16px]双链损伤。研究证明，西达本[/size][size=16px]胺作用[/size][size=16px]于白血病细胞后，诱导细胞内[/size][size=16px]R[/size][size=16px]OS[/size][size=16px]产生，细胞凋亡增加。此外，在胰腺癌细胞系中，西达本[/size][size=16px]胺明显[/size][size=16px]增强细胞内[/size][size=16px]ROS[/size][size=16px]的产生，上调γ[/size][size=16px]H2AX[/size][size=16px]（[/size][size=16px]D[/size][size=16px]NA[/size][size=16px]双链断裂的标志物）表达水平，诱发细胞[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]损伤[/size][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]18][/size][/font][size=16px]。[/size][size=16px]西达本[/size][size=16px]胺通过[/size][size=16px]调控细胞周期蛋白（[/size][size=16px]Cyclin[/size][size=16px]）、细胞周期蛋白依赖性激酶（[/size][size=16px]Cyclin-dependent kinases[/size][size=16px]，[/size][size=16px]CDKs[/size][size=16px]）以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（[/size][size=16px]Cyclin-dependent kinases inhibition[/size][size=16px]，[/size][size=16px]CDKI[/size][size=16px]）的表达阻滞细胞周期。例如，西达[/size][size=16px]本胺使[/size][size=16px]MM[/size][size=16px]细胞系[/size][size=16px]P21[/size][size=16px]、[/size][size=16px]P27[/size][size=16px]的表达量增高，[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK4[/size][size=16px]、[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK6[/size][size=16px]、[/size][size=16px]Cyclin D2[/size][size=16px]表达[/size][size=16px]量下降，阻滞[/size][size=16px]M[/size][size=16px]M[/size][size=16px]细胞系于[/size][size=16px]G[/size][size=16px]1[/size][size=16px]期。在[/size][size=16px]N[/size][size=16px]K/T[/size][size=16px]细胞淋巴瘤中，西达本胺上调[/size][size=16px]P21[/size][size=16px]表达，下调[/size][size=16px]Cyclin E[/size][size=16px]表达，诱[/size][size=16px]导细胞发生[/size][size=16px]G0/G1[/size][size=16px]期阻滞，从而抑制细胞的增殖[/size][size=16px]。[/size][size=16px]目前为止，关于西达[/size][size=16px]本胺在[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]中的研究并不多，为探究西达本胺对[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系[/size][size=16px]的作用及机制，探究[/size][size=16px]西达本胺对[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系在体外水平的作用及机制[/size][size=16px]，发掘西达[/size][size=16px]本胺在[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]治疗中的潜力，为[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]靶[/size][size=16px]向治疗[/size][size=16px]提供新的思路[/size][size=16px]仍有重要意义[/size][size=16px]。[/size]

  • 西达本胺促进SCLC细胞系组蛋白乙酰化

    西达本胺促进SCLC细胞系组蛋白乙酰化

    [align=left][size=18px]西达本胺促进[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系组蛋白乙酰化[/size][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px] [/size][size=16px]为验证西达本胺是否上调[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系的乙酰化水平，我们使用[/size][size=16px]Western blot[/size][size=16px]检测了不同浓度（[/size][size=16px]I[/size][size=16px]C10[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC20[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC50[/size][size=16px]）西达本胺处理[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后，[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系中乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平，并以组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平为对照。结果如图所示。在四种亚型细胞系中，总组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平无变化，乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达量随加药浓度增大而增多，这证明了西达本胺对[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系组蛋白乙酰化的促进作用，这种作用呈剂量依赖性。[/size][/align][align=left][size=18px]A[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350400898_8640_5887180_3.png[/img][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px]西达本胺通过线粒体凋亡途径诱导[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系凋亡[/size][/align][align=left][size=16px]我们的功能实验表明，西达本胺[/size][size=16px]可剂量依赖的[/size][size=16px]促进[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞[/size][size=16px]系[/size][size=16px]凋亡[/size][size=16px]，但其机制尚未明确。[/size][size=16px]依据国内外报道，西达本胺主要通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡[/size][size=16px]。除此之外，[/size][size=16px]西达本胺[/size][size=16px]能[/size][size=16px]使[/size][size=16px]线粒体[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]双链断裂，发生损伤。[/size][size=16px]为探究其是否通过此途径在[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系中发挥作用，我们检测了加药[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后，[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]DMS114[/size][size=16px]细胞中由线粒体介导的[/size][size=16px]C[/size][size=16px]aspase[/size][size=16px]信号通路相关蛋白[/size][size=16px]Bcl-2[/size][size=16px]，[/size][size=16px]Bax[/size][size=16px]，细胞色素[/size][size=16px]C[/size][size=16px]，[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 9[/size][size=16px]，[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved Caspase 9[/size][size=16px]，[/size][size=16px]P[/size][size=16px]ARP[/size][size=16px]，[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved [/size][size=16px]PARP[/size][size=16px]，[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 3[/size][size=16px]，[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved Caspase 3[/size][size=16px]以及[/size][size=16px]D[/size][size=16px]NA[/size][size=16px]双链断裂标志物[/size][size=16px] [/size][size=16px]γH2AX[/size][size=16px]表达水平。[/size][size=16px]Western blot[/size][size=16px]结果显示，[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 9[/size][size=16px]，[/size][size=16px]P[/size][size=16px]ARP[/size][size=16px] [/size][size=16px]，[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 3[/size][size=16px]表达水平无明显变化，[/size][size=16px]Bcl-2[/size][size=16px]表达下调，其余蛋白表达均上调。这些结果表明，在[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞中，西达本胺可以通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。[/size][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][size=16px]A[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350402755_79_5887180_3.png[/img][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px]西达本胺通过抑制[/size][size=18px]C[/size][size=18px]yclin-CDK[/size][size=18px]复合物活性阻滞[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系周期[/size][/align][align=left][font='宋体'][size=16px]据文献报道，[/size][/font][size=16px]不同[/size][size=16px]HDACI[/size][size=16px]对不同细胞阻滞时相不一致。为验证西达本胺对[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞周期的作用，我们检测了[/size][size=16px]经[/size][size=16px]西达本胺[/size][size=16px]处理[/size][size=16px]48[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后，[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]DMS114[/size][size=16px]细胞中细胞周期相关蛋白的表达水平，如图所示。[/size][size=16px]在[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]细胞系中[/size][size=16px]P21[/size][size=16px]、[/size][size=16px]P27[/size][size=16px]表达上调，[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin A2[/size][size=16px]与[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK[/size][size=16px]2[/size][size=16px]表达下调[/size][size=16px]，[/size][size=16px]说明西达本胺阻滞[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]于[/size][size=16px]S[/size][size=16px]期。在[/size][size=16px]H446[/size][size=16px]细胞系中[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin E1[/size][size=16px]与[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK2[/size][size=16px]表达下调[/size][size=16px]，说明西达本胺阻滞其于[/size][size=16px]G[/size][size=16px]1[/size][size=16px]/S[/size][size=16px]期。[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350422585_1956_5887180_3.png[/img][size=16px] [/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350405804_8826_5887180_3.png[/img][/align][align=left][size=18px]小结[/size][/align][size=16px]1[/size][size=16px].[/size][size=16px]西达本胺可以增强[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系组蛋白乙酰化水平。[/size][size=16px]2.[/size][size=16px]西达本胺诱导[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞凋亡的机制可能与其激活线粒体介导的[/size][size=16px]caspase[/size][size=16px]凋亡途径有关。[/size][size=16px]3[/size][size=16px].[/size][size=16px]西达本胺可阻滞[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞周期，可能与其上调细胞周期蛋白激酶抑制剂表达、从而抑制[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin-CDK[/size][size=16px]复合物活性有关。[/size]

  • 如何做好细胞培养？—实验室细胞培养技术面面观

    [align=center][b][size=14pt][font=等线]如何做好细胞培养？[/font]—实验室细胞培养技术面面观[/size][/b][/align][align=center][size=11pt]会议时间[/size][size=11pt]：[/size][size=11pt]2020年[/size][size=11pt]4[/size][size=11pt]月[/size][size=11pt]17[/size][size=11pt][font=等线]日[/font]1[/size][size=11pt]4[/size][size=11pt]:00[/size][/align][b][size=12pt]内容[/size][size=12pt]介绍：[/size][/b][size=10.5pt]1. 细胞培养简介[/size][size=10.5pt]；[/size][size=10.5pt]2. 细胞培养实验室[/size][size=10.5pt]：实验室安全等级、培养设备[/size][size=10.5pt]/耗材[/size][size=10.5pt]、无菌技术；[/size][size=10.5pt]3. 细胞培养基础[/size][size=10.5pt]：细胞系、细胞培养环境（[/size][size=10.5pt]PH，CO2浓度，温度，湿度）[/size][size=10.5pt]；[/size][size=10.5pt]4. 细胞培养方案[/size][size=10.5pt]：贴壁细胞传代、悬浮细胞传代、细胞冻存、细胞复苏、细胞计数；[/size][size=10.5pt]5. 细胞培养常见问题[/size][size=10.5pt]：细胞污染、细胞太稀、细胞消化过度、细胞复苏状态不佳。[/size][b][size=12pt]讲师[/size][size=12pt]介绍：[/size][size=11pt]雷俊[/size][size=11pt]:[/size][/b][size=11pt]北京大学细胞生物学博士博士研究生期间，主要从事细胞周期事件与肿瘤发生关系的研究，具有细胞生物学、蛋白质组学等学科背景，精通分子细胞生物技术、成像技术等研究手段。现任瑞沃德生命科技有限公司细胞产线产品经理。[/size][b]报名地址：[/b][url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_10287.html][u][font='Times New Roman'][color=#0000ff]https://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_10287.html[/color][/font][/u][/url]

  • 【每周读报】单细胞分析--CE无可取代地位之体现！

    【每周读报】单细胞分析--CE无可取代地位之体现！

    题名：自动化毛细管电泳的快速单细胞分析（Automated Capillary Electrophoresis System for Fast Single-Cell Analysis）作者：Alexandra J. Dickinson , Paul M. Armistead , andNancy L. Allbritton （一群美国滴家伙）杂志：Analytical Chemistry年卷页： 2013, 85 (9), pp 4797–4804 正文：毛细管电泳在单细胞分析上显示了其独特而强有力的优势，这是HPLC和UPLC等难望其项背的优势之一。以下就给大家介绍一个该项技术在单细胞分析上的应用，很牛很强大~ 为了介绍全面一点，我把整段摘要给翻译了。毛细管电泳用于单细胞分析是一种非常有前景的技术，但是在生物研究上其具有低通量的局限性。本文提出了一个微型细胞捕获器和三通道体系的自动化分析平台，在该系统上可进行快速缓冲液交换以进行快速单细胞分析。导入的细胞跟荧光素和俄勒冈绿一起被分离分析，通量为3.5 细胞/分，荧光素和俄勒冈绿的分离度为2.3±0.6。细胞蛋白激酶B（PKB）的活性是通过检测免疫荧光染色后的二氧膦基-PKB来检测的。结果显示，PKB在并没有变化，说明在CE分析过程中应激活化蛋白酶没有被上调，而且在细胞溶膜之前基底细胞的生理机能也没有被扰乱。在癌细胞中鞘氨醇激酶(SK)通常情况下是会被上调的。在此实验中，通过将神经胺-荧光黄(SF)基底引入细胞中而对SK进行检测。SF、神经胺-1-磷酸荧光黄（S1PF）和1/3荧光种类在单细胞中得到分析。219个细胞中，单细胞通量为2.1细胞/分钟。虽然这些亚种群细胞（此类细胞SK活性差异很大，这些差异跟种群均值有关）很容易被测定到，但88%的细胞具有上调SK的活性。该系统稳定，重现性好，可用于上百个贴壁和非贴壁细胞的生物组分的分离分析；还可用于检测非表征的生物学现象。生物方面的知识翻译起来颇费功夫，有些地方翻译得不一定地道。不过生物知识在这里不是重点，亮点在仪器上。比如微型细胞捕获器，这个装置至于毛细管入口端上面50微米处，那个三通道系统也一副牛掰哄哄的样子。如下图： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/01/201401202053_488354_1624715_3.png其他参数：溶膜方式：激光脉冲生理盐水和分离缓冲液的控制方式：接地电位进样方式：电动进样（-5kV，1s），此时横跨毛细管的电压设为0，1s，毛细管被从air gap移动到分离缓冲溶液中。结语：如果没有多年的科研积累和强大的平台是做不出这样的实验的。纵观这两年发到AC上的文章，动则CE-MS，剩下的就是类似这种：需要很多电化和物化知识外加搞技术难度的仪器创新。革命尚未成功，同志们需多努力啊~~~~~~~

  • 敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系抑制作用的机制研究

    敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系抑制作用的机制研究

    [align=center]敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系抑制作用的机制研究[/align]敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系 EMT 的影响提取对数生长期的 H69、H82、H526、SW1271 对照组及实验组细胞总蛋白，利用Western blot 检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 的表达量。E-粘连蛋白（E-cadherin） 表达下调是 EMT 的一个主要标志，削弱了上皮细胞之间的强大粘附力，使细胞流动性增强。N-钙粘蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）上调，导致肿瘤细胞骨架重排，促进肿瘤的转移。结果如图 显示，与对照组相比，实验组 E-cadherin 表达量增加，而 N-cadherin、Vimentin 表达量显著下降，证明 MSI1 低表达使小细胞肺癌细胞的 EMT 过程受到明显抑制。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232328545719_4765_5389809_3.png[/img]图 EMT 相关蛋白在 H69、H82、H526、SW1271 对照组与实验组的表达情况 敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系周期的影响提取对数生长期的 H69、H82、H526、SW1271 对照组及实验组总蛋白，利用Western blot 检测敲低 MSI1 对 SCLC 细胞周期的影响。结果如图 4-2 显示，在细胞系 H69、H82 中，与对照组相比，实验组 Cyclin B1 表达上调，Cyclin A2 的表达下调，说明敲低 MSI1 后，细胞阻滞于 G2 /M 期。细胞系 H526 中，与对照组相比，实验组 Cyclin E1 表达上调，Cyclin A2 的表达下调，说明敲低 MSI1 后，细胞阻滞于 G1 /S 期。细胞系 SW1271 中，与对照组相比，实验组Cyclin D1 表达上调，Cyclin E1 表达下调，说明敲低 MSI1 后阻滞其于 G1 期。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232328548906_4460_5389809_3.png[/img]图 周期相关蛋白在 H69、H82、H526、SW1271 对照组与 MSI1 敲低组的表达情况 敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系凋亡的影响提取对数生长期的 H69、H82、H526、SW1271 对照组及实验组细胞总蛋白，利用Western blot 检测敲低 MSI1 对 SCLC 细胞凋亡的影响，因此我们检测了 Caspase 信号通路相关蛋白 BCL-2，BAX，Cytochrome c，Caspase 3，cleaved Caspase 3，PARP， cleaved PARP。结果如图 4-3 所示，与对照组相比，实验组的抗凋亡蛋白 BCL-2 表达下调，促凋亡蛋白 BAX 显著上调， Cytochrome c，cleaved Caspase 3，cleaved PARP 显著上调，Caspase 3 的表达下调，PARP 无明显变化。这些结果表明，在 SCLC 细胞中， 敲低 MSI1 诱导 SCLC 细胞凋亡，且诱导凋亡的的机制可能是激活了 Caspase 凋亡途径。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232328545353_2689_5389809_3.png[/img]图 凋亡相关蛋白在 H69、H82、H526、SW1271 对照组与实验组的表达情况4 敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系 Wnt 信号通路的影响MSI1 作为一种干细胞决定因素发挥作用，促进癌细胞存活、肿瘤进展，大量研究证实 MSI1 在肿瘤中发挥作用与 Wnt 信号通路密切相关，而 β-Catenin 是 Wnt 信号通路下游关键调控分子，细胞表面标记物 CD44、CD133 是肿瘤干细胞标志物，因此本研究检测在人 SCLC 细胞中 MSI1 敲低后 β-Catenin、CD44、CD133 的表达情况。结果如图所示，与对照组相比，实验组的 CD44、CD133、β-Catenin 的表达量明显下调，敲低 MSI1 后在一定程度上抑制了 Wnt 信号通路，表明 MSI1 在人小细胞肺癌细胞中通过激活 Wnt 通路发挥作用。 [img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211232328553033_2421_5389809_3.png[/img]图 Wnt 信号通路相关蛋白 H69、H82、H526、SW1271 对照组与实验组的表达情况

  • 2017第七届国际分子与细胞生物学大会通知

    第七届国际分子与细胞生物学大会将于2017年4月25-27日在西安举行。大会活动主要包括主题报告、科技论坛、专题讨论会、展览展示、海报展示高端人才招募洽谈会等。会议议题包含干细胞、分子与细胞生物学的最新技术、分子细胞生物学、生物医药等。此外本届会议将邀请到国内外著名院士、以及来自世界50多个国家和地区的相关领域学者、企业高管、科研院所的科研专家等领衔主讲高端论坛近40个。为广大的国内外分子与细胞生物学领域嘉宾提供了相互交流的平台。同期将召开第二届遗传学大会和生物技术产业大会。三会联动，一次注册均可参加！大会网站：http://www.bitcongress.com/cmcb2017/cn/default.asp大会主席：尹玉新博士，北京大学基础医学院院长、北京大学系统生物医学研究所所长大会主题论坛演讲人：Martin Banwell 博士，澳大利亚国立大学教授 Christian Patermann 博士，德国欧洲委员会前主任 Robert S. Plumb 博士，英国帝国理工学院教授Dongping Zhong博士，美国俄亥俄州立大学教授Xiang Zhang博士，英国剑桥大学首席顾问，皇家学会会员 著名演讲人（国内）卢灿忠，中国科学院福建物质结构研究所教授罗顺，中国健顺生物科技有限公司总裁许胜勇，北京大学教授范兴明，云南省农业科学院研究员孙凌云，南京大学医学院教授、主任谭砚文，复旦大学教授陈建海，南方医科大学教授谢志红， 安徽医科大学教授华益民，苏州大学教授沈赞明，南京农业大学教授胡颖，哈尔滨工业大学教授刘磊, 北京大学教授郑彩霞，北京林业大学教授邓文生，武汉科技大学教授邓文礼， 华南理工大学教授王雯，首都医科大学教授陈兵， 第三军医大学教授张小莺，西北农林科技大大学杨铁林，西安交通大学教授秦 鸿雁，第四军医大学教授刘毅， 遵义医学院附属医院教授许乃寒，清华大学深圳研究生院教授茅卫锋，大连医科大学副教授张志远，中国国家生物科学研究所研究员蒋晓江，第三军医大学教授，主任医师刘书逊，第二军医大学副教授吴玉梅，第四军医大学副教授著名演讲人（国外）：Ying-Jan Wang，台湾国立成功大学教授Julie Kazimiroff，美国艾伯特爱因斯坦医学院主任Samir Ounzain，瑞士洛桑大学博士后科学家Yitzhak Rabin，以色列巴伊兰大学教授Franz E. Weber， 瑞士苏黎世大学教授Christina L. Chang，台湾国立成功大学教授Ivan Robert Nabi，加拿大英属哥伦比亚大学教授Brajendra K. Tripathi，美国国立卫生研究院科学家Stefano Zanasi，意大利佛罗伦萨大学教授Vadim Davydov，俄罗斯国立医科大学教授So Yoon Kim，韩国延世大学教授Kari Keinanen，芬兰赫尔辛基大学教授Yi Wang，加拿大阿尔伯塔大学Yeu-Ching Shi，台湾Indigena Botanica公司Ruben G. Contreras，墨西哥高级研究中心首席研究员Yong Jia，美国诺华研究基金会基因组学研究所高级研究员Dongxia Xing，美国MD安德森癌症中心高级研究科学家Mark A. Birch-Machin，英国纽卡斯尔大学教授 Zvi Naor，以色列特拉维夫大学教授Jia-Ching Shieh，台湾中山医科大学副教授Emmanuel M. Drakakis，英国帝国理工大学教授Kiwon Song，韩国延世大学教授Gregory Lee，加拿大不列颠哥伦比亚大学教授Michael Uhlin，瑞典卡罗林斯卡学院研究员Makoto Fukuda，日本东京医科齿科大学Kwan-Kyu Park，韩国大邱大学教授Yonggui Gao，新加坡南洋理工大学副教授Edith Aberdam， 巴黎第七大学研究工程师Alex Kharazi ，美国Stemedica副总裁Jukka Tuomi，芬兰阿尔托大学研究室主任Charles H. Sherwood，美国阿尼卡疗法有限公司总裁、首席执行官David Trudil，美国NHDetect公司执行总裁Alain Verreault，加拿大蒙特利尔大学教授、首席研究员Susanne Staehlke， 德国罗斯托克大学医学中心研究员 会议议题专题一：细胞生物学的研究前沿论坛1：细胞核结构和功能 论坛2：染色质和表观遗传 论坛3：基因组不稳定性和DNA损伤 论坛4：细胞骨架、粘附和迁移 论坛5：中心粒、中心体和纤毛 论坛6：蛋白质结构和功能 论坛7：膜结构、动态、运输和调控 论坛8：线粒体功能和细胞能量代谢 论坛9：信号转导和信号网络 论坛10：细胞分裂和细胞周期 论坛11：蛋白质稳态、细胞应激 论坛12：细胞坏死与存活 论坛13：叶绿体和光合作用 论坛14：细胞壁生物学 论坛15：发育和形态发生 论坛16：免疫细胞生物学 论坛17：微生物和寄生虫生物学 论坛18：基因表达和转录调控专题二: 干细胞论坛1：胚胎干细胞和成体干细胞 论坛2：间充质干细胞 论坛3：造血干细胞 论坛4：神经干细胞 论坛5：细胞可塑性和重编程 论坛6：干细胞治疗专题三: 分子与细胞生物学的最新技术论坛1：基因组编辑技术 论坛2：高通量/高含量技术 论坛3：分子和细胞成像技术 论坛4：单分子和单细胞分析技术 论坛5：实验室芯片、微流体和微阵列 论坛6：流式细胞术 论坛7：新型细胞分离,分离和培养技术 论坛8：光遗传学专题四: 分子细胞生物学与生物医药论坛1：分子与细胞生物学和转化医学 论坛2：分子药物靶标研究 论坛3：癌细胞生物学 论坛4：细胞神经生物学 论坛5：神经退行性疾病 论坛6：生殖细胞和生殖疾病 论坛7：肌肉细胞和肌肉疾病 论坛8：RNA与疾病和治疗 论坛9：端粒、端粒酶与衰老 论坛10：模式生物和疾病模型 论坛11：组织修复与再生 论坛12：心血管生物学 论坛13：红细胞疾病 论坛14：时间生物学★ 企业展位展览范围 一、科学仪器区 分析测试仪器：光谱仪器、色谱仪器、质谱仪器、频谱仪器、波谱仪器、光学分析仪器、热分析仪器、表面分析仪器、元素分析仪器、成份分析仪器、过程分析仪器、图像分析仪器、射线分析仪器、气相色谱、液相色谱、显微镜、光学影像处理和其他通用分析仪器等。 通用实验室仪器：热量装置、反应装置、剂量称重系统、自动化装置、独立技术、实验室家具、实验室用品、实验室医疗设备、实验室数据系统、实验室图像分析及处理、实验室工艺及设备、输送设备与连接装置、清洁、烘干设备、超洁净环境工程设备等。 生化仪器、生命科学及微生物检测仪器、实验动物设施：多肽合成仪、氨基酸测试仪、DNA合成仪、诊断仪器、生物生化技术设备、生物培养箱、发酵罐、酶标仪、生物传感器、生物工程过程控制与生产工艺装备。行业专用分析仪器与设备：电子光学仪器、生化仪器、生命科学及微生物检测仪器、生物反应器、实验动物设施。二、试剂/消耗品区 通用试剂、仪器专用化学试剂、标准物质、实验室用化学品、电子试剂 、光化学试剂、生化和分子生物学试剂、医学/诊断/检验试剂、细胞/血清/培养基抗体、实验室消耗品。 三、生物医药区

  • 红细胞与白细胞的重新定向

    白细胞与红细胞在此重新定向。白细胞（WBC）和红细胞（RBC）是血液中的重要组成部分，在生命体延续发展和生物治疗中具有不同的功能。红细胞，又称红血球，含有一种蛋白质称作血红蛋白。当血红蛋白从肺部吸收氧气时，血液呈红色。随着血液流经全身，血红蛋白向人体组织释放氧气。红细胞的生命周期为4个月，其形如圆盘，中间下凹，边缘较厚，呈圆饼状。白细胞，又称白血球，具有更加复杂的功能。白细胞构成了人体抵抗感染的一种防御机制。有多种不同类型的白细胞，其生命周期和功能各不相同。白细胞还能够产生一种特殊的蛋白质，称作抗体，能够识别并吞噬入侵人体的外来异物。 红细胞白细胞物理特征红细胞呈双凹圆盘状，无核。尺寸大约为6-8 μm。白细胞呈不规则性，但有一个核和外缓冲层。生命周期120天。几天，但在健康人体中可存活数天至数年不等。类型：血液中只有一种红细胞在血液中存在许多类型的白细胞，其功能各不相同：嗜中性粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞（巨噬细胞）、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞。循环系统：心血管系统。心血管和淋巴系统总计红细胞700:1白细胞男性每立方毫米460-6200万个；女性每立方毫米4200-5400万个。每立方毫米4000 – 11000个功能：向身体的不同部位提供氧气，并负责运送二氧化碳和其它废物。产生抗体，对感染形成免疫力，有些具有噬菌功能。血液中含量：

  • 图文讲座第233期：实时细胞分析技术在肿瘤研究和病毒抗体疫苗检测中的应用

    图文讲座第233期：实时细胞分析技术在肿瘤研究和病毒抗体疫苗检测中的应用

    【线上讲座233期】实时细胞分析技术在肿瘤研究和病毒抗体疫苗检测中的应用 主讲人：周尧 活动时间：2013年10月9日-10月19日 热烈欢迎 周尧 老师光临生命科学仪器版面进行讲座！http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647975_2685866_3.gif引言实时无标记细胞分析技术（RTCA, Real Time cell Analysis）是艾森生物全球独有的专利核心技术，该技术采用特殊工艺，将微电极列阵整合在细胞培养板的每个细胞生长孔底部，用以构建实时、动态、定量跟踪细胞形态和增殖分化改变的细胞阻抗检测传感系统。该技术可广泛应用于生物活性因子测定、细胞增殖检测、大规模抗肿瘤药物筛选、细胞毒性检测等研究。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647975_2685866_3.gif提要一、 实时细胞分析技术原理 1.传统终点检测与实时无标记动态检测 2. 实时细胞分析技术原理 3. 实时细胞分析技术优势二、 实时细胞分析技术平台产品简介三、 实时细胞分析技术在肿瘤、药物细胞毒性检测领域的应用 1.RTCA实时动态细胞毒性检测 2.肿瘤与微环境之间的相互作用RTCA实时动态检测 四、 实时细胞分析技术在病毒、细胞毒素、中和抗体及疫苗检测与评估领域的应用 1.RTCA实时动态检测病毒Cytopathic Eff ect效应 2.RTCA实时定量检测病毒侵染效力及评估中和抗体效价http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647975_2685866_3.gif提问时间：2013年10月09日--10月19日答疑时间: 2013年10月09日--10月19日特邀佳宾：生命科学仪器版面版主、专家以及同行们参与人员：仪器论坛全体注册用户活动细则：1、请大家就ATR技术知识的相关问题进行提问，直接回复本帖子即可，自即日起提问截至日期2013年10月19日2、凡积极参与且有自己的观点或言论的都有积分奖励（1-50分不等），提问的也有奖励在活动期间我们将评选出20名积极参与奖和5名精彩问答奖。3、提问格式：为了规范大家的提问格式，请按下面的规则来提问 ：周尧老师您好！我有以下问题想请教，http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647975_2685866_3.gif说明：本讲座内容仅用于个人学习，请勿用于商业用途，由此引发的法律纠纷本人概不负责。虽然讲座的内容主要是对知识与经验的讲解、整理和总结，但是也凝聚着笔者大量心血，版权归tianzhen老师和仪器信息网所有。本讲座是根据笔者对资料的理解写的，理解片面、错误之处肯定是有，欢迎大家指正。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647975_2685866_3.gif

  • 【转帖】新产品Cellscreen全自动细胞图像分析仪

    Cellscreen系统第一次实现了可重复对细胞培养进行观察。无需染色、无需制样，通过光学图像分析将细胞培养的生长曲线保存；与其它现有测试方法相比，Cellscreen系统对细胞培养无损伤性，独立性。第一次实现了对同一细胞培养区域进行多次测量。Cellscreen技术证明是一种精确的、可靠的、自定义实验条件、操作方便、节省成本的方法。Cellscreen能优化和加速新产品和测试程序的开发。 Cellscreen应用领域 Cellscreen模块化设计能适用于更广范的领域，例如： 制药研究：Cellscreen系统能缩短常规科研究时间，能拍摄细胞生长因子的各种因素，如毒性测试及生物适应性的测试。 生物技术研究：Cellscreen系统适用于增殖研究、过程（培养基）最优化、质量控制。另外，用于拍摄克隆细胞实验的新性质，如应用在新的治疗蛋白和抗体的研究。 Cellscreen系统的优势： l缩短制药研发的时间周期 l对细胞培养无损伤—细胞可再用于其它研究 l可扩展的详细的结果描述，对细胞培养过程的文档和图像存档 l与现有的方法相比，更精确——可靠、重复性、自定义 l很容易融入到日常实验 l很容易操作Multiwellplate l特别低的操作成本-对所有的测量只需要一个培养皿，不需试剂、不需对细胞染色。 l节省时间—不需样品制备 l技术成熟—innovatesAG图像识别技术 l模块化设计—系统可扩展其它分析模块 Cellscreen系统模块化设计： 为满足广泛的分析需求，Cellscreen系统是按模块化设计，能运行不同的软件系统。硬件由一个双处理器电脑及控制单元组成，控制单元通过高精度电机台自动聚焦、自动调光来控制显微镜；不同的软件模块对数码相机获取的图像进行分析，分析所得的图像和数据存储在终端数据库。 软件模块包括： l悬浮细胞的增殖研究模块（PS模块） l贴壁细胞的增殖研究模块（PA） l克隆细胞实验模块（CL） 细胞增殖研究模块（PS和PA）能重复观测细胞培养的生长因子，CL模块观察克隆细胞，并能追随到起源的单克隆细胞。 克隆细胞实验模块（CL） 在整个培养过程中，CL模块自动监控单个克隆细胞到群体的生长过程；为了证明细胞群体的单克隆细胞起源，需要监控整个生长过程。 Cellscreen系统用40倍放大系数抓取容器低部的16幅图像，它能代表整个容器的状态。 所有获得的图像和数据存档到数据库，因此可以跟踪任何生物群体的成长过程，证明生物群体起源的单克隆细胞。 很好的保护—Cellscreen的培养器 Cellscreen的培养器精确的安装在显微镜上，在测量过程中，对您贵重的细胞培养，它保持一个稳定的环境。对温度和CO2的浓度能精确的控制。培养器可以长时间或频繁的监控微量滴定盘，而不需移动它。 贴壁细胞的增殖研究模块（PA） PA模块通过测量细胞覆盖区域，用户可以观察到贴壁细胞的增殖。PA以40放大倍数获得图像。系统可以自由选择培养皿的区域。这系统适用于所有通用的微量滴定盘规格（6-96眼）。结果以图像和曲线的形式表示出来。PA模块将所有的图像和结果存档，输出格式CSV（兼容Excel格式）。 PA模块精确的测量至少80%细胞的生长因子，用于科研、发展、研制新产品。 悬浮细胞的增殖研究模块（PS） PS模块通常应用在对细胞生长因子影响的研究。为了获得生长曲线，悬浮液里培育的细胞数量被重复的量化——时间、原料、操作的消耗成本。对同一培养皿里的细胞生长，PS模块能重复计数、消除对每次测量都需要更换盘子的影响。 另外，Cellscreen系统对每个细胞进行计数，相对现存的细胞计数方法，它有很高的精确性。PS模块用的是100放大倍数，它获得的图像有很好的分辨率，能提供出细胞直径和细胞形状的一些信息。 Cellscreen系统概述 很容易综合到您的日常工作中——易学易用 实验和测量的标准化 在准备阶段，用户按要求设定实验配置。对实验条件有详细选择和描述，例如：微量滴定盘上的哪个培养皿，培养皿里哪个区域需要检测；另外一些参数需要选定，如：体积、细胞类型、培养方法、细胞直径。因为无需吸液管，其它方法中隐含的误差就很容易避免。 图像清晰、分析准确 现在的测量方法里，用CCD相机拍摄图像，对每一幅图片用相同的技术指标聚焦。 Cellscreen精确的控制技术保证，在每一个测量过程中，准确的拍摄培养皿的同一区域；因此对每一选择的区域，用户可以跟踪细胞的生长过程；PS软件对选定区域的细胞进行计数；CL和PA软件用来测定克隆细胞和悬浮细胞的表面区域。 广泛和详细的结果陈述 用户可以选择结果的描述方式：如照片、生长曲线、细胞浓度曲线图或幻灯片，用来证明细胞生长发育的全过程。所有的信息，如实验设置、图像的获得、处理结果以及一些简单的实验文档都自动保存在终端数据库。

  • 义翘神州稳定细胞株构建平台流程及常见问题解析

    义翘神州稳定细胞株构建平台流程及常见问题解析

    [font=宋体]稳定细胞株可组成型表达外源基因。因其稳定性高，适用于各种研究应用，包括重组蛋白、抗体生产、结构生物学和功能性研究等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州在重组表达方面不断深耕，积累了大量稳定株开发的相关经验，在提高稳定细胞株的生产能力，改善稳定细胞株的细胞状态等方面有着丰富的经验。义翘神州可提供从基因合成到稳定细胞株交付的一站式服务，为客户的研究提供助力。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有[/font][font=Calibri]GS[/font][font=宋体]系统和可用于药品申报的整套系统，能够完成各类稳定细胞株的开发筛选工作。稳定株的开发首先是将外源基因导入宿主细胞，随后通过抗性基因进行筛选，得到稳定表达目的基因的细胞株。从转染后的细胞池中挑选优质克隆，通过测定目标蛋白的表达情况筛选大的细胞群，以发现高亲和力或高产量的细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]稳定细胞株重组表达流程图[/font] [font=宋体]：[/font][/font][align=center][font=宋体] [/font][img=稳定细胞株重组表达流程图,690,280]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308291536242843_9813_5907840_3.png!w690x280.jpg[/img][/align][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/stable-cell-line-development]稳定细胞株构建平台[/url]常见问题解析：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①若想做稳定细胞株，需提供哪些信息？[/font][font=宋体][font=宋体]客户仅需提供目标蛋白的序列信息和希望表达的目标蛋白的区段，义翘神州技术人员会根据客户要求进行表达风险评估和制定表达纯化策略。常见蛋白序列信息来源包括[/font][font=Calibri]UniProt[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]NCBI[/font][font=宋体]等数据库。客户也可直接提供编码目标蛋白的核苷酸序列。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②稳定株细胞如何交付？[/font][font=宋体]采用干冰运输，尽可能减少温度波动对细胞造成的影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③单克隆和[/font][font=Calibri]pool[/font][font=宋体]怎么选择？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]成药蛋白需要单克隆，以便溯源。如只需拿到蛋白[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗体的话，[/font][font=Calibri]pool[/font][font=宋体]即可满足。需要提醒的是，通常情况下，[/font][font=Calibri]pool[/font][font=宋体]产量较单克隆低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④稳定细胞株做重组蛋白，能否根据蛋白活性进行克隆筛选？[/font][font=宋体][font=宋体]是可以的，只要客户有完整的活性检测方法，我们可以提供[/font][font=Calibri]minipool[/font][font=宋体]供客户进行活性检测（或由义翘进行活性检测）。符合客户对活性的要求后再进行后续的实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤为什么要构建稳定细胞株？[/font][font=宋体]稳定株一个很大的优势是减小重组表达蛋白的批间差异，并且表达量通常比瞬转高。对于成药性抗体来说，构建稳定细胞株是十分必要的。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑥为什么稳定细胞株构建周期较长？[/font][font=宋体]稳定株的构建周期长，很大程度是由于要筛选出阳性克隆，并需要对细胞株的稳定性进行检测。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑦制备稳定株表达蛋白的周期大致如何？[/font][font=宋体][font=宋体]如只需要[/font][font=Calibri]pool[/font][font=宋体]即可，从基因合成到得到纯化后的蛋白，周期一般在[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]周左右。如需引入多步纯化方案，标签切除，以及额外检测服务则周期会根据具体项目情况有所延长。[/font][/font]

  • 全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗？

    全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗？库尔特原理库尔特原理指出：悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时，在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化，产生电位脉冲。脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。这主要是根据血细胞与稀释剂相比，血细胞是不良导体的特性而提出的。起初，原始的库尔特计数器只能计算和测量红细胞。后来，随着技术的不断发展和设备的不断改进，临床医生还可以利用它来计算和测量白细胞。到20世纪70年代，技术的进一步发展使技术人员能够分离血小板。全自动细胞计数器的演进传统意义上的血细胞计数器是通过研究外周血涂片，使用血细胞仪和白细胞分类计数而手动完成的（也称为100个细胞涂片分类，手动白细胞分类计数或手动计数器）。根据库尔特原理导致了库尔特计数器的发明，随后又开发出了技术先进的全自动血液细胞分析仪。自此，仪器的技术水平得到不断提高。由于技术的进步，一台仪器可以分析越来越多的参数，从而大大提高了血液检测的效率，减少在多台仪器上分析一个样品的情况。现代的细胞分析仪能够测量白细胞（WBC）、白细胞分类（五分类）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、血小板（PLT）、平均红细胞体积（MCV）、平均血小板体积，并且可以自动计算血细胞比容（HCT）、平均红细胞血红蛋白（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞分布宽度，血小板比积和血小板分布宽度。自动分析仪的其他重要因素包括它们运行的速度和每批次可以处理的样本数量（大处理容量可以减少周转时间）。即时检验（POCT）即时检验（[/

  • 什么是稳定细胞株？稳定细胞株常见问题解析

    [font=宋体][font=宋体]稳定细胞，又被称为静止细胞，是那些在生理状态下增殖不明显，处于细胞增殖周期静止阶段的细胞（[/font][font=Calibri]G0[/font][font=宋体]期）。然而，当它们受到组织损伤的刺激时，这些稳定细胞会迅速反应，进入[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成前期（[/font][font=Calibri]G1[/font][font=宋体]期），展现出强大的再生能力。它们是维持组织和器官稳态的关键因素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]稳定表达细胞株，也被称为稳定转染细胞株，是一种特殊的细胞株。这些细胞能够持续、稳定地表达特定的基因或干扰特定基因的表达。在生物学和医学研究中，稳定表达细胞株被广泛应用于基因功能研究、药物筛选和疾病模型建立等领域。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]稳定细胞株平台的常见问题解答[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①若想做稳定细胞株，需提供哪些信息？[/font][font=宋体][font=宋体]客户仅需提供目标蛋白的序列信息和希望表达的目标蛋白的区段，义翘神州技术人员会根据客户要求进行表达风险评估和制定表达纯化策略。常见蛋白序列信息来源包括[/font][font=Calibri]UniProt[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]NCBI[/font][font=宋体]等数据库。客户也可直接提供编码目标蛋白的核苷酸序列。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②稳定株细胞如何交付？[/font][font=宋体]采用干冰运输，尽可能减少温度波动对细胞造成的影响。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③单克隆和[/font][font=Calibri]pool[/font][font=宋体]怎么选择？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]成药蛋白需要单克隆，以便溯源。如只需拿到蛋白[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗体的话，[/font][font=Calibri]pool[/font][font=宋体]即可满足。需要提醒的是，通常情况下，[/font][font=Calibri]pool[/font][font=宋体]产量较单克隆低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④稳定细胞株做重组蛋白，能否根据蛋白活性进行克隆筛选？[/font][font=宋体][font=宋体]是可以的，只要客户有完整的活性检测方法，我们可以提供[/font][font=Calibri]minipool[/font][font=宋体]供客户进行活性检测（或由义翘进行活性检测）。符合客户对活性的要求后再进行后续的实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤为什么要构建稳定细胞株？[/font][font=宋体]稳定株一个很大的优势是减小重组表达蛋白的批间差异，并且表达量通常比瞬转高。对于成药性抗体来说，构建稳定细胞株是十分必要的。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑥为什么稳定细胞株构建周期较长？[/font][font=宋体]稳定株的构建周期长，很大程度是由于要筛选出阳性克隆，并需要对细胞株的稳定性进行检测。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑦制备稳定株表达蛋白的周期大致如何？[/font][font=宋体][font=宋体]如只需要[/font][font=Calibri]pool[/font][font=宋体]即可，从基因合成到得到纯化后的蛋白，周期一般在[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]周左右。如需引入多步纯化方案，标签切除，以及额外检测服务则周期会根据具体项目情况有所延长。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][b]稳定细胞系构建服务[/b][/url]，同时提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/stable-cell-line-development][b]稳定细胞株构建平台[/b][/url]，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/stable-cell-line-development[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 流式细胞胞仪的分析及分选原理

    流式细胞胞仪的分析及分选原理流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和数字信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成。在对细胞悬液中的单个细胞或其超微结构进行多参数快速自动分析过程中，每秒钟能测量数千个至数万个细胞，能在分析过程中按实验设计要求对特定细胞进行分析，带细胞分选系统的流式细胞仪还可按实验设计要求分选出具相同特征的同类型细胞，用于培养或进一步研究。一、工作原理流式细胞仪的工作原理借鉴了荧光显微镜技术，将荧光显微镜的激发光源改为激光，使其具有了更好的单色性与激发[/

  • 单细胞分析——你能做得更多

    定义：单细胞研究，就是针对单个细胞的研究，这是相对于群体细胞的研究。研究意义：细胞是生命活动的基本单位，研究细胞的结构功能及行为，有利于揭示复杂生命体的生命活动规律，探究生理生化现象，获得统计平均结果。然而，现代研究表明，单个细胞内的成分存在巨大差异，平均分析结果不能反映单个细胞内成分的真实情况，会带来误导信息。癌症等疾病总是从个别细胞的变异开始，极少量异常细胞信号会被群体信号所掩盖，不能及时获得有关病变的信息。另外，细胞间的信号传导，应激反应等活动在细胞内迅速发生，传统方法无法做到实时监测。对于数量较少且较为珍贵的细胞样本，如干细胞、元祖细胞及患者样本，传统分析方法需要大量的细胞样本，并不适宜。关于物质在细胞内的空间分布，亚细胞结构如细胞器的分析，传统方法也不能满足。这些都要求我们在一定范围内从单细胞水平研究细胞的生命活动。单细胞分析方法：毛细管电泳、微流控芯片、图像分析、动力学分析及纳米技术等。目前单细胞分析存在的难点：首先无论是针对一个特异性大分子，还是在OMIC水平上进行分子分析，都存在单细胞提取物数量少，难以分析的困难，这甚至可以说是不可能完成的，因此增加灵敏度势在必行。除此之外高通量分析也是一个瓶颈，要想获得单细胞分析确切的分析结果，研究人员必须快速而准确的分析多个细胞，这并不容易。另外单细胞分析也常常需要进行多种方式分析，这不仅是由于细胞存在于一种异质性环境汇总，而且也在同一时间，也需要测量多个参数。

  • 流式细胞仪 怎么分析

    ?流式细胞仪数据分析?主要包括数据可视化、门控、补偿和数据分析软件的使用。 数据可视化 流式细胞术的数据分析软件通常使用含有一系列数据图的工作表来实现数据可视化。单参数（直方图）或双参数（散点图）显示了每种标志物的表达模式。通过设门来明确数据边界并分离具有共同表型特征的细胞，从而识别和分离感兴趣的细胞群体?。 门控 门控是流式细胞术分析中的关键步骤。通过层层设门或布尔逻辑可以缩小目标群体的范围。根据门内的数据点（如频率）进行统计计算。例如，辅助T细胞群先根据CD3+、CD4+的表达被选定，之后再根据活化标记物（如CD25）的表达选定活化细胞群所在区域，进行活化分析?。 补偿 在设置流式细胞仪的电压时，必须确保所有阳性信号都在标度范围内（在仪器可检测到的荧光限度内）。如果信号饱和，则降低在捕获微球上使用的抗体效价。对于每个补偿对照，每个通道的电压必须相同。补偿值可在采集前利用仪器软件自带的算法来计算，也可在数据采集后利用流式细胞术分析软件来计算?。 数据分析软件 常用的流式分析软件包括FlowJo、WinList、FCS Express、Kaluza和WinMDI。这些软件不仅用于常规的流式细胞术分析，还支持高维数据分析。高维数据分析工具包括SPADE、tSNE、PCA和FLOCK等，这些工具可以帮助分析含有14个以上参数的高维数据?。

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