微生物极定仪

如题，请问新霉素微生物检定可以用二剂量法吗？

管碟法微生物检定问题1、牛津杯加药液后标准要求是否杯外不得有漏液？2、如果发生漏液是哪些操作要点不标准，如倒平板的台面的水平度、倒培养基后至放置牛津杯的时间间隔不合适等？

微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。　　概述：　　一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。　　生长量测定法　　体积测量法：又称测菌丝浓度法。　　通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。

摘要： 　　微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。　　概述：　　一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。　　生长量测定法　　体积测量法：又称测菌丝浓度法。　　通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。　　称干重法：　　可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。　　比浊法：　　微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm 处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。　　菌丝长度测量法：　　对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长。微生物计数法　　血球计数板法:　　血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1 mm2面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。　　染色计数法：　　为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。　　比例计数法：　　将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。　　液体稀释法：　　对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN（most probably number）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。　　平板菌落计数法：　　这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9cm的平板上出现50-500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。　　试剂纸法：　　在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，无色）待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现一定密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。　　膜过滤法：　　用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。　　生理指标法：　　微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。测定含氮量：　　大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。　　测定含碳量：　　将少量（干重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或无机缓冲液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加热30分钟后冷却。加水稀释至5毫升，在580nm的波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做标准曲线。　　还原糖测定法：[/si

[color=#888888][url=http://blog.sina.com.cn/s/blog_17a5fba0f0102xvau.html]《病原微生物实验室生物安全管理条例》[/url][/color][color=#888888]2004年11月12日中华人民共和国国务院令第424号公布　[/color][color=#888888]2016年2月6日《国务院关于修改部分行政法规的决定》修订[/color][color=#888888]2018年04月04日《国务院关于修改和废止部分行政法规的决定》修订[/color] 《国务院关于修改和废止部分行政法规的决定》中华人民共和国国务院令第698号十一、删去《病原微生物实验室生物安全管理条例》第二十一条第二款。第二十二条第一款中的“取得从事高致病性病原微生物实验活动资格证书的实验室，”修改为“三级、四级实验室”。第二十三条第一款中的“取得相应资格证书的实验室”修改为“具备相应条件的实验室”。第二十六条修改为：“国务院卫生主管部门和兽医主管部门应当定期汇总并互相通报实验室数量和实验室设立、分布情况，以及三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动的情况。”第五十六条修改为：“三级、四级实验室未经批准从事某种高致病性病原微生物或者疑似高致病性病原微生物实验活动的，由县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令停止有关活动，监督其将用于实验活动的病原微生物销毁或者送交保藏机构，并给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由实验室的设立单位对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。”第五十八条中的“卫生主管部门或者兽医主管部门对符合法定条件的实验室不颁发从事高致病性病原微生物实验活动的资格证书，或者对出入境检验检疫机构为了检验检疫工作的紧急需要”修改为“卫生主管部门或者兽医主管部门对出入境检验检疫机构为了检验检疫工作的紧急需要”。第六十一条中的“由原发证部门吊销该实验室从事高致病性病原微生物相关实验活动的资格证书”修改为“责令停止该项实验活动，该实验室2年内不得申请从事高致病性病原微生物实验活动”。 [b]【2018修订版】《病原微生物实验室生物安全管理条例》第一章　总　　则[url=http://blog.sina.com.cn/s/blog_17a5fba0f0102xvau.html]点击打开链接[/url][/b]第一条　为了加强病原微生物实验室（以下称实验室）生物安全管理，保护实验室工作人员和公众的健康，制定本条例第二条　对中华人民共和国境内的实验室及其从事实验活动的生物安全管理，适用本条例。　　本条例所称病原微生物，是指能够使人或者动物致病的微生物。　　本条例所称实验活动，是指实验室从事与病原微生物菌（毒）种、样本有关的研究、教学、检测、诊断等活动第三条　国务院卫生主管部门主管与人体健康有关的实验室及其实验活动的生物安全监督工作。　　国务院兽医主管部门主管与动物有关的实验室及其实验活动的生物安全监督工作。　　国务院其他有关部门在各自职责范围内负责实验室及其实验活动的生物安全管理工作。　　县级以上地方人民政府及其有关部门在各自职责范围内负责实验室及其实验活动的生物安全管理工作。第四条　国家对病原微生物实行分类管理，对实验室实行分级管理。第五条　国家实行统一的实验室生物安全标准。实验室应当符合国家标准和要求。第六条　实验室的设立单位及其主管部门负责实验室日常活动的管理，承担建立健全安全管理制度，检查、维护实验设施、设备，控制实验室感染的职责。 [b]第二章　病原微生物的分类和管理[/b] 第七条　国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，将病原微生物分为四类：　　第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。　　第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。　　第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。　　第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。　　第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。 第八条　人间传染的病原微生物名录由国务院卫生主管部门商国务院有关部门后制定、调整并予以公布；动物间传染的病原微生物名录由国务院兽医主管部门商国务院有关部门后制定、调整并予以公布。 第九条　采集病原微生物样本应当具备下列条件：　　（一）具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备；　　（二）具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员；　　（三）具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施；　　（四）具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段。　　采集高致病性病原微生物样本的工作人员在采集过程中应当防止病原微生物扩散和感染，并对样本的来源、采集过程和方法等作详细记录。 第十条　运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本，应当通过陆路运输；没有陆路通道，必须经水路运输的，可以通过水路运输；紧急情况下或者需要将高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本运往国外的，可以通过民用航空运输。 第十一条　运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本，应当具备下列条件：　　（一）运输目的、高致病性病原微生物的用途和接收单位符合国务院卫生主管部门或者兽医主管部门的规定；　　（二）高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本的容器应当密封，容器或者包装材料还应当符合防水、防破损、防外泄、耐高（低）温、耐高压的要求；　　（三）容器或者包装材料上应当印有国务院卫生主管部门或者兽医主管部门规定的生物危险标识、警告用语和提示用语。　　运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本，应当经省级以上人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门批准。在省、自治区、直辖市行政区域内运输的，由省、自治区、直辖市人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门批准；需要跨省、自治区、直辖市运输或者运往国外的，由出发地的省、自治区、直辖市人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门进行初审后，分别报国务院卫生主管部门或者兽医主管部门批准。　　出入境检验检疫机构在检验检疫过程中需要运输病原微生物样本的，由国务院出入境检验检疫部门批准，并同时向国务院卫生主管部门或者兽医主管部门通报。　　通过民用航空运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本的，除依照本条第二款、第三款规定取得批准外，还应当经国务院民用航空主管部门批准。　　有关主管部门应当对申请人提交的关于运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本的申请材料进行审查，对符合本条第一款规定条件的，应当即时批准。 第十二条　运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本，应当由不少于2人的专人护送，并采取相应的防护措施。　　有关单位或者个人不得通过公共电（汽）车和城市铁路运输病原微生物菌（毒）种或者样本。 第十三条　需要通过铁路、公路、民用航空等公共交通工具运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本的，承运单位应当凭本条例第十一条规定的批准文件予以运输。　　承运单位应当与护送人共同采取措施，确保所运输的高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本的安全，严防发生被盗、被抢、丢失、泄漏事件。第十四条　国务院卫生主管部门或者兽医主管部门指定的菌（毒）种保藏中心或者专业实验室（以下称保藏机构），承担集中储存病原微生物菌（毒）种和样本的任务。　　保藏机构应当依照国务院卫生主管部门或者兽医主管部门的规定，储存实验室送交的病原微生物菌（毒）种和样本，并向实验室提供病原微生物菌（毒）种和样本。　　保藏机构应当制定严格的安全保管制度，作好病原微生物菌（毒）种和样本进出和储存的记录，建立档案制度，并指定专人负责。对高致病性病原微生物菌（毒）种和样本应当设专库或者专柜单独储存。　　保藏机构储存、提供病原微生物菌（毒）种和样本，不得收取任何费用，其经费由同级财政在单位预算中予以保障。　　保藏机构的管理办法由国务院卫生主管部门会同国务院兽医主管部门制定。 第十五条　保藏机构应当凭实验室依照本条例的规定取得的从事高致病性病原微生物相关实验活动的批准文件，向实验室提供高致病性病原微生物菌（毒）种和样本，并予以登记。 第十六条　实验室在相关实验活动结束后，应当依照国务院卫生主管部门或者兽医主管部门的规定，及时将病原微生物菌（毒）种和样本就地销毁或者送交保藏机构保管。　　保藏机构接受实验室送交的病原微生物菌（毒）种和样本，应当予以登记，并开具接收证明。 第十七条　高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本在运输、储存中被盗、被抢、丢失、泄漏的，承运单位、护送人、保藏机构应当采取必要的控制措施，并在2小时内分别向承运单位的主管部门、护送人所在单位和保藏机构的主管部门报告，同时向所在地的县级人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门报告，发生被盗、被抢、丢失的，还应当向公安机关报告；接到报告的卫生主管部门或者兽医主管部门应当在2小时内向本级人民政府报告，并同时向上级人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门和国务院卫生主管部门或者兽医主管部门报告。　　县级人民政府应当在接到报告后2小时内向设区的市级人民政府或者上一级人民政府报告；设区的市级人民政府应当在接到报告后2小时内向省、自治区、直辖市人民政府报告。省、自治区、直辖市人民政府应当在接到报告后1小时内，向国务院卫生主管部门或者兽医主管部门报告。　　任何单位和个人发现高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本的容器或者包装材料，应当及时向附近的卫生主管部门或者兽医主管部门报告；接到报告的卫生主管部门或者兽医主管部门应当及时组织调查核实，并依法采取必要的控制措施。 [b]第三章　实验室的设立与管理[/b] 第十八条　国家根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平，并依照实验室生物安全国家标准的规定，将实验室分为一级、二级、三级、四级。 第十九条　新建、改建、扩建三级、四级实验室或者生产、进口移动式三级、四级实验室应当遵守下列规定：　　（一）符合国家生物安全实验室体系规划并依法履行有关审批手续；　　（二）经国务院科技主管部门审查同意；　　（三）符合国家生物安全实验室建筑技术规范；　　（四）依照《中华人民共和国环境影响评价法》的规定进行环境影响评价并经环境保护主管部门审查批准；　　（五）生物安全防护级别与其拟从事的实验活动相适应。　　前款规定所称国家生物安全实验室体系规划，由国务院投资主管部门会同国务院有关部门制定。制定国家生物安全实验室体系规划应当遵循总量控制、合理布局、资源共享的原则，并应当召开听证会或者论证会，听取公共卫生、环境保护、投资管理和实验室管理等方面专家的意见。 第二十条　三级、四级实验室应当通过实验室国家认可。　　国务院认证认可监督管理部门确定的认可机构应当依照实验室生物安全国家标准以及本条例的有关规定，对三级、四级实验室进行认可；实验室通过认可的，颁发相应级别的生物安全实验室证书。证书有效期为5年。 第二十一条　一级、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动，应当具备下列条件：（一）实验目的和拟从事的实验活动符合国务院卫生主管部门或者兽医主管部门的规定；（二）具有与拟从事的实验活动相适应的工作人员；（三）工程质量经建筑主管部门依法检测验收合格。国务院卫生主管部门或者兽医主管部门依照各自职责对三级、四级实验室是否符合上述条件进行审查；对符合条件的，发给从事高致病性病原微生物实验活动的资格证书。 第二十二条　三级、四级实验室，需要从事某种高致病性病原微生物或者疑似高致病性病原微生物实验活动的，应当依照国务院卫生主管部门或者兽医主管部门的规定报省级以上人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门批准。实验活动结果以及工作情况应当向原批准部门报告。　　实验室申报或者接受与高致病性病原微生物有关的科研项目，应当符合科研需要和生物安全要求，具有相应的生物安全防护水平。与动物间传染的高致病性病原微生物有关的科研项目，应当经国务院兽医主管部门同意；与人体健康有关的高致病性病原微生物科研项目，实验室应当将立项结果告知省级以上人民政府卫生主管部门。 第二十三条　出入境检验检疫机构、医疗卫生机构、动物防疫机构在实验室开展检测、诊断工作时，发现高致病性病原微生物或者疑似高致病性病原微生物，需要进一步从事这类高致病性病原微生物相关实验活动的，应当依照本条例的规定经批准同意，并在具备相应条件的实验室中进行。　　专门从事检测、诊断的实验室应当严格依照国务院卫生主管部门或者兽医主管部门的规定，建立健全规章制度，保证实验室生物安全。 第二十四条　省级以上人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门应当自收到需要从事高致病性病原微生物相关实验活动的申请之日起15日内作出是否批准的决定。　　对出入境检验检疫机构为了检验检疫工作的紧急需要，申请在实验室对高致病性病原微生物或者疑似高致病性病原微生物开展进一步实验活动的，省级以上人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门应当自收到申请之时起2小时内作出是否批准的决定；2小时内未作出决定的，实验室可以从事相应的实验活动。　　省级以上人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门应当为申请人通过电报、电传、传真、电子数据交换和电子邮件等方式提出申请提供方便。 第二十五条　新建、改建或者扩建一级、二级实验室，应当向设区的市级人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门备案。设区的市级人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门应当每年将备案情况汇总后报省、自治区、直辖市人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门。 第二十六条　国务院卫生主管部门和兽医主管部门应当定期汇总并互相通报实验室数量和实验室设立、分布情况，以及三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动的情况。。 第二十七条　已经建成并通过实验室国家认可的三级、四级实验室应当向所在地的县级人民政府环境保护主管部门备案。环境保护主管部门依照法律、行政法规的规定对实验室排放的废水、废气和其他废物处置情况进行监督检查。 第二十八条　对我国尚未发现或者已经宣布消灭的病原微生物，任何单位和个人未经批准不得从事相关实验活动。　　为了预防、控制传染病，需要从事前款所指病原微生物相关实验活动的，应当经国务院卫生主管部门或者兽医主管部门批准，并在批准部门指定的专业实验室中进行。 第二十九条　实验室使用新技术、新方法从事高致病性病原微生物相关实验活动的，应当符合防止高致病性病原微生物扩散、保证生物安全和操作者人身安全的要求，并经国家病原微生物实验室生物安全专家委员会论证；经论证可行的，方可使用。 第三十条　需要在动物体上从事高致病性病原微生物相关实验活动的，应当在符合动物实验室生物安全国家标准的三级以上实验室进行。 第三十一条　实验室的设立单位负责实验室的生物安全管理。　　实验室的设立单位应当依照本条例的规定制定科学、严格的管理制度，并定期对有关生物安全规定的落实情况进行检查，定期对实验室设施、设备、材料等进行检查、维护和更新，以确保其符合国家标准。　　实验室的设立单位及其主管部门应当加强对实验室日常活动的管理。 第三十二条　实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。 　　实验室从事实验活动应当严格遵守有关国家标准和实验室技术规范、操作规程。实验室负责人应当指定专人监督检查实验室技术规范和操作规程的落实情况。 第三十三条　从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室的设立单位，应当建立健全安全保卫制度，采取安全保卫措施，严防高致病性病原微生物被盗、被抢、丢失、泄漏，保障实验室及其病原微生物的安全。实验室发生高致病性病原微生物被盗、被抢、丢失、泄漏的，实验室的设立单位应当依照本条例第十七条的规定进行报告。　　从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室应当向当地公安机关备案，并接受公安机关有关实验室安全保卫工作的监督指导。 第三十四条　实验室或者实验室的设立单位应当每年定期对工作人员进行培训，保证其掌握实验室技术规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作技能，并进行考核。工作人员经考核合格的，方可上岗。　　从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室，应当每半年将培训、考核其工作人员的情况和实验室运行情况向省、自治区、直辖市人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门报告。 第三十五条　从事高致病性病原微生物相关实验活动应当有2名以上的工作人员共同进行。　　进入从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室的工作人员或者其他有关人员，应当经实验室负责人批准。实验室应当为其提供符合防护要求的防护用品并采取其他职业防护措施。从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室，还应当对实验室工作人员进行健康监测，每年组织对其进行体检，并建立健康档案；必要时，应当对实验室工作人员进行预防接种。 第三十六条　在同一个实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从事一种高致病性病原微生物的相关实验活动。 第三十七条　实验室应当建立实验档案，记录实验室使用情况和安全监督情况。实验室从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验档案保存期，不得少于20年。 第三十八条　实验室应当依照环境保护的有关法律、行政法规和国务院有关部门的规定，对废水、废气以及其他废物进行处置，并制定相应的环境保护措施，防止环境污染。 第三十九条　三级、四级实验室应当在明显位置标示国务院卫生主管部门和兽医主管部门规定的生物危险标识和生物安全实验室级别标志。 第四十条　从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室应当制定实验室感染应急处置预案，并向该实验室所在地的省、自治区、直辖市人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门备案。 第四十一条　国务院卫生主管部门和兽医主管部门会同国务院有关部门组织病原学、免疫学、检验医学、流行病学、预防兽医学、环境保护和实验室管理等方面的专家，组成国家病原微生物实验室生物安全专家委员会。该委员会承担从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室的设立与运行的生物安全评估和技术咨询、论证工作。　　省、自治区、直辖市人民政府卫生主管部门和兽医主管部门会同同级人民政府有关部门组织病原学、免疫学、检验医学、流行病学、预防兽医学、环境保护和实验室管理等方面的专家，组成本地区病原微生物实验室生物安全专家委员会。该委员会承担本地区实验室设立和运行的技术咨询工作。 [b]第四章　实验室感染控制[/b] 第四十二条　实验室的设立单位应当指定专门的机构或者人员承担实验室感染控制工作，定期检查实验室的生物安全防护、病原微生物菌（毒）种和样本保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和废气以及其他废物处置等规章制度的实施情况。　　负责实验室感染控制工作的机构或者人员应当具有与该实验室中的病原微生物有关的传染病防治知识，并定期调查、了解实验室工作人员的健康状况。 第四十三条　实验室工作人员出现与本实验室从事的高致病性病原微生物相关实验活动有关的感染临床症状或者体征时，实验室负责人应当向负责实验室感染控制工作的机构或者人员报告，同时派专人陪同及时就诊；实验室工作人员应当将近期所接触的病原微生物的种类和危险程度如实告知诊治医疗机构。接诊的医疗机构应当及时救治；不具备相应救治条件的，应当依照规定将感染的实验室工作人员转诊至具备相应传染病救治条件的医疗机构；具备相应传染病救治条件的医疗机构应当接诊治疗，不得拒绝救治。 第四十四条　实验室发生高致病性病原微生物泄漏时，实验室工作人员应当立即采取控制措施，防止高致病性病原微生物扩散，并同时向负责实验室感染控制工作的机构或者人员报告。 第四十五条　负责实验室感染控制工作的机构或者人员接到本条例第四十三条、第四十四条规定的报告后，应当立即启动实验室感染应急处置预案，并组织人员对该实验室生物安全状况等情况进行调查；确认发生实验室感染或者高致病性病原微生物泄漏的，应当依照本条例第十七条的规定进行报告，并同时采取控制措施，对有关人员进行医学观察或者隔离治疗，封闭实验室，防止扩散。 第四十六条　卫生主管部门或者兽医主管部门接到关于实验室发生工作人员感染事故或者病原微生物泄漏事件的报告，或者发现实验室从事病原微生物相关实验活动造成实验室感染事故的，应当立即组织疾病预防控制机构、动物防疫监督机构和医疗机构以及其他有关机构依法采取下列预防、控制措施：　　（一）封闭被病原微生物污染的实验室或者可能造成病原微生物扩散的场所；　　（二）开展流行病学调查；　　（三）对病人进行隔离治疗，对相关人员进行医学检查；　　（四）对密切接触者进行医学观察；　　（五）进行现场消毒；　　（六）对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施；　　（七）其他需要采取的预防、控制措施。 第四十七条　医疗机构或者兽医医疗机构及其执行职务的医务人员发现由于实验室感染而引起的与高致病性病原微生物相关的传染病病人、疑似传染病病人或者患有疫病、疑似患有疫病的动物，诊治的医疗机构或者兽医医疗机构应当在2小时内报告所在地的县级人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门；接到报告的卫生主管部门或者兽医主管部门应当在2小时内通报实验室所在地的县级人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门。接到通报的卫生主管部门或者兽医主管部门应当依照本条例第四十六条的规定采取预防、控制措施。 第四十八条　发生病原微生物扩散，有可能造成传染病暴发、流行时，县级以上人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门应当依照有关法律、行政法规的规定以及实验室感染应急处置预案进行处理。 [b]第五章　监督管理[/b] 第四十九条　县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自分工，履行下列职责：　　（一）对病原微生物菌（毒）种、样本的采集、运输、储存进行监督检查； 　　（二）对从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室是否符合本条例规定的条件进行监督检查；　　（三）对实验室或者实验室的设立单位培训、考核其工作人员以及上岗人员的情况进行监督检查；　　（四）对实验室是否按照有关国家标准、技术规范和操作规程从事病原微生物相关实验活动进行监督检查。　　县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门，应当主要通过检查反映实验室执行国家有关法律、行政法规以及国家标准和要求的记录、档案、报告，切实履行监督管理职责。 第五十条　县级以上人民政府卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门在履行监督检查职责时，有权进入被检查单位和病原微生物泄漏或者扩散现场调查取证、采集样品，查阅复制有关资料。需要进入从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室调查取证、采集样品的，应当指定或者委托专业机构实施。被检查单位应当予以配合，不得拒绝、阻挠。 第五十一条　国务院认证认可监督管理部门依照《中华人民共和国认证认可条例》的规定对实验室认可活动进行监督检查。 第五十二条　卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门应当依据法定的职权和程序履行职责，做到公正、公平、公开、文明、高效。 第五十三条　卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门的执法人员执行职务时，应当有2名以上执法人员参加，出示执法证件，并依照规定填写执法文书。　　现场检查笔录、采样记录等文书经核对无误后，应当由执法人员和被检查人、被采样人签名。被检查人、被采样人拒绝签名的，执法人员应当在自己签名后注明情况。 第五十四条　卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门及其执法人员执行职务，应当自觉接受社会和公民的监督。公民、法人和其他组织有权向上级人民政府及其卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门举报地方人民政府及其有关主管部门不依照规定履行职责的情况。接到举报的有关人民政府或者其卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门，应当及时调查处理。 第五十五条　上级人民政府卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门发现属于下级人民政府卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门职责范围内需要处理的事项的，应当及时告知该部门处理；下级人民政府卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门不及时处理或者不积极履行本部门职责的，上级人民政府卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门应当责令其限期改正；逾期不改正的，上级人民政府卫生主管部门、兽医主管部门、环境保护主管部门有权直接予以处理。 [b]第六章　法律责任[/b] 第五十六条　三级、四级实验室未经批准从事某种高致病性病原微生物或者疑似高致病性病原微生物实验活动的，由县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令停止有关活动，监督其将用于实验活动的病原微生物销毁或者送交保藏机构，并给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由实验室的设立单位对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 第五十七条　卫生主管部门或者兽医主管部门违反本条例的规定，准予不符合本条例规定条件的实验室从事高致病性病原微生物相关实验活动的，由作出批准决定的卫生主管部门或者兽医主管部门撤销原批准决定，责令有关实验室立即停止有关活动，并监督其将用于实验活动的病原微生物销毁或者送交保藏机构，对直接负责的主管人员和其他直接责任人员依法给予行政处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。　　因违法作出批准决定给当事人的合法权益造成损害的，作出批准决定的卫生主管部门或者兽医主管部门应当依法承担赔偿责任。 第五十八条　卫生主管部门或者兽医主管部门对出入境检验检疫机构为了检验检疫工作的紧急需要，申请在实验室对高致病性病原微生物或者疑似高致病性病原微生物开展进一步检测活动，不在法定期限内作出是否批准决定的，由其上级行政机关或者监察机关责令改正，给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，对直接负责的主管人员和其他直接责任人员依法给予撤职、开除的行政处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 第五十九条　违反本条例规定，在不符合相应生物安全要求的实验室从事病原微生物相关实验活动的，由县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令停止有关活动，监督其将用于实验活动的病原微生物销毁或者送交保藏机构，并给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由实验室的设立单位对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 第六十条　实验室有下列行为之一的，由县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令限期改正，给予警告；逾期不改正的，由实验室的设立单位对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；有许可证件的，并由原发证部门吊销有关许可证件：　　（一）未依照规定在明显位置标示国务院卫生主管部门和兽医主管部门规定的生物危险标识和生物安全实验室级别标志的；　　（二）未向原批准部门报告实验活动结果以及工作情况的；　　（三）未依照规定采集病原微生物样本，或者对所采集样本的来源、采集过程和方法等未作详细记录的；　　（四）新建、改建或者扩建一级、二级实验室未向设区的市级人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门备案的；　　（五）未依照规定定期对工作人员进行培训，或者工作人员考核不合格允许其上岗，或者批准未采取防护措施的人员进入实验室的；　　（六）实验室工作人员未遵守实验室生物安全技术规范和操作规程的；　　（七）未依照规定建立或者保存实验档案的；　　（八）未依照规定制定实验室感染应急处置预案并备案的。 第六十一条　经依法批准从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室的设立单位未建立健全安全保卫制度，或者未采取安全保卫措施的，由县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令限期改正；逾期不改正，导致高致病性病原微生物菌（毒）种、样本被盗、被抢或者造成其他严重后果的，责令停止该项实验活动，该实验室2年内不得申请从事高致病性病原微生物实验活动；造成传染病传播、流行的，该实验室设立单位的主管部门还应当对该实验室的设立单位的直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予降级、撤职、开除的处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 第六十二条　未经批准运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本，或者承运单位经批准运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本未履行保护义务，导致高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本被盗、被抢、丢失、泄漏的，由县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令采取措施，消除隐患，给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由托运单位和承运单位的主管部门对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 第六十三条　有下列行为之一的，由实验室所在地的设区的市级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令有关单位立即停止违法活动，监督其将病原微生物销毁或者送交保藏机构；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由其所在单位或者其上级主管部门对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；有许可证件的，并由原发证部门吊销有关许可证件；构成犯罪的，依法追究刑事责任：　　（一）实验室在相关实验活动结束后，未依照规定及时将病原微生物菌（毒）种和样本就地销毁或者送交保藏机构保管的；　　（二）实验室使用新技术、新方法从事高致病性病原微生物相关实验活动未经国家病原微生物实验室生物安全专家委员会论证的；　　（三）未经批准擅自从事在我国尚未发现或者已经宣布消灭的病原微生物相关实验活动的；　　（四）在未经指定的专业实验室从事在我国尚未发现或者已经宣布消灭的病原微生物相关实验活动的；　　（五）在同一个实验室的同一个独立安全区域内同时从事两种或者两种以上高致病性病原微生物的相关实验活动的。 第六十四条　认可机构对不符合实验室生物安全国家标准以及本条例规定条件的实验室予以认可，或者对符合实验室生物安全国家标准以及本条例规定条件的实验室不予认可的，由国务院认证认可监督管理部门责令限期改正，给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由国务院认证认可监督管理部门撤销其认可资格，有上级主管部门的，由其上级主管部门对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员依法给予撤职、开除的处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 第六十五条　实验室工作人员出现该实验室从事的病原微生物相关实验活动有关的感染临床症状或者体征，以及实验室发生高致病性病原微生物泄漏时，实验室负责人、实验室工作人员、负责实验室感染控制的专门机构或者人员未依照规定报告，或者未依照规定采取控制措施的，由县级以上地方人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令限期改正，给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由其设立单位对实验室主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；有许可证件的，并由原发证部门吊销有关许可证件；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 第六十六条　拒绝接受卫生主管部门、兽医主管部门依法开展有关高致病性病原微生物扩散的调查取证、采集样品等活动或者依照本条例规定采取有关预防、控制措施的，由县级以上人民政府卫生主管部门、兽医主管部门依照各自职责，责令改正，给予警告；造成传染病传播、流行以及其他严重后果的，由实验室的设立单位对实验室主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予降级、撤职、开除的处分；有许可证件的，并由原发证部门吊销有关许可证件；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 第六十七条　发生病原微生物被盗、被抢、丢失、泄漏，承运单位、护送人、保藏机构和实验室的设立单位未依照本条例的规定报告的，由所在地的县级人民政府卫生主管部门或者兽医主管部门给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由实验室的设立单位或者承运单位、保藏机构的上级主管部门对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 第六十八条　保藏机构未依照规定储存实验室送交的菌（毒）种和样本，或者未依照规定提供菌（毒）种和样本的，由其指定部门责令限期改正，收回违法提供的菌（毒）种和样本，并给予警告；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，由其所在单位或者其上级主管部门对主要负责人、直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职、开除的处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 第六十九条　县级以上人民政府有关主管部门，未依照本条例的规定履行实验室及其实验活动监督检查职责的，由有关人民政府在各自职责范围内责令改正，通报批评；造成传染病传播、流行或者其他严重后果的，对直接负责的主管人员，依法给予行政处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任。 [b]第七章　附　则[/b] 第七十条　军队实验室由中国人民解放军卫生主管部门参照本条例负责监督管理。 第七十一条　本条例施行前设立的实验室，应当自本条例施行之日起6个月内，依照本条例的规定，办理有关手续。 第七十二条　本条例自公布之日起施行。

[size=10.5pt][font=微软雅黑][b]微生物制剂发酵[/b]的物理条件研究主要有[b]发酵温度[/b]、[b]初始[/b]、[b]溶解氧[/b]。温度是微生物生长的重要环境条件之一。微生物的生长实际是生物体的一系列生物化学反应和酶反应的有机组合,温度是影响这些反应的主要因素。由于不同来源、不同菌株和培养基成分的差异,zui适培养温度有一定的差异。[/font][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]PH值影响微生物的发育增殖和各种能量代谢的化学活性等,在工业发酵过程中,值PH直接影响菌体的生长和目的产物的产生和积累,菌体还会产生酸碱物质导致发酵液值的变化,为保持值的稳定以至于不影响菌体的生长及产物的生成,常常需要补加酸碱来平衡值。[/font][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]在好氧微生物发酵时溶解氧是重要的限制性因素,尤其是液体深层发酵对氧的供应要求更高。溶解氧的调节主要靠通气量、搅拌速度、罐压等进行调节。[/font][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]此外,在液体发酵过程中往往要产生大量的泡沫,为了防止逃液和染菌,保证生产顺利进行,需在发酵液中加入消泡剂。常用的消泡剂有植物油,如花生油、豆油等,还有的用一些高分子化合物,如聚醚类消泡剂、高碳醇、有机硅消泡剂等,这类消泡剂的消泡抑泡[/font][/size]

凯氏定氮法检测期间微生物负载情况研究1凯氏定氮法检测前后产品中微生物负载情况研究本部分主要是考察人血白蛋白原液蛋白质含量检测前后产品中微生物负载水平的变化情况。1.1 材料供试品：人血白蛋白原液蛋白质含量检测前后的制品；培养基：青岛日水生物技术有限公司生产的胰酪大豆胨营养琼脂培养基（成品），批号：20150825。30-35 ℃细菌培养箱；净化超净工作台；无菌试管等。1. 2方法（1）样品的采集采用无菌的塑料试管，对连续生产的201601批至201610批共10批人血白蛋白产品原液蛋白质含量检测前后的制品进行取样，共得到20个样品。（2）试验方法根据《中国药典》2015版三部1105通则“微生物计数法”要求，在超净工作台下，每个样品取样1 ml接种到无菌的胰酪大豆胨琼脂培养基（φ脂培培养基）上，轻轻摇动，待样品分布均匀涂布后，放置于30-35 ℃细菌培养箱中培养3天，进行细菌计数。每个样品至少接种2个平皿，同时做阴性对照。1.3实验结果经30-35 ℃培养3天后，观察平皿培养结果，发现阴性对照无细菌菌落生长，人血白蛋白原液201601批至201610批细菌含量较多，菌落数均在100 cfu/ml以上，且部分平皿无法进行细菌菌落的准确计数。结果表明，人血白蛋白产品原液蛋白质含量检测前后制品中微生物含量存在批间差异，但总体来看微生物含量较多，且检测前后明显增多。图1至8为部分批次产品凯氏定氮法检测前后微生物的负载情况,图1,3,5,7为检测前，图2,4,6,8为检测后。[align=center] [img=,250,163]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151544_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图1人血白蛋白201601批 [/align][align=center][img=,236,164]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151545_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center] 图2人血白蛋白201602批[/align][align=center][img=,251,175]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151545_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图3人血白蛋白201603批[/align][align=center][img=,234,174]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151546_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center] 图4人血白蛋白201605批[/align][align=center][img=,251,166]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151546_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图5人血白蛋白201606批[/align][align=center][img=,234,165]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151546_03_1626619_3.png[/img][/align][align=center] 图6人血白蛋白201608批[/align][align=center][img=,256,156]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151546_04_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图7 人血白蛋白201609批 [/align][align=center][img=,256,156]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151547_01_1626619_3.png[/img] [/align][align=center] 图8 人血白蛋白201610批[/align]2产品中微生物负载量变化情况研究本部分主要考察凯氏定氮法检测蛋白质含量期间，随时间的延长人血白蛋白原液中微生物负载量变化的情况。通过对比检测前后制品原液中微生物负载水平的变化情况，分析由于检测时间较长带来的微生物数量的变化情况。2.1材料2.1.1 试剂供试品：人血白蛋白原液蛋白质含量检测前的制品；培养基：青岛日水生物技术有限公司生产的胰酪大豆胨营养琼脂培养基（成品），批号：20150825。2.1.2 仪器和软件30-35 ℃细菌培养箱；净化超净工作台；无菌试管等。2.2方法2.2.1样品的采集采用无菌的塑料试管，对连续生产的201601批至201603批共3批人血白蛋白产品原液蛋白质含量检测前的制品进行取样，每批样品至少取样20 ml。2.2.2试验方法根据《中国药典》2015版三部1105通则“微生物计数法”要求，将每批样品分样到13个无菌无热源的试管中，1 ml/管。放置于10-20 ℃的条件下密封保存，在超净工作台下分别把0 min、1 min、2 min、3 min、5 min、10 min、15 min、30 min、1 h、2 h、3 h时的样品取0.1 ml接种到无菌的胰酪大豆胨琼脂培养基上，轻轻摇动，待样品分布均匀涂布后，放置于30-35 ℃细菌培养箱中培养3天，进行细菌计数。每个样品至少接种2个平皿，同时做阴性对照。2.3 实验结果经30-35 ℃培养3天后，观察平皿培养结果，发现阴性对照无细菌菌落生长，表1为人血白蛋白原液201601批至201603批样品不同时间段接种的平皿中菌落平均数，图9为201601批至201603批产品不同时间段微生物数量变化趋势。[align=center]表1 不同时间段接种的平皿中菌落平均数[/align][align=center][img=,583,142]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151550_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center][/align][align=center][img=,606,282]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151551_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图9 201601批至201603批产品不同时间段微生物数量变化趋势[/align]从培养结果看，人血白蛋白原液201601批至201603批样品0 min、1 min、2 min、3 min、5 min、10 min、15 min、30 min，样品中的菌落数几乎没有变化；1 h后样品中菌落数有增长趋势。本次试验结果表明，人血白蛋白产品原液在等待凯氏定氮法检测蛋白质含量期间，制品中微生物负载量有增长的趋势。根据试验结果推算，在2-3小时后每ml人血白蛋白原液中至少含100 CFU，那么批量1000L的制品中至少含有109 个微生物，如此数量的微生物肯定会对人血白蛋白的质量（如纯度、热源）有一定的影响。但具体使用凯氏定氮法检测人血白蛋白原液蛋白质含量前后产品质量指标（如纯度、热原质等）的变化情况还有待进一步研究。结合[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]检测技术快速检测（2-3分钟）的特点，如果在人血白蛋白实际生产中应用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]快速检测技术，除了能够快速准确的为人血白蛋白生产提供非常有意义的指导外，还能有效控制产品中的微生物负载量，大大降低人血白蛋白产品的质量风险。参考文献刘文芳. 人血白蛋白分离工艺的历史沿革及发展 . 中国输血杂志, 2008, 21（4）:323-326.倪道明.《血液制品》 . 北京:人民卫生出版社, 2003.03: 19.Quinlan GJ,Martin GS, Evans TW. Albumin: biochemical properties and therapeutic potential . Hepatology. 2005. 41(6):1211-9.杨阳, 刘玉红, 王凤山.《人血清白蛋白的制备与应用研究进展》 .《中国药学杂志》, 2011, 46(24):1857-1860.杨晓波, 王晓雷, 王峰.人血白蛋白提取工艺的对比分析与改进方案 . 生命科学仪器, 2010, 08(2):44-48.张建军, 高缘, 孙婉瑾. 白蛋白作为药物载体的研究 . 化学进展, 2011, 23(8): 1747-1754.郭宾,李川. 药物与血浆蛋白结合的药理学基础及其研究进展 . 中国临床药理学和治疗学, 2005, 10(3): 241-253.张敏. 人血浆白蛋白的生理功能及临床应用 . 四川生理科学杂志, 2011, 33(1):36-38.肖婷予, 王斌. 人血白蛋白临床应用调查与分析 . 药物与临床, 2010, 45(13)1036.

微生物培养的仪器问题对于微生物的研究，拥有大量的实验材料是十分必要的，这就需要进行微生物的培养。而且，对于某些微生物病原体的检测，也是需要进行微生物的培养。所以微生物培养用的培养基的制作也就成为了最基本的实验技术。 然而现今培养基已经可以工业化生产，技术也比较成熟，也就对培养基不是那么重视了。常识性的，培养基分为天然的（Defined Media）和合成的（Complex Media） 。天然培养基是提供接近于微生物生长的自然环境的营养物质，然而为此付出的代价是我们并不完全清楚其中的物质的组成或其含量，这种培养基可以用于实验用基本培养基和生产，但在作某些实验时得到的数据会不稳定。合成的培养基是用多种高纯化学试剂配制成的，各种成分和含量都是已知的。虽然制作成本高，也很烦琐，但成分精确，重复性强，用于对于营养、代谢、生理生化特性的研究等要求较高的工作。然而可以在这种微生物培养基上生长的微生物十分有限，原应是许多微生物的生长代谢我们并不完全了解，无法配出微生物满意的营养基质。现在的微生物培养技术已经相当成熟了，然而其中总有令人不满的地方。比如，无论何时空气中总有微生物，无论是制作培养基过程中还是将微生物接种到培养基上时总会和空气接触，很容易想到不久后长出的菌落到底是谁的，样品的？还是空气的？这些也许是无法避免的，但确实会带来很多麻烦。整个过程充满着失败的可能性，没有先进的仪器设备就无法降低这种可能性，对于研究这种时时处处在身边的小东西我们总显得有点力不从心。用铁丝接种环划线就很容易弄坏培养基，更别说分离出单菌落了。这需要经验和技术，对于一个研究微生物的人来说本不该去关心的经验和技术。前人也许是这样的，但我们未必也需要这样。对于无法用肉眼观察的东西，研究和培养是很困难的，尤其是没有先进的仪器设备的时候，那种痛苦是可想而知的。我们现在用的固体培养基大都是用琼脂。在琼脂发现以前，想要做细菌的纯培养是非常困难的，那时候只有液体培养基，根本无法进行纯培养。后来用凝胶培养基，但很多细菌都无法在基质上正常生长，直到琼脂被用来做固体培养基的基质，才解决了这个难题。应为琼脂是多聚糖的硫酸盐，其中主要是D-半乳糖，一般微生物很难分解利用它。这在微生物培养上是一次很大的革新。由于材料容易获得，而且本身的特性又很好，所以至今仍在使用。然而，微生物的培养依旧受到很大限制。我们对微生物的了解还不够多，许多微生物的培养只能用天然培养基，这在要求可重复的实验中会带来很大的麻烦；另外，条件的限制导致很多实验都无法达到无菌环境，实验结果有多少是可靠的，很难说明。微生物的培养只是一种手段，但却是一种很重要的手段。虽然只要能说明研究成果就可以了，但在实际操作中也确实有着非常繁琐，难以操作的地方存在，只要做过微生物培养的实验便可以知道，想要做出漂亮的结果是非常困难的，其中需要改进的地方有很多，比如有没有办法就算再不是无菌的环境下也能尽量减少空气中细菌的干扰，可不可以用更柔软的材料做接种环来划线，有没有其他的方法来给涂布棒灭菌。不然实验失败很难找出其中的原因。虽然实验失败的可能性很多，但我们至少应该减少它发生的可能性。微生物培养基是微生物实验必不可少的组成，它以及与它有关的组成构成了微生物培养的装置，这些仪器和操作中的不确定因素太多，这样做出的实验结果是没有说服力的。这些仪器和操作有待于改进。（因为我的基础太差，所以无法指出其中需要改进的地方到底应该改成怎样，但已经明显体会到了这些仪器以及操作的不足之处。）

化学药剂对微生物的作用取决于药剂浓度、作用时间和微生物对药物的敏感性。1．重金属及其化合物 重金属离子尤其是Hg+、 Ag+和CU2+具有很强的杀菌力。重金属离子进入细胞后主要与酶或蛋白质上的-SH基结合而使之失活或变性。微量的重金属离子还能在细胞内不断累积并最终对生物发生毒害作用，此即微动作用。2．卤化物 杀菌力高低顺序是：F＞CL＞Br＞I，最常用的是碘和氯。碘 碘不可逆地与菌体蛋白质（或酶）的酪氨酸结合，生成二碘酪氨酸，使菌体失活。常用于皮肤消毒。氯 氯与水结合成次氯酸，后者易分解产生新生态氧，为强氧化剂。Cl2+H2O→HCl+HClO HClO→HCl+常用于饮水和游泳池水消毒。3．有机化合物 常用作杀菌剂的有机化合物是酚、醇、醛和有机酸等。酚及其衍生物 酚类化合物的作用主要是损伤微生物的细胞膜，钝化酶和使蛋白质变性。酚系数①被广泛用作比较化学药剂杀菌效力的标准。甲酚是酚的衍生物，杀菌力比酚强几倍。乳化的甲酚溶液即煤酚皂液（俗称来苏尔）。醇类 通过溶解细胞壁和膜中的类脂，破坏膜结构及使蛋白质脱水变性，而起杀菌作用。醇类的杀菌力，随分子量增大而增强，但丙醇以上的醇不易与水相混，所以一般不作消毒剂。甲醇杀菌力较乙醇差，且对人尤其对眼有害，也不适于作消毒剂。70％的乙醇，杀菌效果最好。醛类 能与蛋白质氨基酸中的多种基团共价结合而使其变性，是常用的杀细菌与杀真菌剂。福尔马林溶液即37％～40％的甲醛水溶液。10％的甲醛溶液熏蒸厂房、无菌室以及传染病患者的住房等，消毒效果较好。酸类 有机酸能抑制微生物（尤其是霉菌）的酶和代谢活性，常加在食品、饮料或化妆品中以防止霉菌等微生物的生长。新型气态有机化学杀菌剂 环氧乙烷是目前广泛应用的一种新型空气及器械表面消毒剂，通过用—CH2CH2OH基团取代氨基酸中的—SH、—COOH或—OH基团而使蛋白质变性。能在4h～18h内杀死微生物细胞包括芽孢，尤其适用于不能高温处理的物品的灭菌。其缺点是有毒性和纯品易爆，使用时常与二氧化碳或氮气等气体混合。4．表面活性剂 是能降低液体分子表面张力的化学物质。这类物质可以影响细胞质膜的稳定性和透性，使细胞的某些必要成分（如K+）流失而导致微生物生长停滞和死亡。肥皂和洗衣粉是阴离子表面活性剂，杀菌作用不强，但能机械性地移去微生物。杀菌作用较强的是阳离子表面活性剂，它们均是季胺类化合物，如新洁尔灭，其有效成分为溴代十二烷基二甲苄基胺，常用于皮肤、器具和空气消毒等。现市场商品名为苯扎溴铵溶液。5．染料（染色剂） 一般碱性染料比酸性染料杀菌力强。碱性染料如结晶紫、亚甲蓝、孔雀石绿、吖啶黄等在低浓度下具有明显的抑菌效果并表现出一定的特异性。因为碱性染料的阳离子基因（显色基团带正电）易与带负电的菌体蛋白结合，从而抑制细菌生长发育。G+细菌一般对碱性染料敏感，染料对它们的作用浓度（一般＜10mg/L）比对G-细菌要低十至几十倍。6．化学治疗剂 化学治疗剂是一类能选择性地抑制或杀死人畜或家禽体内的病原微生物并可用于临床治疗的特殊化学药剂。按其作用性质可分为抗代谢物和抗生素两大类。（1）抗代谢物 结构与生物体所必需的代谢物很相似，可与特定的酶结合，产生竞争性拮抗作用，这类化合物叫做抗代谢物。如磺胺类药物，其结构式为NH2— SO2NHR，与细菌生长所必需的代谢物对氨基苯甲酸NH2 —COOH的结构很相似，能在细菌合成叶酸的过程中竞争性地与二氢叶酸合成酶结合，阻止对氨基苯甲酸参与合成二氢叶酸，从而破坏细菌细胞活力。（2）抗生素 由某些生物合成或半合成的，在低浓度时就可抑制或杀死微生物、螨类和寄生虫等多种生物的化合物叫做抗生素。抗生素的作用机制随种类而异，或抑制细胞壁的合成，如青霉素等；或损伤细胞质膜，如多粘菌素等；或干扰蛋白质的合成，如链霉素等；或阻碍核酸的合成，如丝裂霉素C等。

一、微生物的传染1．传染：　　能引起人体或动物体发生传染病的微生物，称为病原微生物或致病微生物。传染是指病原微生物侵入机体后，在一定的部位生长、繁殖，并引起一系列病理生理的过程。有时不表现临床症状，成为隐性传染或带菌状态，有时则表现出临床症状。当病原微生物侵入机体后，病原微生物与机体互相作用，互相改变对方的活性与功能，因此能否引起传染病，一方面取决于病原微生物的致病能力即致病性或毒力，另方面还取决于机体的抵抗力即免疫力。2．细菌性传染的机理：　　病原性细菌引起传染的能力大小，就是细菌的毒力或致病性。细菌毒力的有无和毒力的强弱主要取决于它的侵袭力、产毒素性和引起超敏反应的能力。　　①侵袭力是指病原菌突破宿主的防御机能，并在其中进行生长繁殖和实现蔓延扩散的能力，它由三方面组成：吸附和侵入能力，繁殖与扩散能力、对宿主防御机能的抵抗力。　　②细菌产生的毒素可分为外毒素和内毒素两大类。　　外毒素是病原菌在生长繁殖期间分泌到周围环境种的一种代谢产物，主要由革兰氏阳性菌产生，少数革兰氏阴性菌也能产生。其化学组成是蛋白质，抗原性强，毒性也强，但极不稳定，对热和某些化学物质敏感，容易受到破坏。如用0.3-0.4%的甲醛处理，可使其毒性完全丧失，但仍保持其抗原性，这种经处理的外毒素称为类毒素，常用来进行预防注射。外毒素对机体的组织器官具有选择性，不同病原菌所产生的外毒素性质不同，所引起的症状也不同。常见的如：白喉棒杆菌产生的白喉外毒素、破伤风梭菌产生的破伤风毒素、霍乱弧菌产生的肠毒素、肉毒梭菌产生的肉毒毒素等。　　大多数革兰氏阴性细菌能产生内毒素，实际上它存在于细菌细胞壁的外层，属于细胞壁的组成部分，一般情况下并不分泌到环境中，只有当细菌溶解后才释放出来，因而称为内毒素。其作用没有组织器官选择性，不同病原菌产生的内毒素引起的症状大致相同，都有机体发热、腹泻、出血性休克和其它组织损伤等表现，其毒性比外毒素要低，抗原性也弱。　　③超敏反应，又称变态反应，是机体再次受到相同抗原或半抗原刺激后，产生的体液性或细胞性的异常免疫反应，从而引起组织损伤或生理机能障碍。　　病原性细菌除需要一定的毒力以外，还需要一定的数量和适当的侵入途径才能引起机体发生传染。

据欧盟委员会消息，11月29日欧盟发布No 1223/2011号法规，修订了No 1688/2005号法规，对输入芬兰与瑞典两国的部分肉类产品以及鸡蛋出产地蛋鸡的微生物检测与取样方法进行了修订。该规定将自公布之日起20天后生效。 原文链接：

营养（nutrition）：指生物体从外部环境中摄取对其生命活动必需的能量和物质，通过吸收利用以满足正常生长和繁殖需要的一种最基本的生理功能。 营养物（nutrient）：指具有营养功能的物质，那些能够满足微生物机体生长、繁殖和完成各种生理活动所需的物质。 在微生物学中，它还包括非常规物质形式的光辐射能在内。微生物的营养物可为它们的正常生命活动提供结构物质、能量、代谢调节物质和必要的生理环境。 微生物的营养物可为它们的正常生命活动提供结构物质、能量、代谢调节物质和必要的生理环境。营养物质的功能： 提供结构物质、提供能量、调节代谢、稳定生理环境。 营养物质相对性、种族差异、个体差异。 　微生物的6类营养要素一、微生物细胞的化学组成 1. 化学元素（chemical element） 构成微生物细胞的物质基础是各种化学元素！ 细胞化学元素组成（生命元素）主要元素：碳、氢、氧、氮 90~97% 大量元素：磷、硫、钾、镁、钙、铁等；微量元素：锌、锰、钠、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼等。组成微生物细胞的各类化学元素的比例常因微生物种类的不同而不同。 Eg. 细菌、酵母菌和真菌的碳、氢、氧、氮、磷、硫六种元素的含量就有差别。元素细菌酵母菌真菌碳~50~50~48氢~8~7~7氧~20~31~40氮~15~12~5磷~3————硫~1———— 硫细菌(sulfur bacteria)、铁细菌(iron bacteria)和海洋细菌(marine bacteria)相对于其他细菌则含有较多的硫、铁和钠、氯等元素, 硅藻(Diatom) 需要硅酸来构建富含(SiO2)n的细胞壁。 2. 化学成分及其分析 http://www.jxausgy.com/jp/wswx/admin/eWebEditor/UploadFile/200841204554126.gif干物质的比例：微生物 蛋白质% 碳水化合物 脂肪 矿质元素 球菌 40-50 10-25 10-30 6-10 酵母 40-60 25 4 7-10 mold 20-40 20 8-40 7 二、微生物的6类营养要素 在元素水平上都需20种左右，且以碳、氢、氧、氮、硫、磷6种元素为主；在营养要素水平上则都在六大类的范围内，即碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水。 微生物、动物、植物之间存在“营养上的统一性”。

微生物多糖包括某些细菌、真菌和蓝藻类产生的多糖，主要以三种形式存在：粘附在细胞表面上，分泌到培养基中，构成细胞的成分。微生物多糖，因其安全无毒、理化性质独特等优良性质而倍受关注。近几年，随着对微生物多糖研究的深入，世界上微生物多糖的产量和年增长量均在10%以上，而一些新型多糖年增长量在30%以上。到目前为止，已大量投产的微生物胞外多糖主要有黄原胶、热凝多糖、结冷胶、小核菌葡聚糖、短梗霉多糖等。微生物多糖具有植物多糖不具备的优良性质，它们生产周期短，不受季节、地域和病虫害条件限制，具有较强的市场竞争力和广阔的发展前景。随着对微生物多糖的结构和功能研究的不断深入，工业化的微生物多糖产品应用在各个领域，如美容养生的保健食品、工业染料的稳定剂、石油工业中的钻井泥浆处理剂、提高采油的注水稠化剂、意料中的代血浆、纺织造纸的上胶料、化妆品的拼料以及生物化学医药工业和实验室用的吸附剂、固定化酶或固定化细胞的载体等各个方面。微生物多糖的应用如此广泛，它的粘度如何呢？粘度是对流体内部摩擦的一种量度，是影响流体物理性质的一个重要参数。对于微生物多糖这种非牛顿流体来说，测定其粘度是鉴定其物理性质的一个重要方面。大部分非牛顿流体都是假塑性流体，特别是一些高分子溶液和悬浮液均具有剪切稀化的特性，假塑性流体的表观粘度随着剪切速率发生变化的范围很大，所以不能把它们作为牛顿流体来处理，必须对它的流动问题进行单独的测试。通常情况下，非牛顿流体的流变测量主要是在对流体施加一定剪切应力的条件下，通过跟踪流体对手里的响应值而获得。根据公式剪切应力Շ=kγn，k和n可以通过流变仪测出，但是流变仪价格昂贵，难以普及，因此可以通过测定不同剪切速率下的粘度值而计算出来。实验室采用美国BROOKFIELD公司的DV-S旋转粘度计测定流体的不同剪切速率下的粘度值，DV-S粘度计是BROOKFIELD最新研发的最经济的数字显示粘度计，采用全中文操作面板，操作简便，采用应力传感器，反应迅速，结合实验室仪器的使用可得到微生物多糖的粘度。

微生物絮凝剂是一类由微生物产生的有絮凝活性的代谢产物〔1〕,有糖蛋白、多糖、蛋白质、纤维素和DNA等。它是利用生物技术得到的具有生物分解性和安全性的新型、高效、无毒、无二次污染的水处理剂。它克服了无机高分子和合成有机高分子絮凝剂本身的一些缺陷,不仅能快速絮凝各种颗粒物质,而且在废水脱色、高浓度有机物去除等方面有独特效果。J . Nakamura〔2〕等人早在1976年已对能产生絮凝效果的微生物进行了研究。文献〔3〕中介绍了该方面知识, 该项技术日益受到国内同行重视〔4 - 7〕。2 　微生物絮凝剂的主要来源2. 1 　土壤土壤是人类最丰富的“菌种资源库”,因为土壤中具有微生物所需要的一切营养和微生物生长繁殖和生命活动的各种条件〔8〕,平均1000m2 土壤,微生物可达500kg～700kg。至今从土壤分离得到的微生物絮凝剂已达20 种〔4〕～〔7〕。2. 2 　废水处理厂程金平等〔9〕从活性污泥中获得8 株微生物絮凝剂产生菌,以高岭土悬浊液为处理样筛选出1株絮凝活性较高的絮凝剂产生菌,初步鉴定为酵母菌。刘紫鹃等〔10〕也从活性污泥中分离筛选到一株产絮凝剂的细菌A25,鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus2 megaterium) ,产生的絮凝剂BP - 25 具有絮凝活性高、絮凝范围广、对热稳定等优点。从1976 年,J . Nakamura〔2〕等人开始研究和筛选具有絮凝能力的微生物至今,环境科学工作者已研制和开发絮凝剂已有30 多种，见表1http://www.e-dyer.com/userfiles/image/bb%2836%29.jpg

原生动物（103），其中放线菌和霉菌指其孢子数。但各种微生物由于生理特性不同，在土壤中的分布也随着地理条件、养分、水分、土质、季节而有很大的变化。因此，在分离菌株前要根据分离筛选的目的，到相应的环境和地区去采集样品。（一）根据土壤特点1. 土壤有机质含量和通气状况一般耕作土、菜园土和近郊土壤中有机质含量丰富，营养充足，且土壤成团粒结构，通气饱水性能好，因而，微生物生长旺盛，数量多，尤其适合于细菌、放线菌生长。山坡上的森林土，植被厚，枯枝落叶多，有机质丰富，且阴暗潮湿，适合霉菌、酵母菌生长繁殖，微生物数量相应也比较少。从土层的纵剖面看，1～5cm的表层土由于阳光照射，蒸发量大，水分少，且有紫外线的杀菌作用，因而微生物数量比5～25cm土层少；25cm以下土层则因土质紧密，空气量不足，养分与水分缺乏，含菌量也逐步减少。因此，采土样最好的土层是5～25cm。一般每克土中含菌数约几十万到几十亿个，并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离到。如好气芽孢杆菌、假单胞菌、短杆菌、大肠杆菌、某些嫌气菌等。但总的说来酵母菌分布土层最浅，约5～10cm，霉菌和好氧芽孢杆菌也分布在浅土层。2. 土壤酸碱度和植被状况土壤酸碱度会影响微生物种类的分布。偏碱的土壤（pH7.0～7.5）环境，适合于细菌、放线菌生长。反之在偏酸的土壤（pH7.0以下）环境下，霉菌、酵母菌生长旺盛。由于植物根部的分泌物有所不同，因此，植被对微生物分布也有一定的影响。如番茄地或腐烂番茄堆积处有较多维生素C生产菌。葡萄或其他果树在果实成熟时，其根部附近土壤中酵母菌数量增多。豆科植物的植被下，根瘤菌数量比其他植被下占优势。3. 地理条件南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多，特别是热带和亚热带地区的土壤。许多工业微生物菌种，如抗生素产生菌，尤其是霉菌、酵母菌，大多从南方土壤中筛选出来。原因是南方温度高，温暖季节长，雨水多，相对湿度高，植物种类多，植被覆盖面大，土壤有机质丰富，造成得天独厚的微生物生长环境。4. 季节条件不同季节微生物数量有明显的变化，冬季温度低，气候干燥，微生物生长缓慢，数量最少。到了春天随着气温的升高，微生物生长旺盛，数量逐渐增加。但就南方来说，春季往往雨水多，土壤含水量高，通气不良，即使有微生物所需的温度、湿度，也不利于其生长繁殖。随后经过夏季到秋季，约有7～10个月处在较高的温度和丰富的植被下，土壤中微生物数量比任何时候都多，因此，秋季采土样最为理想。（二）采样方法用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25处的土样10～25，装入事先准备好的塑料袋内扎好。北方土壤干燥，可在10～30处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。但有时样品较多，或到外地取样，路途遥远，难以做到及时分离，则可事先用选择性培养基做好试管斜面，随身带走。到一处将取好的土样混匀，取3～4撒到试管斜面上，这样可避免菌株因不能及时分离而死亡。

因发展需要，公司准备订购一台微生物检测车，用于检测路途远，影响时效的微生物检测检测车车厢改装为洁净室，配备超净工作台和培养箱、灭菌器、冰箱，预计检测车只做：细菌、大肠、金葡问了好多专家意见都不一样，有的说可以做，有的说不行申请书上有个可移动的选项现在不清楚是作为可移动实验室申请还是作为公司设备控制就行----------------------------------------------------------------------随这辆实验车前往外地进行了一段时间的工作，发现车内空间太过狭小，工作量稍微多点就转不开身。还有车辆必须停在很平的场地，不平的地方倾注的平板都是斜的。公司投入一辆移动试验车后又有了更好的解决办法，停止了后续继续投入移动试验车的打算

蛋白胨是一种外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。它作为微生物培养基的主要原料，在抗生素，医药工业，发酵工业，生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大；不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽，因此存在各种蛋白胨，一般来说，用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（酪蛋白、肉类）和植物蛋白（豆类）两种。蛋白胨当中不仅含有丰富的氨基酸，特别是含硫氨基酸较多，而且含有更多的细菌生长需要的维生素和其它生长因子。是生物制药发酵及各种培养基制备的基础原材料。在培养基当中它起的主要作用是提供氮源。胰酪蛋白胨（Casein Tryptone)是一种优质蛋白胨，亦称胰酶蛋白胨（Pancreatic digestof Casein),或称胰蛋白胨。该蛋白胨系采用酪蛋白经胰酶消化后，浓缩干燥而成的浅黄色粉末，具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好物理性状。可配制各种微生物培养基。蛋白胨的用途：实验室用作培养基，培养细菌。食品中用作提高蛋白含量。用于饲料中显著降低了饲料厂的生产成本，是饲料行业中蛋白源不足的良好佳品。大豆蛋白胨是是用大豆为基质，采用新工艺提取而成的淡黄色粉末，含有多种营养成份，适合做微生物培养用原料。专门用于培养链球菌、肺炎球菌、布氏杆菌等，营养丰富，也可用做工业化生产的发酵原料！牛肉蛋白胨用新鲜精牛肉，采用最新工艺精致而成的类白色粉末。适合奈瑟氏菌、沙门氏菌属等生长！牛肉浸膏用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。色泽呈微黄色适宜于各种微生物培养基的基础及发酵材料。牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。该产品广泛应用于生物制药发酵及各种培养基的制备。在培养基当中它起的主要作用是补充蛋白胨以及其它氮源的营养不足。多价胨采用先进生物提取工艺精致而成，为淡黄色干燥粉末，营养极为丰富，可做多种培养基的基础。酪蛋白胨是用酪蛋白经胰酶水解精制而成，色泽呈淡黄色或白色。月示胨采用精蛋白为基质，经特殊水解提取制备的干燥粉末，营养极为丰富，可做多种培养基的基础。骨蛋白胨系蛋白质分解产物，如将牛肉、酪蛋白、牛奶粉、白明胶、大豆蛋白、丝蛋白、血纤维蛋白等为原料，经不完全的水解工艺所得的产物。市售产品以淡黄至棕黄色粉剂为主。其分子量介于月示和肽之间，约2000左右。不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。鲜骨蛋白胨采用新鲜骨为原料，经发酵喷雾干燥而成。 广泛用于黄原胶、食品添加剂、医药中间体、生物制品等发酵产品中。

微生物操作的几个概念1、病毒培养：指病毒的分离、培养、滴定、中和试验、活病毒及其蛋白纯化、病毒冻干以及产生活病毒的重组试验等操作。利用活病毒或其感染细胞（或细胞提取物），不经灭活进行的生化分析、血清学检测、免疫学检测等操作视同病毒培养。使用病毒培养物提取核酸，裂解剂或灭活剂的加入必须在与病毒培养等同级别的实验室和防护条件下进行，裂解剂或灭活剂加入后可比照未经培养的感染性材料的防护等级进行操作。2、动物感染实验：指以活病原微生物感染动物的实验。3、未经培养的感染性材料的操作：指未经培养的感染性材料在采用可靠的方法灭活前进行的病毒抗原检测、血清学检测、核酸检测、生化分析等操作。4、灭活材料的操作：指感染性材料或活病毒在采用可靠的方法灭活后进行的病毒抗原检测、血清学检测、核酸检测、生化分析、分子生物学实验等不含致病性活病毒的操作。5无感染性材料的操作：指针对确认无感染性的材料的各种操作，包括但不限于无感染性的病毒DNA或cDNA操作。6、大量活菌操作：实验操作涉及“大量”病原菌的制备，或易产生气溶胶的实验操作（如病原菌离心、冻干等）。“大量”的病原菌制备，是指病原菌的体积或浓度，大大超过了常规检测所需要的量。比如在大规模发酵、抗原和疫苗生产，病原菌进一步鉴定以及科研活动中，病原菌增殖和浓缩所需要处理的剂量。7、 样本检测：包括样本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活动。

今年上半年，在我的极力建议之下，这家公司总算决定增加微生物项目，但是要扩微生物项目就必须要有微生物检测室，装修以及微生物室的仪器购买。于是寻找报价就落到了我和质量负责人手上，在网上发布需求，很快就有很多报价单到手了。这里基本上就涉及到了采购和使用者的矛盾了，如果使用者去寻找报价，可能会哪家高就选哪家，毕竟这个行业还没有物美价廉一说。但是如果是采购去寻找报价，那就可能会只选择价格最低的，而忽略质量的要求。几个装修报价清单比对：[table][tr][td] [/td][td]A[/td][td]B[/td][td]C[/td][td]D[/td][td]E[/td][/tr][tr][td]总价（元）[/td][td]212，137[/td][td]183，500[/td][td]176，000(折)[/td][td]178，000[/td][td]150，000[/td][/tr][tr][td]装修部分[/td][td]65056[/td][td]58000[/td][td]62000[/td][td]60000[/td][td]50000[/td][/tr][tr][td]电气系统[/td][td]14188[/td][td]12000[/td][td]16488[/td][td]15000[/td][td]13000[/td][/tr][tr][td]给排水[/td][td]2868[/td][td]2500[/td][td]2488[/td][td]3000[/td][td]2000[/td][/tr][tr][td]洁净空调[/td][td]94269[/td][td]82000[/td][td]85000[/td][td]90000[/td][td]70000[/td][/tr][tr][td]其它[/td][td]35757[/td][td]28000[/td][td]21000[/td][td]15000[/td][td]15000[/td][/tr][tr][td]包含[/td][td]滴水架、更衣柜、鞋柜、水槽、风淋、边台、不锈钢台、生物安全柜（未包括）、传递窗[/td][td]水槽、风淋、边台、不锈钢台、传递窗、微生物项目咨询[/td][td]滴水架、更衣柜、鞋柜、水槽、风淋、边台、不锈钢台、传递窗[/td][td]更衣柜、边台、不锈钢台、传递窗[/td][td]更衣柜、水槽、风淋、传递窗[/td][/tr][tr][td]来源[/td][td]网上查找[/td][td]朋友介绍[/td][td]老板朋友介绍[/td][td]网上查找[/td][td]公司股东介绍[/td][/tr][/table]当然，最后选择的公司股东给介绍的价格最低的供应商，但是自始至终都存在有几个问题。1，其他服务：公司B提出可以提供微生物项目的咨询服务，并且帮助通过资质申请，这一项并未被老板重视，其实如果是刚开始建设的实验室最好应该找相应的咨询公司培训人员等，能够省下不少时间，当然是实验室里没有太多经验的技术和质量负责人而言。如果是新手没经验，我建议老板或者采购在遇到相同决策的时候可以将体系咨询（1-5万）、项目咨询（每项300-500）的价格计算进去。2，公司C提出来的报价单，有折扣价。但通过实际比价发现，包括总价以及各部分的分别的价格显示，并没有明显的价格优势，反而缺少了一些其他仪器设施的搭配。3，最后选择的公司E其实是公司股东联系老板，几番周折后敲定的合同，价格也是在接触之后从17万一直谈到15万，虽然缺少了几台大型设施，但是基础设施还是有，其他的可以通过另寻供应商等途径。最后还是那个话题，采购就是博弈，压低价格就是比耐心，切不可一下露出底价。

一、特点当今空气微生物污染所造成的严重伤害，已越来越受到重视，因而对各种空气污染采样污染采样监测的需求就更加迫切，空气微生物的数量及其大小分布乃是评价起危害的两个不可缺少的指标。本厂生产的KHW-6型六级筛孔撞击式空气微生物采样器能够测定空气微生物的数量之外，它独有的特性是还能测出这些粒子的大小，而后者是判定空气微生物危害的重要指标之一。它是由六个撞击器组合成一体，每一级实际是一个单级采样器，利用6次反复撞击原理，绝大部分粒子特别是在气管及肺沉降的粒子基本都撞击下来，因而它采集到的粒子大小范围自然比单级的广，这是一些单级撞击采样器所无法比拟的。撞击器的圆形喷口比裂隙式等喷口有更高的采样效率。采样时相对湿度逐级地升高（由第一级的39％增至第六级的88％），这十分有利于脆弱的病原微生物，特别是病毒粒子的存活，自问世以来常用不衰。二、用途KHW-6型六级筛孔撞击式空气微生物采样器可广泛用于疾病预防控制、环境保护、制药、发酵工业、食品工业、生物洁净等环境的空气微生物数量及其大小分布的采样监测，以及有关科研、教学部门作空气微生物的采样研究，为评价环境空气微生物污染的危害及其治理措施提供科学依据。三、工作原理以KHW-6型六级筛孔撞击式空气微生物采样器为例，模拟人体呼吸道的解剖结构及其空气动力学特征，采用惯用撞击原理，将悬浮在空气中的微生物粒子，按大小等级地分别收集在采样介质表面上，然后共培养及做进一步微生物分析，求出空气微生物粒子数量及其大小分布的特征。四、结构整套仪器由六级撞击器、主机（流量计）、定时器、三角架组成。-撞击器是由六级带有微笑喷孔的铝合金圆盘组成的，圆盘下方放盛有采样介质的平皿，用三个弹簧挂钩把六级圆盘紧密地连接在一起。每个圆盘上环形排列400个尺寸精确的喷孔。当含有微生物粒子的空气进入采样口后，气流速度逐级增高，不同大小的微生物粒子按空气动力学特性分别撞击在响应的采样介质表面上。第一、二级类似人体上呼吸道捕获的粒子，第三级-第六级类似下呼吸道捕获的粒子，这就在相当程度上模拟了这些粒子在呼吸道的穿透作用和沉着部位。五、技术参数1.捕获率：＞98％2.捕获粒子范围： 第一级 ＞7.0um 孔径1.18mm 第二级 4.7-7.0um 孔径0.91mm 第三级 3.3-4.7um 孔径0.71mm 第四级 2.1-3.3um 孔径0.53mm 第五级 1.1-2.1um 孔径0.34mm 第六级 0.65-1.1um 孔径0.25mm3.采样流量28.3L/min（可调节）4.电源：AV220V 功率：35W 5.体积：Φ108mm x 192mm 主机:长200mm x宽 150mm x 高125mm 6.重量：撞击器：1kg 主机：3kg六、使用方法（一）采样器的流量校正KHW-6型六级筛孔撞击式空气微生物采样器是28.3L/min，采样前校正好流量。1. 必须保证圆盘上孔眼通畅，然后按顺序将撞击器装配好，一手从上部按住撞击器，另一只手挂在三个弹簧挂钩。2. 用橡胶管连接撞击器出口→主机进气口，取下撞击器进气口的上盖。3. 将主机插上电源（AC220V），按下主机上“电源开关”，调节“流量调节”旋钮，使流量计转子稳定在28.3L/min。 （二）撞击器的清晰与消毒1.用中性洗涤剂温水清洗撞击器，用超声波洗则更好，可除去喷孔的塞物。2．若喷孔发生阻塞，用高压气流或配备的细针清除3.六级撞击器使用70％酒精擦拭消毒。（三）采样平皿的制备1.一般需氧的空气微生物采样用普通琼脂培养基（培养基1.8％-2.0％）若采集特殊微生物（如高营养的病原因，病毒，真菌等）可选用响音的采样介质。2.平民采用国产Φ90 x 18mm玻璃培养皿，用高压蒸汽灭菌后备用。3.在无菌条件下用量杯往 平皿内倒入琼脂24-30ml，琼脂表面与高密圈（8mm）一平，以保证采样时喷孔与琼脂表面之间2-3mm的最佳撞击距离。4.将加入采样介质的平皿，倒置放入37℃恒温培养箱中培养24小时，无杂菌生长方可使用（四）现场采样1.将三角架支开并锁紧，把三角架顶部调至水平，主机放在三角架上，撞击器放在桌上或地上，用橡胶管连接 撞击器出气口→主机进气口。2.顺序放入采样平皿，一手打开平皿盖，另一手迅速盖上撞击盘，然后按住撞击器上部，挂上三个弹簧挂钩。放入和取出采样平皿时，必须戴口罩，以防口鼻排出细菌污染平皿。 3．打开撞击器进气口上盖，离开采样点2米之外，即可启动采样。可用定时器设定采样时间，参照定时器使用说明书 4.采样时间长短视所才空气环境的污染程度而定，但最好不超过30分钟，一面长时间的气流冲击致使采样介质脱水而影响微生物生长。 5.为了保持菌落计数的准确性，每个平皿的均落在250个以下为宜，一般室外空气环境采10分钟，室内空气环境采1-5分钟即可。 6.采样完毕后，取出采样平皿扣上盖子，注意顺序和编号号码，切勿弄错。七、培养计数菌落 1.将采样后的平皿倒置于37℃恒温箱中培养48小时，对有特殊要求的微生物则放相应条件下培养。 2.计数各级平皿上的菌落数，一个菌落既是一个菌落形成单位（cuf）八、结果计算1.空气中微生物数量：是以每立方米空气中所含粒子数量表示之。 空气中微生物数量（cuf）/m³ = 所有平皿菌落数 / 采样时间（min） x 28.3（L/min x 1000 2.空气中微生物大小分布：是以各级的菌落数占六级总菌落数百分比表示之 各级微生物粒子数％=该级菌落数/ 六级总菌落数 x1000

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#05073b]　　食品微生物检测仪器优缺点有哪些，食品微生物检测仪器在食品行业中发挥着重要的作用，它能够快速、准确地检测食品中的微生物，保障食品的质量和安全。然而，这种仪器也存在一些优缺点。　　优点：　　快速性：食品微生物检测仪器能够在短时间内完成检测，大大提高了检测效率。传统的微生物培养方法需要数天甚至数周的时间，而现代仪器可以在几个小时内得到结果。　　准确性：这些仪器采用了先进的技术，如光学、生物化学、免疫学等原理，能够提供精确的检测结果。与传统的检测方法相比，它们的误判率更低，能够更准确地判断食品的卫生状况。　　多样性：食品微生物检测仪器可以检测多种微生物，包括细菌、病毒、真菌等。这使得它们能够更全面地评估食品的微生物污染情况。　　自动化：现代食品微生物检测仪器通常具有自动化功能，可以减少人为操作的错误和繁琐。一些仪器甚至能够自动完成样品的预处理、检测和数据分析等步骤。　　便携性：一些食品微生物检测仪器体积小巧、携带方便，可以随时随地进行检测。这对于现场监管和应急检测来说非常重要。　　缺点：　　成本较高：食品微生物检测仪器通常价格较高，对于一些小型企业和农户来说可能难以承受。此外，仪器的维护和校准也需要一定的成本。　　需要专业人员操作：这些仪器需要专业人员进行操作和维护，如果使用不当可能会影响检测结果的准确性。因此，需要投入一定的人力和培训成本。　　局限性：虽然食品微生物检测仪器可以检测多种微生物，但它们对某些特定物质的检测可能存在一定的局限性。此外，对于一些复杂样本或特殊微生物的检测可能需要更高级别的仪器和技术。　　需要定期校准和维护：为了确保检测结果的准确性和可靠性，食品微生物检测仪器需要定期进行校准和维护。如果长时间不进行校准和维护可能会影响仪器的性能和使用寿命。　　综上所述，食品微生物检测仪器在食品行业中具有重要的作用和优点，但也存在一些缺点和局限性。因此，在选择和使用这些仪器时需要根据实际情况进行权衡和选择。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405130946103402_171_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/color][/size][/font]

[font='Times New Roman']本人正在翻译USP 微生物检定法，请求各位帮忙，一起讨论有关句子的翻译。以下这段话大家觉得如何翻译比较好！“From the information available for the preparation to be assayed (the “Unknown”), assign to it an assumed potency per unit weight or volume, and on this assumption prepare on the day of the assay a stock solution and test dilution as specified for each antibiotic but with the same final diluent as used for the USP Reference Standard. The assay with five levels of the Standard requires only one level of the Unknown at a concentration assumed equal to the median level of the Standard.”[/font]

微生物学相关的一些知识及做研究的经验（转载-绝对原创）这是别人总结的一些经验，我读后引起共鸣，因为自己是搞微生物这方面的研究，觉得有必要让更多的同行园友知道这些，特此转载！微生物学相关的一些知识及做研究的经验：1：无菌操作台吹出的风一般形成是涡流，知道了这点后就对操作台的使用有个了解：如果你操作的是霉菌，则先杀菌，再在操作中操作，此时无需要吹风；当然放线菌也一样；2：操作台杀菌的原理中，紫外除了射线之外，还有个化学作用，其实就是形成臭氧，对各个死角落都会有杀菌作用，所以开着操作台紫外杀菌新鲜培养基要慎重，要考虑氧化作用；如果开着操作台风机杀菌就更不正确了。3：灭菌锅国际国内的产品均有其设计缺陷，所以请大家在灭菌的时候，最上层最好用几层废报纸，以免锅顶的水漏下；再就是灭菌完后应在97度锅里温度以下时及时打开灭菌锅，利用余热蒸煮锅内灭菌之物；否则形成倒吸，外面的空气就进去培养基里面或者物品内部去了，甚至有可能再次染菌，可能一般的人不会注意这些操作步骤。可以这么说，真正懂了这些细节之后微生物学操作才合格。4: PCR可以说是分子操作中最简单但也最难的技术，请大家深刻理解这些含义。基于全世界PCR试剂和试剂合都是人生产的，而且是那些只注意赚钱的人生产的，所以，不要轻易相信他们的说明书。我的理解是：一般酶在生产过程中，以及运输过程中（特别是运输过程达不到要求），达不到理想的要求，所以请大家在刨制PCR反应的时候：注意过量的各种酶、离子、模板非常没有必要，一定要相对定量，也就是你必须做到心中有数，而且是在冰上刨制。5： 请大家多看文献。以前说学好英语注意：精读一篇必须泛读10篇。我看文献也一样。精读一篇必须泛读10篇，而且每周关注一下最新文献，关注一下最新方法。硕士二年至少读200篇泛读，30篇以上的精读；博士至少一倍。特别强调读外文综述。看文献的时候做出批注，批注越多你积累的水平就越高了。想法才有创新。 注意找不到的外文找通讯作者或者非通讯作者要，如果不回信的，一定不是真正的科学家。而且也让他知道你正在做这个方向，保不准哪一天他会找上门和你一起合作。或者邀请你去他实验室。不要怕老外，老外的英文再好，他也会犯错误。真正懂英语的人，他只是觉得你的信写的好玩，不会鄙视你的。百度中新开发的百度硬盘非常好用；可以用它来管理你的文献。6： 多上网，上网就上最好的网站，这些网站我平时在群里提到了。现在国外非常多的免费申请培训的，只要你进去，你就有机会，就象上次一些学生到北京进行陪训一样。一些重要的专业论坛非常值得去逛。哥们，你们读了研，就好象走上了不归路，只有不断积累，才能达到一定高度。7：写文章不要怕投外文。我一个师妹投了七次同一杂志，终于接受了。影响因子2.68：所有的都要学，学习教授“三人行，必有我师”的精神。包括怎么样送红包，如何炒股等等。不要学我，做生意我没有任何窍门。因为你们很快会走上社会。9:一般的专业期刊网页中都有这个功能或者类似的功能，Table of Contents Alert for this Journal，即输入关键词，自动将新出现的文献送到你邮箱；还有一个好处就是，有一些杂志，虽然是收钱的，但最近一期还没有出版的文章，在网上先出来了，但它不是收费的，但过几周后就收费了。所以非常值得哦。10：实验之前的设计非常重要：争取一箭三雕或多雕；即做一个实验，想得尽可能周全，则得到了几个数据，可以用在几篇文章中。11:谈谈我所认识的科技创新：创新首先需要模仿。模仿的前提是该领域有多少成果，别人做了什么，有什么瓶颈或难题？其次才是升华。升华的基础是个人的知识全积累。所以你积累的越多，你崩发出的创新思维才越多。包括研究思路，包括采取的手段，方式、方法等等，各种创新。创新有大小。不能说国内的文章没有创新，有些文章创新思维非常强，但他验证的手段比较差，所以他只能发国内的文章。或者有些都达到了，但他的英文差，所以只能发国内的文章。基于此，请大家不要轻视中文期刊。很多中文期刊的内容就是你的思维源泉。12:如果你碰到了一些国内国际的新鲜事，不妨采用创新的观点来看看。上次国内的奶粉出问题，我首先就想到了应该采用一种既简便又有效的检测方法，（有点吹牛了），结果事情还没有完结，国家相关部门就全国范围内征集相关的检测方案。 如果你碰到了什么事，如果是和生命现象有关的，不妨想想微生物。因为微生物基本上无所不能，上至上天，下至下深海，包括海沟。都有他的影子。比如，微生物采矿，微生物能源，微生物芯片。智能微生物或者人工细菌。等等。这些发散性的思维对你的研究路非常有帮助

[size=4][font=Times New Roman]1 [/font][/size][size=4][font=宋体]巴氏杀菌[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=Times New Roman]1.1[/font][/size][size=4][font=宋体]巴氏杀菌的目的[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]首先杀死引起人类疾病的所有微生物，杀菌条件是[/font][/size][size=4][font=Times New Roman]62.8-65.6[/font][/size][size=4][font=宋体]，[/font][/size][size=4][font=Times New Roman]3[/font][/size][size=4][font=宋体]分钟，这就是结核杆菌的致死温度。[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]其次是尽可能的破坏这些微生物和酶类系统，以保证产品质量，这就需要比杀死致病微生物更强的热处理。[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]巴氏杀菌乳检测菌落总数，大肠菌群和致病菌[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]乳粉检测霉菌和酵母，菌落总数，大肠菌群和致病菌[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]酸牛乳检测大肠菌群，霉菌和酵母，致病菌[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=Times New Roman]2 [/font][/size][size=4][font=宋体]大肠菌群[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]一群能发酵乳糖，产酸，产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=Times New Roman]3[/font][/size][size=4][font=宋体]微生物的培养[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]微生物的培养是在人工条件下，根据微生物的生理特性，采用特定的培养基及培养条件使微生物生长，繁殖的过程，是微生物学基础理论研究和实际应用的基础。[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=Times New Roman]3.1[/font][/size][size=4][font=宋体]培养基的类型[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]培养基是人工配制的含有多种营养物质，用来培养微生物的基质。[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]琼脂：是从海藻中提取的一种多糖，具有较高的熔点（[/font][/size][size=4][font=Times New Roman]96[/font][/size][size=4][font=宋体]摄氏度）和较低的凝固点小于（[/font][/size][size=4][font=Times New Roman]40[/font][/size][size=4][font=宋体]摄氏度），对微生物无毒，且不被绝大多数微生物分解利用，是理想的凝固剂。[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=Times New Roman]3.2[/font][/size][size=4][font=宋体]配制培养基的一般原则[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]根据微生物的营养类型即培养目的选择合适的营养物质[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]不同营养物质的添加量和配比必须合理[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]合适的[/font][/size][size=4][font=Times New Roman]PH[/font][/size][size=4][font=宋体]和渗透压[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]选择合理的灭菌方法[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=Times New Roman][/font][/size]

表面微生物，微生物检测（定性试验）的一些心得提到表面微生物检测，检测人可能会很头疼。今天我想借着这个机会，把我在国外的一些同行那里吸收到的经验分享给大家，也希望借此机会可以达到共勉。那么，我们为什么需要表面微生物采集检测？首先，说说什么是表面微生物擦拭试验？因为它对于监测处理食品的环境卫生对确保食品安全至关重要。以下文章解释了擦拭试验的目的和方法，该试验被推荐用于评估微生物对环境的污染，即微生物检验的卫生监测。一、什么是擦拭试验法？ 以及它的目的是什么？导致食物中毒的微生物一般是由食物处理者带入食品厂和厨房的。然而，它们也以另外两种模式存在于食品处理环境中。第一个是空气中的细菌，它们存在于空气中。另一种是表面传播的细菌，它们粘附在各种表面上，如食品、餐具、设备、设施和食品处理人员的手和手指上。擦拭试验也是为了检测这些表面附着的细菌。 它是验证与食品有关的环境的生物卫生的测试之一。此外，在我们所在的国家里，各地方监管机关和法令指定城市制定的卫生管理和操作标准将擦拭检查描述为 "定期进行产品检查和擦拭检查以确认设施的卫生状况"。（在这里我们不再赘述。）二、擦拭试验法所揭示的内容环境中的微生物对人眼来说是看不见的。然而，通过擦拭测试的方法可用于检测和显示微生物的存在，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和诺瓦克病毒。擦拭试验法还不仅显示了导致食物中毒的微生物是否存在于试验对象上，而且如果存在，并对于它们在多大程度上存在并污染了环境做出判定。（定量和定性实验）因此，擦拭试验可用于监测食品处理环境中存在的微生物。通过检测高污染区域，有可能确定问题区域，划定风控区域并制定解决方案。三、擦拭试验方法之样品收集可以通过用试管棉签套组或者采菌棉擦拭测试对象或用介质直接接触测试对象来收集标本。用采菌棉进行擦拭测试对象，用采菌棉擦拭物体表面的一定区域。下面就做详细图例和讲解。●　用采菌棉擦拭测试对象（印章式采菌方法）?100cm2(10×10cm)范围内进行曲线采菌①砧板擦拭试验方法实例?擦拭砧板的表面②刀擦拭检查法的例子?擦拭菜刀的表面③手工擦拭检查法的例子?擦掉处理食物的人的手掌?采集工作人员指尖这种方法的优点是可以有效地从各种测试对象的表面收集微生物。●　直接盖章法培养基与待测物的表面直接接触，物体表面的微生物被转移到培养基的表面。手部擦拭试验的例子?直接在手掌上盖章之后，对其进行培养，并测量在培养基上形成的细菌菌落的数量。这种方法使用起来很简单，可以很容易地收集样品，但缺点是很难从弯曲的表面收集样品。四、其他试验法通过直接收集的标本进行培养，并计算细菌菌落的数量。用棉签擦拭的标本的培养法或ATP法进行检测。●　培养方法在培养方法中，从拭子中提取的样品溶液被涂抹在培养基上并进行培养。经过一到两天的培养，包括大肠杆菌和葡萄球菌在内的活菌的菌落数量可以用来确定测试对象的污染状况。只有经过培养之后才能确定环境中生存的微生物。●　ATP法ATP方法检测存在于生物体内的三磷酸腺苷，具有提供快速结果的优势。然而，ATP方法并不能检测微生物本身。 这些结果应仅作为一种指导。它一般用于有限的应用，例如对清洁后的环境进行评估。总结本文对擦拭试验进行了概述。处理食品的工厂和厨房的管理人员需要定期监测他们所控制的环境的卫生状况。来源：上新生物科技有限公司soukouei原创分享

[align=left]《进出口环保用微生物菌剂环境安全管理办法》自2010年5月1日起施行。[b][font=黑体]【法规标题】[/font] [font=楷体_GB2312 ][size=3][color=blue]环保用微生物菌剂进出口环境安全管理办法 [/color][/size][/font][font=黑体 ][size=3][color=black]【颁布单位】[/color][/size][/font] [font=楷体_GB2312 ][size=3][color=blue]环境保护部 国家质量监督检验检疫总局 [/color][/size][/font][font=黑体 ][size=3][color=black]【发文字号】[/color][/size][/font] [font=楷体_GB2312 ][size=3][color=blue]国环境保护部第10号 [/color][/size][/font][font=黑体 ][size=3][color=black]【颁布时间】[/color][/size][/font] [size=3][color=blue][font=楷体_GB2312]2010-4-2 [/font][/color][/size][color=#8b0000][size=5][font=楷体_GB2312] [size=3]环保用微生物菌剂进出口环境安全管理办法　　为加强进出口环保用微生物菌剂环境安全管理，维护环境安全，根据《中华人民共和国国境卫生检疫法》及其实施细则、《中华人民共和国环境保护法》等有关规定，特制定《进出口环保用微生物菌剂环境安全管理办法》。现予公布，自2010年5月1日起施行。　　环境保护部部长[/size]　[size=3]　质检总局局长 　　二○一○年四月二日[/size][/font][/size][/color][/b][font=新宋体 ][color=darkgreen][size=5][b][size=3]☆进出口环保用微生物菌剂环境安全管理办法　　第一章 总 则[/size]　　[size=3]第一条 为加强进出口环保用微生物菌剂环境安全管理，维护环境安全，根据《中华人民共和国国境卫生检疫法》及其实施细则、《中华人民共和国环境保护法》等有关规定，制定本办法。　　第二条 本办法适用于进出口环保用微生物菌剂环境安全管理。　　本办法所称环保用微生物菌剂，是指从自然界分离纯化或者经人工选育等现代生物技术手段获得的，主要用于水、大气、土壤、固体废物污染检测、治理和修复的一种或者多种微生物菌种。[/size]　　[size=3]第三条 国家对进出口环保用微生物菌剂的环境安全管理，实行检测和环境安全评价制度。　　第四条 环保用微生物菌剂进出口经营者，应当是依法成立的从事生产或者使用微生物菌剂的企业事业法人，并具备微生物菌剂安全生产、使用、储藏、运输和应急处置的能力。　　进口环保用微生物菌剂，应当按照本办法的规定申请获得《微生物菌剂样品环境安全证明》，并凭该样品环境安全证明依法办理卫生检疫审批和现场查验。[/size][/b][/size][/color][/font][/align]

微生物的基本知识一、微生物的概念与分类在自然界里，有许多内眼不能直接看见，必须借助于显微镜放大才能观察到微小生物，这些微小生物总称为微生物。微生物虽然个体微小，但具有一定的形态与结构，在适宜的环境中生长和繁殖很快，它们在自然界里起着巨大的作用，是引起各种物质转化的原因之一。例如土壤中的微生物能将动物蛋白质转化为无机含氮化合物，以供植物生长发育的需要，而植物又为人类和动物所利用。有的微生物可使人和动植物得病，而另一些微生物又可直接用来治病，如乳酸杆菌制剂乳酶治疗腹泻，有的微生物产生一些有用的物质而应用于工农业生产，如酿酒、发酵以及抗生素生产等。微生物与人类的关系至为密切，绝大多数微生物对人类是有益的，而且是必须的。没有微生物，植物就不能新陈代谢，人和动物也将无法生存，只有少数微生物可能引起人类或动杆物病害，这些具有致病性的微生物则称为病原微生物或致病菌。微生物的分类，目前公认的包括七大类。即病毒→立克次休→支原休→细菌→放线菌→螺旋体→真菌（酵母菌、霉菌）。排在前面的小而低等，排在后面的逐渐大而高等，本课程只介绍三类。二、微生物的特点微生物除了个体微小、结构简单这一基本特征以外，还有一些其他特点也是与众多生物不同的。（一）种类繁多微生物的数量和种类是十分惊人的。一滴水，一颗土粒往往都是一个微生物“社会”。其中以土壤内的生存密度最大，1克较肥活的土壤常含有几亿到几十亿个微生物；贫瘠土壤每克也含有几百万到几千万个，一只肮脏的苍蝇，全身能携带5亿多个细菌，三对足能粘附700万至1000万个细菌，可见微生物的密集度之大。微生物的各类也很可观，自然界已知的微生物就有10万种左右。有人估计，这个数仅占自然界微生物种类的1/10，所以微生物资源的开发潜力是很大的。尤其微生物的生理类型多种多样，如细菌光合作用；化能合成作用；生物固氮作用；厌氧性的生物氧化作用以及烃代谢；合成各种次生代谢产物：如抗生素、毒素、维生素、赤霉素等；分解各种复杂化合物，如纤维素、木素、甲壳素、琼脂、角蛋白；一些塑料等和分解极毒素物质，如酚、氰、甲醛、多氯联苯等。显然，微生物多种多样的代谢类型，可为生产实践和科学研究提供丰富的菌种资源。分子间的范德瓦引力，主要是由瞬间偶极引起色散力，这种微弱的作用力与分子中原子数目（相应于电子数目）有关，也与分子间大约接触面积有关。多一个碳原子时，上述两个因素都要增大。1m=102cm=106μm=109nm=1010A°（埃）（二）分布广泛微生物是地球上分布最广泛的一类生物。在辽阔的自然界中，无论土壤、水域、空气以及动物、植物、人体内外都有大量微生物存在。从炎热的赤道，到酷寒的极地；从阳光强烈的万米高空，到终年不见阳光的万米海底；从绿色无边的平原，到荒芜人烟的沙漠；从冰雪高山到泥泞沼泽，到处都有微生物的踪迹。尤其令人惊奋的是，有些微生物能够在异常的条件下生存，例如耐酸菌能在10%的硫酸溶液中生活，暗热菌能在温度高达98℃以上的温泉中生活，有的甚至在高达200～300℃的深海火山口附近也能活动，嗜盐菌在含盐量高达23%～25%的死海里，甚至30%的摘录化钠溶液中和盐块上存活，显然这是一般生物所望尘莫及的。（三）繁殖迅速微生物的繁殖速度也是同样惊人的，比高等动植物快得多，有些细菌，在适宜条件下每20分钟就可以繁殖一次，例如大肠杆菌，1个细菌经20分钟就分裂成2个，每小时可分裂3次，这样，1个细菌繁殖3代就产生8个细菌。即：1小时 =8个2小时 8×23=64个3小时 64×23=512个4小时 512×23=4096个 24小时 1×272=4.7*1021照此速度繁殖下去，24小时就可繁殖72代，数量大约为4.7*1021个。所以细菌培养24小时就可以看见菌群。其增殖速率是相当惊人的。但因种种条件（营养物质）限制，这种繁殖速度是不能持久的。尽管如此，微生物这种快速繁殖能力应用到工业发酵上，在短时间内得到大量增殖，收或较多的产物，也是有着重要意义的。（四）代谢旺盛微生物的个体虽然微小，但却有很大的表面积与体积的比值。就是说，物体分割得越细，其单位体积所占有的表面积值就越大，所以，微生物细胞实质上都是一个小体积大面积的独立生活个体，能迅速地和周围环境进行物质交换，因此，微生物具有较强的合成与分解能力，其代谢强度比高等动植物高得多。例如有人研究认为，活跃的大肠杆菌，每小时可消耗自重2000倍的糖。乳酸菌每小时可产生其自重1000～10000倍的乳酸。一种产朊假丝酵母（Candidautilis）合成蛋白质的能力是大豆的100倍，是肉用公牛的10000倍。可见，微生物的这种高效率吸收转化能力，是有巨大应用价值的。（五）容易变异微生物在漫长的进化历程中，其适应性与变异性都较高等动物、植物突出。这是由于微生物的个体小，对外界环境条件直接接触而表面特别敏感，因此，当环境剧烈变化时，多数个体容易死亡而被淘汰，少数个体则发生变异而适应新的环境。微生物的这种易变性，从利用微生物的角度讲，既有利又不利。有利的是可以利用其容易变异的特点进行菌种选育，并可在短时间内获得优良菌种。例如青霉素产生菌，最初产量每毫升只有几十单位，可是通过大量人工诱变育种，现已培育出每毫升产量达上万单位的优良菌种。不利的是即便是优良菌种也极易发生退化，若保存不当或在人工培养基上经多次传代后，菌种的优良特性。例如白僵菌菌种，经30代移种后，其致病力降低50%。可见，充分认识和运用微生物的特点，对利用和改造微生物是极为重要的。三 常见的微生物（一）细菌细菌是能够独立地进行生长繁殖的单细胞生物，种类很多，大小不一，平均约1.0μm，用显微镜放大1000倍，也只有1.0mm大小，所以肉眼看不见。通常看到的是菌落，菌落就是细菌在固定的培养基上，经过生长繁育形成许多菌集在一起，可用肉眼看见的群体。不同的细菌所形成的菌落有不同的形态，可以根据其外形结构、大小、色泽、透明度、粘稠度、边缘形状及其他特征来区别各种不同的菌类。细菌的形态是不完全相同的，一般可归纳为三种类型， [/fo