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基因突变检测

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  • 基于TILLING技术的基因突变分析

    基于TILLING技术的基因突变分析

    [align=center][b][font=黑体][font=黑体]基于[/font][font=黑体]TILLING技术的基因突变分析[/font][/font][/b][/align][align=center][/align][font=黑体]小麦是我国主要的粮食作物，其栽培面积和总产量仅次于水稻，随着生活水平的日益提高，人们对小麦品质的要求也越来越高，因此，品质改良已成为小麦育种工作的重要目标之一[/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]1[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体]。[/font][font=黑体][font=黑体]小麦是异源[/font][font=Times New Roman]6[/font][font=黑体]倍体植物，基因组庞大，突变机制较为复杂[/font][/font][font=黑体][font=黑体]，反向遗传学技术，例如[/font][font=Times New Roman]T-DNA[/font][font=黑体]插入、转座子标签，已经越来越多的应用于研究中。然而，这些方法大多数，应用于基因组较小的模式植物，小麦的多倍性及转化体获得的难度，制约了这些方法的更好使用，而[/font][font=Times New Roman]TILLING[/font][font=黑体]技术不受物种倍性影响，[/font][/font][font=黑体]推动了基因功能研究和品质改良的发展[/font][font=黑体]。[/font][b][font=黑体][font=宋体]1 [/font][font=黑体]材料与方法[/font][/font][/b][font=黑体][font=Times New Roman]1.1 [/font][/font][font=黑体]植物[/font][font=黑体]材料[/font][font=黑体]春小麦（[/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]Triticum aestivum[/font][/font][/i][font=黑体] [font=Times New Roman]L.[/font][font=黑体]）品种龙辐麦[/font][/font][font='Times New Roman']17[font=黑体]经航天诱变[/font][/font][font=黑体]选育而成。[/font][font=黑体][font=黑体]共获得[/font][font=Times New Roman]1122[/font][font=黑体]个[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]EMS[/font][font=黑体]诱变的龙辐麦[/font][/font][font='Times New Roman']17[/font][font=黑体] [font=Times New Roman]M[/font][/font][sub][font=黑体][font=Times New Roman]2[/font][/font][/sub][font=黑体]代单粒传[/font][font=黑体]植株，苗期单株编号，采集[/font][font=黑体][font=黑体]叶片，迅速冷冻干燥，用于[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=黑体]提取。[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]1.2 [/font][font=黑体]基因组[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=黑体]提取及[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=黑体]池构建[/font][/font][font=黑体][font=黑体]将干燥后的叶片按编号置于装有珠子的[/font][font=Times New Roman]1.5ml[/font][font=黑体]离心管中，利用组织研磨器[/font][font=Times New Roman]Vibration Mill Type MM301[/font][font=黑体]（[/font][font=Times New Roman]Retsch GmbH Co, Germany[/font][font=黑体]）将叶片磨成粉末状；加[/font][font=Times New Roman]600[/font][/font][font='Times New Roman']μl[/font][font=黑体] [font=Times New Roman]DNA[/font][/font][font='Times New Roman'] Extraction buffer[/font][font='Times New Roman'] [/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]0.1[/font][/font][font='Times New Roman'] mol/ L[/font][font=黑体] [/font][font=黑体][font=Times New Roman]Tris[/font][font=黑体]；[/font][font=Times New Roman]0.[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]1[/font][/font][font='Times New Roman'] mol/ L[/font][font=黑体] [font=Times New Roman]KCl[/font][font=黑体]；[/font][font=Times New Roman]0.5M EDTA pH 8.0[/font][font=黑体]；[/font][font=Times New Roman]1[/font][/font][font='Times New Roman'] mol/ L[/font][font=黑体] [font=Times New Roman]PVP 40[/font][font=黑体]；[/font][font=Times New Roman]1.5[/font][/font][font='Times New Roman'] mol/ L[/font][font='Times New Roman'] Na[/font][sub][font='Times New Roman']2[/font][/sub][font='Times New Roman']S[/font][sub][font='Times New Roman']2[/font][/sub][font='Times New Roman']O[/font][sub][font='Times New Roman']6[/font][/sub][font='Times New Roman']][/font][font=黑体][font=黑体]，充分混匀；保温振动[/font][font=Times New Roman]1 h[/font][font=黑体]；加[/font][font=Times New Roman]200μl 5 mol/[/font][/font][font='Times New Roman']L KAc[/font][font=黑体][font=黑体]，混匀并离心；取约[/font][font=Times New Roman]300 μl[/font][font=黑体]上清液加至[/font][font=Times New Roman]165 μl[/font][font=黑体]预冷的异丙醇中，沉淀[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=黑体]；用[/font][font=Times New Roman]70 %[/font][font=黑体]乙醇洗[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=黑体]，干燥后，溶于[/font][font=Times New Roman]TER[/font][/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]Tris 10mmol/L[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]EDTA 1 mmol/L[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]RNA[/font][font=黑体]酶[/font][font=Times New Roman]0.05mg/ml[/font][/font][font='Times New Roman']][/font][font=黑体][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]-20 [/font][font=黑体]℃保存备用。[/font][/font][font=黑体][font=黑体]利用[/font][font=Times New Roman]1.0%[/font][font=黑体]的琼脂糖凝胶电泳检测[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=黑体]样品，并将其稀释至[/font][font=Times New Roman]40 ng/[/font][/font][font='Times New Roman']μ[/font][font=黑体][font=Times New Roman]l[/font][font=黑体]，随机两两等量混匀，构建两倍的[/font][font=Times New Roman]DNA[/font][font=黑体]池，用于后续[/font][font=Times New Roman]TILLING[/font][font=黑体]筛选。[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]1.3 [/font][font=黑体]特异性引物设计及筛选[/font][/font][font=黑体][font=黑体]根据[/font][font=Times New Roman]NCBI[/font][font=黑体]提供的目标基因序列信息，在线设计引物，并用[/font][font=Times New Roman]1%[/font][font=黑体]琼脂糖凝胶电泳检测[/font][font=Times New Roman][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=黑体]产物，选择[/font][font=Times New Roman][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=黑体]产物条带单一，大小在[/font][font=Times New Roman]700-1500[/font][font=黑体]左右的[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=黑体]对引物（表[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=黑体]），其中[/font][/font][font=黑体]除[/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]Pinb[/font][/font][/i][font=黑体][font=黑体]引自[/font][font=Times New Roman]Wang[/font][font=黑体]等[/font][/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]2[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体][font=Times New Roman](2008)[/font][font=黑体]。[/font][/font][align=center][font=黑体][font=黑体]表[/font][font=Times New Roman]1 [/font][font=黑体]用于[/font][font=Times New Roman]TILLING[/font][font=黑体]检测的基因及其荧光标记引物序列[/font][/font][/align][align=center][font='Times New Roman']Table1 [/font][font=黑体] [font=Times New Roman]Genes and their [/font][/font][font='Times New Roman']IRDye labled primer sequence[/font][font=黑体][font=Times New Roman]s [/font][/font][font='Times New Roman']used[/font][font=黑体] [font=Times New Roman]in TILLING[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][/align][table][tr][td=1,2][align=center][b][font=黑体]基因[/font][/b][/align][align=center][b][font=黑体][font=Times New Roman]Gene[/font][/font][/b][/align][/td][td=2,1][align=center][b][font=黑体][font=黑体]引物序列[/font] [font=Times New Roman]Primer sequence (5[/font][font=黑体]′–[/font][font=Times New Roman]3[/font][font=黑体]′[/font][font=Times New Roman])[/font][/font][/b][/align][/td][td=1,2][align=center][b][font=黑体]长度[/font][/b][/align][align=center][b][font='Times New Roman']Length[/font][font=黑体][font='Times New Roman'] [/font][font=Times New Roman](bp)[/font][/font][/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][b][font=黑体][font=黑体]正向[/font] [font=Times New Roman]Forward[/font][/font][/b][/align][/td][td][align=center][b][font=黑体][font=黑体]反向[/font] [font=Times New Roman]Reverse [/font][/font][/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][i][font='Times New Roman']P[/font][font=黑体][font=Times New Roman]in[/font][/font][font='Times New Roman']b[/font][/i][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']CCAACGAAACTAATGAGAAATAAAAAGGTG[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']AAGTTGTTGGATGGACGAATAAGGTT[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']1334[/font][font=黑体][font='Times New Roman'] [/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][i][font='Times New Roman']W[/font][font=黑体][font=Times New Roman]a[/font][/font][font='Times New Roman']x[/font][font=黑体][font=Times New Roman]y[/font][/font][/i][/align][/td][td][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]ACCCGCATGGTGTTTGATAATTTCAGTG[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]AGAATGCCACCTAGCCATGAAATGAGT[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']790[/font][font=黑体][font='Times New Roman'] [/font][/font][/align][/td][/tr][/table][font=黑体][font=Times New Roman]1.4 TILLING[/font][font=黑体]检测[/font][/font][font=黑体]参照潘娜[/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]3[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体][font=黑体]（[/font][font=Times New Roman]2011[/font][font=黑体]）建立的小麦[/font][font=Times New Roman]TILLING[/font][font=黑体]技术检测平台，对目的基因进行检测。采用[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]Touchdown [/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=黑体]程序，[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]10μl [/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][/font][font=黑体]体系含[/font][font='Times New Roman']10 ×Buffer[/font][font=黑体] [font=Times New Roman]0.5μl[/font][font=黑体]；[/font][/font][font='Times New Roman']Mg[/font][sup][font='Times New Roman']2+[/font][/sup][sup][font=黑体] [/font][/sup][font=黑体][font=Times New Roman]0.6[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]μl[/font][/font][font=黑体]；[/font][font=黑体][font=Times New Roman]dNTP [/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]0.8[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]μl[/font][/font][font=黑体]；[/font][font=黑体]引物各[/font][font=黑体][font=Times New Roman]0.4[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]μl[/font][font=黑体]；[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]Ex Taq HS DNA[/font][font=黑体]聚合酶[/font][font=Times New Roman]0.05[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]μl[/font][font=黑体]，[/font][/font][font=黑体][font=黑体]在[/font][font=Times New Roman]Bio-Rad c1000[/font][font=黑体]仪上扩增。扩增后加[/font][font=Times New Roman]20[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]μl[/font][/font][font=黑体] [font=Times New Roman]0.1M CEL[/font][font=黑体]Ⅰ酶，[/font][font=Times New Roman]45[/font][font=黑体]℃酶切[/font][font=Times New Roman]15 min[/font][font=黑体]，利用[/font][font=Times New Roman]Sephadex G50[/font][font=黑体]（[/font][font=Times New Roman]GE Healthcare [/font][font=黑体]公司）纯化板纯化酶切产物，并[/font][font=Times New Roman]90[/font][font=黑体]℃浓缩[/font][font=Times New Roman]35-45 min[/font][font=黑体]。利用[/font][font=Times New Roman]6[/font][font=黑体]％变性聚丙烯酰胺凝胶，在[/font][font=Times New Roman]LI-COR 4300[/font][font=黑体]仪器中电泳检测酶切产物[/font][/font][font=黑体]并[/font][font=黑体][font=黑体]采用[/font][font=Times New Roman]Gelbuddy[/font][font=黑体]软件对电泳图像分析处理，标记突变位点。[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]1.5 [/font][font=黑体]基因点突变分析[/font][/font][font=黑体][font=黑体]检测到突变后对[/font][font=Times New Roman][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=黑体]产物进行测序验证，利用[/font][font=Times New Roman]Invitrogen[/font][font=黑体]软件、[/font][font=Times New Roman]NCBI[/font][font=黑体]等对序列进行比对、翻译等分析，确定突变位置与类型。[/font][/font][font=黑体][font=黑体]点突变密度[/font][font=Times New Roman](%)=[/font][font=黑体]突变碱基数[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=黑体]检测总碱基数×[/font][font=Times New Roman]100%[/font][font=黑体]。[/font][/font][b][font=黑体][font=宋体]2 [/font][font=黑体]结果与分析[/font][/font][/b][font=黑体]本实验对[/font][font=黑体]小麦籽粒硬度基因[/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]pinb[/font][/font][/i][font=黑体][font=黑体]进行了[/font][font=Times New Roman]1122[/font][font=黑体]个单株的[/font][font=Times New Roman]TILLING[/font][font=黑体]检测。[/font][/font][font=黑体]基因的突变密度分别为[/font][font=黑体][font=Times New Roman]1/374.18 kb[/font][/font][font=黑体]。[/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]Pinb[/font][/font][/i][font=黑体][font=黑体]基因共获得[/font][font=Times New Roman]7[/font][font=黑体]个突变株系的[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=黑体]个不同的突变位点[/font][font=Times New Roman]([/font][font=黑体]图[/font][font=Times New Roman]1)[/font][font=黑体]，有[/font][font=Times New Roman]6[/font][font=黑体]个突变单株的碱基突变位点均位于外显子区域，突变株编号及突变位点分别是[/font][font=Times New Roman]LF996[/font][font=黑体]第[/font][/font][font='Times New Roman']51[/font][font=黑体][font=Times New Roman]2bp[/font][font=黑体]位的[/font][font=Times New Roman]C-T[/font][font=黑体]碱基转换，[/font][font=Times New Roman]LF[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]892[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]LF997[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]LF919[/font][font=黑体]第[/font][/font][font='Times New Roman']7[/font][font=黑体][font=Times New Roman]26bp[/font][font=黑体]位的[/font][/font][font='Times New Roman']G[/font][font=黑体][font=Times New Roman]-[/font][/font][font='Times New Roman']A[/font][font=黑体][font=黑体]碱基转换，及[/font][font=Times New Roman]LF791[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]LF1114[/font][font=黑体]第[/font][/font][font='Times New Roman']750[/font][font=黑体][font=Times New Roman]bp[/font][font=黑体]位的[/font][/font][font='Times New Roman']G[/font][font=黑体][font=Times New Roman]-[/font][/font][font='Times New Roman']A[/font][font=黑体][font=黑体]碱基转换，[/font][font=Times New Roman]LF996 [/font][/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]pinb[/font][/font][/i][font=黑体][font=黑体]基因第[/font][font=Times New Roman]37[/font][font=黑体]为氨基酸[/font][font=Times New Roman]S[/font][font=黑体]变为氨基酸[/font][font=Times New Roman]F[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]LF[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]892[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]LF997[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]LF919[/font][/font][i][font=黑体] [font=Times New Roman]pinb[/font][/font][/i][font=黑体][font=黑体]基因第[/font][font=Times New Roman]110[/font][font=黑体]为氨基酸[/font][font=Times New Roman]G[/font][font=黑体]变为氨基酸[/font][font=Times New Roman]S[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]LF791[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]LF1114[/font][font=黑体]第[/font][font=Times New Roman]116[/font][font=黑体]位氨基酸[/font][font=Times New Roman]W[/font][font=黑体]被终止，内含子区域突变是[/font][font=Times New Roman]LF890[/font][font=黑体]突变株第[/font][font=Times New Roman]350bp[/font][font=黑体]碱基[/font][font=Times New Roman]G[/font][font=黑体]转换为碱基[/font][font=Times New Roman]A[/font][font=黑体]。见表[/font][font=Times New Roman]1[/font][/font][align=center][img=,442,414]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/12/202212160839201707_5062_3237657_3.png!w442x414.jpg[/img][/align][align=center][font=黑体] [/font][/align][align=center][font=黑体][font=黑体]图[/font][font=Times New Roman]1 [/font][/font][i][font='Times New Roman']W[/font][font=黑体][font=Times New Roman]a[/font][/font][font='Times New Roman']x[/font][font=黑体][font=Times New Roman]y[/font][/font][/i][font=黑体]基因电泳图[/font][/align][align=center][font='Times New Roman']Fig[/font][font=黑体][font=Times New Roman]1 [/font][/font][font='Times New Roman']E[/font][font=黑体][font=Times New Roman]lectrophorogram of [/font][/font][i][font='Times New Roman']W[/font][font=黑体][font=Times New Roman]a[/font][/font][font='Times New Roman']x[/font][font=黑体][font=Times New Roman]y gene[/font][/font][/i][/align][align=center][i][font=黑体] [/font][/i][/align][font='Times New Roman'][/font][align=center][font=黑体][font=黑体]表[/font][font=Times New Roman]1[/font][/font][font=黑体] [font=黑体]基因点突变信息[/font][/font][/align][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]Table1 Point[/font][/font][font='Times New Roman'] mutations[/font][font=黑体] [font=Times New Roman]of[/font][/font][font='Times New Roman'] quality[/font][i][font=黑体] [/font][/i][font=黑体][font=Times New Roman]gene[/font][/font][/align][table][tr][td][align=center][b][font='Times New Roman'][font=黑体]基因名称[/font][/font][/b][/align][align=center][b][font='Times New Roman']Gene[/font][font=黑体][font='Times New Roman'] [/font][/font][font='Times New Roman']name[/font][/b][/align][/td][td][align=center][b][font='Times New Roman'][font=黑体]登录号[/font][/font][/b][/align][align=center][b][font='Times New Roman']Accession[/font][font=黑体][font='Times New Roman'] [/font][/font][font='Times New Roman']No.[/font][/b][/align][/td][td][align=center][b][font='Times New Roman'][font=黑体]基因大小[/font][/font][/b][/align][align=center][b][font='Times New Roman']Gene size[/font][font=黑体][font='Times New Roman'] [/font][/font][font='Times New Roman'](bp)[/font][/b][/align][/td][td][align=center][b][font='Times New Roman'][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][font=黑体]扩增长度[/font][/font][/b][/align][align=center][b][font='Times New Roman'][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] size (bp)[/font][/b][/align][/td][td][align=center][b][font='Times New Roman'][font=黑体]等位变异[/font][/font][/b][/align][align=center][b][font='Times New Roman']Mutant[/font][font=黑体][font='Times New Roman'] [/font][/font][font='Times New Roman']allele[/font][/b][/align][/td][td][align=center][b][font='Times New Roman'][font=黑体]氨基酸突变[/font][/font][/b][/align][align=center][b][font='Times New Roman']amino acid[/font][font=黑体][font='Times New Roman'] [/font][/font][font='Times New Roman']mutation[/font][/b][/align][/td][td][align=center][b][font='Times New Roman'][font=黑体]突变[/font][/font][font=黑体]株编号[/font][/b][/align][align=center][b][font=Calibri]Number[/font][font=黑体][font='Times New Roman'] [/font][/font][font='Times New Roman']of mutation[/font][/b][/align][/td][td][align=center][b][font='Times New Roman'][font=黑体]总突变频率[/font][/font][/b][/align][align=center][b][font='Times New Roman']Total[/font][/b][font=Calibri][color=#434343] [/color][/font][b][font='Times New Roman']mutation density[/font][font=黑体][font='Times New Roman'] [/font][/font][font='Times New Roman'](kb)[/font][/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][i][font='Times New Roman']pinb[/font][/i][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']AJ302100.1[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']870[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']1334[/font][/align][/td][td][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]C[/font][/font][font='Times New Roman']51[/font][font=黑体][font=Times New Roman]2T[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]S37F[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]996[/font][/font][/align][/td][td=1,4][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]1/374.18 [/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']G7[/font][font=黑体][font=Times New Roman]26[/font][/font][font='Times New Roman']A [/font][/align][/td][td][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]G110S [/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]892[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]919[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]997[/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']G750A[/font][/align][/td][td][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]W116-[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]791[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]1114[/font][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman'] [/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']G350A[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman'][font=黑体]未改变[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=黑体][font=Times New Roman]890[/font][/font][/align][/td][/tr][/table][font='Times New Roman'][/font][b][b][font=黑体][font=Times New Roman]3[/font][/font][font=黑体] [font=黑体]讨论[/font][/font][/b][/b][font=黑体]籽粒硬度是小麦重要的品质性状，对食品加工及磨粉质量都有重要影响。[/font][i][font='Times New Roman']P[/font][font=黑体][font=Times New Roman]inb[/font][/font][/i][font=黑体]是调控籽粒硬度的主效基因之一，与[/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]pina[/font][/font][/i][font=黑体]基因共同作用决定小麦胚乳质地[/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]4-5[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体]。[/font][font=黑体]本实验[/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]Pinb[/font][/font][/i][font=黑体]基因的突变密度是[/font][font=黑体][font=Times New Roman]1/374.18 [/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]kb[/font][font=黑体]，低于[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]Feiz[/font][font=黑体]等[/font][/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]6[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体]在普通软质小麦突变体库得到的[/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]pinb[/font][/font][/i][font=黑体]基因[/font][font=黑体][font=Times New Roman]1/12 kb[/font][font=黑体]的[/font][/font][font=黑体]突变密度，但高于[/font][font=黑体]潘娜[/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]3[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体][font=黑体]利用空间诱变新麦[/font][font=Times New Roman]18[/font][font=黑体]突变体库群体得到的该基因[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]1/3073 kb[/font][font=黑体]的[/font][/font][font=黑体]突变密度。[/font][font=黑体][font=Times New Roman]Morris[/font][font=黑体]等[/font][/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]5, 7[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体]获得的硬红春小麦[/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]pinb[/font][/font][/i][font=黑体]基因突变体[/font][font=黑体]，分别发生在[/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]pinb[/font][/font][/i][font=黑体][font=黑体]基因第[/font][font=Times New Roman]39[/font][font=黑体]位和第[/font][font=Times New Roman]44[/font][font=黑体]位的色氨基酸[/font][font=Times New Roman]T[/font][font=黑体]及第[/font][font=Times New Roman]56[/font][font=黑体]位半胱氨酸[/font][font=Times New Roman]C[/font][font=黑体]，均突变为终止密码子。[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]Wang[/font][font=黑体]等[/font][/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]13[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体]获得[/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]Pinb[/font][/font][/i][font=黑体][font=黑体]基因，[/font][font=Times New Roman]382bp[/font][font=黑体]处[/font][font=Times New Roman]C [/font][/font][font='Times New Roman']–[/font][font=黑体] [font=Times New Roman]T[/font][font=黑体]碱基转换和[/font][font=Times New Roman]257bp[/font][font=黑体]处[/font][font=Times New Roman]G [/font][/font][font='Times New Roman']–[/font][font=黑体] [font=Times New Roman]A[/font][font=黑体]碱基转换。[/font][/font][font=黑体]在潘娜[/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]3[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体]创制[/font][font=黑体][font=黑体]的[/font][font=Times New Roman]TILLING[/font][font=黑体]群体中，[/font][/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]pinb[/font][/font][/i][font=黑体][font=黑体]基因组[/font][font=Times New Roman]736 bp[/font][font=黑体]的[/font][font=Times New Roman]A[/font][font=黑体]碱基缺失，引起移码突变，而本实验突变株[/font][font=Times New Roman]LF[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]791[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]LF1114[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]LF996[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]LF[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]892[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]LF997[/font][font=黑体]、[/font][font=Times New Roman]LF919[/font][font=黑体]的基因突变依次为[/font][/font][font='Times New Roman']750[/font][font=黑体][font=Times New Roman]bp[/font][font=黑体]位的[/font][/font][font='Times New Roman']G[/font][font=黑体][font=Times New Roman]-[/font][/font][font='Times New Roman']A[/font][font=黑体]碱基转换，[/font][font='Times New Roman']51[/font][font=黑体][font=Times New Roman]2bp[/font][font=黑体]位的[/font][font=Times New Roman]C-T[/font][font=黑体]碱基转换，[/font][/font][font='Times New Roman']7[/font][font=黑体][font=Times New Roman]26bp[/font][font=黑体]位的[/font][/font][font='Times New Roman']G[/font][font=黑体][font=Times New Roman]-[/font][/font][font='Times New Roman']A[/font][font=黑体]碱基转换，[/font][font=黑体]均导致错义突变。[/font][font=黑体]王亮等[/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]8[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体][font=黑体]和[/font][font=Times New Roman]Chen[/font][font=黑体]等[/font][/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]9[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体][font=黑体]的研究中几乎所有[/font][font=Times New Roman]Puroindoline[/font][font=黑体]变异类型的籽粒硬度值都显著高于野生型，而[/font][/font][font=黑体][font=黑体]本实验，对突变株进行表型分析，籽粒硬度测定显示[/font][font=Times New Roman]LF996[/font][font=黑体]、 [/font][font=Times New Roman]LF[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]892[/font][font=黑体]、[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]LF1114[/font][font=黑体]突变株的[/font][/font][font=黑体]籽粒硬度均[/font][font=黑体]极显著低于野生型。此外，[/font][font=黑体]突变体自交系研究发现[/font][font=黑体]，突变[/font][font=黑体]对小麦出粉率、面包体积、面粉灰分等品质性状均有影响，[/font][font=黑体][font=黑体]不同[/font][font=Times New Roman]Puroindoline[/font][font=黑体]变异类型之间在磨粉、面包等加工品质上也存在较差别[/font][/font][sup][font='Times New Roman'][[/font][/sup][sup][font=黑体][font=Times New Roman]9-10[/font][/font][/sup][sup][font='Times New Roman']][/font][/sup][font=黑体]。基于以上的研究发现，可利用本实验获得的突变株，进行后代品质研究，为品质改良奠定基础。[/font][b][b][font=黑体][font=Times New Roman]4 [/font][/font][font=黑体][font=黑体]结[/font] [font=黑体]论[/font][/font][/b][/b][font=黑体]本研究所获得的基因点突变及表型突变株为植物基因功能研究及小麦品质改良提供了新材料。[/font][font=黑体] [/font][font=黑体] [/font][font=黑体][font=Times New Roman]References[/font][/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]1[/font][/font][font='Times New Roman']][/font][font=黑体] [/font][font=黑体][font=Times New Roman]Liu L([/font][font=黑体]刘丽[/font][font=Times New Roman]), Yang J-H([/font][font=黑体]杨金华[/font][font=Times New Roman]), Hu Y-X([/font][font=黑体]胡银星[/font][font=Times New Roman]), Cheng G([/font][font=黑体]程耿[/font][font=Times New Roman]).[/font][/font][font='Times New Roman'] Research Progress in Effects of Glutenin Subunits on[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']Wheat Processing Quality[/font][font=黑体][font=Times New Roman].[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][font=黑体] [/font][i][font='Times New Roman']Journal of Agricultural Science and Technology[/font][/i][font=黑体] [font=Times New Roman]([/font][font=黑体]中国农业科技导报[/font][font=Times New Roman]), 2012, 14(1): 33-42 [/font][/font][font='Times New Roman'](in Chinese with English abstract)[/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]2[/font][/font][font='Times New Roman']][/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']Wang J, Sun J Z, Liu D C, Yang W L, Wang D W, Tong Y P, Zhang A M. Analysis of [/font][i][font='Times New Roman']Pina[/font][/i][font='Times New Roman'] and [/font][i][font='Times New Roman']Pinb[/font][/i][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']alleles in the microcore collections of chinese wheat germplasm by Ecotilling and identification of[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']a novel [/font][i][font='Times New Roman']Pinb[/font][/i][font='Times New Roman'] allele[/font][font=黑体][font=Times New Roman]. [/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][i][font='Times New Roman']Journal of Cereal Science[/font][/i][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']2008, 48(3): 836-[/font][font=黑体][font=Times New Roman]842[/font][/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]3[/font][/font][font='Times New Roman']][/font][font=黑体][font=黑体]潘娜[/font][font=Times New Roman]. [/font][font=黑体]空间环境诱发小麦突变体的[/font][font=Times New Roman]TILLING[/font][font=黑体]分析[/font][font=Times New Roman], [/font][font=黑体]中国农业科学院[/font][font=Times New Roman], 2011.[/font][/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]4[/font][/font][font='Times New Roman']][/font][font=黑体][font=Times New Roman]CaPPaerlliR[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]Bo[/font][font=黑体]币[/font][font=Times New Roman]elloqGirouxMJ[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]AmoorsoMGPuorindolineA[/font][font=黑体]一[/font][font=Times New Roman]geneexPerssion15involved[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]inassociationofPuroindolinetostacrh.TheoerctialandAPPliedGenetics[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]2003[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]107:1463[/font][font=黑体]一[/font][font=Times New Roman]1468[/font][/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]5[/font][/font][font='Times New Roman']][/font][font=黑体][font=Times New Roman]Chen F. Molecular Characterization of Puroindoline Alleles in Chinese and CIMMYT Common Wheats and Their [/font][/font][font='Times New Roman']Eeffct[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']on[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']Porcessing[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']Quaiity[/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]6[/font][/font][font='Times New Roman']]Feiz L, Martin J M, Giroux M J. Creation and functional analysis of new Puroindoline alleles[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']in Triticum aestivum.[/font][i][font='Times New Roman']Theoretical and Applied Genetics[/font][/i][font='Times New Roman'],2009, 118:247-257[/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]7[/font][/font][font='Times New Roman']][/font][font=黑体] [font=Times New Roman]Morris C F[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]Lillemo M[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]Simeone M C[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]Giorux M J[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]Bbab S L[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]Kimberiee K K.Pervalence of [/font][/font][font='Times New Roman']Puorindoline[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']garin[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']hdarness[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']genotypes[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']among[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']historieally[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']significant[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']North[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']American[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']s[/font][font=黑体][font=Times New Roman]p[/font][/font][font='Times New Roman']ring[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']and[/font][font=黑体] [/font][font='Times New Roman']winter[/font][font=黑体] [font=Times New Roman]wheats. [/font][/font][i][font=黑体][font=Times New Roman]Crop Scienee[/font][/font][/i][font=黑体][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]2001,41:218-228[/font][/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]8[/font][/font][font='Times New Roman']][/font][font=黑体] [font=Times New Roman]C[/font][/font][font=黑体][font=Times New Roman]hen F[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]He z H[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]Xia x C[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]el a1[/font][font=黑体]．[/font][font=Times New Roman]Molecular and biochemical charac[/font][font=黑体]—[/font][/font][font='Times New Roman']terization of P“roindoline a and b alleles in Chinese landraces and[/font][font=黑体][font=Times New Roman]historical eultivars[J][/font][font=黑体]．[/font][font=Times New Roman]Theoretical and Applied Genetics. 2006[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]112[/font][font=黑体]：[/font][font=Times New Roman]400[/font][font=黑体]—[/font][font=Times New Roman]409[/font][font=黑体]．[/font][/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]9[/font][/font][font='Times New Roman']][/font][font=黑体] [font=黑体]王亮，穆培源，桑伟，等．新疆小麦品种籽粒硬度及[/font][font=Times New Roman]Puroindoline[/font][font=黑体]基因等位变异的分子检测[/font][font=Times New Roman][J][/font][font=黑体]．麦类作物学报。[/font][font=Times New Roman]2010[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]30(1)[/font][font=黑体]：[/font][font=Times New Roman]17-22[/font][font=黑体]．[/font][/font][font='Times New Roman'][[/font][font=黑体][font=Times New Roman]10[/font][/font][font='Times New Roman']][/font][font=黑体] [font=黑体]赵新，王步军．不同硬度小麦品质差异的分析[/font][font=Times New Roman][J][/font][font=黑体]．麦类作物学报，[/font][font=Times New Roman]2009[/font][font=黑体]，[/font][font=Times New Roman]29(2)[/font][font=黑体]：[/font][font=Times New Roman]246[/font][font=黑体]—[/font][font=Times New Roman]251[/font][font=黑体]。[/font][/font]

  • 【非常有趣】AJHG：基因突变致少数人天生没指纹

    20世纪30年代臭名昭著的劫匪约翰-狄林杰为了不让警方发现犯罪现场的指纹与他的指纹一样，不惜忍受巨大的痛苦，利用硫酸把指纹烧掉。但是对我们来说，没有指纹是一件非常可怕的事情，它会在边界控制和证明身份时造成很多麻烦。科学家目前已经确定可以导致一些人天生没有指纹的基因。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201109/2011092211413775.jpg皮纹病患者天生没有指纹这种情况被称作皮纹病(adermatoglyphia)或者“入境延期病(Immigration Delay Disease)”，患有这种疾病的人天生手指肚上没有指纹。以色列特拉维夫大学的艾里-斯普雷彻教授获得的最新发现显示，一种基因突变造成这种与众不同的病变。一名瑞士女性试图穿越边境，进入美国，边境控制人员需要收集她的指纹。然而当这位女子告诉他们，她无法满足他们的要求，因为她根本没有指纹时，这些官员感到非常迷惑。这也促使医学界开始注意皮纹病。研究人员对这位女性以及她的另外9名没有指纹的家庭成员进行遗传分析。特拉维夫大学的科学家将存在这种情况的人的基因与没有这种情况的人的基因进行比对，确定基因变异到底发生在哪里。他们发现，SMARCAD1突变影响了指纹的形成。研究发现，没有指纹的人拥有的与皮肤发育有关的这种基因更少。现在科学家将能进一步研究这种基因是如何调控指纹的发展的。与DNA一样，每个人的指纹也是独一无二的，即使是同卵双胞胎也不例外，因此它们也成为破案和国际旅行管理等的重要鉴定工具。它们之所以会被当作确定身份的工具，是因为它们在受精24周后就会发育健全，而且整个一生都不会发生任何改变。目前全球仅有4个记录在案的家庭存在这种情况。斯普雷彻表示，不仅手指上长有带图案的皮肤，手掌、脚趾和足底也长着被称作皮纹的纹路。然而他说：“胚胎发育阶段导致指纹形成和拥有不同图案的因素目前大部分还不得而知。”除了缺少指纹外，这种情况还导致汗腺减少。指纹异常可能也是出现更严重的疾病的一种预警信号。该研究成果发表在《美国人类基因学期刊》上。2009年，一名中国女性通过整形手术改变她的指纹，想利用这种方法非法进入日本。东京警方表示，以前因签证过期被驱逐出日本的林荣(Lin Rong)花了1.5万美元在中国做了这项整形手术。警方认为，这种欺骗行为可能普遍存在，因为中国经纪人进行了大量指纹修改手术。这项手术涉及到摘除拇指和食指上的指纹，然后把它们嫁接到另一只手的手指上。

  • 基因检测: “朱莉经验”非四海皆准

    今年5月美国影星安吉丽娜·朱莉依据特定基因检测结果，接受乳腺切除手术，以防乳腺癌变。这一“朱莉效应”如今远播海外，基因检测的热度在国内逐渐升温，以致某地出现根据基因检测评估酒量、烟瘾，甚至是幼童的天赋和未来优势。如此向基因“问卜”与“朱莉经验”挨得上吗？查基因真能助我们料事如神吗？http://www.ibioo.com/data/attachment/portal/201307/23/201831p6klrkntk8m1tb8k.jpg基因是DNA分子上的一个功能片断，是遗传信息的基本单位，是决定一切生物物种最基本的因子；基因决定人的生老病死，是健康、靓丽、长寿之因，是生命的操纵者和调控者。因此，哪里有生命，哪里就有基因，一切生命的存在与衰亡的形式都是由基因决定的。基因检测是通过血液、其他体液或细胞对DNA进行检测的技术，是取被检测者脱落的口腔黏膜细胞或其他组织细胞，扩增其基因信息后，通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测，分析它所含有的各种基因情况，从而使人们能了解自己的基因信息，预知身体患疾病的风险，从而通过改善自己的生活环境和生活习惯，避免或延缓疾病的发生。遗传学专业人士游识猷表示，说起基因检测就不能不谈及10年前美国、中国等6国科研人员共同绘制的人类基因组序列图。该图使科研人员对人类基因概况、基因指导合成蛋白质的特点、基因变化与疾病的相关因素，有了“跨越式”了解。但迄今专家能够掌握的基因与疾病的关联、基因变异探知方法，与预测实实在在的绝大多数疾病之间还有漫长距离，遑论品评后天性甚强的个性差异。有人把基因组图谱比喻成地图，好像拿着它就能随时知道我们脚下的路通往哪里。其实基因彼此间会相互调控，多种罕见的基因突变会“殊途同归”地引起某种看起来相同的病，某些基因功能会出现后天性可逆转、可遗传的改变，一个基因在不同发育时期或不同环境压力中的表现也会时好时坏。因此，基因的种种实际表达及其对人体的影响，远比形形色色的检测结果复杂得多。但朱莉所防范的乳腺癌是个特例，它是与基因突变直接相关的疾病。“朱莉的选择是理智的”，游识猷说，但若要评论这种抉择是否可以复制，就要权衡如此行事的付出与收益。朱莉体内的单个BRCA1基因突变有可能大幅提升患癌几率，只有在发现因果关联与此类同的突变后，才能考虑“防患于未然”的治疗手段。游识猷认为，虽然美国的“我与23对染色体”公司等商业机构已售卖了好几年的个人基因检测报告，但那些结论基本上“仅供娱乐”。它们要么是老生常谈的健康常识，要么模棱两可到只能让被检测者去猜。说到底，知道基因突变容易，了解为何突变及其影响就难了。

  • 【原创大赛】我的基因定点突变方法总结与实验心得

    【原创大赛】我的基因定点突变方法总结与实验心得

    基因定点突变，顾名思义，就是把目的基因上的一个碱基有目的的替换为另一个碱基。体外定点突变时目前分子生物学领域中一种快速有效地手段。产生定点突变操作及所需仪器简单，随着技术的发展，方法也越来越快捷简便。定点突变除了可以生成点突变，多点突变外，还可以人为产生碱基删除和添加等。体外基因定点突变是实验室中优化改造基因，研究基因功能的常用方法之一。通过改造基因序列，可以对相应氨基酸序列进行改变，进而影响蛋白质的结构和功能，探讨突变氨基酸位点在蛋白结构和功能中所起的作用。在我多年的实验中，体外基因定点突变是其中一项重要的内容。在这里，我与大家分享一下我的实验方法和心得体会。多年来，我所采用的基因定点突变的方法主要有三种，这可能也包括了目前所有的定点突变的方法。基因定点突变使用的主要仪器就是PCR扩增仪(biometra)，而这是每一个分子生物学实验室的必需品，也就是大家吃饭的家伙。下面从繁到简对我所采用的突变方法进行一下简单描述。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212032022_409068_1306303_3.jpg我所使用过的定点突变方法简单的说就是三步，两步和一步PCR法。三步PCR法是我早期在实验室使用的定点突变方法。利用三步PCR法构建一个点突变，需要4条PCR引物：L1，L2，R1和R2。L1和R1是目的基因5‘和3‘端的引物，分别包含起始和终止密码子。突变点设计在引物L2和R2的正中间位置，L2和R2是完全互补的两条PCR引物，长度一般在28-40 bp之间，推荐长度31-35 bp，这样可以保证突变的两边有效搭在一起。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212032026_409072_1306303_3.jpg三轮PCR均采用常规PCR反应条件，第一轮分别以L1和R2，L2和R1扩增获得目的片段L和R。第二轮PCR，不需要引物，仅加入模板L和R各100 nmol，进行约20 轮的PCR反应，获得产物m1。第三轮PCR以m1为模板，L1和R1为引物进行PCR扩增。最终得到目的产物m。得到的PCR产物进行克隆转化得到进一步扩增，便获得了突变的目的基因。在随后的实验中，我将三步PCR法简化为两步法PCR。两步法PCR和三步法PCR一样，需要引物四条，引物设计也与三步法相同，只是在第一轮PCR获得产物L和R之后不再单独进行第二轮PCR，而直接在PCR体系中加入等mol的产物L和R

  • H5N1禽流感病毒只需发生较小突变就可高效复制

    迄今为止，虽然在人类中只发生孤立的H5N1禽流感病毒(H5N1 bird flu virus)感染病例，但是这种感染并没有发生广泛的传播，这是因为该病毒不能够在人鼻子中有效地复制。在一项新的研究中，来自英国肯特大学和伦敦帝国理工学院的研究人员发现H5N1禽流感病毒发生较小的基因突变就能够在哺乳动物鼻子中更容易复制。相关研究结果于2013年3月13日在线发表在Journal of General Virology期刊上，论文标题为“Mutations in hemagglutinin that affect receptor binding and pH stability increase replication of a PR8 influenza virus with H5 HA in the upper respiratory tract of ferrets and may contribute to transmissibility”。这一发现支持了2012年发表的一项争议性研究的结论：只需几次基因突变就能够让禽流感在雪貂(常被用作人类流感病毒感染的研究模型)之间传播。

  • 135万！中山大学附属第三医院5种突变基因检测试剂盒(荧光PCR法)采购项目

    [quote][b]项目概况[/b]中山大学附属第三医院5种突变基因检测试剂盒(荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法)采购项目 招标项目的潜在投标人应在广州市环市中路205号恒生大厦B座501室（广州顺为招标采购有限公司）获取招标文件，并于2023年02月24日 09点30分（北京时间）前递交投标文件。[/quote][font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号：CGDL20220007（代理机构编号：GZSW22175HG4248）项目名称：中山大学附属第三医院5种突变基因检测试剂盒(荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法)采购项目预算金额：135.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：135.0000000 万元（人民币）采购需求：预算金额：总预算135万元人民币（年度采购预算45万元，采购年限3年）单价最高限价：2980元/人份采购需求：（1）具体包组划分如下：[table][tr][td][align=center]包组[/align][/td][td][align=center]采购内容[/align][/td][td][align=center]数量[/align][/td][td][align=center]预算金额（人民币）[/align][/td][td][align=center]单价最高限价（人民币）[/align][/td][td][align=center]货物质量或服务标准要求[/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font=inherit]一[/font][/align][/td][td][align=center]5种突变基因检测试剂盒（荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]法）（EGFR/ALK/ROS1/KRAS/BRAF）[/align][/td][td][align=center]1批[/align][/td][td][align=center]135万元（45万*3年）[/align][/td][td][align=center]2980元/人份[/align][/td][td][align=center]符合国家和招标文件相关要求，详见招标文件[/align][/td][/tr][/table]注：1）投标人必须对项目内全部内容进行投标，不允许只对其中部分内容进行投标。2）投标人报价不得高于预算金额（或最高限价），否则将作无效投标处理。[font=inherit]3）本项目采购本国产品。[/font]4）本项目[font=inherit][u]不属于[/u][/font]专门面向中小企业采购项目。本项目所属行业属于[font=inherit][u]工[/u][/font][font=inherit][u]业[/u][/font]5）需要落实的政府采购政策：《政府采购促进中小企业发展管理办法》（财库〔2020〕46号）、《关于进一步加大政府采购支持中小企业力度的通知》【财库（2022）19 号】、《关于政府采购支持监狱企业发展有关问题的通知》(财库〔2014〕68号)、《关于促进残疾人就业政府采购政策的通知》（财库〔2017〕141号)、《关于环境标志产品政府采购实施的意见》（财库〔2006〕90号）、《节能产品政府采购实施意见》的通知（财库〔2004〕185号）、《关于调整优化节能产品、环境标志产品政府采购执行机制的通知》（财库〔2019〕9号）等。（2）交货时间：签订合同后三年内。（3）交货地点：中山大学附属第三医院。合同履行期限：项目采购合同生效之日起至甲乙双方义务履行完毕。本项目( 不接受 )联合体投标。

  • 利用荧光DNA探测分子 单个碱基突变也能被发现

    中国科技网讯 DNA序列中最轻微的变异也会影响深远，无论对研究还是医学应用，可靠识别这些序列都非常重要。据物理学家组织网近日报道，美国华盛顿大学和莱斯大学研究人员合作，开发出一种荧光DNA探测分子，能检查出一段目标DNA链中单个碱基的变化。而这些微小突变可能是造成某些疾病的根源，或耐抗生素细菌的原因。这一成果有助于诊断和治疗像癌症、肺结核这样的疾病。相关论文发表于7月28日的《自然·化学》杂志网站上。 不同的DNA序列为不同生物设定了独特的基因标记。现代基因组学研究表明，仅一个碱基对的变化都足以引发严重的生物后果，可能决定了一种疾病能否被治愈，也解释了疾病的突发或某些疾病对常规抗生素治疗无效的原因。论文领导作者、华盛顿大学电力工程和计算机科学与工程副教授乔治·塞利格说，比如造成肺结核的细菌有很强的耐药性，这种能力通常来自其基因序列中的少量突变。现在，人们已能预先查出这种突变。 “我们真正改进了以往的方法。”塞利格说，“新方法不需要任何复杂的反应或添加酶，就只用DNA。这意味着无论温度及其他环境变量怎样变化，该方法都是稳定的，所以很适合用于低资源设置中的诊断。” 这种探测分子经过专门设计，采用了新的编程机制，能与一个可疑的DNA序列结合，对其双螺旋链生成互补的DNA序列。把含有两种序列的分子在盐水试管中混合，如果两条链的碱基对都是完好的，它们自然地匹配在了一起，探测分子会发出荧光；如果不发光，则意味着上面有碱基对发生了突变。与以往技术不同的是，探测分子会检查目标DNA双螺旋的两条链是否发生了突变，而不是一条，这使检验更加全面具体。 此外，探测分子由许多寡核苷酸构成，克服了合成上的局限，可以探测更长的DNA序列中更详细的变异信息，达到200个碱基对，而现有探测突变的方法只能检查20个。 目前，研究人员与华盛顿大学商业化中心一起对该技术提出了专利申请，他们希望把这种技术和诊断试纸结合用于疾病测试。（常丽君） 《科技日报》（2013-8-7 二版）

  • 【资料】污染物致突变性检测

    简介：污染物对人体的潜在危害，引起人们的普遍关注。世界上已发展了百余种短期快速测试法，检测污染物的遗传毒性效应。B．N．Ames等经十余年努力，于1975年建立并不断发展完善的沙门氏菌回复突变试验（亦称Ames试验）已被世界各国广为采用。该法比较快速、简便、敏感、经济，且适用于测试混合物，反映多种污染物的综合效应。众多学者有的用Ames试验检测食品添加剂、化妆品等的致突变性，由此推测其致癌性；有的用Ames试验检测水源水和饮用水的致突变性，探索较现行方法更加卫生安全的消毒措施；或检测城市污水和工业废水的致突变性，结合化学分析，追踪污染源，为研究防治对策提供依据；有的检测土壤、污泥、工业废渣堆肥、废物灰烬的致突变性，以防止维系生命的土壤受致突变物污染后，通过农作物危害人类；检测气态污染物的致突变性，防止污染物经由大气，通过呼吸对人体发生潜在危害；用Ames试验研究化合物结构与致变性的关系，为合成对环境无潜在危害的新化合物提供理论依据；检测农药在微生物降解前后的致突变性，了解农药在施用后代谢过程中对人类有无隐患；还有用Ames试验筛选抗突变物，研究开发新的抗癌药等等。 关键字：突变性检测,Ames试验一、目的和原理　　鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）的组氨酸营养缺陷型（his－）菌株，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一般只能分裂几次，形成在显微镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作用后，大量细胞发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。某些化学物质需经代谢活化才有致变作用，在测试系统中加入哺乳动物微粒体酶①，可弥补体外试验缺乏代谢活化系统之不足。鉴于化学物质的致突变作用与致癌作用之间密切相关，故此法现广泛应用于致癌物的筛选。　　二、步骤和方法　　Ames试验的常规方法有斑点试验和平板掺入试验。　　1．菌株鉴定 用于测试的菌株，需经基因型和生物学性状鉴定，符合要求才能投入使用。　　目前推荐使用的一套菌株是TA97、TA98、TA100和TA102。鉴定前先进行增菌培养。为鉴定结果可靠，需同时培养野生型TV菌株，作为测试菌基因型之对照。增菌培养用牛肉膏蛋白胨液体培养基，接种后于37℃，100r／min振荡培养12h左右，细菌生长相为对数期末，含菌数应为1×109个／ml～2×109个／ml。　　鉴定项目：　　（1）脂多糖屏障丢失（rfa）用接种环或一端挠起的接种针以无菌操作术取各菌株的增菌培养液，在营养琼脂平板上分别划平行线，然后用灭菌尖头镊夹取灭菌滤纸条，浸湿结晶紫溶液，贴放在平板上与各接种平行线垂直相交。盖好皿盖后倒置于37t温箱，培养24h后观察结果。　　（2）R因子 划线接种，贴放滤纸条及培养等均同上，唯滤纸条浸湿的药液不同，为氨苄青霉素钠溶液。TA102除pKM101外，还有pAQ1，载有抗四环素的基因，故另用滤纸条浸湿四环素溶液后贴放于划线接种的平板上。　　（3）紫外线损伤修复缺陷（△uvrB）在营养琼脂平板上按上述方法划线接种后，一半接种线用黑玻璃遮盖，另一半暴露于紫外光下8sec，然后盖好皿盖并用黑纸包裹平皿，防止可见光修复作用。培养同上。　　（4）自发回变 预先制备底平板；向灭菌并在水浴内保温45℃的上层软琼脂中注入0.1ml菌液；混匀后倾于底平板上并铺平。平皿倒置于37℃温箱培养48h。　　（5）回变特性——诊断性试验 上层软琼脂中除菌液外，还注入已知阳性物之溶液，需活化系统者并加入S9mix，余同上。　　组氨酸营养缺陷型由自发回变即可知。　　2．斑点试验 吸取测试菌增菌培养后的菌液0.1ml，注入融化并保温45℃左右的上层软琼脂中，需S9活化的再加0.3ml－0.4mlS9mix，立即混匀，倾于底平板上，铺平冷凝。用灭菌尖头镊夹灭菌圆滤纸片边缘，纸片浸湿受试物溶液，或直接取固态受试物，贴放于上层培养基的表面。同时做溶剂对照和阳性对照，分别贴放于平板上相应位置。平皿倒置于37℃温箱培养48h。在纸片外围长出密集菌落圈，为阳性；菌落散布，密度与自发回变相似，为阴性。　　3．平板掺入试验 将一定量样液和0.1ml测试菌液均加入上层软琼脂中，需代谢活化的再加0.3ml－0.4ml S9mix，混匀后迅速倾于底平板上铺平冷凝。同时做阴性和阳性对照，每种处理做3个平行。试样通常设4个～5个剂量。选择剂量范围开始应大些，有阳性或可疑阳性结果时，再在较窄的剂量范围内确定剂量反应关系。培养同上。同一剂量各皿回变菌落均数与各阴性对照皿自发回变菌落均数之比，为致变比（MR）。MR值≥2，且有剂量-反应关系，背景正常，则判为致突变阳性。　　三、应用　　1．斑点试验只局限于能在琼脂上扩散的化学物质，大多数多环芳烃和难溶于水的化学物质均不适宜用此法。此法敏感性较差，主要是一种定性试验，适用于快速筛选大量受试化合物。　　2．平板掺入试验可定量测试样品致突变性的强弱。此法较斑点试验敏感，获阳性结果所需的剂量较低。点试获阳性结果的浓度用于掺入试验（每皿0.1ml），往往出现抑（杀）菌作用。　　3．致变作用迟缓或有抑菌作用的试样，培养时间延长至72h。　　4．挥发性的液体和气体试样，可用干燥器内试验法进行测试。　　5．目前，Ames试验作为检测环境诱变剂的一组试验中的首选试验，广泛应用于致突变化学物的初筛。但是，与今天快信息、高效率的社会要求相比，该试验程序还嫌繁琐，方法不够简便，有待于创建新的更为快速灵敏、简单易行的环境诱变剂短期生物测试法。

  • 新型基因检测技术实现丙肝个性化诊疗

    科技日报讯（戴欣郭阳虎）近日，解放军302医院临床检验医学中心科研人员开发出一种针对丙型肝炎患者的新型基因检测技术。该技术对患者本身的白介素28B基因进行多态性分析，在国内率先将多色荧光探针技术（PCR）运用于丙肝患者临床抗病毒疗效的预测和评估中。这为快速检测丙肝患者对某种抗病毒药物是否有效提供了重要依据，从而能更有效地指导临床医务人员准确选择用药，提升治疗效果。 由于患者身体基因型的不同而导致抗病毒用药使用疗效的差异，一直是广大医师用药的困扰。业界许多专家认为，丙肝患者体内白介素28B基因的分布与抗病毒疗效可能存在非常密切的关系，掌握其分布有助于更准确的用药选择。目前国内外科研人员已相继开发了多项针对这一基因位点的检测技术，但由于操作程序复杂、周期长、准确性较差，很难应用推广，给丙肝临床诊断治疗带来一定困难。 302医院的临床检验医学中心毛远丽和王海滨带领的课题组，通过对上千例丙肝患者基因样本进行分析、检测，成功研制出一套针对丙肝患者的抗病毒治疗易感基因检测技术。该技术对多组白介素28B的基因进行筛选，通过合成DNA序列探针，构建双色荧光PCR体系，通过对患者的染色体内白介素28B的基因进行多态性分析，从而得出患者本身个别基因突变的位点。运用该方法，一小时即可完成检测，快速准确，能为患者的临床治疗提供更加准确有效的诊疗依据。 该技术在国内率先将多色荧光探针技术运用于丙肝患者临床抗病毒疗效的预测和评估，大大提高了丙肝临床诊治水平，也标志丙肝个性化诊疗迈出了重要一步。它有助于临床医生更好地选择适合丙肝患者的个性化治疗方案，准确选择抗病毒药物的种类和治疗持续时间，有效缩短患者治疗时间的同时减少就医成本。来源：中国科技网-科技日报 作者：郭阳虎 2014年01月21日

  • 基因定点突变step by step

    8 kb）的原理我上面已经说了，只是补充了一些我认为的注意事项。如果你更有钱的话，那么你可以叫其它公司帮你做定点突变服务，大约是改一个点1000元左右。

  • 基因编辑大危机？Nature 子刊报道CRISPR小鼠体内出现数百种意外突变!

    [b][b]CRISPR基因编辑技术遭遇迄今最大安全性质疑，这事您怎么看？科学技术造福人类，是否存在一个发展的界限？是否存在一些不可逾越的边界？[/b][/b]据《新科学家》杂志网站5月30日报道，美国科学家通过全基因组测序发现，CRISPR基因编辑技术能引起基因组内大量非靶标区内的基因发生突变，包括1500多种单核苷酸突变和100多种大片段序列的敲入和敲除。发表在《自然方法学》杂志上的这一论文表明，CRISPR的脱靶效应可能远超人们此前的估计。CRISPR基因编辑技术因其快速和高精准等特点，成为研究基因与疾病关系的热门之选，并因其能敲入新基因、敲除或修复受损基因，为基因疗法带来了更大希望。但最新论文共同作者、哥伦比亚大学医学中心病理学和细胞生物学副教授斯蒂芬曾认为，随着临床试验的相继展开，科学界是时候慎重考虑CRISPR技术脱靶效应的潜在风险了。资讯链接：CRISPR基因编辑技术遭遇迄今最大安全性质疑 [url]http://www.instrument.com.cn/news/20170601/220937.shtml[/url]

  • 广东发现一列英国突变株

    英国变异毒株杀入广东！粤港澳大湾区是一体，11个城市600万平方公里，七千万人口，是中国对开放的前沿阵地，与英美来往密切，大湾区的朋友们一定要警惕！这个变异毒株，重点不在毒，在“变”！感染性极强，遑论大人，过去不易感的儿童都会超大概率中招！?根据广东疾控中心通报，英国留学生12月4日入境广州，检测是阴性，隔离14后检测为阴阳性！这个变异病毒潜伏期这么长，感染性这么强，相当狡猾，这就是我说的，新冠病毒是特洛伊木马攻城，载人载物由欧美向中国大陆进击！?1月2日，广东省疾控中心在一名英国输入新冠肺炎确认病例的咽拭子样本中发现了B.1.1.7突变株，与近期英国报道的变异病毒基因序列高度相似。英国变异病毒最大的特点即其S蛋白与人类ACE2受体结合亲和力提高了100倍，传播速度比之前的毒株高达70%，已成为伦敦地区的主要毒株，英国回国的留学生，一定不要只隔离14天就出去逛，还得要居家再多隔离七天，再检查无问题后再玩，切切。保护好自己，也是保护家人，保护所在社区！

  • 用变性梯度凝胶电泳、PCR及GC发夹检测突变

    变性梯度胶凝电泳(DGGE)能够将具有单个碱基差别的DNA分子分离开来。分离以 DNA在溶液中的解链特性为基础。以温度或变性剂浓增高时，DNA分子在不同的区域相 对应的解链温度称为基础。解链区域的长度从25个碱基对到数百个碱基对不等，与每 一个解链区域相对应的解链温度称为解链温度(Tm)。由于一个DNA链上相邻碱基间的 堆积作用在DNA双螺旋的稳定上起着相当重要的作用，因此解链区域的Tm值主要取决 于的序列。既使是很小的变化也会引起DNA片段Tm值的改变，如单碱基替代可 引起1.5℃的差异。在DGGE系统中，DNA片段在变性剂梯度聚丙烯酰胺凝胶中电泳，凝 胶中自上而下所含变性剂浓度呈线性增加。DNA片段在进入变性剂某一浓度时，此浓 度下DNA片段在最低温度解链区域解链(相当于该区域的Tm值)，此时DNA分子成分枝状 结构，它使DNA分子在胶中的移动减慢。如果梯度条件选择恰当，因单个碱基变化使 不同的DNA片段在凝胶中的不同位置分叉，随后DNA片段移动减慢，从而使笪DNA片段 最终分离开来。DGGE可以用来检测除最高温度解链区域以外的所有发生单个碱基变化的DNA片段。例如一个DNA片段有三个解链区域，其中头两个区域中的碱基变化能够检测到；但 是最后一个区域的碱基变化，由于缺乏完全解链区域时依赖序列移动的DNA片段，一 般不能检测。我们能够利用克隆的DNA片段通过一个富含GC片段与有两个解链区域的 DNA片段结合来解决这一困难，富含GC的片段我们称之为GC发夹。当缺乏GC发夹时， 只有那些发生在此DNA片段第一个区域所发生的单碱基变化可用DGGE分开；而GC发夹与 该DNA片段结合能够区分第二区域所发生的单碱基改变。\par我们对GC发夹的研究最 初是通过将突变的DNA片段克隆入一个质粒载体，使其与一个含80%鸟嘌呤与胞嘧啶的 300bp片段连接，并用限制性内切酶隆解此克隆DNA，使之释放出与GC发夹结合的靶片 段。虽然该方法是行得通的，但是要设计一个适合于直接检测基因组DNA片段、特别 是带有长达300bp的GC发夹的片段仍然存在着困难。克服这个困难的第一步是有关的 实验观察以及理论推算，结果表明GC发夹长为30bp就足能用于绝大多数DNA片段的 DGGE分析。第二步进展在聚合酶链反应(PCR)基础上，设计一方法使短的GC发夹与DNA 基因组结合。该方法是根据一篇报道，即有限制性内切酶位点的DNA短片段能够与寡 核苷酸相连，此寡核苷酸用于PCR扩增DNA片段；这些在DNA基因组织中未编聯的寡聚核 苷酸的wè5'尾斣陂织PCR过程中有效地掺入扩增的DNA片段的5'末端。我们最近将该原 理用于DGGE方法，结果表明长40-45bp的GC发夹能够与来源于人基因组的扩增DNA片段 结合，此GC发夹能检测发生单个碱基变化的DNA片段，而当其缺乏GC发夹时，DGGE检 测不到。PCR扩增过程中DNA片段的大量扩增增加了灵敏度，所以只需少量DNA样品， 经EB染色的DNA可以很容易地检测出来，因而不需使用放射性探针。因不需与放射性 探针杂交，此法也能比较容易地检测低、中和高拷贝数的重复序列，而这些序列用 Southern杂交来分析有时是十分困难的。在此将详细描述本方法的实验过程，并且专 门讨论该方法如何用于完整的从短到中等长度的基因的分析。

  • PE的Lambda950切换检测器突变？

    PE的Lambda950切换检测器突变？

    单位有台Lambda950型紫外，测反射率在860nm处切换检测器时有3%左右的突变，不知道是什么原因，请高手指点？另外有哪个单位也有Lambda950的紫外吗？想联系交流一下http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508211811_562100_3024213_3.png

  • 警惕药物中的“基因毒性杂质”

    近几年频频出现药物制剂中检出基因毒性杂质残留而被召回的事件。何为基因毒性杂质呢？“基因毒性杂质”（又称遗传毒性杂质Genotoxic Impurity ，GTI），是指本身直接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向的化合物。其主要来源为原料药合成过程中的起始物料、中间体、试剂和反应副产物，此外，药物在合成、储存或者制剂过程中也可能因为降解而产生基因毒性杂质，因其特点为毒性极强，在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，进而导致基因突变并可能促使肿瘤的发生，对用药的安全性产生了强烈的威胁。化学药品中的典型基因毒性杂质包括亚硝胺类杂质和磺酸酯类杂质，它们经过代谢激活后基因毒性非常强，是药物研发过程当中最易产生且需严格把控的基因毒性杂质。因此，各国的法规机构如ICH、FDA、EMA等都对基因毒性杂质提出了明确的要求，越来越多的药企在创新药和仿制药研发过程中也更加关注基因毒性杂质的控制和检测。2020 版《中国药典》四部通则中新增了《遗传毒性杂质控制指导原则》，本指导原则对基因毒性杂质的监管策略与ICH M7指导原则几乎保持一致。2020年5月国家药监局药审中心网站发布了《化学药物中亚硝胺类杂质研究技术指导原则》，该原则为注册申请上市以及已上市化学药品中亚硝胺类杂质的研究和控制提供了指导。在理论上，大部分药物都存在残留基因毒性杂质或被基因毒性杂质污染的风险，因此建立便捷、高效的分析方法是非常有必要的。

  • 50万！上海国际旅行医疗保健门诊部CTNG核酸检测试剂盒及结核分枝杆菌基因和突变检测试剂盒采购项目

    [quote][b]项目概况[/b]CTNG核酸检测试剂盒及结核分枝杆菌基因和突变检测试剂盒采购项目 招标项目的潜在投标人应在上海市静安区天目中路380号11楼会议室获取招标文件，并于2023年09月05日 10点00分（北京时间）前递交投标文件。[/quote][font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号：SHZC20232707项目名称：CTNG核酸检测试剂盒及结核分枝杆菌基因和突变检测试剂盒采购项目预算金额：50.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：50.0000000 万元（人民币）采购需求：CTNG核酸检测试剂盒及结核分枝杆菌基因和突变检测试剂盒采购项目（具体项目内容、采购范围及所应达到的具体要求，以招标文件第三章—招标需求相应规定为准）。合同履行期限：供货周期：合同签订后一年（具体内容详见招标文件第三章—招标需求）本项目( 不接受 )联合体投标。[font=inherit]二、申请人的资格要求：[/font]1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定；2.落实政府采购政策需满足的资格要求：本次招标执行政府强制或优先采购节能和环境标志产品、促进中小微企业、促进残疾人就业、支持监狱和戒毒企业、扶持不发达地区和少数民族地区以及限制采购进口产品等相关政策。如投标产品的制造商（或服务提供商）为符合《政府采购促进中小企业发展管理办法》（财库〔2020〕46号）第二条要求的中小微企业（本招标文件中所称的中小微企业的含义均与此相同），则投标人须在投标文件中提供格式符合财库〔2020〕46号附1要求的《中小企业声明函》；如投标人为残疾人福利性单位，则须在投标文件中提供格式符合财库〔2017〕141号文要求的《残疾人福利性单位声明函》，一旦中标将在中标公告中公告其声明函，接受社会监督；若提供声明函与事实不符的，将依照《中华人民共和国政府采购法》第七十七条第一款的规定追究法律责任。3.本项目的特定资格要求：1） 投标人单位负责人为同一人或者存在控股、管理关系的不同单位，不得参加同一标段投标或者未划分标段的同一招标项目投标；2） 为采购项目提供整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的供应商，不得再参加该采购项目的其他采购活动；3）投标文件递交截止时间前三年内，未被国家财政部指定的“信用中国”网站（www.creditchina.gov.cn）、“中国政府采购网”（www.ccgp.gov.cn）列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单或政府采购严重违法失信名单；4） 法人依法设立的分支机构以自己的名义参与投标时，应提供依法登记的相关证明材料和由法人出具的授权其分支机构在其经营范围内参加政府采购活动并承担全部民事责任的书面授权。法人与其分支机构不得同时参与同一项目的采购活动；5） 本项目面向大、中、小、微型企业，事业法人等各类供应商采购（但不接受公益一类事业单位投标，若为事业单位，应提供本单位为非公益一类事业单位的证明材料或承诺书）。[font=inherit]三、获取招标文件[/font]时间：2023年08月14日 至 2023年08月21日，每天上午9:00至11:00，下午13:00至16:00。（北京时间，法定节假日除外）地点：上海市静安区天目中路380号11楼会议室方式：现场获取或通过电子邮件（zhangjiachen@shzfcg.cn）获取售价：￥600.0 元，本公告包含的招标文件售价总和[font=inherit]四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点[/font]提交投标文件截止时间：2023年09月05日 10点00分（北京时间）开标时间：2023年09月05日 10点00分（北京时间）地点：上海市静安区天目中路380号11楼会议室[font=inherit]五、公告期限[/font]自本公告发布之日起5个工作日。[font=inherit]六、其他补充事宜[/font]1、 报名需提交的资料：(1) 供应商法人资格证明文件（如营业执照或法人登记证书等）；(2) 法定代表人证明文件及法定代表人身份证或法定代表人授权委托书、被授权人身份证及本单位社保缴纳证明或劳动合同；2、 凡有意参加此次招标投标并满足上述条件的合格投标人，供应商携带上述报名资料复印件一套，在上述时间段内至代理公司进行现场报名或通过电子邮件（zhangjiachen@shzfcg.cn）、领购招标文件，逾期不再办理。本项目将对完成报名的供应商同时发售招标文件。报名时提供的资料应与投标文件中的资格证明文件一致，如有不同，以投标文件为准。投标人的合格与否，将由评审小组决定。投标人须保证登记及获得招标文件需提交的资料和所填写内容真实、完整、有效、一致，如因投标单位递交虚假材料或填写信息错误导致的与本项目有关的任何损失由投标单位承担。[font=inherit]说明：获取招标文件环节对潜在供应商部分证明资料的审核系[/font][font=inherit]招标人[/font][font=inherit]为便于后续采购活动开展、减少无效投标响应的前置服务，该服务不属于前置资格审查，该服务产生的建议不影响供应商参与后续采购活动的权利，正式供应商资格审查按法定程序进行[/font][font=inherit]。[/font]3、 本招标公告的公告期限为5个工作日，有效期至2023年08月21日止。4、 投标人购买招标文件后若决定放弃投标的，请至少在投标文件递交截止前3天以书面或邮件形式通知招标代理机构。[font=inherit]5、 开标携带资料：届时请投标人的法定代表人或其授权代表出席开标会，并携带出席人的身份证和法定代表人授权委托书原件及本单位缴纳社保证明，如法定代表人出席开标会的携带法定代表人证明书原件。[/font]如上述日程安排发生变更，以招标机构发出的书面变更通知为准。[font=inherit]七、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。[/font]1.采购人信息名 称：上海国际旅行医疗保健门诊部地址：上海市长宁区金浜路15号联系方式：刘老师、021-626861712.采购代理机构信息名 称：上海政采项目管理有限公司地　址：上海市静安区天目中路380号11楼联系方式：戴小军、张嘉晨021-62091253*80073.项目联系方式项目联系人：张嘉晨电　话：　　021-62091253*8007

  • 如何快速辨认转基因食品？

    如果要推举出过去几年全民参与度最高的话题，那么“转基因”当之无愧。翻看近年的新闻报道，部分转基因农作物遭曝光，转基因是否应该强制标识等也被频频提及，这些都一度引起了广泛的讨论。而转基因食品是否安全，更成为人们关注和争议的焦点。外表能辨认转基因食品吗？外界有一种说法是通过颜色来辨别转基因食品。通过辣椒的黄、红色去分辨，但那些颜色异于常规的未必都是转基因产物。例如彩椒，是一个太空育种的产品，是突变，跟我们转基因的原理是一样的。另一种说法是通过外形来辨别。比如我们的圣女果，就外形而言与普通的番茄有很大差异，实际上却是从以色列引进的一个品种。如此看来，单看颜色或外形，是无法确认是否为转基因食品的。如何能辨认转基因食品呢？通过检测公司可以快速轻松地分辨转基因食品。基于食品的种类、加工方式的不同以及在食品中含有的相应的转基因片段的不同，适用合适的、高效的、精确地检测方法和手段。通过PCR技术，经过罗氏检测仪对待检测的转基因食品的DNA进行适当的扩增，通过其有无特定长度和序列的DNA序列和片段来判定是否为转基因食品。

  • EDTA测锌终点无突变

    以前做锌分析时终点是突变为亮黄色，最近做样看不到突变，慢慢变亮黄无法判断终点分析方法是这样的，依次加3酸溶样冒白烟，加水至50ML，加氯化铵5g左 右，滴加氨水至铁沉淀完全并过量，加热过滤后调节PH，加抗坏血酸、硫脲、氟化钾，有时也加碘化钾，加二甲酚橙，乙酸乙酸钠缓冲溶液20ML，滴定

  • 液相基线垂直上升，信号突变求助

    液相基线垂直上升，信号突变求助

    各位大佬，请问这种垂直上升的信号突变是什么原因造成的条件:安捷伦1260，dad检测器，同一个方法，一个序列中只可能有一针出现也可能一针都没有，我在不同的序列中寻找发现每次出现这种垂直的保留时间都不同，并且不止一台液相有这种情况，，并且压力也正常[img=,690,388]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006101637044347_7090_4134806_3.png[/img]

  • 【求助】请教用质谱的方法进行DNA点突变的分析

    大家好最近在做DNA点突变的研究,由于基因很大,有七十几个外显子,如果一一扩增测序的话成本和时间上都不划算.所以在考虑能否用质谱的方法，或者其他什么分析的方法先进行下初筛。和标样比较，如果看到了某个峰有异常的话，再专门扩增这个外显子去测序外显子一般200－300bp。想请教大家，不知道用质谱的方法可不可以？另外，国内有哪里用质谱进行DNA序列的研究的吗?我知道用MALDI-TOF-TOF这个进行SNP的研究，但是对于我们这个200－300bp来说量程上就太小了。期待大家的回答～～～～

  • 内标回收率突变？

    近日测样品，发现Rh内标回收率有突变现象，从100%突变到50%，一会儿又是160%，其他元素也都跟着变，通过内标校正计算后数据倒也可以。进样系统正常，换了雾化器，咨询工程师说是矩管前的银屏蔽圈下面的触点接触不好，换了个新的屏蔽圈，下面的也用砂纸擦了，均无大的改善！求解？大家遇到如此问题吗？

  • 【分享】PNAS：基因大规模变异速检技术问世

    据美国物理学家组织网近日报道，马萨诸塞大学医学院研究人员开发出一种新的突变基因筛查技术，该技术能在同一试管中检测出可能发生突变的每个氨基酸，并分析出每种突变对细胞造成的影响。新技术为检测遗传疾病、识别突变细菌和新疫苗开发开辟了一条捷径。该研究发表在近日的美国《国家科学院院刊》（PNAS）网站上。人类染色体组中每个基因都由上千个DNA（脱氧核糖核酸）密码组成，其中一个密码改变就可能造成严重疾病，如癌症、囊性纤维化、肌肉萎缩或亨廷顿病等。同样，病毒或细菌中一个微小突变也能产生抗药性菌种，使常规药物失效。即使很小的基因片段都可能有上千种变化，要系统分析它们很难。通常的DNA测序是阅读整个染色体组。而生化与分子制药副教授丹尼尔·玻仑领导的研究小组开发出名为EMPIRIC的新技术，能在同一个试管中，精确计算并记录细胞的上百种不同变异。波尔他们使用新技术对活性面包酵母菌进行了检测，该酵母菌基因包含9个氨基酸，同时在同一试管中检测出这一小片基因中发生的500多种不同DNA突变。而之前的检测技术需要做几千次试验，花几年才能完成。新技术的关键突破在于，能在同一个试管中同时分析大量突变。目前的抗药性筛查技术要依赖偶然的突变，所以效率低下，对那些可能发生却并未发生的突变更是无从下手。但由于病毒基因氨基酸相对较少，新技术可在同一试管中检测出某种病毒进化出抗药性的所有突变，将病毒整个基因组系统地筛查一遍。这为系统地鉴定抗药性突变、开发新型疗法和新疫苗提供了一条捷径。新方法还有助于深入理解生物寄主的问题，包括环境压力怎样在基因层面影响了进化过程，何种突变可能造成基因疾病，如何筛查可能产生抗药性的突变病毒等。玻仑说：“虽然我们只用酵母菌细胞做了试验，但新技术很全面，能用于任何迅速生长的细胞，还能作为一种对癌症、病毒或细菌的基因控制手段。”( 来源：科技日报 )

  • 【云唐仪器】食品安全检测系统有什么用途

    【云唐仪器】食品安全检测系统有什么用途

    [img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/01/202401050936132043_411_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]　　 食品安全检测系统是一种用于检测食品中是否存在有害物质、微生物污染以及其他食品质量问题的工具。随着人们对食品安全问题的日益关注，食品安全检测系统也变得越来越重要。　　首先，食品安全检测系统可以检测食品中的有害物质，如农药残留、重金属、添加剂等。这些有害物质可能对人体造成极大的危害，例如导致中毒、基因突变和致癌等。食品安全检测系统通过高精度的仪器和测试方法，快速准确地检测出这些有害物质，从而保障消费者的健康。　　其次，食品安全检测系统还可以检测食品中的微生物污染，如细菌、霉菌和病毒等。微生物污染是食品变质和引发食源性疾病的主要原因之一。食品安全检测系统通过培养和计数等方法，快速准确地检测出食品中的微生物数量和种类，从而判断食品是否符合卫生标准。　　此外，食品安全检测系统还可以检测食品的其他质量问题，如营养成分、食品添加剂、食品过敏原等。这些质量问题可能影响食品的口感、风味和安全性。食品安全检测系统通过高精度的仪器和测试方法，快速准确地检测出这些质量问题，从而保障消费者的权益。　　总之，食品安全检测系统在保障食品安全方面发挥着重要的作用。它可以检测食品中的有害物质、微生物污染和其他质量问题，从而保障消费者的健康和权益。随着人们对食品安全问题的日益关注，食品安全检测系统将会得到更广泛的应用和发展。

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