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外核酸提取仪

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外核酸提取仪相关的论坛

  • 核酸提取仪的工作原理

    核酸提取(核酸的分离与纯化)主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开,但在分离核酸时,应保证核酸分子一级结构的完整性,并排除其他分子污染。核酸提取方法一般包括细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤,而每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。操作过程中首先通过物理、化学或酶解作用裂解细胞,使核酸释放出来,并去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂肪类等生物大分子的过程。在此基础上,沉淀核酸、去除盐类和有机试剂等杂质,从而得到纯化的核酸。核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器。在传统的手工核酸提取过程中通常采用离心澄清的方法,操作时费时费力。近年来,出现了磁珠分离技术,利用磁珠在一定条件下对核酸具有很强亲和力的特点,吸附核酸。当条件改变时,磁珠又可以与其吸附的核酸分离,从而得到纯化的核酸。这种方法简便、高效、易于操作,是目前核酸提取仪采用的主要方法。具体来说,磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞,从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面,而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后,再在磁场作用下,使磁性颗粒与液体分开,回收颗粒(即磁珠-DNA 混合物),再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂,操作简单,符合核酸自动化提取要求,是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。

  • 与传统的手工操作相比核酸提取仪的优势

    核酸提取仪有两种分类分类方式,一种是按用途进行分类,另一种是按照应用试剂的不同进行分类。(1)按照用途分类:一类是自动液体工作站,自动液体工作站是功能非常强大的设备,液体分液、吸液等自动完成,甚至可以整合扩展、检测等仪器设备,实现标本提取、扩增、检测全自动化。提取核酸只是其功能的一个应用,不太适合常规实验室提取核酸,一般都应用在单一类标本并且一次提取标本量非常大(至少96个,一般几百个)的实验需求上。自动工作站的平台建立及平台的运作,需要比较大的资金。另一类是小型的自动化仪器,小型的自动化仪器是通过运行结构的特殊设计来达到自动提取核酸的目的,可以在任何实验室得到应用,最近几年有很多机型陆续投放市场。(2)根据应用的试剂不同分类:一类是应用磁珠法试剂的仪器,另一类是应用离心柱法试剂的仪器。应用磁珠法的自动核酸提取仪操作简便,容易自动化,是目前市场上的主流,如QAGEN、Lab-Aid 820等仪器。与传统的手工操作相比核酸提取仪的优势:核酸提取仪一般具有以下的特点:(1) 无交叉污染:仪器部件未接触到生物学样本;(2) 自动化系统:每次提取工作,操作者只需要做好安装工作,布置好孔板(提供提取所需要的试剂).提取整个过程都不需要人为的帮助,仪器自动完成;(3)提取控制:在提取过程中,如果操作者需要,该系统允许您对提取过程进行控制。

  • 全自动稀有样品核酸提取仪

    全自动稀有样品核酸提取仪

    [img=,257,264]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/06/201706301258_01_3194653_3.png[/img]Aurora全自动核酸提取系统采用专利SCODA( Synchro-nous Coefficient of Drag Alteration)电泳DNA操作技术,从具有挑战性的样品中浓缩和纯化DNA.SCODA根据DNA的物理特性选取长的带电聚合物(而非通过其其化学性质或化合物亲合力分离DNA).因此,系统可提供卓越的污染物排斥.此外,Aurora系统可从单一样本中提取高达100倍浓度,从几百分子到100微克的DNA.可高效稳定地纯化提取核酸和蛋白,尤其适合珍贵样品、低生物质低丰度样品、土壤、环境等各类型难提取样品的提取. 产品特征电泳纯化高分子量DNA的提取低生物量和严重抑制样品处理样品成本为零,适合低通量样品处理宏基因组学/NGS/光学测绘/单分子测序应用应用领域生命科学研究土壤与环境农业生物技术法医学 技术参数样品处理时间:2-4小时,样品盐度60%DNA / RNA片段大小: 500 nt RNA,300 bp - 50 kb DNA,可扩展到1Mb污染物抑制: 10-50,000X2产量: 60 uL 该系统避免了研磨、匀浆等传统方法的费力、耗时、低效等诸多缺点,通过非机械过程直接从环境样品,细胞提取物,或带电泳插头的琼脂糖中回收完整的高纯大片段DNA。DNA提取缓冲液、DNA凝胶柱可用于进行后续的克隆,归档,光学标测,或PCR、测序等遗传分析。系统可从至多5毫升稀释裂解液或洗出液中提取核酸,回收低生物质样品包括沉积物,土壤,苔原,和水样中的微量核酸。系统还可净化商业试剂盒受污染洗脱液,提高样品利用率,并无缝对接到现有的工作流程中.

  • 自动核酸提取仪选型的困惑

    单位计划采购自动核酸提取仪,听几个进口厂家推介了,得出来的观点相悖,特求助高人指点一二。到底是滤膜法好还是磁珠法好?是否为真正的全自动怎样去区分?高通量与否怎样鉴定?

  • 出售赛默飞核酸提取仪kingfisher prime

    出售赛默飞核酸提取仪kingfisher prime,仪器未使用过。开机正常。有意义私聊。[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211120846072310_5286_4092743_3.png[/img]

  • 【实战宝典】核酸提取方式主要有哪些?有何差异?

    问题描述:核酸提取方式主要有哪些?有何差异?解答:[align=left][font=宋体][color=black]目前主流的核酸提取方法有煮沸裂解法、苯酚氯仿抽提法、离心柱法、磁珠法,接下来介绍这几个方法的原理、优劣势及适用场景。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]([/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]1[/color][/font][font=宋体][color=black])煮沸裂解法:原理是通过加热使细胞膜破裂,充分暴露核酸,核酸可溶解于上层水溶液中,通过高速离心沉淀变性蛋白质和细胞碎片,上清液即为核酸粗提液。此方法的操作相对简单,成本低,但由于是粗提,成分比较复杂,有时可能带来一定的体系干扰或者裂解不充分的情况,一般用于细菌定性鉴定时使用。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]([/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]2[/color][/font][font=宋体][color=black])苯酚氯仿抽提法:原理是苯酚和氯仿抽提除去蛋白和多糖类杂质,获得相对较为纯净的基因组核酸。成本比较低廉。缺点是试剂毒性较大,长时间操作对人员健康有较大影响。试剂需要自行配制,批次间差异显著。提取效率相对较低,不适宜少量或者微量操作。一般用于大量核酸样本的抽提。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]([/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]3[/color][/font][font=宋体][color=black])离心柱法:原理是利用裂解液促使细胞破碎,使细胞中的核酸释放出来,利用柱子中的载体吸附提纯核酸。它的优点是比传统的酚氯法提取纯度高、毒性低,有利于[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]RNA[/color][/font][font=宋体][color=black]保护,而且能进行微量操作,价格较低。缺点是不便于高通量、自动化操作,对实验室设备和人员的操作技能要求较高。目前应用广泛,常用于细菌、病毒、动物组织等多种样本的核酸提取[/color][/font][sup][font='Times New Roman','serif'][color=black][13][/color][/font][/sup][font=宋体][color=black]。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]([/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]4[/color][/font][font=宋体][color=black])磁珠法:与离心柱的操作原理基本相同,利用交换吸附材料吸附核酸,从而将核酸和蛋白质等细胞中其他物质分离。优点是能够实现自动化、高通量操作,配合核酸自动提取仪使用,操作简单、用时短,核酸纯度高、浓度大,可广泛用应用于血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]DNA[/color][/font][font=宋体][color=black]和[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]RNA[/color][/font][font=宋体][color=black]分离,但超高通量样本同时进行时,可能存在一定的污染风险。[/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 【实战宝典】核酸提取中裂解液的使用量为多少合适?

    问题描述:核酸提取中裂解液的使用量为多少合适?解答:[align=left][font=宋体]裂解液的用量原则是确保能彻底裂解样品,同时使裂解体系中核酸的浓度适中。浓度过低,将导致沉淀效率低,影响得率;浓度过高,去除杂质的过程复杂且不彻底,导致纯度下降。另外,裂解液的用量是以样品中蛋白质的含量为基准的,而不是以核酸含量为基准,这一点务必牢记。[/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 核酸蛋白检测仪应用和原理

    核酸蛋白检测仪是层析分析的主要装置,核酸蛋白检测仪配上层析柱、恒流泵、部分收集器、层析谱分析系统(根据需要选配)和电脑打印设备即构成一套完整的核酸蛋白检测仪分离层析系统。它是当今从事生命科学研究、药物测定、化工、食品科学及医学研究等行业的现代分析实验仪器。核酸蛋白检测仪分析系统广泛用于工业、农业、科研和大专院校的科学研究和教学实验。其原理是根据物质(样品)对紫外光有明显吸收的特征,实现对样品成份含量比对分析,以便进行样品蛋白、核酸物质识别检测和含量测定。在生化分析、环保科学、食品研究、毒理研究、新药开发等领域中对核酸、蛋白检测、纯化和提取提供了一种独特的分析手段。

  • 核酸微小提过程

    核酸纯化柱(微/小提)http://www.biocomma.cn/images/2mlxiaoti.jpg核酸纯化小提柱产品组成外管医疗级PP,2ml,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,收集离心试剂。内管医疗级PP,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,底部鲁尔接口设计,方便试剂流出。筛板特殊纤维材料,在高速离心过程中,支撑硅胶膜,保证硅胶膜的完整性,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,厚度仅为0.3mm,孔径50um,致孔,孔隙率只有不到百分之二十,相比市场上同类产品,比面积小,静电小,DNA吸附极大降低。硅胶膜孔径1um,高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA,低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP,固定筛板与硅胶膜。核酸纯化微提柱http://www.biocomma.cn/images/2mlweiti.jpg产品组成外管医疗级PP,2ml,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,用来收集离心液。内管医疗级PP,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,底部鲁尔接口设计,方便离心液收集。装配位(这里指装配硅胶膜、筛板和压圈处)1直径为7.4mm,与市场上核酸小量提取同等规格。装配位2,直径为5.4mm,此处为微量核酸提取装配位,面积为小量提取装配位的一半。筛板特殊纤维材料,在高速离心过程中,支撑硅胶膜,保证硅胶膜的完整性,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,厚度仅为0.3-0.5mm,孔径50um,孔隙率只有不到百分之二十,相比市场上同类产品,比面积小,静电小,DNA吸附极低。硅胶膜孔径1um,高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA,低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP,固定筛板与硅胶膜。CommaPrep™核酸微提/小提柱可用在核酸提取过程(见图1)中过柱结合、洗涤、洗脱步骤中http://www.biocomma.cn/images/nucleic-2.jpg 图1 核酸提取过程核酸吸附量:核酸纯化小提柱:0-20ug核酸纯化微提柱:0-10ug规格:2ml离心管+吸附柱 适用范围:核酸提取原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,再改 变溶液环境使DN A溶解到纯水或TE中。DNA提取:核酸提取柱用于基因组DNA抽提,不需要使用平衡液。抽提缓冲液,或者结合液中需要胍盐(如硫氰酸胍等) 辅助DNA吸附到膜上。RNA提取:裂解液建议使用含有硫氰酸胍(异硫氰酸胍)可以抑制RNA酶活性,保证RNA酶完整性;可以配合Trizol使用,样品经Trizo裂解后,氯仿分相去除蛋白等杂质,取上层过柱,然后70%乙醇洗涤,即可得到纯净的RNA。【注意事项】 1.上柱前溶液的PH值应小于7;2.洗涤液中的乙醇浓度不得低于50%,一般55%--80%之间。3.最后洗脱,可以用去离子水或者TE(10 mmol/LTris-Cl,1 mmol/L EDTA (pH8.0))。如果长期保存DNA,建议使用TE。定购信息Cat#品名离心柱规格提取量包装DNAK1001CommaPrep™质粒小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1004CommaPrep™琼脂糖凝胶回收纯化柱2ml0-10μg100套/包DNAK1007CommaPrep™ 核酸纯化柱(微小提)2ml0-10μg100套/包DNAK1008CommaPrep™基因组小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1009CommaPrep™RNA小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1002CommaPrep™质粒中提纯化柱15ml0-100μg20套/包DNAK1003CommaPrep™质粒大提纯化柱50ml0-500μg10套/包定制

  • 【分享】ZHD型紫外蛋白核酸检测仪使用说明

    ZHD型紫外蛋白核酸检测仪使用说明 一、系统简介 蛋白核酸检测仪是层析分析的主要装置,配上层析柱、恒流泵、部分收集器(根据需要选配)和电脑打印设备即构成一套完整的液相色谱分离系统。它是当今从事生命科学研究、药物测定、化工、食品科学及医学研究等行业的现代分析实验仪器。广泛用于工业、农业、科研和大专院校的科学研究和教学实验。其原理是根据物质(样品)对紫外光有明显吸收的特征,实现对样品成份含量比对分析,以便进行样品蛋白、核酸物质识别检测和含量测定。然而,目前国内生产的蛋白检测仪虽然种类繁多,但均采用记录仪描谱且预热时间较长。 ZHD型紫外蛋白核酸检测仪的研制成功,为科研和实验人员利用电脑系统实现核酸蛋白检测和分析提供了一种先进的手段,其特点是系统稳定、操作简便、电脑显示谱图、数据分析和打印谱图。 二、系统特点 本系列检测仪有别于其他检测仪,主要有以下特点: 1、预热时间短,一般做实验只要预热10分钟左右。 2、稳定性高,预热后每小时漂移一般小于0.001。 3、操作简洁,开机后仪器自动调整透光率(T)到100%,吸光度(A)调整到0.000。 4、透光率(T)和吸光度(A)对应准确,点两者误差小于1%。 5、双数据显示,仪器适时显示吸光度(A)和透光率(T)。 6、仪器带有电脑接口和记录仪接口(吸光度0—200mv)。 7、工作软件提供谱图采集、分析计算、保存、打印等功能,可将谱图插入文档(word)文件中。 8、一台电脑可配多台检测仪(由电脑有效端口数决定)。 三、 技术性能 1、通过测量选择菜单,在电脑屏幕上可描出吸光度(A)谱图,透过率(T%)谱图以及A-T%谱图。 2、通过图形平移、复读伸缩和压缩选择等菜单,可对谱图并进行幅度、宽度调整和谱图参数计算,预览满意后打印输出。 3、在描谱过程中,电脑会自动将图形左移(也可人工调整),电脑描谱最长时间为20小时。 4、采集数据自动保存。 四、主要参数: 1、波长:254nm,280nm(可根据用户需要调配)。 2、样品池100ul,光程3mm。 3、量程:吸光度(A):0--2.000 透光率(T):1%—100%。 4、分辩率:吸光度(A):0.001 透光率(T):0.1%。 5、电脑分析参数:峰高、峰宽、峰面积、峰面积比、保留时间、面积含量(归一化)、层析柱分辩率等。 6、电源220V±10%,50HZ。 7、主机重量:约3.5Kg。 五、系统安装与操作步骤 1、将仪器背板上的输出端通过一根串行口连接电缆与电脑主机的COM1或COM2串行口相连。 2、打开紫外蛋白核酸检测仪电源,仪器预热10分钟左右。 3、打开电脑后,将应用软件(ZHD.exe)复制到硬盘上。钦一下仪器面板上的复位按钮,待仪器显示0.000A和100%T后,双击ZHD.exe启动应用软件,系统进入采集(分析)状态。 4、在“测量选择”菜单下,用鼠标选择检测项目。 5、在“检测操作”菜单下点击“测量开始”,电脑开始采集。 6、要停止采集,点击“检测操作”下的“测量结束”菜单,然后关闭紫外蛋白酸检检测仪。 六、层析普工作站软件使用 1、 对硬件的基本要求: a、电脑在简体中文Windowsxp操作系统上运行; b、显示器分辩率为1024*768,小字体,256色配置; c、图形打印机; d、电脑系统必须正常工作,并保证串行口(COM2或COM1)有效; 2、系统连接无误后先让检测仪工作,再执行应用软件ZHD.exe; 3、 点击文件操作菜单下的“打开谱图”,出现文件操作对话框,打开随机盘上的数据文件(.ran),图形被打开,熟悉菜单操作。菜单介绍如下: a、“文件操作”菜单下有打开谱图、保存谱图、打印谱图、打印预览等; b、“检测操作”菜单下有测量开始、测量结束(测量结束后,系统在应用程序目录下生成“文件名.TXT”文件,此格式文件可在Excel软件中打开,并可转贴到Word文档中使用); c、“灵敏度选择”菜单下有A、T%、A-T%选项; d、“谱图平移”菜单后有向左慢移动 []和向右快移动[]; e、“谱图重绘”菜单:从起始点描谱;清理屏幕;释放压缩; f、“谱图全貌”菜单:在屏幕上观察全部谱图。 g、“参数选择”菜单:可对谱图进行参数分析计算。方法如下:在吸光度状态下,点击鼠标左键选取基线及时间范围(第一次点击选取第一点,第二次点击选取第二点),点击“选择参数”下拉菜单的峰高、标准差、半峰宽、峰底宽、峰面积、峰面积比、面积含量及保留时间等参数进行计算,还可间接计算出层析柱分辨率;双击鼠标左键,即可取消本次计算。 h、在吸光度(A)或透光率(T%)状态下,单击鼠标右键,屏幕显示该鼠标点的数值;双击鼠标右健,擦除屏幕显示数值。 七、注意事项: a、 更改波长方法:打开样品池挡板后,可见到滤光片的燕尾型支架和印字(245或280代表当前所使用的波长),用手将其轻轻抽出,换向后插入原位,再将样品池挡板装上,拧紧固定螺钉即可。 b、 在检测仪和电脑正常工作后才能运行应用软件; c、 应用软件执行后,十秒钟后不出现采集分析界面,说明电脑未收到数据,需检查系统连接是否正常; d、 在A—T%描谱过程中,开始1小时内,T%谱以实蓝线表示;1小时后(或点击“图形重绘” ),已描过的T%谱会以虚蓝线表示; e、 测量开始后(特别是出峰以后)不要按复位按钮。 f、 要停止采集,请点击“测量结束”后,先点击“EXIT”,再关闭检测仪。 g、 开始测量时,屏幕会弹出保存文件对话框,要求输入数据文件名及存放路径;之后,电脑自动保存数据。 I、基线选取要保证基线与所选峰必须要有两个焦点,并与其他峰无焦点。

  • 【讨论】远离EB和紫外,检测核酸有没有更好的选择

    话说无论是初接触分子生物学的新手,还是久经考验的“老鸟”,都知道EB染料的有害性,这种有害性表现在三个方面:接触致癌性,紫外观测的诱变性,以及麻烦的后处理。但是要说到EB的替代品,好像又都不是那么合心意,比如SYBR类染料在紫外下不稳定,容易降解,一些像是GelRed之类的染料虽然毒性低,但是价格却不亲民。想要避免EB的影响,又不想影响实验的效果,许多实验人员常陷入两难中,另一方面,经典的凝胶成像系统一般都是采用的紫外成像,在这种波长下,EB的灵敏度和价格都是比较合适的,而其它的染料又存在不稳定性这一瓶颈式缺点,所以导致了虽然知道EB的有害性,但许多实验室还是采用EB染料的现状。国内生物技术自主研发着名企业:百泰克公司2009年推出了新一代的凝胶透射仪,可用于核酸和蛋白质电泳凝胶样品的观察、处理、分析和拍照。这种凝胶透射仪:UltraPowerTM采用的是可见光光源,如果配合新一代核酸染料UltraPowerTM或者其他花菁类荧光染料,可检测出几十pg的dsDNA,灵敏度比紫外凝胶透射仪配合EB染料高10-25倍。这是由于花菁染料具有摩尔吸收系数大和荧光量子产率高的优点,通过共轭链长度的调节,花菁的光谱可以从可见光区一直延伸到近红外区,采用红区测量可有效地排除背景干扰,获得更为理想的分析灵敏度和选择性。花菁染料的光谱对外界微环境的变化极为敏感,非常适合生物及环境样品的分析研究。除此之外,UltraPowerTM可见光凝胶透射仪还可以用于多数荧光染料,比如SYBR Green I、绿色荧光蛋白(EGPF)等(具体染料见附表)。这可以算得上是一套多色荧光成像分析系统,而且UltraPower可以采用普通数码相机拍照,从而摆脱了高昂造价得黑白CCD时代,可以拍出多姿多彩的电泳图片来。

  • 质粒提取流程

    质粒提取柱(大中/硅胶膜)CommaAffin™质粒中提柱http://www.biocomma.cn/images/nucleic-11.jpg产品组成外管医疗级PP,15ml,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,用来收集离心液。内管医疗级PP,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,底部鲁尔接口设计,方便离心液收集。直径11.0mm筛板特殊 纤维材料 ,在高速离心过程中,支撑硅胶膜,保证硅胶膜的完整性,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,厚度仅为0.3-0.5mm,孔径50um,孔隙率只有不到百分之二十,相比市场上同类产品,比面积小,静电小,DNA吸附极低。硅胶膜孔径1um,高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA,低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP,固定筛板与硅胶膜。CommaAffin™质粒大提柱http://www.biocomma.cn/images/nucleic-3.jpg产品组成外管医疗级PP,50ml,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,用来收集离心液。内管医疗级PP,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,底部鲁尔接口设计,方便离心液收集。直径24.0mm筛板特殊 纤维材料 ,在高速离心过程中,支撑硅胶膜,保证硅胶膜的完整性,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,厚度仅为0.3-0.5mm,孔径50um,孔隙率只有不到百分之二十,相比市场上同类产品,比面积小,静电小,DNA吸附极低。硅胶膜孔径1um,高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA,低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP,固定筛板与硅胶膜。CommaAffin™核酸中/大提柱可用在核酸提取过程(见图1)中过柱结合、洗涤、洗脱步骤中核酸吸附量:CommaAffin™质粒中提柱:0-100ug 规格:15ml离心管+吸附柱CommaAffin™质粒大提柱:0-500ug 规格:50ml离心管+吸附柱 http://www.biocomma.cn/images/nucleic-7.jpg 图1 质粒提取过程适用范围:核酸提取原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,再改 变溶液环境使DN A溶解到纯水或TE中。质粒DNA提取:抽提缓冲液,或者结合液中需要胍盐(如硫氰酸胍等) 辅助DNA吸附到膜上。【注意事项】 1.上柱前溶液的PH值应小于7;2.洗涤液中的乙醇浓度不得低于50%,一般55%--80%之间。3.最后洗脱,可以用去离子水或者TE(10 mmol/LTris-Cl,1 mmol/L EDTA (pH8.0))。如果长期保存DNA,建议使用TE。订购信息Cat#品名柱管规格包装004407质粒中提过滤管20ml50套/包004410质粒中提过滤管30ml50套/包004416质粒大提过滤管60ml20套/包

  • 未名环境分子诊断(常熟)有限公司刚刚发布了核酸提取试剂盒研发员-苏州市职位,坐标苏州市,速来围观!

    [size=16px][color=#ff0000][b][url=https://www.instrument.com.cn/job/position-88822.html]立即投递该职位[/url][/b][/color][/size][b]职位名称:[/b]核酸提取试剂盒研发员-苏州市[b]职位描述/要求:[/b]岗位职责:负责针对各种临床样本的核酸提取试剂的开发和优化;配合磁珠进行核酸提取试剂盒的开发和优化;如游离DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]纯化试剂盒、DNA片段筛选试剂盒等。岗位要求:拥有相关学科的大专/硕士或博士学位,如生物技术、分子生物学等。至少1年以上核酸提取的开发经验,熟悉相关实验操作和技术原理。[b]公司介绍:[/b] 未名环诊是国内成立最早的环境分子诊断企业,以北京大学研究成果和团队基础,研发基于污水流行病学的大数据监测评估技术,开创了污水毒情监测业务,为各级政府提供毒情监测和溯源服务。为全国行业龙头,细分领域市场占有率超60%。与公安部、18个省级公安厅、200多个地市级公安局合作,为我国公安禁毒事业做出了巨大贡献和技术突破。 企业的发展目标为以城市生活污水为载体,不断挖掘污水中蕴含的城市大...[url=https://www.instrument.com.cn/job/position-88822.html]查看全部[/url][align=center][img=,178,176]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108160948175602_3528_5026484_3.png!w178x176.jpg[/img][/align][align=center]扫描二维码,关注[b][color=#ff0000]“仪职派”[/color][/b]公众号[/align][align=center][b]即可获取高薪职位[/b][/align]

  • 【实战宝典】为了保证分离核酸的完整性和纯度,在实验过程中应注意哪些?

    问题描述:为了保证分离核酸的完整性和纯度,在实验过程中应注意哪些?解答:[align=left][font=宋体][color=black]尽量简化操作步骤,缩短提取过程,以减少各种有害因素对核酸的破坏;减少化学因素(酶、[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]PH[/color][/font][font=宋体][color=black])对核酸的降解,提取核酸过程中所用枪头、容器等与核酸直接接触的实验用具应保证无酶,避免核酸被酶解。为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏,操作多在[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]pH[/color][/font][font=宋体][color=black]为[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]4.0-10.0[/color][/font][font=宋体][color=black]的条件下进行;减少物理因素对核酸的降解,物理降解因素主要是机械剪切力,其次是高温。[/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 实验室核酸清除仪器气溶胶污染清除

    2020年4月18日,《[url=https://www.zhihu.com/search?q=%E5%8D%8E%E7%9B%9B%E9%A1%BF%E9%82%AE%E6%8A%A5&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A%22387158915%22%7D]华盛顿邮报[/url]》(WashingtonPost)爆出一则重磅新闻,美国CDC在实验室生产的新冠病毒检验试剂出现了污染问题(图1),导致全美的核酸检测推迟最少一个月。2020年1月21日,美国CDC开发了新冠病毒检测方法,1月下旬,美国CDC对26个公共卫生实验室发放新冠病毒试剂盒,有24个实验室出现了假阳性,美国CDC紧急召回诊断试剂,直到3月2日,IDT公司生产新冠试剂重新投入使用。由于实验室污染,美国错过了黄金的疫情防控窗口。[img=,919,]https://pic3.zhimg.com/80/v2-cd8d1d3aca2679ba712ee37665d3f292_720w.jpg[/img][img=,979,]https://pic3.zhimg.com/80/v2-b0ffe581305755a0db617c2b5e98eaf6_720w.jpg[/img]二、核酸污染与分类2.1 核酸污染,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室绕不开的“疼”[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url](聚合酶链式反应简称)检测因其灵敏度高、快速、操作方便等优势被广泛应用,不过正是由于它灵敏度极高,极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性。因此,如何避免以及处理实验室污染,对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测人来说是一种挑战。2.2 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]污染分类(1)样本间交叉污染:主要是在采(取)样的过程中,由于取样工具之间的交叉造成污染;或者在核酸提取的过程中,由于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]、离心管等使用不当导致的样本间污染。(2)[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]试剂的污染:主要是在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]试剂配制过程中,由于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。(3)克隆质粒的污染:在实验室操作中经常会用到阳性参考品,这些阳性参考品大多数是由某些克隆质粒制作而成,克隆质粒在单位容积内浓度高,使用不当极易造成污染。(4)CR扩增产物污染:这是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应中最主要、最常见,也是最令人头疼的污染问题。因为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]产物拷贝量大,远远高于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测数个拷贝的极限,所以极微量的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]产物污染,就可造成假阳性结果。[img=,966,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-ef39f2836cc5d3c8b081f0916a887635_720w.jpg[/img]图2 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]产物拷贝量示意三、扩增产物[url=https://www.zhihu.com/search?q=%E6%B0%94%E6%BA%B6%E8%83%B6&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A%22387158915%22%7D]气溶胶[/url]污染—核酸污染中的“牛皮藓”[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室核酸污染中最难消除的是气溶胶污染,尤其是扩增产物的气溶胶污染。污染主要发生在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]的扩增和产物分析阶段。因为,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]产物拷贝量大(一般为1013拷贝/mL)(图2),扩增产物液面与空气摩擦时会形成气溶胶。所以,比较剧烈地摇动反应管、开盖时吸样,以及反复吸样都可形成气溶胶污染。飞溅的扩增产物会形成气溶胶漂浮在空气中,粘附到物体表面及检测人员身体上,随着人员及物料流动而污染整个实验室。如果这种污染能及时发现,实验室空置几天,采取积极有效的处理措施,情况会好转。四、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室核酸污染传统处理方法4.1 物理方法使用紫外灯照射是目前[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室预防污染最常规的方法。由于DNA链上相邻的嘧啶在254nm紫外诱导下发生交联,[url=https://www.zhihu.com/search?q=%E5%98%A7%E5%95%B6%E4%BA%8C%E8%81%9A%E4%BD%93&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A%22387158915%22%7D]嘧啶二聚体[/url]不能被切除,导致DNA聚合酶在空间上被阻碍或者DNA不能被完全变性,从而使扩增反应终止。由于小的扩增子只有较少的临近嘧啶,所以该方法对小的扩增子效果不明显,对富含G+C的和短的(300bp)的扩增产物污染效果不大。4.2 化学方法包括使用商品化的DNA去除剂、次氯酸钠、1mol/L的盐酸等各种化学物质去降解DNA。化学方法主要通过氧化损伤核酸的作用,从而使留在实验室的扩增产物被破坏掉。4.3 顺其自然法停下所有实验,靠通风和时间抹掉核酸的痕迹。4.4 绝地求生法换一种试剂盒,只要两种试剂的扩增产物不一致,没有交叉反应,可以继续做实验。五、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室核酸污染的整体解决方案根据《[url=https://www.zhihu.com/search?q=%E5%8C%BB%E7%96%97%E6%9C%BA%E6%9E%84%E6%96%B0%E5%9E%8B%E5%86%A0%E7%8A%B6%E7%97%85%E6%AF%92&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A%22387158915%22%7D]医疗机构新型冠状病毒[/url]核酸检测手册(试行第二版)》(联防联控机制医疗法〔2020〕313号)中提到:实验室结束后空气清洁要求。必要时可采用核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸(图3)。[img=,795,]https://pic4.zhimg.com/80/v2-86e6a5ba788dad4f3b9aae8016e0ce0f_720w.jpg[/img]图3《医疗机构新型冠状病毒核酸检测手册(试行第二版)》的要求5.1 全自动核酸气溶胶污染清除仪—预防、清除气溶胶污染的得力助手[img=,829,]https://pic4.zhimg.com/80/v2-232699116e0e539fab32efb00bd91db3_720w.jpg[/img]Ares Y2000 / Ares Y1000图4 熠创鼎惠全自动核酸气溶胶污染清除仪Ares Y2000 / Ares Y1000熠创鼎惠(上海)生物科技有限公司推出的全新全自动核酸气溶胶污染清除仪(图4),清除仪采用独特配方的配套核酸清除剂(片剂溶解),经Ares系统顶尖的Dry Fog剪断作用,雾化的清除剂被超音速空气再次微粒化,与另一喷口同样被雾化的水滴在中央撞击,相互反复剪断的同时,发生3.3万-4万赫兹的超声波,使清除剂更加微粒化,均等化,形成真正的Dry Fog。超级雾化的清除剂通过无规则的布朗扩散运动,充分捕捉空气中[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]气溶胶,高效破坏DNA的嘌呤和嘧啶碱的共轭双键,从而实现清除的目的。Ares在氧化处理[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]气溶胶后,通过空气置换,由气溶胶吸附屏吸附DNA气溶胶,在设备内部LED紫外灯光照下,二氧化钛发生光触媒反应,产生数以亿计具有超强氧化能力的羟基自由基,进一步降解[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]气溶胶,从多维度协同清除气溶胶。Ares还能起到分解细菌和病毒,净化空气,保证实验室生物安全性的多重作用。另外可以一机多用,还具有雾化过氧化氢消毒消毒功能,更加全面保障实验室的安全。可广泛使用于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室样本处理区、核酸提取区、试剂配制区、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增或检测区,适用于医院检验科、疾控、海关、食药监、血站、科研院校等[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室。图5为RCR气溶胶清除仪使用效果验证示意。为配合气溶胶清除仪对物表核酸污染的高效清除,配套的核酸气溶胶清除剂采用接触催化协同作用,非酶性高效降解[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]产物或DNA/RNA,高效防止[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]假性的扩增。该型清除剂使用简单,不影响实验结果,无腐蚀性和[url=https://www.zhihu.com/search?q=%E8%87%B4%E7%99%8C%E6%80%A7&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A%22387158915%22%7D]致癌性[/url],对皮肤无刺激性,无毒性,是可安全使用的产品。对不锈钢和铜、铝等材料也基本无腐蚀。且其作用有效,可以全面解决困扰实验室的气溶胶污染问题。[img=,970,]https://pic3.zhimg.com/80/v2-e051cd9b0d92ab8423b60f253f39f3b2_720w.jpg[/img]结语[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室污染引起的检测结果假阳性风险极大,因此需要采取积极有效的预防措施。进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,最大程度地降低可能出现的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]污染或杜绝污染的出现。实验结束后,对实验室环境进行清洁,必要时采用核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸。熠创鼎惠气溶胶污染清除仪可有效预防和清除气溶胶核酸污染,保障实验室安全。熠创鼎惠厂家13728031910

  • 在核酸检测核心区维修仪器札记

    [size=21px] [/size][size=24px] 在核酸检测核心区维修仪器札记[/size][size=32px][/size][size=21px][/size][size=24px][font='宋体'][color=#222222] “青山一道同云雨,明月何曾是两乡”。全国[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]各地[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]打赢疫情防控狙击战气吞山河。[/color][/font][font='宋体'][color=#222222] 本地8月初发生疫情后,我被派到了核酸检测实验室[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]的[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]核心区,从事核酸检测及辅助工作。[/color][/font][font='宋体'][color=#222222] 很多从事检测分析的朋友可能对核酸检测[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]核心区[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]不是太了解。我简单介绍一下[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]:[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]实验室核心区分为3个区,1区是试剂配置间,2 区是加样区,3区是扩增区。试剂从1区转到2区加样品(日常从口腔采集的样品)[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]、[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]提取,[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]再[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]转到3区上荧光PCR扩增。[/color][/font][font='宋体'][color=#222222] 某日,1区[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]剂配置间的1号试剂添加设备出现故障,具体表现为机械臂与枪头不能准确地抽取20ul反应液,位置出现偏差[/color][/font][font='宋体'][color=#222222],听说这台设备故障很长时间了,时好时坏,我没有来就有了[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]故障了[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]。关机,自动重新启动电脑和设备,均不能排除故障。我仔细检查了一下机械臂,与气相/气质上常用的CTC的机械臂还不一样。它是用螺丝固定[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]死[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]的,不[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]能[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]人为[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]上下左右移动,在软件上也没有地方可以调整的。在它工作时,我发现向前偏离了0.2CM左右。我就在枪头盒子后面垫了一小块[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]裁剪好的[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]硬纸板[/color][/font][font='宋体'][color=#222222],枪头盒子向前移动了0.2cm左右,设备正常[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]工作。[/color][/font][font='宋体'][color=#222222] 一日,[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]2 区[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]生物安全柜的紫外灯不能打开,在对2区做了相应消杀后,穿好防护服进入。控制面板上,照明和通风都可以正常工作,唯独紫外灯打不开。初步估计原因有两个,一个是线路有故障,二是紫外灯坏了,都需要把最外层的罩子打开。穿上隔离服,站在凳子上,手拿螺丝刀,困难程度比平时在实验室卸螺丝难度大。一是戴有手套,二是面罩有阻挡限制。最外层的罩子打开后,检查线路,把每个插式接头断开再插上。紫外灯正常工作,故障是插头松动造成,插头松动在我们平时的实验室也会遇到,常见,也最容易排除的故障。[/color][/font][font='宋体'][color=#222222] 又一日,扩增区的老师叫住我,说荧光PCR仪卡住了,盖子打不开。与厂家工程师电话简单沟通后,快速确定了故障所在,找出工具包,把仪器后面的盖子打开,在卸最后一颗螺丝时,用手把盖子拖住,有一根线连着盖子,如果不拖住,容易把线扯断。用工具包里面的要把手动转动的方法,看看能否将盖子打开,要把可以转动,盖子开后仔细检查并没有什么异物。我又检查设备里面的传动轴,发现露有一个黑呼呼的角,把手慢慢升进去,扯不动,我轻用要把转动,黑呼呼的东西慢慢显现出来,是一块消毒用的湿巾,白色的面已经被机油染成黑色。湿巾被取出,故障自然也就消除了。[/color][/font][font='宋体'][color=#222222] 疫情就是命令,核心区的PCR扩增仪几乎24小时工作。房间是封闭的,散热靠中央空调。又一日,在核酸结果快出来时,几台扩增仪突然断电停止工作,把大家急得直跺脚。我前去查看,把插线板上的保护开关合上后,一两分钟后又断电。初步判断问题在插线板上,通过对讲机,让外面送4个插线板进来。[/color][/font][font='宋体'][color=#222222] 在等待的时间里,我发现这[/color][/font][font='宋体'][color=#222222]一路的插线板是通过串连连接的,连接的PCR扩增仪和电脑加起来有10台。每台PCR扩增仪加电脑功率大概900瓦。10台就是9000瓦,长时间工作,如果有电压波动,串连式插线板肯定受不了,可能出现过载而断电。4个插线板到了以后,我把线路重新布置,4个插线板并联,每个插线板上只插2-3台设备,故障排除。在平时,我经常也去一些实验室,有时会看到仪器旁边一个插线板上插满插头,这样是有风险的。会告诉操作人员使用多个插线板,分开插插头,减少风险。[/color][/font][font='宋体'][color=#222222] 写在最后,由于核酸检测核心区的特殊性,仪器设备维修时不方便拍照,不能放在文章中,缺少直观性,也是有点遗憾吧![/color][/font][/size]

  • 【实战宝典】核酸洗涤过程中应注意什么?

    问题描述:核酸洗涤过程中应注意什么?解答:[font=宋体]洗涤对于整个提取过程来说,也是非常重要的。洗涤,首先一定要将沉淀悬浮起来;第二就是要控制一定的时间,尤其是当核酸沉淀比较大时[/font][font='Times New Roman','serif'] ([/font][font=宋体]使核酸沉淀最终蓬松[/font][font='Times New Roman','serif'])[/font][font=宋体];第三是少量多次;第四则是去上清要彻底。大部分资料中的操作基本上都是[/font][font='Times New Roman','serif']“[/font][font=宋体]倒掉上清后倒置在吸水纸上片刻[/font][font='Times New Roman','serif']”[/font][font=宋体],这一说法,对于质量好的离心管,如果离心管是经过硅化的,因为液体几乎不挂壁,所以上清可以去除得非常彻底;好的离心管,即使没有经过硅化,残留量也非常少,也没有什么问题;差的离心管,液体挂壁非常可观,其残留量多到会影响后续的实验。避免液体残余的一个好方法,就是倒掉液体后再短暂离心,将残液用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]吸出。还有需大家牢记的是,残液中都含有上一步操作中的杂质,其残留量与混匀程度、核酸沉淀的大小都有关。挥发时去掉的是乙醇,杂质是不会被挥发去除的。这步,切忌不要用手甩,这样容易将核酸甩掉。另外,核酸沉淀的大小及裂解液的裂解能力也决定了洗涤的强度。沉淀越大,裂解液的裂解能力越强,洗涤越要彻底:放置时间相对要长一点,洗涤次数也要考虑增加。[/font]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 【转帖】蛋白质提取与纯化技术

    [size=3]选择材料及预处理   以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;二是将混合物置于单一物相中,通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的,如电泳,超速离心,超滤等。在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大分子的完整性,防止酸、硷、高温,剧烈机械作用而导致所提物质生物活性的丧失。蛋白质的制备一般分为以下四个阶段:选择材料和预处理,细胞的破碎及细胞器的分离,提取和纯化,浓细、干燥和保存。   微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料,所选用的材料主要依据实验目的来确定。对于微生物,应注意它的生长期,在微生物的对数生长期,酶和核酸的含量较高,可以获得高产量,以微生物为材料时有两种情况:(1)得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等;(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等。植物材料必须经过去壳,脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同,其中所含生物大分子的量变化很大,另外与季节性关系密切。对动物组织,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理。另外,对预处理好的材料,若不立即进行实验,应冷冻保存,对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备。 蛋白质的分离纯化 一,蛋白质(包括酶)的提取   大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中,因些,可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。 (一)水溶液提取法   稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间。但另一方面,温度升高会使蛋白质变性失活,因此,基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温(5度以下)操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制剂(如二异丙基氟磷酸,碘乙酸等)。下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。[/size]

  • 核酸采样方舱,核酸检测采样亭,双人核酸采样工作站,为居民和医护人员提供更为安全的采样环境

    核酸采样方舱,核酸检测采样亭,双人核酸采样工作站,为居民和医护人员提供更为安全的采样环境

    一、核酸采样工作站产品介绍为了更好有效地保护医护人员的健康安全、在高强度的工作环境下提供一个舒适的采样环境,我司结合移动方舱设计生产经验,研发出了可移动式核酸采样亭,空间设计紧凑合理,产品采用“无接触式”采样窗口,包含杀菌系统、空调系统、新风正压系统、供电系统、照明系统、对讲系统等,为工厂集成化预拼装,投放即可使用,高效便捷,在坚持标准化经营发展的同时,更要注重个性化服务对接,研发和生产出特定城市需要的产品,并相应调整服务对接流程,外观时尚美观、满足城市发展风貌。[align=center][img=核酸采样舱,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281403518632_3015_5635765_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/align]二、核酸检测采样亭技术参数(可以根据客户需求定制生产)单人机壳尺寸(外部):1800*2000*H2600双人机壳尺寸(外部):1900*2800*H2600机壳材质:热熔镀锌+户外专用粉末烤漆观察窗材质:10mm钢化玻璃+黑色烤漆边框杀菌系统:UV紫外灯杀菌 杀菌时间:30分钟至60分钟为宜送风系统:优质离心鼓风机滤芯:初级过滤:防尘海绵垫 高级过滤:H14过滤器监测:内部气压显示(正压0-30PA)、内部温度显示隔热系统:内部加装隔热棉及隔热板对讲系统:双向窗口对讲机系统照明系统:LED照明灯 室内、室外配备灯,方便晚上工作。空调系统:分体化空调(1匹)[align=center][img=空调核酸采样工作站,600,800]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281404387477_9002_5635765_3.jpg!w600x800.jpg[/img][/align]三、核酸采样方舱性能特点1) 紫外线照明灯杀菌,可定时,实现人走自动消毒。2) 内置品牌一匹冷暖挂式空调,给医护人员提供良好的工作环境。3) 空间设计紧凑合理,活动空间大,万向脚轮自带刹车,移动停靠方便。4) 配置高效过滤器,可提供万级洁净度正压环境,有效隔离医护人员,保障医护人员的安5) 对于0.3mm颗粒过滤效率达到99.99%,配备离心风机6) 语音对讲功能,外置音响话筒。7) 专用配电箱,操作简单,使用安全。我司接受核算检测站代工生产服务,质量保障、高标准、高效率、优质的服务。五季智能核酸采样亭厂家——欢迎咨询17201681858[align=center][img=便民核酸采样工作站,690,566]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281405130760_7694_5635765_3.jpg!w690x566.jpg[/img][/align]

  • 核酸量法测生物量

    不是用试剂盒,需要紫外分光光度计,下面是具体测定方法核酸量测定方法如下: 1、取2mL发酵液加8mL蒸馏水,混匀,3000r/min离心15min; 2、弃上清,在沉淀中加冷的10%三氯乙酸溶液2mL,振荡,冰水浴中放置2~3min,3000r/min离心15min; 3、弃上清,沉淀中加冷的5%三氯乙酸溶液2mL,混匀,沸水浴中加热30min,冷却后离心, 3000r/min离心15min; 4、取上清0.1mL,加4.9mL蒸馏水,混匀后,在紫外分光光度计上测280nm处吸收值。 菌体核酸量(g/L)=A260×1.72

  • 水浴锅在核酸检测实验中的应用

    2022年新冠疫情来势汹汹,做核酸成为许多人的日常,核酸检测实验也成为许多生物实验人的日常。核酸检测实验过程复杂,病毒灭活是非常重要的一步,其中,水浴锅作为常见的恒温仪器,在病毒灭活中发挥着重要作用。[img=,630,]https://pic1.zhimg.com/80/v2-e8a3063325978b82ec93ba0bb143a178_720w.jpg[/img][b][i]一、哪个实验步骤能用到水浴锅?[/i][/b]核酸检测过程复杂,包括信息录入、核酸提取、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增[/color][/url]、结果分析等环节。核酸样本收集之后,首先要做的就是将样本中的病毒进行灭活,灭活之后才能开启信息录入、核酸提取等一系列的环节。经研究人员测试发现,新冠病毒对紫外线和热敏感,只需高温就可以把新型冠状病毒灭活。目前,国家卫健委相关指南就要求,在提取样本核酸前需将样本置于56℃以上以灭活病毒。因此,将病毒样品放入56℃的恒温水槽或是水浴锅中,高温消毒30分钟以上,成为新冠病毒灭活的常用方法。[img=,623,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-5cb88675f34cdc6a354f242c10bb2679_720w.jpg[/img][b][i]二、力辰水浴锅的优势有哪些?[/i][/b]疫情反复突增,核酸检测任务量大且紧急,缩短实验时间,提升检测效率成为各生物实验室的亟需解决的痛点之一。力辰数显恒温水浴锅,控温精准、升温迅速、性能稳定,可以有效缩短预热时间,精准控制加热温度,适用于实验室[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]核酸检测的病毒灭菌环节。[img=,625,]https://pic1.zhimg.com/80/v2-4746ea8d3c01f1bf78f7097bd45b94a0_720w.jpg[/img][b]1、微电脑控温仪表、PT100温度传感器,控温准确[/b]力辰数显恒温水浴锅采用抗振动、稳定性好、准确度高、耐高压的PT100温度传感器,同时使用数显控温仪表,按键控制,能做到准确控温。从控温精度来看,力辰水浴锅的温度范围在室温+5℃-100℃之间,控温精度≤±1℃,部分机型可做到≤±0.5℃的控温精度,充分满足用户精准控温需求。[img=,588,]https://pic4.zhimg.com/80/v2-fa2d2ed62ded9533223366a99f5c7ccb_720w.jpg[/img][b]2、大功率变压器,升温快、受热均匀[/b]机身内部设有大功率变压配套电路板,可控硅控制,配套不锈钢加热管,升温速度快。容积3-38L的水浴锅,由室温升至沸点(100℃)均小于70分钟。同时部分型号配备磁力搅拌功能,边加热边搅拌,使受热更均匀,能有效缩短实验时间,提升实验效率。[img=,602,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-e2358e4366ba4e4495eb331b077ec195_720w.jpg[/img][b]3、可拆卸式锅盖,适配多种规格容器、保温性能高[/b]锅盖采用可拆卸式,能适配多种规格容器,保温性能好,有效保证温度精准性,确保样本处在稳定的恒温环境中;同时采用耐高温塑料,使用寿命长,节约实验室成本。[img=,619,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-4e01da7de94c634a57134b428b0e845d_720w.jpg[/img][b]4、冷轧钢外壳、304不锈钢内胆,耐腐蚀性强、易清洗[/b]外壳采用冷轧钢,防生锈、防静电;内胆使用优质304不锈钢,一次性冲压成型,耐腐蚀,易清理消毒,杜绝病毒的残留。[img=,616,]https://pic3.zhimg.com/80/v2-d1b917968d59035122412f8b341f8162_720w.jpg[/img]在生物和制药行业,水浴锅是必备的实验仪器。核酸检测、疫苗研制等需要灭活病毒的实验,其他需要培养微生物的实验等等,都需要水浴锅提供恒温环境;除此之外,水浴锅可以结合旋转蒸发器、真空冷冻干燥箱等仪器,进行多功能化学反应作业及药物储存,用途十分广泛。【参考文献】张沁欣,赵庆顺.(2020).病毒核酸提取前的高温灭活过程显著降低可检出病毒核酸模板量.[ChinaXiv:202002.00034]

  • 核酸采样工作站,核酸采样舱,核酸采样小屋,提高了核酸采样工作的安全性与舒适性

    核酸采样工作站,核酸采样舱,核酸采样小屋,提高了核酸采样工作的安全性与舒适性

    五季智能核酸采样亭的消毒简单方便。室内采用紫外线杀毒,可以在工作前对采样亭进行自助消毒,并确保无菌和卫生。采样人员在核酸采样亭内与外部人员不产生直接接触,医废和垃圾会进行消杀并进行统一回收处理,不会对周边环境造成影响。采样人员通过特制的手套来采集样本,并透过玻璃进行观察。样品采集后,采样人员将样本直接放样本存储区内,大大减少了面对面接触,避免了触摸和呼吸造成的感染。[align=center][img=单人核酸采样工作站,690,460]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281424200807_3234_5635765_3.jpg!w690x460.jpg[/img][/align]具体点位选择以室外空旷、手机信号强、通风良好、面积较大为参考标准,可设置在社区卫生服务站、学校操场、体育场、楼宇园区广场、社区空地等。核酸采样场所应划分为等候区、扫码区和采样区,有效分散待检人员密度。每采样点设1-2个工位,每天1-2班,可根据采样人数需求及时增减。与传统核酸采样不同,医护人员在核酸采样亭内与居民无接触即可完成信息登记和采样操作。[align=center][img=移动核酸采样工作站,690,566]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281424511064_5867_5635765_3.jpg!w690x566.jpg[/img][/align]如遇正在开展采样的核酸采样亭,建议市民与排队做核酸的人员保持两米以上距离,以避免人员聚集所带来的危险。目前市面上出售的岗亭以单人操作和双人操作两种规格为主,主要配备的设施包括空调、对讲机、紫外消毒设备、离心风机、过滤器等,每台核酸检测亭都配有空调一台。尽管核酸采样亭已在多地铺设,但目前相关的配置规范和标准仍较少,仅有个别地市如无锡市出台了相关管理规范,对采样亭的选址、设施配套、人员配备等作出明确。核酸检测采样亭配置规范需要根据行业标准去制定,比如负压要求、空调设备要求、采样隔离要求等。杭州、广州、无锡等地比上海更早开始布局建设,相关标准也在参考前人经验。核酸采样亭的快速布局落地,势必给全民的工作生活带来极大的方便,助力全国的精准防疫。五季智能核酸采样亭厂家——欢迎咨询17201681858[align=center][img=便民核酸采样小屋,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281425565485_2290_5635765_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/align]

  • Waters 2695-2998 PDA如何提取紫外光谱图

    实验室做药品检测,配置的是:Waters 2695-2998二极管阵列检测器。平时对样品进行定量测定,只需选择“2D通道”;这次对两个样品进行定性检测,在色谱图中需要提取某个特定波长的紫外光谱图进行比较,在“2998 PDA 检测器设置”上选了“启动 3D数据”,波长范围设好了,2D通道设好了特定波长,其它都是默认值。这样设定可以吗?另外就是 “浏览项目”该怎么设定,真的不熟,麻烦大家给我指点一下,感激不尽!!!

  • 核酸适配体在固相萃取技术中的研究进展

    [color=#333333] 核酸适配体是一种经由体外指数级富集系统进化技术筛选得到的随机寡核苷酸片段,该寡核苷酸片段能特异性结合靶物质。核酸适配体与固相萃取技术相结合,可以高选择性地应用于复杂样品中痕量组分的萃取、分离、富集和纯化,由此引起了广泛关注。该文综述了基于核酸适配体的固相萃取研究进展,着重评述了核酸适配体固相萃取柱的制备、固相萃取过程、面临的问题和应用前景。 [/color]

  • 甲苯提取液,使用乙醇作为溶剂,紫外光谱峰皆为甲苯,掩盖了有效成分。

    甲苯提取液,使用乙醇作为溶剂,紫外光谱峰皆为甲苯,掩盖了有效成分。

    [table=100%][tr][td]我是使用甲苯作为有机溶剂提取某些天然代谢产物的,在做紫外可见光谱分析时,使用乙醇作为参比溶剂及稀释甲苯溶液。这张图是我稀释了2000倍之后的3个不同代谢产物的甲苯提取物光谱图,但是感觉所有的峰都是甲苯,找不到我所提取的产物的峰。很急!要疯了![/td][/tr][/table][img=,690,516]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909301440080773_5609_1827556_3.jpg!w690x516.jpg[/img]

  • 【原创大赛】利用硅胶膜法提取纯化质粒DNA

    【原创大赛】利用硅胶膜法提取纯化质粒DNA

    利用硅胶膜法提取纯化质粒DNA摘要:系统的阐述了质粒核酸提取过程中针对裂解和核酸纯化两大关键步骤的研究,重点介绍了利用硅胶膜法提取纯化核酸,以及在实验过程中的一些经验。关键词:硅胶膜法;纯化;质粒DNA一、前言随着分子生物学技术的发展,核酸的分子生物学技术成为了药物研发、遗传病和感染性疾病的诊断、基因研究及物种鉴定等的常用研究手段之一。然而,核酸提取质量是进行下游一系列研究的关键,因此提取的方法会直接影响后续实验。细菌质粒是一类双链闭合环状的DNA,大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份。质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子,重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。硅胶膜法是一种应用最为广泛的提取纯化质粒DNA的方法,因硅基质材料可特异吸附核酸DNA,使用方便、快捷,不需要使用有毒溶剂如酚、氯仿等,使得提取质粒核酸像过滤一样简单。二、实验部分2.1 原理硅基质材料吸附核酸的原理主要利用DNA在高盐低pH值环境下与硅基质材料相结合,在低盐高pH值环境下与硅基质材料脱离的特征。其机理是带负电荷的DNA和带正电的二氧化硅粒子之间有很强的亲和力。在高浓度盐离子的作用下,盐离子打破水中的氢和二氧化硅上带负电荷的氧离子间的氢键,DNA与硅基质紧密结合,洗涤除去其他杂质;再用低离子强度的TE缓冲液或蒸馏水洗脱结合的DNA分子,机理是当盐被清除后,再水化的硅基质破坏了基质和DNA之间的吸引力,因而DNA从硅基质上被洗脱下来。2.2 主要试剂溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8.0)。溶液Ⅱ:0.2NNaOH,1% SDS。溶液Ⅲ:醋酸钾(KAc)缓冲液,pH 4.8。漂洗液:60mM 乙酸钾、10mM Tris-HCl (pH 7.5) 、60% 乙醇TE:10mMTris-HCl(pH 8.0),1mM EDTA(pH 8.0)。2.3 主要步骤该步骤采用CommaPrePTM的质粒小提纯化柱。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171513_556042_3310_3.jpgCommaPrep™核酸小提柱可用在核酸提取过程中过柱结合、洗涤、洗脱步骤中http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171516_556043_3310_3.jpg1. 取1.5ml过夜培养的菌液,加入离心管中,使用常规台式离心机,12,000 rpm 离心1 min, 尽量吸除上清。 (注意:应根据所培养菌体的浓度与质粒的拷贝数,确定收集的菌液量。菌量过大可能导致溶菌不充分,纯化时会影响质粒纯度菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。2. 将细菌沉淀重悬于100uL溶液Ⅰ中,移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀,使菌体分 散混匀。 (注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。并且溶液Ⅰ中 要加入适量的RNA酶)3. 向离心管中加入200uL溶液Ⅱ,温和地上下翻转数次,并将离心管放置于冰上2-3min,使细胞膜裂解。(注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮,如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。)4. 加入150uL溶液Ⅲ,立即将管温和颠倒数次混匀,见白色絮状沉淀。12000rpm, 离心2分钟。 (注意:加入溶液Ⅲ后,要立即将管温和颠倒,避免产生局部沉淀。如果上清液中存在沉淀,可再一次离心。溶液Ⅲ为中和溶液,此时质粒DNA复性,染色体和蛋白质不可逆变性,形成不可溶复合物。)5. 吸取上清至吸附柱(内管)中(吸附柱在离心管中),尽量不要吸出沉淀,12000rpm,离心30秒。弃去废液,将吸附柱重新放入一个新的离心管中。6. 加入750uL的漂洗液(漂洗液要在实验前加入无水乙醇)12000rpm离心,1min。取出 DNA结合柱,弃废液,重新插入DNA结合柱到离心管中。7. 用500uL漂洗液重复冲洗过程。12000rpm离心,1min。(注意:重复一次可以增加质粒的回收效率。)8. 转移DNA结合柱到1个新的1.5mL离心管中,加入60uL的无核酸酶的水到DNA结合柱中,洗脱质粒DNA,室温条件下,12000rpm离心,1min。 (注意:不要转入DNA结合柱中的漂洗液,如果混有,就需要12000rpm离心,1min。洗脱缓冲液体积不少于50uL,体积小会影响回收效率。 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大的影响,若用水洗脱应保证pH值在7.0-8.5范围内, pH小于7会降低洗脱效率。如果长期保存DNA,洗脱液建议使用TE。)9. 加入100uL的无核酸酶水到结合柱中,洗脱质粒DNA,离心12000rpm,1min。(注意:重复一次,增加洗脱效率。)10.洗脱DNA后,从1.5mL离心管中取出DNA结合柱并废弃。11.取2uLDNA进行电泳,检测DNA质量。12.将纯化的DNA溶液于-20℃中。三、实验结果图为质粒DNA(10kb)的凝胶电泳图,说明提取效果较好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171525_556044_3310_3.jpg

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