单克隆抗体 (mAb) 是制药行业中发展最快的一类药物。mAb 作为蛋白质药物,从初始表达到最终商业化经历了一个高度复杂的过程,需要在每个步骤中对其进行仔细表征。在用于 mAb 表征的众多分析方法中,肽谱分析是一项至关重要的技术,它能够实现 mAb 的一级结构确认,还可以对翻译后修饰 (PTM)(如脱酰氨基化、氧化和糖基化)进行鉴定和定量分析。使用 LC/MS/MS 方法进行的 mAb 肽谱分析包括将纯化的 mAb 酶裂解为肽段、串联质谱分析以及数据解析。样品前处理通常涉及多个步骤,包括变性、还原、烷基化和酶解。手动进行肽谱分析样品前处理的过程十分繁琐,且易于受到可扩展性和重现性不佳的影响。此应用简报展示了一个高通量工作流程,能够同步进行样品消解和样品净化,具有很高的重现性。
肽图分析是蛋白质鉴定,特别是重组蛋白鉴定的最常用的方法。它通过酶解(一般使用胰蛋白酶)将蛋白质打碎形成肽段,然后以可重现的方式进行肽段的分离和鉴定。肽图分析是一种非常有用的方法,已成为生物技术领域中最有价值的工具之一,它能检测和监控单个氨基酸改变、氧化、去酰胺化,以及其它降解形式。它还能直接检测常见的单克隆抗体修饰变异,如 N 端环化,C 端赖氨酸处理,N- 糖基化,以及内含子表达等非预期的变异。肽图是蛋白质及其酶解产物的指纹图谱,它能提供待测蛋白质的全面信息。肽图分析包含四个主要步骤,蛋白质的分离和纯化;肽键的选择性酶切;多肽的色谱分离;多肽的分析和鉴定。对测试样品与参考标准品或对照样品进行同步的酶解和分析。肽图应该包括足够数量的肽段以进行有效的分析;它不仅要提供蛋白质鉴定所需的必要信息,还应尽可能地涵盖完整的蛋白质序列。