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基因分型检测

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基因分型检测相关的论坛

  • 基因芯片技术在疾病耐药性检测中的应用

    基因芯片技术对于疾病耐药性检测可从两个方面加以实现:1.在肿瘤中,通过检测肿瘤耐药基因的表达变化来分析对药物的抗性;2.在感染性疾病中,病原体的耐药性检测可通两种方式:表达谱芯片检测药物诱导的表达改变来分析其耐药性;寡核苷酸芯片检测基因组序列的亚型或突变位点从而分析其耐药性。一、多药耐药基因的表达检测肿瘤治疗中对细胞毒素药物的抗性是引起治疗失败的重要原因,是限制化疗的重要因素。机制是复杂的,由肿瘤的综合特征决定,如存活细胞的比例、血液的供给是否充分、特殊的细胞机制及多药耐药表型,多药耐药是指当肿瘤细胞暴露在某一化学治疗药物后会产生对此药及其他结构上没有联系的药物的交叉抗性,可由不同的机制引起,如MDR1、MRP、LRP等基因的过度表达,拓扑异构酶II和谷胱甘肽代谢的改变等,另外,其他促进DNA修复和抑制细胞凋亡的基因表达改变也可能导致多药耐药。检测多药耐药基因表达的变化不但可以研究恶性肿瘤的不同耐药机制,还可以用于临床诊断,以指导制定治疗方案。目前已建立了几种多药耐药检测方法,在RNA水平上有:Northern blot、Slot blot、RT-PCR、Rnase protection assay和原位杂交,从蛋白水平上的检测方法有免疫组化、Western blot及流式细胞仪等。这些方法一次只能对一个基因进行研究,效率低,难以定量检测耐药基因表达增加的幅度。基因表达谱芯片可同时对成千上万的基因表达进行检测,可以大大加速这方面的研究,在设计芯片时,可以将已知肿瘤相关基因及标记基因都点到芯片上,同时,芯片上还包含目前所有报导过的耐药基因。这样可以同时得到肿瘤的各个方面的信息。另外基因芯片还可以帮助发现新的耐药基因。二、病原体耐药性检测细菌对三种以上不同类抗菌药物耐药者即可称为多重耐药菌(multi-drug resistant bacteria, MDR)。MDR感染在全球的状况十分严重,对婴幼儿、免疫缺陷者和老年人的威胁巨大,1992年美国疾病控制中心(CDC)的资料表明,有13300例住院患者,是因为对所使用的抗菌药物耐药,细菌感染得不到控制而死亡。MDR感染已成为治疗上的难点和研究上的热点。MDR大多为条件致病菌,革兰阴性杆菌(GNR)占较大比例,如肠杆菌科中的肺炎杆菌、大肠杆菌、阴沟杆菌、粘质沙雷菌、枸橼酸菌属、志贺菌属、沙门菌属等,以及绿脓杆菌、不动杆菌属、流感杆菌等。革兰阳性菌中有甲氧西林耐药葡萄球菌(MRS),尤以MRSA和MRSE为多;万古霉素耐药肠球菌(VRE),近年来在重症监护室(ICU)中的发病率有明显增高;青霉素耐药肺炎链球菌(PRSP),常引起肺炎、脑膜炎、菌血症和中耳炎,人结核分支菌等。此外尚有淋球菌、脑膜炎球菌、霍乱弧菌等。耐药性又称抗药性,一般是指病原体的药物反应性降低的一种状态。这是由于长期应用抗菌药,病原体通过产生使药物失活的酶、改变原有代谢过程,而产生的一种使药物效果降低的反应,因而作用的剂量要不断增加。细菌对抗菌药物的耐药机制可有多种,最重要者为灭活酶的产生,如β-内酰胺酶、氨基糖苷钝化酶等;其次为靶位改变如青霉素结合蛋白(PBPs)的改变等;其他尚有胞膜通透性改变,影响药物的进入;细菌泵出系统增多、增强,以排出已进入细菌内的药物;以及胞膜主动转运减少、建立新代谢途径、增加拮抗药物等,两种以上的机制常可同时启动。耐药菌及MDR的发生和发展是抗菌药物广泛应用,特别是无指征滥用的后果。找到耐药菌的耐药基因,从而根据这些耐药基因设计新型抗生素,或将耐药菌分成不同的亚型,针对不同的亚型在临床上使用相应的抗生素,达到改善治疗效果的目的。国外采用基因芯片技术,检测耐药菌基因的改变,即检测耐药基因。如Michael Wilson就曾使用此方法检测到肺结核杆菌中脂肪酸合成酶II、fbpC、efpA、fadE23、fadE24和ahpC基因发生改变与耐药性有关。提供了新药物作用的靶目标,并指导抑制这些靶目标试剂和药物的合成。在感染性疾病中,病原体的耐药性检测可通过两种方式:1.表达谱芯片检测药物诱导的基因表达改变来分析其耐药性;2.寡核苷酸芯片检测基因组序列的亚型或突变位点从而分析其耐药性。用基因芯片不仅可以同时检测耐药菌的多个耐药基因,还可以同时对多个耐药菌的多个耐药基因进行检测。对临床上用药和新药物的合成均具有指导作用。

  • 转基因检测的必要性

    近来小编有幸找到了英格尔检测技术服务(上海)有限公司的赵老师,跟赵老师讨论了一些关于转基因检测的问题,总结如下:问:转基因食品的现状答:第一例转基因食品要追溯到1983年的转基因烟草。这是一门跨世纪的技术。是生物技术发展的重要产物。到2009年时,转基因植物的研究已经发展到120多种植物,包括抗虫,抗毒等方面的研究。如今大面积种植的作物有大豆,水稻,玉米,棉花等,而大豆的转基因作物则领先于其它。 生物技术发展到如今所显示的强大潜力,还在进一步的推进转基因食品的发展,越来越多的转基因作物出现在市场上或者实验室里。到2009年共有25个国家种植了转基因作物。其中美国是种植大户,占全球种植面积的72%。转基因作物将会在以后获得更多的发展问:转基因食品在我国是什么现状答:我国对于转基因技术的应用研究非常重视。我国的基因改良作物研究始于20世纪80年代。经过20多年的努力,我国基本形成了从基础研究到产品研发的技术体系。我国在大田作物的转基因技术中处于世界零线地位,例如棉花和水稻。如今我国正在更进一步的发展和研究基因技术,并获得国家的高度重视和支持。其中基因植物达47钟,微生物达31种,动物基因30余种。问:对于转基因食品的安全性问题您怎么看答:关于转基因食品的安全性问题如今没有一个定论。科学界一直也争论不休。同时没有长时间的实践经验我认为是无法判断其是否安全的。毕竟基因技术是在改变原有作物基因的基础上来实现其作用的。而我们生物体的构成又是以基因为基础的,所以这是个矛盾。它是否有危害需要时间来检验,谁说了都不算。实践才是检验真理的唯一标准嘛。问:您觉得对转基因食品检测有必要吗答:我觉得是非常有必要的。既然转基因食品的安全性得不到证实。那么,普通民众就有权决定自己是否食用。说的简单点是自己选择的问题,说的大一点,隐瞒真相就是侵犯民众权利的问题,这事民权的问题了。因为实验室太忙的原因采访告于段落,后续的采访下次带来。编辑:_________ 审核:_________发布范围: 微信口 媒体网站口 企业站口 论坛口 周刊 口 其他 口

  • 转基因产品,各位大侠是否有简单操作检测方法供老百姓使用?

    你吃的是转基因的大米吗?今天又收到这样一封短信通知,现在什么产品不是转基因?转基因危害很多人知,但是作为老百姓,怎么去检测呢?是否有简单操作的方法?我想这样的话,一可以造福百姓,二也可以使得那些不法人员减少销量,从而让转基因没有存在之地。

  • 转基因检测技术知多少~~~

    事件一:7月4日,俄罗斯总统普京签署法令,禁止在俄境内种植转基因作物、养殖转基因动物、生产转基因食品,并禁止俄罗斯进口转基因食品,违者将处以罚款。=======================================================================事件二:7月29日,美国总统奥巴马签署了一项有关转基因食品销售的法律,要求生产商在食品包装上标注其是否含有转基因成分,从而让消费者“买得明白”。======================================================================= 美俄两个超级大国在转基因领域的大动作,代表着一个趋势,那就是政府部门对转基因食品的监管会越来越严格,立法越来越完善,因此对检测的技术要求也会越来越高。那么目前国内转基因发展现状,转基因成分的检测技术都有哪些,依据什么原理,准确度怎么样呢,就由小编为大家简单介绍一下。~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~据国际农业生物技术应用服务组织(ISAAA)统计报道,目前国内共批准60项转基因作物事件,分别为转基因玉米17项、转基因阿根廷油菜12项、转基因大豆10项、转基因棉花10项、转基因西红柿3项、转基因水稻2项、转基因杨树2项及转基因甜椒、转基因甜菜、转基因矮牵牛花和转基因木瓜各1项。转基因技术的核心是对物种遗传物质进行人为改造,导入外源基因,从而获得预期的目的性状。因此可以通过检测材料中是否含有外源启动子、终止子、标记基因、目的基因(抗虫、抗除草剂、抗病和抗逆等基因)及其表达产物来判断是否含有转基因成分。目前国内外对转基因成分的检测从原理上可以分为两类,基于外源蛋白靶标检测和基于外源核酸成分检测。基于外源蛋白靶标的检测技术主要是以免疫分析技术为基础,利用转基因作物产生的特定的外源蛋白与抗体的特异性识别进行检测和定量的技术。常见的基于外源蛋白靶标的转基因检测技术包括酶联免疫吸附技术(ELISA)、蛋白印迹(Western blot)检测技术、免疫层析试纸条技术及蛋白质芯片技术(Protein chip)等。ELISA方法和免疫层析试纸条法快速准确,但仅可检测一种目标蛋白,而蛋白质芯片可通过设计不同的探针阵列和特定的检测方法,使一次反应同时检测多个蛋白,具有通量高、微型且自动化等优点,但背景信号高、蛋白质活性难以长久保持。蛋白质检测方法往往不能检测加工食品,而且受目的蛋白质在转基因作物中的表达部位、表达时间及环境等的影响,限制了其应用。而核酸成分,尤其是DNA,因其稳定性好,在加工过程中不易降解,被广泛用于转基因检测中。基于外源核酸成分的检测方法主要包括 PCR 技术、恒温扩增技术、基因芯片技术等。PCR技术已经成为转基因作物及产品日常检测工作中应用最广泛的技术,国内以及国际发布的食品和饲料中转基因产品的检测标准方法大都采用的PCR技术原理,应用普通PCR方法或实时荧光定量PCR可以对检测样品进行定性和定量检测。在此基础上,新的PCR技术如巢式和半巢式 PCR、多重 PCR、PCR-免疫层析等技术也成功应用于转基因成分的检测中。同 PCR 检测技术相比,恒温扩增技术具有特异性强、等温高效、操作简单、耗时较短、产物易检测及设备要求低等优势, 在快速检测中具有良好的前景。基因芯片综合了 PCR 技术和分子杂交的优点,可用于一种转基因作物中多个基因的平行检测或对多种转基因作物进行同时检测,其快速简便、自动化、微型化、高通量、准确度高等优点,使其在转基因作物检测方面具有广阔的应用前景。数字 PCR 是一种基于单分子 PCR 的对DNA分子直接计数的绝对定量方法,不需要标准品作为参考,融合了定量 PCR的准确性及基因芯片的高通量,因此有望成为绝对定量新标准,也有潜力解决转基因检测通量和劳力成本的问题。目前, 国内外针对转基因成分的检测主要以DNA为检测对象的核酸扩增检测技术为主,但是却面临着两大挑战:1、Talen和CRISPR等基因组编辑技术在转基因研发中的应用;2、加工技术水平和加工精度的提高, 导致DNA的提取难度加大,提取质量下降。但是我们相信,正是在这些挑战的激励下,我们的检测技术会不断地发展,检测人员的水平也会不断地提高。行路难!行路难!多歧路,今安在?长风破浪会有时,直挂云帆济沧海。

  • 英开发出前列腺癌症检测新法 基因活动模式成检测关键

    中国科技网讯 前列腺癌是一种十分复杂的癌症,变化多端,有的患者可以活很长时间,而有的患者却很快地死去。因此,开发出有效的检测手段来评定不同类型的病症十分重要。英国癌症研究所最新发布的新闻公报称,该所科学家最近开发出一种新的血液检测手段,可利用基因活动的特点快速检测出前列腺癌症患者病情的严重程度。研究人员相信,这一血检手段可最终与现在的PSA(前列腺特异性抗原)测试并用,用来判定哪些患者需要立即进行治疗。 在最近一期的《柳叶刀·肿瘤学》杂志上,英国癌症研究所的研究人员阐释了他们的研究成果。他们对英国100名前列腺癌症患者血液样本中的基因进行了扫描,这些患者中有69人病情已进入晚期,另外的31人则属于早期癌症患者。利用统计模型,研究人员将病人分成四组,每一组人员的基因活动方式皆不相同。在对患者长达两年半的病情进行系统评估之后,研究人员发现,其中一组患者的存活几率明显低于其他患者。而进一步分析发现,在这组患者中,每名患者身上都有9个关键基因异常活跃。通过与美国的70名前列腺癌症患者的样本进行对比后,研究人员确认,通过这9个基因的活动模式可以准确确认哪些患者的生存几率更小。数据表明,具有这种基因活动模式的患者的平均存活时间为9.2个月,而其他患者的平均存活时间则为21.6个月。 研究人员表示,对于癌症治疗来说,个性化治疗是未来的方向。最新的研究表明,通过病人的基因活动模式可以判定病患肿瘤的恶性程度,这种基因活动模式就如条形码,可快速简便地加以识别。而这种通过读取前列腺患者基因变化情况来判定癌症病情的血检手段则是一个重要的进展,可以使得医生能够更好地对病患进行针对性治疗。(驻英国记者 刘海英) 《科技日报》(2012-10-10 二版)

  • 转基因检测

    最近在开展转基因检测,转基因大豆的CaMV35S, NOS还算好P的,可转基因玉米Bt11的CaMV35S总是P出1000多拷贝的非特异性基因,而且条带也还算清晰,没有目标条带,空白,阴性对照都正常,我觉得是引物设计有问题吧?不知道版里哪位大牛来帮帮我?

  • 转基因检测方法

    "20世纪70年代以来,随着生物技术的飞速发展,尤其是基因工程技术的成熟,转基因技术在农作物的改造中得到广泛运用,转基因农作物的面积越来越大。正是因为转基因品种具有他独特的优势,比如具有很强的抗病虫害能力、高产、减少劳动投入等,给种植的人带来了巨大的经济效益,也降低了成本和人的劳动。但由于转基因食品对于人体的影响,并未经受长期的检验或者有明确的论点证明,因此转基因食品遭到大多数国家及其民众的反对和质疑。将未经验证安全可靠的食品投入市场为民所食用,是极度不安全也是不负责任的做法。因此国家食品安全法指出必须对转基因食品进行标识。而且个人认为,改变传统生物进化的做法是有违进化论,以及人类生命特征发展的。基因是决定一个个体的基础,倘若基因变了,对于食用者真的就没有一丝改变么,而这发生的改变是好是坏如今依旧无法定论。因此对于转基因食品应该做出检测并贴出明确的标识。对转基因食品的检测方法,目前主要有对外源基因的检测和对外源蛋白质的检测二大类。1. 外源基因的检测现阶段对于外源基因的检测主要是对转入的外源基因进行PCR扩增,进而在做紫外检测或荧光检测。PCR技术全称“聚合酶链反应技术”,这是一种聚合反应,是在体外由引物介导的DNA聚合酶催化的,能在短时间内准确地大量复制序列。目前英格尔检测公司(ICAS)是用自己独立的实验室,通过这种方法在做转基因检测。2.蛋白质印迹法蛋白质印迹法将电泳的较高的分离能力、抗体的特异性和显色酶反应的灵敏性结合起来,是检测复杂混合物中特异蛋白质的最有力的工具之一,普遍用于分离、检测特异的目的蛋白质,灵敏度为1-5ng。它可确定一个样品中是否含有低于或超过预定限值水平的目的蛋白质,特别用于不可溶蛋白质的分析。

  • 新型基因检测技术实现丙肝个性化诊疗

    科技日报讯(戴欣郭阳虎)近日,解放军302医院临床检验医学中心科研人员开发出一种针对丙型肝炎患者的新型基因检测技术。该技术对患者本身的白介素28B基因进行多态性分析,在国内率先将多色荧光探针技术(PCR)运用于丙肝患者临床抗病毒疗效的预测和评估中。这为快速检测丙肝患者对某种抗病毒药物是否有效提供了重要依据,从而能更有效地指导临床医务人员准确选择用药,提升治疗效果。 由于患者身体基因型的不同而导致抗病毒用药使用疗效的差异,一直是广大医师用药的困扰。业界许多专家认为,丙肝患者体内白介素28B基因的分布与抗病毒疗效可能存在非常密切的关系,掌握其分布有助于更准确的用药选择。目前国内外科研人员已相继开发了多项针对这一基因位点的检测技术,但由于操作程序复杂、周期长、准确性较差,很难应用推广,给丙肝临床诊断治疗带来一定困难。 302医院的临床检验医学中心毛远丽和王海滨带领的课题组,通过对上千例丙肝患者基因样本进行分析、检测,成功研制出一套针对丙肝患者的抗病毒治疗易感基因检测技术。该技术对多组白介素28B的基因进行筛选,通过合成DNA序列探针,构建双色荧光PCR体系,通过对患者的染色体内白介素28B的基因进行多态性分析,从而得出患者本身个别基因突变的位点。运用该方法,一小时即可完成检测,快速准确,能为患者的临床治疗提供更加准确有效的诊疗依据。 该技术在国内率先将多色荧光探针技术运用于丙肝患者临床抗病毒疗效的预测和评估,大大提高了丙肝临床诊治水平,也标志丙肝个性化诊疗迈出了重要一步。它有助于临床医生更好地选择适合丙肝患者的个性化治疗方案,准确选择抗病毒药物的种类和治疗持续时间,有效缩短患者治疗时间的同时减少就医成本。来源:中国科技网-科技日报 作者:郭阳虎 2014年01月21日

  • 一顿饭钱的基因检测,靠谱吗?

    作为生命遗传的基本单位,基因正变得愈来愈为大众所熟知。由32亿个碱基对组成的人类基因组,是一部蕴藏着生命奥秘的天书。始于1990年的国际人类基因组计划,由6国科学家共同完成,花费27亿美金,在2000年6月宣布完成。  时至今日,基因组测序的费用已经大大下降。中科院北京基因组研究所陈科博士在接受《中国科学报》记者采访时给出了下面的数据:“基因组测序费用从27亿美元到1万元人民币,时间成本从13年变成13天,人力成本从当时上千人的六国科学家,到今天的3到5人就可以搞定。总体投入小到对大部分人来说都是可用得上的。”  安吉丽娜·朱莉因为基因检测确信自己未来会罹患乳腺癌而进行了预防性切除手术,随着基因检测费用的降低,是否意味着每个普通人都可以享受到好莱坞女星般的待遇?  平价到仅一餐的价格  电视从业者田晓岩联系到《中国科学报》记者,说她最近发现了一款只要299元的基因检测产品。可以检测肥胖基因以及一些营养需求情况。  浏览该公司网站不难发现,该产品的互联网属性非常明显。目前仅有299元套餐一项产品,新用户注册立减50元,也就是说只要249元人民币、相当于一餐饭的价格,就可以体验一次“高大上”的生命解码。  付费之后,不久便可以收到该公司寄来的DNA采集包。打开一个蓝白色相间的大信封,里面装有一份说明书、两份一次性DNA 采集包——其中包含两套专用植绒棉棒、两个采样管、一份酒精消毒棉片、一份DNA 采样寄回袋,还有一张写着寄回地址的快递单。  用户只需按照说明书指示,用植绒棉棒在口腔内两侧皮肤上下刮拭15次以上,将拭子头部放进采集管即可。完成基因采样动作之后,直接用快递单把采样包寄回,两周后就可以取得自己的基因分析报告了。  田晓岩告诉记者实际上只用了大概一周的时间自己就收到了报告,用户体验也非常不错:“很方便,说明非常详细,完成整个操作只需要10分钟的时间。甚至快递单都填写好了、而且是到付。”最终她收到的报告显示自己存在新陈代谢过慢的风向,以及需要加强补充维生素E和叶酸。  “报告的内容有点简单,而且其中提供了一个人群比较数据,比较好奇这个比较是怎么来的。是基于自己的数据库吗?还是说有别的数据支撑。”田晓岩提出了自己的困惑。虽然只是抱着体验的心态,但是跟自己健康相关的东西,多少还是会有些介意。

  • 【原创大赛】实验室建设实例分享2--基因检测实验室

    【原创大赛】实验室建设实例分享2--基因检测实验室

    新建实验室分为基因检测实验室,基因检测实验室,常规理化实验室,金属元素实验室,仪器分析实验室等。限于篇幅,本文仅分享基因检测实验室建设相关内容。1,基因检测实验室的布局设计:新建实验室面积为1200平米,基因检测实验室面积约100平米左右,空间布局设计是单向流通,依次为试剂准备室,样品制备室,基因扩增室,产物分析室。每个房间均有缓冲间,外有专用洁净走廊。设有样品暂存间,保证样品状态的延续性和稳定性,有利于检测结果的准确性。基因检测实验室布局设计如图1所示。[align=center]图1 基因检测实验室布局设计草图[/align][img=,609,357]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181709564018_8310_2304991_3.png[/img] 人流通过专用洁净走廊和缓冲间进出各功能间,缓冲间门锁均为互锁结构,保证各室的环境和外界环境的隔离效果。试剂从试剂准备室的缓冲窗口进入样品制备室,样品在样品制备室进行基因提取的操作,经过缓冲窗口进入基因扩增室进行基因扩增,荧光定量PCR产物可直接分析结果,普通PCR产物需要进入产物分析室进行产物分析。扩增分析后的废弃物即污流直接通过缓冲窗口进入危废灭菌间灭菌,按照医疗垃圾标准进行无害化处理。各功能区的空气压力严格按照标准的PCR实验室建设方案来设计,基因扩增前室内为正压环境,基因扩增后室内为负压环境。实验室和缓冲间顶部装有紫外灯,供消毒用。2,仪器设备,试剂耗材采购 基因检测实验室仪器设备和试剂耗材采购根据实验室拟开展项目来确定,本实验室主要开展项目为动物源性分析,转基因植物鉴定和微生物致病菌快速鉴定等。常规的主要设备见表1。[align=center]表1 基因检测实验室主要设备清单[/align] [table][tr][td=1,1,142] [align=left]设备名称[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]数量[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]作用[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]重要性[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]生物安全柜[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]2台[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]基因检测操作[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]主要设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]灭菌锅[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]两台100L[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]灭菌[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]主要设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]实时荧光定量PCR[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]1台[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]基因扩增及分析[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]主要设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]超净工作台[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]1台[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]基因检测超净环境(百级)[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]主要设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]普通PCR[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]2台[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]基因扩增[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]主要设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]多通道[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url][/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]2套[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]电泳加样[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]主要设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]凝胶成像仪[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left] [/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]基因产物分析[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]电泳仪电源[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]1套[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]凝胶电泳[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]电泳槽[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]1套[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]凝胶电泳[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]纯水机[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]一体机[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]基因检测检测用水[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]主要设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]超微量紫外分光光度计[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left] [/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]壁挂式 消毒灭菌[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]主要设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]台式离心机[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left] [/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]制样均质[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]冰箱冰柜冷藏展示柜[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]3台[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]样品保藏,试剂保藏,菌种保藏[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url][/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]1mL,0.1mL,0.01mL各3支[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]基因检测检测[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]耐高压处理的离心管和加样器,吸头(带滤芯)[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]精密度0.2摄氏度[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]大肠杆菌,粪大肠菌群检测[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]天平[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]3台[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]配置培养基及称样用[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]金属浴[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]1台[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]加热用[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]万能粉碎机[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]3台[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]粉碎样品[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]液氮罐[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]一台[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]粉碎冷冻样品[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,142] [align=left]陶瓷研钵[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]10套[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]研磨样品[/align] [/td][td=1,1,142] [align=left]辅助设备[/align] [/td][/tr][/table][align=left] [/align][align=left]3,实验室验收及仪器设备调试[/align][align=left] 基因检测实验室设计为全封闭空间,空间四周及上层均为彩钢板结构,填充物为阻燃材料,主体颜色为哑白色,门窗玻璃为普通玻璃,为防止沉积灰尘,窗料使用R25MM铝合金圆弧压线;所有二维连接处的内侧均使用R50MM铝合金内圆角,暴露在外的二维连接线的外侧则用R100MM铝合金外角连接;彩钢板的三维连接处使用三维接点过度,而彩钢板与墙角地面则用铝合金槽连接。吊顶材料亦为彩钢板,地面为环氧树脂材料,具有无缝隙、耐腐蚀、平整、容易清洗的特征。地面地脚线用阴角铝材装饰,美观且严密性好。整个实验室内应形成坚固、无缝、平滑、美观、不反光、不积尘、不生锈、防潮、抗菌、性能优良的无菌表面和内壳。基因检测实验室入口设置有门禁和实时摄像头,可有效控制非授权人员的进入。验收标准参考GB 50591-2010《洁净室施工及验收规范》, GB 50346-2011 《生物安全实验室建筑技术规范》 现场及部分仪器设备如图所示。[/align][align=left] [img=,535,401]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708311522_01_2984502_3.jpg[/img][/align][align=left][img=,483,429]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708311522_02_2984502_3.jpg[/img][/align][align=left][img=,560,417]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708311522_03_2984502_3.jpg[/img][/align][align=left][img=,607,474]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708311522_04_2984502_3.jpg[/img][/align][align=left]3,基因检测人员培训及拟开展项目开发[/align][align=left] 基因检测实验室拟开展项目如表2所示,按计划招聘分子生物学专业硕士,有相关工作经验优先,在总部基因检测实验室培训学习6个月,考核目标为全面掌握基因检测操作技能和标准操作程序,植物转基因分析和动物源性分析等。[/align][align=center]表2 基因检测拟申请CMA资质项目表[/align] [table][tr][td=1,1,111] [align=left]项目名称[/align] [/td][td=1,1,324] [align=left]标准号[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]仪器试剂耗材是否满足要求[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]牛源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法 实时PCR法 》 SN/T 2051-2008[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]羊源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法 实时PCR法 》 SN/T 2051-2008[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]猪源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法 实时PCR法 》 SN/T 2051-2008[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]驴源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第4部分:驴成分检测 实时荧光PCR法》 SN/T 3730.4-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]马源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第5部分:马成分检测 实时荧光PCR法》 SN/T 3730.5-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]狐狸源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第3部分:狐狸成分检测 实时荧光PCR法》 SN/T 3730.3-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left][color=black]是[/color][/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]鹿源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《动物源性饲料中鹿源性成分定性检测方法 PCR方法》 GB/T 21106-2007[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]骆驼源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《动物源性饲料中骆驼源性成分定性检测方法 PCR方法》 GB/T 21100-2007[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left][color=black]是[/color][/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]貂源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第1部分:貂成分检测 实时荧光PCR法》 SN/T 3730.1-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left][color=black]是[/color][/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]兔源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《动物源性饲料中兔源性成分定性检测方法 实时荧光PCR方法》 GB/T 21102-2007[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]狗源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《动物源性饲料中狗源性成分定性检测方法 PCR方方法》 GB/T 21105-2007[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]猫源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第6部分:猫成分检测 实时荧光PCR法》 SN/T 3730.6-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]鸡源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《动物源性产品中鸡源性成分PCR检测方法》 SN/T 2978-2011[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left][color=black]是[/color][/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]鸭源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第5部分:鸭成分检测 PCR法》 SN/T 3731.5-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]鹅源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第2部分:鹅成分检测 PCR法》 SN/T 3731.2-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]鹌鹑源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第1部分:鹌鹑成分检测 PCR法》 SN/T 3731.1-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]火鸡源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第4部分:火鸡成分检测 实时荧光PCR法》 SN/T 3731.4-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]鸽子源性[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品及饲料中常见禽类品种的鉴定方法 第3部分:鸽子成分检测 实时荧光PCR法》 SN/T 3731.3-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left][color=black]是[/color][/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]虾源成分[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《出口食品过敏原成分检测 第10部分:实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分》 SN/T 1961.10-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]蟹源成分[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《出口食品过敏原成分检测 第10部分:实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分》 SN/T 1961.10-2013[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]水稻转基因成分[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《水稻及其产品中转基因成分 实时荧光PCR检测方法》 SN/T 2584-2010[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]转基因食品[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《食品中转基因植物成分定性PCR检测方法》 SN/T 1202-2010[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left][color=black]是[/color][/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]转基因产品[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《转基因产品检测 核酸定性PCR检测方法》 GB/T 19495.4-2004[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left][color=black]是[/color][/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]转基因大豆[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《大豆中转基因成分的定性PCR检测方法》 SN/T 1195-2003[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]转基因小麦[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《小麦中转基因成分PCR和实时荧光PCR定性检测方法》 SN/T 1943-2007[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][tr][td=1,1,111] [align=center]转基因玉米[/align] [/td][td=1,1,324] [align=center]《转基因成分检测 玉米检测方法》 SN/T 1196-2012[/align] [/td][td=1,1,133] [align=left]是[/align] [/td][/tr][/table][align=left] [/align][align=left]4总结[/align][align=left] 基因检测实验室建设,在设计建造过程中,主要关注点为室内空气污染控制和操作流程过程中的交叉污染控制,基因检测实验室有着及其特殊和非常严格的要求,可按照《基因检验实验室技术要求》国家质监检验总局SN/T 1193-2003进行设计和验收,硬件建好后,关注点主要是检测人员的专业素质和专业技能培训,试剂耗材的采购和标准方法的开发及技术经验的积累等,实验室人员的技术水平决定了基因检测的专业水平。[/align][align=left] [/align]

  • 热skr人的药品安全事件,药物基因毒性杂质检测

    安谱实验致力于药品质量安全,针对近期热点基因毒性杂质NDMA的检测,开发了GC-MS对12种亚硝胺检测的应用解决方案,方法简单,定量结果可靠。[align=center][b]事件背景[/b][/align]近期,某药企在对一种主要用于治疗轻、中度原发性高血压的缬沙坦原料药生产工艺优化评估时,在未知杂质中发现并检定其中一种杂质为基因毒性杂质——N-亚硝基二甲胺(NDMA)。该事件持续发酵,国内外陆续有相关缬沙坦药品被召回或暂停交易,此事件被认为是该药企发展的”“黑天鹅”。一时间,药品中基因毒性杂质的排查和有效控制问题被推上行业甚至是广大社会舆论的风口浪尖。[align=center][b]那么NDMA是什么物质,它竟能引起如此恐慌?[/b][/align]世界卫生组织(WHO)将NDMA归类为2A类致癌物质,即对人很可能致癌,此类致癌物对人致癌性证据有限,对实验动物致癌性证据充分。该基因毒性杂质广泛存在于日常食品、饮品、烟草、橡胶制品等物质当中,甚至空气、水、土壤均是其重要来源,它是世界公认的三大致癌物质之一(另外两种是黄曲霉毒素和苯并芘)。在上述涉事药企所生产的缬沙坦原料药中检测出NDMA的平均含量远超欧盟暂定标准0.3ppm的200多倍,而这是被病人长期服用的药物,因此对病人来说是药已经不是“三分毒”而是“十分毒”。安谱实验作为全国领先的实验室用品供应链管理服务商,不仅能够提供整体打包的耗材供应服务,同时也为各行业提供完备的应用解决方案。本次,安谱实验为助力制药行业基因毒性杂质的监测,开发了GC-MS对12种亚硝胺检测的应用解决方案。[b]1.检测方法[/b]色谱检测(GC-MS法):色谱柱:CD-WAX (GAEQ-103221)30m*0.25mm*0.25μm色谱柱温度程序:起始温度60℃,保持1 min;以8℃/min 升温至132℃,保持5min,以50℃/min升温至240℃,保持10 min。载气:氦气,进样量:1.0 μL进样方式:不分流离子源温度:230℃传输线温度:250℃进样口温度:240℃检测器:MS检测器(单四级杆)[b]2.实验结果[/b]配置不同浓度的12种亚硝胺混标溶液,使得其中NDMA的浓度分别为10ppb,20ppb,50ppb,100ppb,200ppb。在10ppb下,该方法仍能满足NDMA检测信噪比大于10。建立浓度和峰面积的线性曲线,得到相关系数R2=0.9997,证明该方法具有良好线性。且平行进样6针,峰面积RSD<2.0%,方法稳定,定量结果可靠。[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/e0e1977c-985f-40c3-a0a9-76abcd31704d.jpg[/img][/align][align=center]12种亚硝胺混标中NDMA标准曲线图[/align][align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/170276fe-703a-479a-ac46-6f6ba0985864.jpg[/img][/align]方法重现性表[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/dfd1dbdc-abc4-49d1-ac38-72d5cc967579.jpg[/img][/align]根据物质特征离子,该方法可以对12种亚硝胺物质分别进行精确定量检测。[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/af52a548-afa5-42b2-99a1-0684afd662e6.jpg[/img][/align][align=center]12种亚硝胺200ppb标液TIC[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]谱图[/align]化合物参数表[align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/dbda93be-ab7a-4c65-8403-0ab9dcf0e999.jpg[/img][/align][b]3.实验室耗材[/b][align=center][img]http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/197a9dc4-da74-4613-a2bc-b57178160aa9.jpg[/img][/align]想要获得更多详细的产品信息欢迎来电咨询:021-54890099或访问安谱实验电商平台:www.anpel.com.cn

  • 烟草及烟草制品转基因检测

    在中国我们的烟民有很多,像老一辈的老人百分之八十都有着不断的烟史,虽然近年来国家不断地在号召远离烟草,但是这已经成为了一种趋势一种习惯,现今在全球范围内转基因科技的广泛应用,而烟草也成为了众多转基因科技的一份子。转基因烟草就是利用转基因技术应用到烟草植物的种植中,把吞噬毒素的生物基因嫁接到了烟草植物身上,我们可以通过检测来判断是否是转基因烟草,烟草及烟草制品转基因的测定项目主要包括:1.机打片烟卷烟2.烟叶样品DNA提取方法3.样品前处理(包鲜烟叶、烤后烟叶)4.DNA提取(包括:鲜烟叶、烤后烟叶)5.DNA含量和纯度的测定(紫外区波长扫描、硝酸还原酶基因序列PCR扩增)6.转基因烟叶检测方法7共有序列引物的PCR检测(引物设计、PCR扩增体系)。这样一套完整的流程就可以为一些生产加工的烟草及烟草制品定性了。检测是一种保护手段,可以让我们看转基因产本的本质,为我们的认知选择上提供了便捷。英格尔基因实验室的专业检测团队采用PCR技术,从分子水平检测农产品、加工原料、成品中的转基因成分,为食品生产加工和流通企业、检测机构、研究院所提供全面快速、简便经济的专业基因检测服务。

  • 数字ERA技术|小海龟携手先达基因共研25分钟核酸精准定量检测产品

    2024年3月12日,上海小海龟科技与苏州先达基因在上海签署全面战略合作协议,共同推进数字ERA技术的商业化应用。目前,小海龟科技和先达基因联合开发的数字ERA技术和产品已经可以在25 min内实现核酸的精准定量检测。此次签约,将全面推进双方在数字ERA技术和产品推广上的深入合作,双方将进一步联合攻关多重和超多重的Digital ERA扩增检测技术,为更多生命科学和前沿分子诊断产品开发人员带来新的技术和产品服务;同时,双方也将基于生命科学领域的AI助手-Biobuddy系统的应用展开深入的合作,以创新的方式共同加速推动数字ERA的普及,支持全球生命科学领域创新研究。[align=center][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/3a6496f7-5a1d-4f6e-be41-ef7464b5e24e.jpg[/img][/align][b]先达基因[/b]苏州先达基因科技有限公司,致力于研究开发分子诊断POCT化产品与提供现场快速一体化解决方案。公司拥有全球自主知识产权酶促恒温扩增技术(ERA技术);基于此平台开发了多系列的核酸诊断试剂及其配套的便携式检测设备;产品涵盖公共卫生快速检测、体外分子诊断、POCT诊断试剂盒等领域,全力打造10-25分钟病原体快检项目。目前,先达基因已与国内外近千家高校院所及企业建立业务合作。截至2023年11月,累计申请专利40余项,11项专利获得授权,3项核心专利申请全球PCT。[b]小海龟科技[/b]上海小海龟科技有限公司,致力于引领生命科学与分子诊断进入数字时代,先后获批国家基因检测技术应用示范中心及国家首张数字 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]计量评价证书,已推出多款数字[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] 系统,并在全球率先推出可商用化的数字等温系统;实现了从基因检测仪器、芯片耗材、超多重试剂盒技术及超高特异性分子诊断酶的全链条技术创新。申请知识产权 70 余项,共获得近 50 项专利授权,其中发明专利20 余项。[url=https://www.instrument.com.cn/news/20240314/708830.shtml][color=#0070c0][b]21台生命科学仪器和1台医学仪器荣获“3i奖-科学仪器优秀新品奖”2023年度“提名”名单[/b][/color][/url][align=center][url=https://www.instrument.com.cn/news/topic-496.html][img=d820de71b1668ec0b2cc891dee3887db_7cf65bd5-818a-48c5-b8c6-9201968442c3.jpg]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/a95a0306-1f2a-4a5a-8cf0-509106b9abaa.jpg[/img][/url][/align][来源:仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

  • 转基因食品检测机构有哪些?

    如题:转基因作物检测大体分为两种:一是检测是否含有外源蛋白,即外源基因表达产物,主要采用酶联免疫吸附法和试纸条法;二是检测是否含有外源基因(DNA),主要有Southern杂交技术、基因芯片法和PCR检测法。讨论:1.转基因食品检测机构有那些?2.转基因食品如何检测,检测方法有哪些?

  • 知乎用户魏景亮爆料:国家转基因检测中心造假

    知乎用户魏景亮爆料:国家转基因检测中心造假

    作者:魏景亮来源:知乎1 我对自己所有言论负法律责任。2 下面讲述的所有事情都是我亲身经历,曝光的造假的检测中心是我在里面亲自工作过的。3 我本该在明年7月拿到博士学位,但我刚刚退学。我的博士方向是动物基因工程,课题方向是CRISPR基因编辑技术。以我的认识水平,我不会盲目地说转基因有毒有害,但也 必须说一句,此事存疑。欢迎科学辩论。 我叫魏景亮,过去在中国农业科学院北京畜牧兽医研究所读书,动物遗传育种专业2012级的硕士研究生,2014年转为硕博连读,专业方向是动物基因工程与细胞工程。导师是李奎教授,做转基因猪的专家,2016年6月当选为国家转基因安全委员会委员。我所在的实验室还有一个头衔,就是国家转基因检测中心。由于动物转基因产品没有市场化,也没有检测的国标,因此实验室的检测项目依然是植物转基因产品。 下面是我的肄业证http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609191024_610588_2984502_3.jpg 首先讲讲转基因检测中心。我们想要知道一个东西是否是转基因产品,需要用技术手段进行检测。目前国家有几十个检测中心,实验室。基本上都是一些高校和科研院所的科研用实验室,兼做转基因检测。 检测中心根据国标的检测方法,通常是使用国标规定的引物,对转基因产品中特定的片段进行PCR扩增,观察条带有无来确定“是否含有某转基因成分”。(插一句,任何检测中心都不能出具“本产品非转基因”的结论,不够严谨。只能说不含某转基因成分) 检测中心有着严格的质量控制体系,每年都会收到科技发展中心的能力验证任务,检测盲样通过才可以保留。每三年都由农业部,科技部等三部门联合成立专家组巡查,检查质量控制体系,档案等。 接下来开始讲这个检测中心具体的造假过程。2015年5月中旬,实验室接到通知,三年一度的转基因检测中心的档案检查将在7月份进行。导师在未经本人同意的情况下便与其他几个老师开会决定由我担任转基因检测中心的“档案员”一职,负责所有档案的制作和管理。 6月初,整个转基因检测中心在我的导师李奎的组织下进行了一次动员大会。也是在这次会上我才大概了解到所谓档案工作的真实性质。由于实验室有日常的科研任务,因此转基因检测中心日常工作中需要的所有过程性档案都没有记录,包括所有质量控制需要的,对环境的记录,仪器检查校准,标准物质和所用试剂的使用记录,按年度进行的监督员监督工作记录等。 从上次检查的2011年底后的档案,都将在之后的一个多月里补齐。而根据会议上所说,这样制作虚假档案应付检查的行为已经进行了不止一次,在三年前的检查中也是如此。这样赤裸裸的造假行为,在场的将近三十人,包括本实验室与相关实验室的诸多研究员、副研究员、助理研究员、研究生,没有一个提出问题,只有个别老师以工作忙为理由在会上推脱监督员之类的职责,但被李奎老师驳回。 会后,我私下向导师指出该行为的不妥,也提出了自己不愿继续担任这样的工作。但导师以“国家战略需要我们这样的空壳转基因检测中心作为技术储备”“不能临时更换工作人员”为由没有接受。 我作为一个学生,学位掌握在导师手中,只能根据导师的要求开始制作档案。仔细想想大概也是因为我不是常在的人员,出了问题好让我背锅。之后的近两个月里,我开始补这三年来缺失的档案,也相当于全部的人员,质量控制,技术和仪器档案。在上述过程中,实验室的转基因检测中心存在以下几个主要问题:1 大规模的“赶作业”式的档案造假 所有应该对检测活动的质量控制负责的过程性记录,都被突击式的在短短的时间里创造出来。其中,本应该定期进行的仪器维护与校准,都一次性完成。所有的标准物质领用,检测试剂领用等记录都根据需要凭空填写。质量体系文件的编写,修订,学习全部都凭空杜撰。人员的上岗考试试卷都统一抄写并自己批改。就连本应该是监督这些行为的监督意见,监督会议记录,也由档案员直接编写。而在我向院里举报时,导师还辩称,“这是把工作集中统一完成”。2 人员的冒名顶替和制作虚假劳动合同 在人员档案中,为了方便起见,有一些早已离开实验室的博士后,博士,依然承担着“检测员”的身份。于是在检查过程中需要实际实验操作的时候,实验室便找了几个硕士学生,冒名顶替这些人的身份进行实验操作。检测中心上报的所有工作人员中,有一部分是不具备资格的学生,例如我作为一个还有两年毕业的学生承担五年的“档案员”职责,这显然是不合理的。甚至还专门为此制作了一批劳动合同,有所有合法的公章和格式,但因为我们的学生身份,实际上是没有法律效力的。3 任用实验技能不熟练的硕士研究生进行检测 每一年的能力验证,检测中心都使用刚回实验室半年的硕士研究生进行检测试验。这与检测员要求的资质明显不符,也因此出现过一些错误的情况。由于是能力验证,错误都被指出了。如果是正常的检测,是有可能出现错误结论的。4 对外推脱检测委托,同时有可能私下开出虚假报告 如上一条所述,这个转基因检测中心具有一切国家承认的检测能力和效力,但实际上却是空壳子,有可能出现错误结论。对此本实验室的应对方法就是,对于找上门的一切检测委托,除了上级单位交来必须的任务,都以太忙等理由推脱,不予检测。如此就规避了可能的检测事故和法律风险。 然而在2015年10月发生了这样一件事,本检测中心的技术负责人敖红副研究员有一天突然拿了一份转基因成分的检测报告给我,让我在相应的位置签字盖章。于是我照做了。事隔几天,质量负责人崔文涛副研究员突然找到我,斥责了我未经他的允许使用检测中心公章的行为,并且告诉我之前的检测报告他们都不知情,事态严重。这件事后来也没有听说进一步的处理。这有可能是虚假检测报告,因为我没有看到有检测实验进行。如果有对应的检测试验在我没有看到的时候进行,也是在不符合规定的质量控制下进行的。 转基因检测的问题,往小了说是实验室没有严格按照国家规定执行,有一些疏忽错漏,需要整改。但那毕竟是和人民群众的食品安全相关联的检测,以这样的态度面对,以后出现检测事故几乎是必然的。更联想到,大多数转基因检测中心也都是需要承担科研任务的实验室,他们是否都按照规定严格执行着记录和质量控制?这背后涉及到的,是非常巨大的安全隐患。原本我是想向媒体揭露此事,但考虑到媒体往往断章取义或者故意曲解,这件事的曝光对转基因技术的发展可能有严重的影响,对农科院的声誉造成巨大的损害,因而始终没有这样做。但是农科院的态度一直在挑战我的底线。 自从5月17日我在中国农业科学院研究生院口头举报该事,5月30日上交此文字材料后,研究生院以向所里核实的名义拖了整整一个月,于6月17日再次约谈时,研究生院表示由于和所里是平级单位,无权处置该事,让我继续和所里谈。研究生院和畜牧所领导多次找我谈话,但言论反复无常,对于所犯的错误时而承认时而不承认。每次谈话都会谈到诉求,认为我是用他们造假的行为要挟他们,并主动提出对我的退学进行经济补偿,之后便不了了之了。我于8月初联系到了一些媒体,但这些媒体知道此事后,一直都以各种理由不予报道。其中比较有良心的记者帮我把材料反馈到了农业部,但农业部的回答就是已经上报领导,这样又过去了一个月,没有任何处理,李奎反而又堂而皇之的继续在国家转基因安全委员会的名单上。 今天我把这些经历发到网上,希望大家看到我们中国所谓的转基因科学家,专家都是怎么样的。他们的项目,经费来源都是国家的转基因专项,同时他们又负责转基因检测,转基因安全评价。他们所有的利益都与转基因相关,同时任何专家都不可能对生物体内的理化变化全部搞清楚,因为我们的科学水平就没有认知到那一步。那他们凭什么给转基因产品开出绝对的安全保证?希望大家看到后帮我扩散,还我一个公道,让我的退学没有白费。 以上为全部原文(https://zhuanlan.zhihu.com/p/22490670)。 同时还有作者好友替其担保:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609191029_610616_2984502_3.jpg http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09507.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09507.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09507.gif 小伙伴儿,对此你怎么看?

  • 【简讯】我国动植物检疫性疫病的分子检测技术取得显著进展

    国家“863计划”现代农业技术领域在动植物检疫性疫病的分子检测技术取得突破,开发出一批适用于口岸检疫和野外诊断的快速、特异、灵敏检测技术产品,研究成果获得2007年教育部科技进步一等奖. 研制出动物水泡性疾病分子鉴别检测试剂盒,并进行了验证应用。该试剂盒适合于水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、猪水泡病病毒的鉴别检测,适用于动物肌肉和内脏组织、淋巴结、扁桃体、肉品、血液、水泡皮、水泡液及OP液等样品的检测,具有特异性高、敏感性强和简便的特点。建立了基于反转录等温扩增技术的BTV、VSV、EHDV、AKV四种病毒快速检测方法。通过试验证明RT-LAMP 扩增技术是一种检测程序简单、灵敏度和特异性较高的基因检测手段,在BTV、VSV、EHDV、AKV病毒的快速检测方面具有一定的开发潜力。目前正在进行LAMP快速检测试剂盒组装的研究工作。 采用AFLP、RFLP、RT-PCR、 PCR等分子生物学技术,分别以功能基因、核糖体 ITS等区域为靶标,筛选获得了大豆疫霉病、小麦矮腥黑穗病菌、水稻细菌性条斑病菌、瓜类果斑病菌和亚洲梨火疫病菌等10多种植物检疫性疫病检测的特异性分子靶标,并开发出PCR检测试剂盒。

  • 转基因及其检测问题

    转基因检测是依据GB/T 19495.1-7还是依据SNT1202-2003、SNT1203-2003、SNT1204-2003方法检测。检测的准确率高吗,有没有漏检的情况?依据欧盟检测标准检测的结果国内认可吗?

  • 【转帖】转基因食品的危害和检测及评价

    80年代初,美国最早对转基因生物进行研究。首例转基因生物(Genetically Modified Organism,GMO)于1983年问世,转基因作物(1986)批准进行田间试验,延熟保鲜番茄(1993)(Calgene公司生产)在美国批准上市,开创了转基因植物商业应用的先例。6年来,其发展更为迅速,超出人们预料。1998年全球转基因作物和种植面积达2780万公顷,1999年增至3990万公顷,增长44%。1995-1998年全球转基因作物的销售额由0.75亿美元猛增至12-15亿美元。4年间增加了20倍。迄今,美国已批准50种转基因植物产品商业化,1/4的耕地种植的是转基因作物,其中转基因抗除草剂大豆占美国大豆总面积的55%,转基因玉米占总面积的30%。美国市场上已有近4000种食品来自转基因化生物。据国际有关方面的预测,到2010年,全世界的转基因食物的种植面积将增至6000万公顷,市场总收入将达到3万亿美元,其种子收入将达到1200亿美元。因而可以毫不夸张地说,转基因食品的新时代已经到来。随着GMO的发展,近来在全球范围内引起一场转基因生物、食品安全性的争论。支持和反对两派争锋相对,势不两立。为此,有关转基因生物安全成为历次缔约国大会、国际和区域性组织、民间团体等讨论的重要议题之一。本文就有关转基因生物和食品存在的安全性问题、检测和评价研究综述如下。

  • 基因检测行业的发展现状:国内外差距明显

    基因检测行业的发展现状:国内外差距明显此前著名影星安吉丽娜?朱莉切除乳腺一事使得基因检测成为全球关注热点,而近年来随着测序技术发展逐渐成熟和成本的不断下降,利用高通量测序技术开展基因检测项目已逐渐成为一种主流方式。特别是今年国家卫计委发布《关于产前诊断机构开展高通量基因测序产前筛查与诊断临床应用试点工作的通知》和《关于开展高通量基因测序技术临床应用试点工作的通知》后,该技术在基因检测临床应用中已得到国家认可。  基因检测是通过血液、其他体液或细胞对DNA进行检测的技术。通过基因检测,人们能了解自己的基因信息,预知疾病发生的风险,从而通过有效的干预措施避免或延缓疾病的发生。  基因检测可以用于疾病的预测,也可以用于疾病的诊断。疾病诊断是用基因检测技术检测导致遗传性疾病的突变基因。  目前应用最广泛的基因检测是通过高通量测序技术开展新生儿遗传性疾病的检测、遗传疾病的诊断和肿瘤疾病的辅助诊断。  国际基因检测行业规范现状  据统计,截至2015年12月3日,全球共有1068家临床机构和670家实验室提供的55125个基因检测项目,涉及4472种相关疾病。  国外基因检测服务开展较早,目前市场已经非常成熟,此外,国外基因检测行业已经相对规范,如美国病理学家协会(CAP)和美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)等都专门针对高通量基因测序的临床应用提出要求。  国内基因检测行业规范现状  同国外相比,国内基因检测的项目偏少,目前明确能在临床开展的基因检测项目只有不到200个,检测项目较多的主要集中在感染性疾病、肿瘤分子生物学检测以及遗传病诊断,也有些项目可应用于产前诊断、预防性诊断等。  早在2014年之前,我国还未对基因检测行业出台相应的准入标准和管理规范。2014年2月9日,国家食品药品监督管理总局与国家卫生和计划生育委员会叫停了基因检测的临床应用。2014年12月,国家卫计委先后发布了《关于开展高通量基因测序技术临床应用试点工作的通知》和《关于产前诊断机构开展高通量基因测序产前筛查与诊断临床应用试点工作的通知》,这意味着高通量基因测序技术在基因检测的临床应用获得国家的认可。  在国内,利用高通量测序技术开展较多的基因检测项目为无创产前筛查(NIPT),可开展的检测机构包含华大基因、达安基因、贝瑞和康、博奥生物、安诺优达等。

  • 【资料】19种转基因成分检测方法标准

    近日,农业部审查批准了《转基因植物及其产品成分检测 DNA提取和纯化》等19项标准。标准目录如下:1、转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂棉花MON1445及其衍生品种定性PCR方法2、转基因微生物及其产品成分检测 猪伪狂犬TK-/gE-/gI-毒株(SA215株)及其产品定性PCR方法3、转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂甜菜H7-1及其衍生品种定性PCR方法4、转基因植物及其产品成分检测 DNA提取和纯化5、转基因植物及其产品成分检测 抗病水稻M12及其衍生品种定性PCR方法6、转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂大豆MON89788及其衍生品种定性PCR方法7、转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂大豆A2704-12及其衍生品种定性PCR方法

  • 基因检测: “朱莉经验”非四海皆准

    今年5月美国影星安吉丽娜·朱莉依据特定基因检测结果,接受乳腺切除手术,以防乳腺癌变。这一“朱莉效应”如今远播海外,基因检测的热度在国内逐渐升温,以致某地出现根据基因检测评估酒量、烟瘾,甚至是幼童的天赋和未来优势。如此向基因“问卜”与“朱莉经验”挨得上吗?查基因真能助我们料事如神吗?http://www.ibioo.com/data/attachment/portal/201307/23/201831p6klrkntk8m1tb8k.jpg基因是DNA分子上的一个功能片断,是遗传信息的基本单位,是决定一切生物物种最基本的因子;基因决定人的生老病死,是健康、靓丽、长寿之因,是生命的操纵者和调控者。因此,哪里有生命,哪里就有基因,一切生命的存在与衰亡的形式都是由基因决定的。基因检测是通过血液、其他体液或细胞对DNA进行检测的技术,是取被检测者脱落的口腔黏膜细胞或其他组织细胞,扩增其基因信息后,通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测,分析它所含有的各种基因情况,从而使人们能了解自己的基因信息,预知身体患疾病的风险,从而通过改善自己的生活环境和生活习惯,避免或延缓疾病的发生。遗传学专业人士游识猷表示,说起基因检测就不能不谈及10年前美国、中国等6国科研人员共同绘制的人类基因组序列图。该图使科研人员对人类基因概况、基因指导合成蛋白质的特点、基因变化与疾病的相关因素,有了“跨越式”了解。但迄今专家能够掌握的基因与疾病的关联、基因变异探知方法,与预测实实在在的绝大多数疾病之间还有漫长距离,遑论品评后天性甚强的个性差异。有人把基因组图谱比喻成地图,好像拿着它就能随时知道我们脚下的路通往哪里。其实基因彼此间会相互调控,多种罕见的基因突变会“殊途同归”地引起某种看起来相同的病,某些基因功能会出现后天性可逆转、可遗传的改变,一个基因在不同发育时期或不同环境压力中的表现也会时好时坏。因此,基因的种种实际表达及其对人体的影响,远比形形色色的检测结果复杂得多。但朱莉所防范的乳腺癌是个特例,它是与基因突变直接相关的疾病。“朱莉的选择是理智的”,游识猷说,但若要评论这种抉择是否可以复制,就要权衡如此行事的付出与收益。朱莉体内的单个BRCA1基因突变有可能大幅提升患癌几率,只有在发现因果关联与此类同的突变后,才能考虑“防患于未然”的治疗手段。游识猷认为,虽然美国的“我与23对染色体”公司等商业机构已售卖了好几年的个人基因检测报告,但那些结论基本上“仅供娱乐”。它们要么是老生常谈的健康常识,要么模棱两可到只能让被检测者去猜。说到底,知道基因突变容易,了解为何突变及其影响就难了。

  • 【转帖】再说科技部的转基因检测

    再说科技部的转基因检测  作者:陈东坡  我之前看到cui 先生的《科技部公然反对转基因?》( XYS20100413 ),觉得其他人对这件事的某些问题可能没搞清楚,因此简单写了《科技部并非公然反对转基因》( XYS20100417 )一文,从转基因生物的强制标识制度的角度作了一些分析。但是最近浏览新语丝时,得知社会大众对这个问题反应甚大,甚至有些过度。比如张宏良教授就说自己“感到无以复加的极度悲哀”,韩寒也表明了态度,觉得转基因食品“是对中国人虎躯的一种自信”。为此,科技部本月 19 号发文解释,说对转基因食品的检测主要也是从强制标识制度出发的,“这与检验病原体、有毒有害物质不同”。社会各界对政府检验转基因的谬误甚深,因此我觉得仍然有必要从政府依法行政强制标识的角度对这个问题再作一下分析。  食品安全是一个大问题,各界都在想方设法提高食品的安全基数。我国主要规定食品安全的法律是《食品安全法》。为了细化法律的规定以及增加可执行性,国务院颁布了《食品安全法实施条例》。食品安全问题多种多样,有关转基因生物的规定主要有国务院颁布的《农业转基因生物安全管理条例》以及农业部发布的《农业转基因生物标识管理办法》。从以上几部法律文件的内容以及结构来分析,法律实质上并没有办法对食品是否安全进行规定。法律规定的是遵从何种程序,食品安全的风险能降到最低的级别,并在出现风险后,能够以最快的速度排除风险,且可以对违反程序的主体进行处罚。食品安全的法律法规事实上并不是实体规则,而是程序规则。对食品的安全进行实体约束的是食品安全标准,法律法规只是承认这些食品安全标准的效力并赋予这些标准强制性。  在转基因生物的强制标识制度上,我觉得我国之所以实行强制标识主要基于以下两方面考虑: 1、保证消费者知情权;2 、来源识别。保证消费者知情权比较容易解释,因为知情权是消费者权益保护的基本内容,下面主要说来源识别的问题。  与传统的简单食品生产不一样,转基因食品的销售、生产过程需要更为严格的控制,因为目前尚不能确定植入有害的基因片段对食用者的安全风险,并且这种安全风险不能通过常规的看、闻甚至普通的检验方式等方法识别。为此,在进行转基因生物的研究、生产、进口、销售环节中,必须做相应的标识。一旦发现转基因食品有危害人体或环境的危险,那么根据相应的转基因标识可以跟踪危害的来源进而快速地找到原因、提供解决办法。那么,政府在这方面的主要职责就是保证转基因食品的标识制度能有效实施。但是转基因食品和普通食品从外观上并无法直观判断,因此必须拥有识别转基因食品与普通食品的检验方法。从这点上来说,转基因食品的强制标识制度意味着政府必须拥有相应的检验手段对不执行标识制度的经营者进行查处。从行政法的角度而言,如果我在超市购买了转基因大豆而没有标识,即使大豆没有问题,我仍然可以向农业部门投诉要求查处;如果农业部门没有查处,就是所谓的行政不作为,我作为行政相对人可以对该农业部门提起行政诉讼,要求其履行法定职权(查处销售转基因食品而没有标识的行为)。从这个意义上来考量,行政机关使用试剂盒检验转基因食品与转基因食品的安全与否并没有直接联系,即使这些转基因食品完全没有问题,但只要是目录所列的转基因食品,不标识就意味着违法,不标识就意味着行政机关可以课以行政处罚。这里我们也可以看到食品安全法律具有明显的程序规则特征。  程序规则着重强调的就是程序的正当,这也就意味着它们往往和实体规则无关。行政机关作出一个具体行政行为,但是没有按照法定程序,那这个行为不合法;转基因食品没有问题,但是在目录所列而没有标识,那这个食品不及格。我们说那个行政行为不合法是因为它没有按照程序作出;我们说那个转基因食品不及格,仅仅是因为它没有标识。

  • 【分享】“基因检测”

    【分享】“基因检测”

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105021251_291831_2185349_3.jpg时至今日,如果有哪个高人说他可以通过某种手段预知您哪天可能遭到雷击或出车祸而且如果你愿意破财,他可以化解之,您一定会对其嗤之以鼻。可若有人说如今一项低额的基因检测就能帮你找到身体健康方面的最大威胁,您信么?

  • 新型的基因分型技术(SNP分型):巢式PCR-RFLP技术

    随着生命科学迅猛的发展,与之相适应的实验技术手段越来越复杂和专业化,对于科研人员实验技能要求也越来越高。由于生物学实验高度的复杂性、使得一个科研人员往往只能精通某一方向的实验。因此许多生物技术公司应孕而生,他们提供了许多专业的服务,其中最常规的技术服务包括核酸、蛋白测序、引物合成,SNP分型,动物培养及转基因动物实验。在国外,生命科学的研究已经初步形成了一个大型技术平台共享的研究形式,科研人员的主要工作是进行实验方案的设计、若干实验和实验数据的分析工作,而大量的基础性的实验工作则由相应的技术公司来完成,据不完全统计,2004年全美60%的SNP分型工作就是外包的生物技术公司完成。因为专业的技术公司在各自领域有着雄厚的技术背景和丰富的实验经验,试验成功率更高,实验数据也更可靠,这样科研人员也能够将主要精力放在真正的科研-实验设计和数据分析中去。出具有针对性的SNP分型技术,“巢式PCR-RFLP”基因分型技术,不同于传统的只能对于有酶切位点的传统的SNP分型的技术,本公司开发的“巢式PCR-RFLP是针对任意的基因分型技术,使任何位点最终都能进行常规限制性内切酶鉴定;同时该SNP分型技术利用巢式PCR技术,使得多个位点同时进行分析称为可能。即使低浓度的DNA也能够进行快速准确的分型工作。 与现有常规的分型技术相比,其最大的优势包括:(一)所需DNA浓度低。1-2ng/uL也能完成检测工作,而Taqman技术所需的DNA含量至少5ng/uL。(二)价格低。由于不需要合成荧光探针,使得该技术比Taqman技术价格低,该优势在对多个位点同时进行分型时更明显。与Taqman技术和普通技术的详细对比分型技术 PCR-RFLP技术 Taqman技术 普通PCR-RFLP技术   最佳运用时机 200-600样本,任何DNA多态位点 样本量大于500人份 仅适合含有现成酶切位点的多态位点的分型  试剂投入 低 荧光探针,需3000-4000元。有可能实验失败需重新花钱设计荧光探针。 低  技术的适用性 可适合任何多态位点的分型 基本适合任何多态位点的分型,但有时若干位点不能成功进行试验;当分型位点过于接近也不能用该方法。 仅适合含有现成酶切位点的多态位点的分型,有时出现的是一些稀有酶的酶切位点,导致效率低下或费用昂贵; 结果判断 直观,明确,稳定 间接,每管反应必须加荧光参照ROX,否则结果判断不确定 一般直观,明确;有时酶切位点出现在非主频等位基因上,导致结果判读困难  结果稳定性 稳定 一般 稳定  结果准确性 准确度高 一般 准确度高  样本消耗量 1-2ng 5-10ng 50-100ng  实验耗时 2-3周 由于要定制MGB荧光探针,和预实验,也需要2-3周 2-3周操作流程 1.基本信息收集具体内容包括客户信息、样本数(case,control)数、位点信息等。 2 位点信息的查询 主要包括:2.1 位点上下游各300bp的确切序列,基因频度;2.2 有无文献报道证明该位点多态存在于中国人群;2.3 如无上述相关文献,在J-SNP数据库中查询该位点多态是否存在于东亚人群中。为了保证结果的可靠,实验方案设计原则上应以野生型进行酶切鉴定,因此确认snp的频度是非常重要的。3.样品质控从全部样品中取8%样品,即96个样品中取8个样品,用我们的一对特异的PCR引物进行样品质控,以检测送来样品是否良好。因为客户样品质量是实验成功的关键因素之一,只有客户提供的样品质量可靠稳定,那么结果自然就好。4.引物设计同时设计AB两套方案,分别以正链和负链为模板设计引物。5.单管测试进行实验方案可行性尝试,首先要在多种温度,多种Mg离子、多种添加剂加入的情况下进行方案的可行性测试,对于所有单管测试的结果都送去测序,以保证序列的正确性,在实验结果得到确认的基础上,挑选稳定的方案进入中试过程。6.中试抽取8个样品做小规模批量实验,以模拟和检查批量PCR情况和酶切情况。7.大规模实验准备将DNA模板按方案进行一次性分板(有冗余),并引入阳性和阴性对照,同时将所有相关的PCR体系进行一次性大规模分装,防止污染。 8.第一板数据先用一板模板进行一轮PCR和酶切,以检验体系和分板的情况。 9.正式实验相关技术要点 1.实验设计必需保证野生型的被限制性内切酶切开因为对于只有少量突变型的SNP位点,如果突变型被切开,那么所得到的实验结果就是大量没有被酶切开的PCR产物,而这个结果与酶切实验失败的结果非常类似,不易区分,对结果的判读造成很大的麻烦,因此保证了主频碱基被解开,从根本上保证了实验的可靠性。2.偏向性扩增的解决。所谓偏向性扩增是因为SNP位点上会往往存在嘌吟和嘧啶的替换,在PCR过程中,聚合反应对嘧啶(C或T)比较敏感,使得嘌吟(A或T)的扩增非常少,而出现偏向性扩增,这在SNP位点附近嘌吟含量较高时特别明显。为此,本公司专门设计一个方案,用以克服偏向性扩增。3.方案设计中的内切酶的选择虽然从理论上,我们的方案可以进行任意位点改造,但事实上在改造过程中会出现一系列的问题,包括扩增效率,碱基划移等一系列问题,使得改造方案失败。对此,我们公司专业开发了一个引物设计软件,通过运算获得最佳的改造方案,同时通过在正向和反向序列上同时设计方案,以保证试验的成功。4.PCR产物的污染问题在大规模的PCR过程中,最严重的问题是PCR产物污染,据我们经验总结,80%以上的污染是由于接触式污染,剩余的污染则包括气溶胶污染等环境造成的污染。对于PCR污染这个问题,本公司制订了严格的实验措施,具体包括使用滤芯抢头、所有PCR体系全部分装、PCR体系与各类模板严格分离、配置体系人员与接触PCR产物人员严格分离等一系列措施,同时在处理PCR管,eppendorf管时也规定了详细的操作过程。5.关于质量控制问题在每板PCR过程中,我们会放入两个阴性对照和一个重复对照,以确认PCR的过程中不会产生污染和PCR的结果确实可信。技术基本原理和实例采用的巢式PCR-RFLP分型技术,其基本原来是利用PCR引物的3’端,对SNP位点附近的碱基进行人为改造,产生一个常规的限制性内切酶识别序列,如SNP rs1321425(rs1321425-来自NCBI的refSNP数据库)的C/G,其任何一个碱基和上下游碱基无法形成一个可直接被限制性内切酶识别的序列,于是我们对SNP位点前的上游碱基进行改造,通过对序列的分析和PCR效果的计算,我们将原本四个碱基AGAT改成CTGC,结合后一个碱基A以及SNP位点G,形成CTGCAG(PstI)酶切识别位点,经测序和序列对比,改造成功。又比如rs9309462和rs4646642,成功的将2个碱基,3个碱基进行成功的改造。rs1321425TCACAAAAAATAAAAAATTTTAATTTTAAAGGAGATA C/G ACAAGAAATGAGCATGTGTGAAAGCAC TTCTGTAAACTACATGCACTAAT

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