荧光定量

荧光定量原理荧光定量原理荧光定量原理

请问大家固体的荧光样品，能不能用测试固体样品的样品架来进行定量测量呢？或是大家知道哪款荧光分光光度计可以进行固体荧光样品的定量测定呢？希望大家积极回答！谢谢！

讨论范围荧光物质,包括自发荧光和激发荧光.这些荧光发出来,有时是一个峰,有时会是几个不同波长的峰.个人感觉,采用峰值定量,即峰高定量. 和峰面积定量 都可以.请各位发表高见.

荧光定量引物和探针设计荧光定量引物和探针设计荧光定量引物和探针设计荧光定量引物和探针设计

在基因扩增仪的几种类型中，荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。 　　实验者要购买一款合适的荧光定量PCR，需要考虑各方面的因素，首先要分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种各样的宣传资料。 　　面对各种不同性能的产品，我们该如何选择呢? 　　首先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区： 　　误区一：荧光定量PCR仪无需梯度功能 　　对于使用染料法的定量PCR反应，虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值)，但运用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差异会很大。 　　引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。 　　梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。 　　不单是退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要，因为Taq和校正酶的最佳反应温度可能有显著差异，优化延伸温度就显得很重要。 　　使用有梯度功能的荧光定量PCR可以一次完成以往多次实验才能完成的优化过程，简化了摸索 PCR反应条件的繁琐实验，既节省实验时间提高效率，又节省实验成本。 　　误区二：仪器通道越多越好 　　随着PCR技术的成熟运用，多重扩增越来越热闹，荧光定量PCR仪也不能幸免。 　　从最初ABI公司推出的单通道荧光定量PCR仪发展到如今各个厂家都推出4通道、5通道甚至6通道荧光定量PCR仪，眼花缭乱的选择让人无所适从，就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。 　　在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时，为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye ，这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。 　　所以，真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个，而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。 　　有的荧光定量PCR的检测通道是只为自已厂家的专用的荧光染料或试剂开放的，有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。 　　在购买前确认荧光定量PCR仪器的有效检测通道尤为重要，不能单单只听宣传。 　　考虑多重荧光定量PCR的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发，多重PCR并非人人适用、人人可用，因为它使实验复杂化了。 　　当我们看清误区，在选择一款最适合自己需求的荧光定量PCR仪时，我们又该关注些什么呢?

荧光定量PCR仪选择要点及误区 荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天，也许对你来说，最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种极富诱惑力的宣传资料。面对各种不同性能的产品，您又该如何选择呢？ 首先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区：

荧光定量PCR简介荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间，而其应用一直都没广泛展开，究其原因，无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期，尤其是08年以来，仪器和试剂是遍地开花，这也使科研人员均跃跃欲试，都想借此技术使自己的研究能突飞猛进，发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据有关统计，在 Medline 数据库中，用“Taqman” 或 ”real time PCR” 作为关键词检索，1996 年是19 篇，1999 年157 篇，到2003 年就高达2984 篇，2009年会是多少呢？我们不得而知。但其迅猛的发展势头却是不可更改的，本公司真诚希望能和众多研究人员共同努力，抓住这一大好时机，为科研事业的发展贡献自身的力量。基于这一目标，本公司长期以来对荧光定量PCR，无论是技术还是多年来的产品，均进行了深入地研究，并及时推出更加优异的荧光定量 PCR技术服务。荧光定量PCR原理荧光定量PCR最早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值（如下图所示）。荧光域值（threshold）是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般荧光域值的缺省设置是PCR反应前3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍，即：threshold。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364674.jpgCt 值：是指每个反应管内的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数。Ct值与起始模板的关系：研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值如下图所示。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364675.jpg荧光定量检测荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合，其荧光增加1000倍。所以，一个反应发出的全部荧光信号与出线的双链DNA量呈比列，且会随扩增产物的增加而增加。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364672.gifSYBR Green I荧光染料与DNA双链的结合双链DNA结合染料的优点：实验设计简单，仅需要2个引物，不需要设计探针，无需设计多个探针即可以快速检验多个基因，且能够进行熔点曲线分析，检验扩增反应的特异性，低的初始成本，通用性好，因此国内外在科研中使用比较普遍。荧光探针法（Taqman 技术）：PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR 仪检测不到荧光信号； PCR扩增时（在延伸阶段），Taq 酶的 5' － 3' 切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步，这也是定量的基础所在。其过程如下图所示http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364673.gif荧光定量PCR的应用分子生物学研究1、核酸定量分析。 对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的检测 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 转基因动植物基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等。2 、基因表达差异分析。 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 ( 如药物处理、物理处理、化学处理等 ) ，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证3 、SNP 检测。检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义，因分子信标结构的巧妙性，一旦SNP 的序列信息是已知的，采用这种技术进行高通量的 SNP 检测将会变得简单而准确。4、 甲基化检测。甲基化同人类的许多疾病有关，特别是癌症， Laird 报道了一种称作 Methylight的技术，在扩增之前先处理 DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影响，用特异性的引物和 Taqman探针来区分甲基化和非甲基化的 DNA ，这种方法不仅方便而且灵敏度更高。医学研究1、 产前诊断：人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗，到目前为止，还只能只能通过产前监测，减少病婴出生，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少X连锁遗传病患儿的出生，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法，易为孕妇所接受。2、 病原体检测：采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。3、 药物疗效考核：对乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析显示：病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达，干扰素治疗作用不敏感，而HCV低滴度，干扰素作用敏感；在拉米夫定治疗过程中，HBV- DNA的血清含量曾有下降，随后若再度上升或超出以前水平，则提示病毒发生变异。4、 肿瘤基因检测：尽管肿瘤发病的机理尚未清楚，但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。癌基因的表达增加和突变，在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量 PCR不但能有效地检测到基因的突变，而且可以准确检测癌基因的表达量。目前用此方法进行过端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病WT1基因、肿瘤 ER基因、前列腺癌PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。

荧光定量PCR实验指南[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=29361]荧光定量PCR实验指南[/url]

有人知道“罗氏荧光定量PCR仪”和“伯乐荧光定量PCR仪”有什么不同呢？

荧光定量PCR有着高灵敏性、高精确度、方便省时等特点

荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简要叙述。一、特点FQ-PCR不仅具有普通PCR的高灵敏性，而且由于荧光探针的应用，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性，克服了常规PCR的许多缺点。如一般PCR产物都需通过琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色紫外光观察结果或通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测，不仅需要多种仪器，而且费时费力，所使用的染色剂溴化乙锭对人体又有害，这些繁杂的实验过程又给污染和假阳性提供了机会。而FQ-PCR只须在加样时打开一次盖子，其后的过程完全是闭管操作，不需要PCR后处理，避免了常规PCR操作中的诸多弊端。实验一般使用PE公司研制的ABI7100型PCR扩增仪。该仪器具有以下特点：①应用广泛：可用于DNA和RNA的PCR产物定量、基因表达研究、病原体检测及PCR条件的优化等。②独特的定量原理：采用荧光标记探针，经激光激发后荧光量随PCR循环而累积，从而达到定量目的。③工作效率高：内置9600型PCR扩增仪，电脑控制1～2小时全自动同步完成96个样品的扩增及定量。④无须凝胶电泳：无须对样品进行稀释和电泳，只须通过特殊探头在反应管内直接检测。⑤无管道内污染：采用独特全封闭反应管及光电传导系统，无须顾及污染。⑥结果重现性好：定量动态范围高达五个数量级。所以自从此项技术研制成功以来，受到许多科研工作者的重视并在多个领域得到应用。二、原理和方法FQ-PCR的工作原理是利用Taq酶的5’→3’外切酶活性，在PCR反应系统中加入一个荧光标记探针。该探针可与引物包含序列内的DNA模板发生特异性杂交，探针的5’端标以荧光发射基因FAM（6-羧基荧光素，荧光发射峰值在518nm处），靠近3’端标以荧光淬灭基团TAMRA（6-羧基四甲基若丹明，荧光发射峰值在582nm处），探针的3’开端被磷酸化以防止探针在PCR扩增过程中被延伸。当探针保持完整时，淬灭基团抑制发射基团的荧光发射。发射基团一旦与淬灭基团发生分离，抑制作用被解除，518nm处的光密度增加而被荧光探测系统检测到。复性期探针与模板DNA发生杂交，延伸期Taq酶随引物延伸沿DNA模板移动，当移动到探针切断，淬灭作用被解除，荧光信号释放出来（见图）。模板每复制一次，就有一个探针被切断，伴随一个荧光信号的释放。由于被释放的荧光基团数目和PCR产物数量是一对一的关系，因此用该技术可对模板进行准确定量。实验仪器一般使用PE公司研制的ABI7100型 PCR扩增仪，也可用其它PCR仪。如果用ABI7700型反应型反应系统进行实验，反应结束后，通过电脑分析，可直接给出定量结果。如果用其他PCR仪，则需要同时使用荧光探测仪测量反应管中的荧光信号，计算出RQ+、RQ-、△RQ。RQ+代表样品管荧光发射基团发光强度与淬灭基团发光强度的比率，RQ-代表空白管中二者的比率，△RQ（△RQ=RQ+-RQ-）代表PCR过程中荧光信号变化量，经过数据处理，即可得出定量结果。由于荧光探针的引入，显著提高了实验的特异性。探针设计一般应符合以下条件：①探针长度应在20～40个碱基左右，以保证结合的特异性。②GC碱基含量在40%～60%，避免单核苷酸序列的重复。③避免与引物发生杂交或重叠。④探针与模板结合的稳定程度要大于引物与模板结合的稳定程度，因此探针的Tm值要比引物的Tm值至少高出5℃。另外，探针的浓度、探针与模板序列的同源性，探针与引物的距离都对实验结果有影响。 http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/07/21/1216476450.gif图.TaqMan PCR反应模式 （A）聚合反应；（B）链置换；（C）裂解； （D）聚合完成（R：FAM；Q：TAMRA，FP：上游引物；RP：下游引物）

[b]上个世纪90年代原美国Perkin Elmer( PE)公司开发出了Taqman荧光探针定量技术，将定量PCR带入了更广阔的应用空间。Taqman探针法的出现是定量PCR技术的重要里程碑，之后在此基础上发展出了杂交探针法，以及荧光引物法，是对探针法的不断改进和简化。如果希望全面掌握定量PCR技术的研究人员就不能错过这些定量检测技术。[/b]

X射线荧光光谱法进行定量分析的根据是元素的荧光X射线强度Ii与试样中该元素的含量Ci成正比:Ii=Is×Ci式中Is为Ci=100%时，该元素的荧光X射线的强度。根据上式，可以采用标准曲线法、增量法、内标法等进行定量分析。但是这些方法都要使标准样品的组成与试样的组成尽可能相同或相似，否则试样的基体效应是指样品的基本化学组成和物理化学状态的变化对X射线荧光强度所造成的影响。化学组成的变化，会影响样品对一次X射线和X射线荧光的吸收，也会改变荧光增强效应。例如，在测定不锈钢中Fe和Ni等元素时，由于一次X射线的激发会产生Nika荧光X射线，Nika在样品中可能被Fe吸收，使Fe激发产生Feka。测定Ni时，因为Fe的吸收效应使结果偏低，测定Fe时，由于荧光增强效应使结果偏高。

荧光定量PCR知识[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=57868]荧光定量PCR知识[/url]

本人现在在做X荧光定量分析方面的工作,请教X荧光定量分析中的基本参数法如何实现

实时荧光定量PCR哪家好

请问有谁做过ＤＮＡ与蛋白的荧光定量分析啊？

请教大家，如何对一生物组织体的荧光光谱进行定量分析呢，通常，我们说的定量分析是对荧光组分的定量分析，那是如何实现的，请教，我的e-mail：lls009663@163.com

二手荧光定量PCR仪转让ABI7000,八成新，可预约看机

实时荧光定量PCR哪家好

实验思路，带有荧光模块的酶标仪可以高通量定量测定显荧光的物质，所以我们合成的新材料可以接上荧光定量标签，可以用酶标仪测定生成物荧光的值，从而测定产物的合成效率。

从1996年ABI公司推出了全球第一款荧光定量PCR以来，经过10几年的发展，由于荧光定量PCR仪的在科研、检测和诊断领域的广泛应用，市场规模也不断扩大。已有多家国内外生产厂商涉足研发生产,就连Eppendorf公司也于2006年底推出了自己的荧光定量PCR仪。这些产品良莠不齐，令研究人员选择是不免挑花了眼。于是很多资金充足的实验室为了保险起见都选择购买了几家最有名气公司的产品，如ABI的7500和7900，罗氏Lightcycler2.0，Lightcycler480，Eppendorf mastercycler等产品。但是这些名牌产品因为品牌溢价所以价格都高高在上，另很多经费不是很充足的实验室望而却步。这些产品的性能有大量文章做过比较，在这里就不做过多描述。但是品牌不是唯一，科研工作者更不应该迷信品牌，依靠自己真实的实验体会做的选择才是最准确的。下面综合大量的科研人员的实验体会着重向广大科研工作者介绍一些现在市场上高性价比的几款荧光定量PCR仪。 进口篇1.Bio-rad伯乐在国际上属于中端品牌，在中国最初由于电泳系统被广大科研用户所熟知。伯乐的PCR产品线也比较丰富，收购MJ Rearch之后进一步丰富的PCR的产品线。目前伯乐的IQ5荧光定量PCR仪是一款性价比较高的产品，采用96孔Peltier半导体加热，5通道，12bit CCD检测，而且还带有梯度功能。售价也是远远低于ABI7500，所以这两年来用户较多。但有用户反应说这款仪器的检测灵敏度不太好，另外维修率比较高。实际情况大家还可以通过多咨询老用户进一步了解2.BIONEER国内的用户可能听说过这个品牌的不多，只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家，引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子生物学领域，目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较，很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM 96，产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热，5通道，16bit CCD检测，也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样，而且检测的CCD像素还要高于IQ5, 理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些，号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少，了解起来不太容易。有兴趣的客户可以联系他们的子公司柏业贸易（上海）有限公司进行试用，新公司都注重是售后服务，大家毕竟要亲身体会到才是最可靠的。3.StratageneStratagene现在为安捷伦公司的子公司，也是专著于分子生物学研究产品开发的公司。在国内它的试剂产品卖的不多，处于推广阶段。Stratagene的荧光定量PCR产品Mx3005P同以上两种产品技术参数也差不多96孔Peltier半导体加热，5通道，PMT检测器，但是没有梯度功能，用户不能在这台仪器上优化反应条件。另外有客户反应该仪器做工较粗糙，噪音比较大，而且边缘的孔做实验的效果不太好，但是只要使用热模块中间的孔做实验效果还是不错的。这样的问题问题在ABI7500仪器上也同样存在，但是Stratagene的价格要实惠很多。国产篇　　现在国内的生命科学研究市场基本上是被国外的跨国公司所垄断，国内的厂商只能靠底价来占领一小部分市场，平心而论国内的厂商在技术和工艺上面确实和国外厂商有一定的差距。但这也是由于我国的基础研究水平和制造工艺起步都比较晚的客观原因造成的，再加上国内厂商的经营和财力等问题，所能提供的员工待遇与跨国公司也有一定的差距，所能吸引的人才也受到限制。有国内生产仪器公司的老总就直言不讳的提出，他们暂时还没有能力请国际一流的设计师和改进生产工艺的能力，只能是靠低价来占领一部分市场待原始积累达到一定程度之后再改进产品争取进入更高一个级别的市场中。当然我们也看到国内的厂商也是在不断的进步之中，随着越来越多的一流人才加入到生物技术领域中，相信生物技术市场也会像当年的家电市场一样慢慢的将国外厂商的垄断局面打破并夺回大部分的市场。下面就介绍几款国内厂商生产的荧光定量PCR仪1.杭州博日（Bioer）提到国产PCR仪就不得不提到杭州博日公司，和Takara一样属于日本在华投资较早的生物技术企业。博日公司一度在低端PCR仪领域占领了很大的市场，虽然近年来随着其他国产品牌的冲击，市场占有率已经严重下降，但是总体上还是处于领先的水平。该公司的荧光定量PCR仪产品FQD-48A是4通道，48孔Peltier半导体加热。相对于前面介绍的几款进口产品相比较样品通量和检测光路均较低，但也可以满足实验样本不是很大的用户使用。而且博日产品的价格比前面介绍的几款进口产品的价格也要更低一些。2.西安天隆西安天隆的荧光定量PCR产品TL988是一款真正的依靠国内自主研发而成多通道荧光定量PCR仪，TL988设计比较灵活，可选36孔与96孔加热模块，但通道和多通道几种组合模式。最多可达5通道，但不足之处是还是使用单激发虑光片，激发光特异性不好，导致检测灵敏度较低。据了解在国内的医疗系统还是一些用户，科研系统的用户比较少。3.上海宏石上海宏石生产的SLAN®实时荧光定量PCR是一款在国内市场反应不错的仪器，在国产荧光定量PCR仪的性能比较中是属于检测灵敏度和重复性最受认可的仪器。不足之处是光路通道和样品孔数量比较小。最大只有三通道和48个样品孔的机型，不能满足较大样品量的客户需求。目前在医院临床检验科中是国产荧光定量PCR仪销量最高的仪器，在科研系统用户比较少。小节：目前大部分的市场份额还是被国外厂商所占领，尤其是在科研, CDC和血站等系统，国外厂商更是处于垄断地位。但是目前国内的厂商也在医院临床检验系统占有一席之地。科研人员和医疗工作者还是要根据自己的实际需求和亲身体会做出选择，“选对的，不选贵的”这句名言用于购买荧光定量PCR仪也同样适用。

[font=等线]第一次做荧光定量pcr，结果很不理想。也分析不出原因，希望有大神指点一二。[/font]

我的cdna样品浓度都是用900ng 的RNA反转录做成的20ul的溶液，那么请问我在加入cdna样品时应该加入多少体积的量？我看到SYBR Premix ex taq(perfecct real time)编号drr041a的试剂盒里面说20ul的荧光定量体系cdna模板加入2ul，但是没有注明浓度是多少，只是说dna模板添加量在100ng以下，而且说反转录反应液作为dna模板时添加量不要超过pcr反应总体积的10%，我用的荧光定量pcr反应总体积是20ul，那么cdna的体积应该不大于2ul了，但是浓度应该多少为好呢？还有引物浓度我该用多少为好呢，试剂盒上20ul的荧光定量体系是10uM的加入0.4ul。我的实际浓度和体积可能跟试剂盒上的不一样，但是我该怎么按照自己的900ng 的RNA反转录做成的20ul的溶液来改动试剂盒上的数据呢？如果做浓度梯度来确定cdna浓度和引物浓度，该怎么浓度梯度为好呢？我是用900ng的RNA来反转录做成20ul体系，然后不稀释直接取2ul来荧光定量PCR（20ul体系），即我用于荧光定量PCR的cdna模板含量是90ng

求有关染料分析中的荧光定量法的具体内容或操作方法,哪位有的话给我email一下,sheny123@tom.com,谢谢!

各位朋友，请问荧光定量PCR的标记物具体都有哪些？详细的。量子点可否用于PCR的标记物？荧光素属于哪类，荧光素的衍生物可以作为PCR的标记物吗？谢谢！

X荧光 可以对大气采样的滤膜做定量分析吗？