现在的相差显微镜还能够配吗?用普通的显微镜能吗?现在好象没有生产的拉,谁能给我介绍拉
相差显微镜:利用光的衍射和干涉现象将透过标本的光线光程差或相位差转换成肉眼可分辨的振幅差显微镜。提高了密度不同物质图像的明暗区别,可用于观察未经染色的细胞结构。 相差显微镜是荷兰科学家Zernike于1935年发明的,用于观察未染色标本的显微镜。活细胞和未染色的生物标本,因细胞各部细微结构的折射率和厚度的不同,光波通过时,波长和振幅并不发生变化,仅相位发生变化(振幅差),这种振幅差人眼无法观察。而相差显微镜通过改变这种相位差,并利用光的衍射和干涉现象,把相差变为振幅差来观察活细胞和未染色的标本。相差显微镜和普通显微镜的区别是:用环状光阑代替可变光阑, 用带相板的物镜代替普通物镜,并带有一个合轴用的望远镜。相衬显微镜,又称相差显微镜或位相显微镜。
我想购买一个显微镜用于观察活体细胞,查了相关的资料有用相差显微镜的,有用倒置显微镜的,不知道这两个有什么不同。目前用的比较多的是什么的,什么牌子的比较好,我需要能拍照的。价钱大概多少?谢谢!
相差显微镜 •1940年荷兰学者F.Zernik巧妙地应用光的衍射和干涉原理提高标本细节的折光率的差异,创造了相差显微镜(phase contrast microscope)。从此非常简便而有效地观察体外培养细胞的生长过程,记录细胞分裂周期中的染色体的移动。近年来细胞学家和生物学家所拍摄的生活细胞生长、分裂过程的非常出色的记录影片,都是利用相差显微镜的优秀性能完成的。因此相差显微镜、倒置相差显微镜已成为细胞学、细菌学、寄生虫学、免疫学和海洋生物学的实验室必备仪器。 •相差显微镜是用于观察组织培养中活细胞形态结构的。活细胞无色透明,一般显微镜下不易分辨细胞轮廓及其结构。 •相差显微镜的特点是将活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用,转换为光密度差异(明暗差),使镜下结构反差明显,影像清楚。 相差显微镜的优点http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161815_278026_2961690_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161816_278027_2961690_3.jpg 相差显微镜成像光路http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161817_278028_2961690_3.jpg 相差显微镜的部件 •相差显微镜的关键性部件为位相板(phase plate)、环状光阑(anular diaphragm)和中心调节望远目镜(centring telescope)。 环状光阑 •环状光阑是在玻璃片上喷涂金属薄膜借以挡光,只留下环形透光窄缝的光阑。它能使来自反光镜的直射光只能从环状部分通过,形成一个空心圆筒状的光柱,经聚光器并照射到标本以后,就产生两部分光,一部分是直射光,另一部分是经过标本后产生的衍射光,这两部分光经物镜内相板的作用而改变了光的相位和振幅。 •在相差聚光器下面装有一个转盘,盘上镶有宽狭不同的环状光阑,在不同光阑边上刻有10×、 20×,40×等字样,这表示当用不同放大倍数的物镜时,必须配合相应的环状光阑。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161819_278029_2961690_3.jpg 相板 •相板安装在物镜的后焦平面上,带有相板的物镜称为相差物镜(蔡司厂用红色“PH”表示)。 •相板上有一灰色的环状圈,称为共轭面。面上涂有吸光物质,直射光从这部分通过,并吸收了约80%的直射光,以降低它的透光度。在共轭面的内,外侧部分称为补偿面,面上涂有减速速物质,使衍射光的相们发生改变,因此这两者相结合就能分别改变直射光和衍射光的振幅和相位。 相板分类 •A型位相板 凡是共轭面即环形相板上涂有吸收层的相板均为A型。A型相板又分为二型: •(1)A十型位相板:这是在共扼面上既涂吸收层又涂有电解质的相板。这种相板能吸收其共轭面的60一90%直射光,而透过其20一40%。市场出售的位相板型号分类时,都以数字表示其透射率和推迟位相的数据(图10-12,表10—1)。 •(2)A一型位相板是共扼面上涂有吸收层。同时在补偿面上涂有电解质。 •B型位相板凡是在补偿面上涂有吸收层而在共轭面上有电解质的位相板,均属此类。 •(1)B十型位相板是在补偿面上涂有吸收层共轭面上有电解质的相板。 •(2)B一型位相板是在补偿面上涂有吸收层加电解质的相板。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281441_279896_2961690_3.jpg 对焦望远目镜 对焦望远目镜(centring telescope)又叫合轴望远镜或校正望远目镜。这是一种场透镜和接目透镜之间的距离可变的目镜。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281443_279897_2961690_3.jpg 相差显微镜的成像原理 •从波动光学的角度可把物体细节即生物标本的细节,看成是成像光束的障碍物。它可以改变相干光束的振幅、位相和光强分布。 •从变换光学的频谱转换角度,可把物体细节看成是不同空间信息的集合物。它可改变光信息的空间频谱。 •在显微镜下标本细节的光密物质、光疏物质和无结构的介质的折射率不同,因此相干光束通过光密物质(t)时,必然产生衍射,使光程延长,推迟位相(图10—21P)。这时衍射光(P)和直射光(S)之间的位相出现d/λ差异。但是标本的吸收程度近似,所以振幅未变即光强末变。这种直射光和衍射光到达像平面重叠成像时,其合成波的振幅与通过无结构介质的直射光的振幅几乎近似,即其光强相似。这就是未染标本在普通显微镜下反差很小的基本原因(图10—22)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281447_279898_2961690_3.jpg 暗相差 •在被检物的折射率大于介质的情况下,透过共轭面的直射光被吸收80%后亮度变暗,衍射光在通过被检物后其相位己推迟1/4波长,再在位相板的补偿面的电解质又推迟了1/4波长。由于这两束光的相位不同(差1/2波长),其合成波的振幅为两者之差,所以光线就更加暗。 •与此同时,通过无结构介质的衍射光的光程只被补偿面的电介质推迟l/4波长。这就造成通过光密物质的光强远比通过无结构介质(背景)的光强减衰得多。相差显微镜下标本细节的反差加大丁。光密结构比背景暗得多了。这种反差叫暗反差也叫正反差。 明相差 •如果相板的共轭面上涂的是减速物质,推迟直射光1/4波长,而补偿面涂的是吸光物质,结果就是直射光与衍射光的相位相同(衍射光通过物体时相位推迟了1/4波长),其合成波的振幅为两者之和,结果物体是明亮的而背景是暗的,这称为明相差或负相差。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281450_279899_2961690_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281450_279900_2961690_3.jpg 相差显微镜实验方法和步骤 •安放相差装置取下原有聚光器和物镜,分别安上相差聚光器和相差物镜,并将转盘转到“0”标记的位置。用10×相差物镜调光。 •调节光源。 •合轴调节取下原有目镜,换上合轴调整望远镜。上下移动望远镜筒,至能看清物镜中的相板环为止。 •放回目镜取下合轴调整望远镜,放回目镜即可进行观察。更换不同放大倍数的相差物镜时,每次都要按上述方法重新调节。
兄弟最近接到一个项目,使用光学显微镜做石棉,有一份国标,是用相差显微镜作的。除了这份国标以外再也没有什么资料性的东西了。这里有人用相差显微镜做石棉检测吗?如果您是做这个检测的,能给我提供一些参考文献和资料吗?谢谢。
如题,用相差显微镜观察总大肠菌群革兰氏染色可以吗?
最近单位想购置一台偏光相差显微镜,但是调研的单位说没什么验收的参数,就是看看有这些东西就可以了,我想知道验收有没有什么重要的指标需要必须达到的?否则算是偏光不合格?谢谢!
请教一下,粉尘分散度用的相差显微镜目镜和物镜都多少倍的啊?
奥林巴斯倒置相差显微镜CKX41价格?四万多能买到吗?
在电子元件厂工作,每天用一台普通光学相差显微镜检查钽电容。现在想把图像保存下来。请问,如果给显微镜配一个11万像素的显微镜专用数码摄像头,能够满足要求吗?几百万像素的产品太贵了,就不要推荐了。现在有的数码显微镜的分辨率也不过如此,成像质量肯定比几百万像素的质量差很大。但是既然生产这个产品,一定就有适合它们应用的地方。只是不知道是否适合我这行业。请行家指教。如果有对照的实拍图片就更好了。
1.体氏显微镜,也就是解剖显微镜,进行显微操作用 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105171212_294583_1643453_3.jpg2.普通生物显微镜,用途最广,各种常规染色,免疫组化,原位杂交等结果观察http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105171212_294584_1643453_3.jpg3.相差显微镜是用来观察组织培养中活细胞形态结构的。活细胞不同厚度及细胞内的各种结构对光产生的不同折射作用,转换微光密度差异,使镜下结构反差明显,影响清楚。相差显微镜的研发获得诺贝尔物理学奖。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105171214_294585_1643453_3.jpg4.倒置显微镜也是用来观察组织培养中活细胞形态的,原理与相差楼上差不多,就是光源方向相反。光源在载物台的上方,物镜在下方,便于观察贴附在培养皿底壁上的活细胞。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105171214_294586_1643453_3.jpg5.荧光显微镜,用来观察组织中的荧光物质(自发的、诱发的、标记的),。标本中的荧光物质在紫外线的激发显产生各种颜色的荧光。目前主要在免疫细胞化学研究中。常用的荧光素有红色:TRITC,Rhodamin,绿色:FITC http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105171215_294587_1643453_3.jpg6.最早的列文.胡克制作的显微镜 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105171208_294582_1643453_3.jpg7.最早的罗伯特.胡克制作的显微镜http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105171216_294588_1643453_3.jpg8.神经外科专用显微镜 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105171217_294590_1643453_3.jpg9.妇产科专用显微镜 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105171217_294591_1643453_3.jpg10.整形外科专用显微镜http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105171218_294592_1643453_3.jpg
(一)阿贝成像原理 为了理解相差尼康显微镜的原理,不得不回顾普通显微镜的成像原理。德国光学家阿贝(E. Abbe)从1874年以后创立了成像原理.在现代波动光学的发展基础上兴起的变换光学中的空间信息滤波和信息处理概念,就是奠基于阿贝成像原理。 据阿贝的看法,尼康显微镜的透镜或透镜组不只是反映物平面和像平面的共扼关系,而且也反映透镜前后的无数个对应平面的共扼关系。当然,显微镜的成像光路中最为重要的共扼面还是物平面和像平面(图10-18,0--0').显微镜成像光路中同样具有重要的共扼面是发光平面((KY1000显微镜)和光源的像平面(L')。 但是如果在显徽镜结构中在聚光镜的前焦面上放置孔径光栏时,那么光源和光源像两平面的共辘关系,代之以聚光镜前焦面的光栏平面和物镜后焦面的L"平面的共扼关系。 阿贝认为发光平面的共扼面即L’平面,是显微镜的初级成像平面,而物平面是次级成像平面。若通俗一点来讲,L‘烛光是L烛光的像,而O‘空间是L'烛光的像。 如果我们在尼康显微镜的初级成像光路上在聚光镜和物镜之间,擂入一张不同光密度的标本O(图10-20上是光栅)时,立即破坏了初级成像光路.这是因为标本细节的光密结构(栅)和光疏结构(间隙)的折射率不同,而产生光的衍射。其结果如图10-20所示,L烛光在它的像平面上出现了数支烛光。与此同时,在像平面上出现标本0的干涉像.这些干涉纹是由次波源。,一1,+1发射的衍射光的重叠所造的。这样由于标本的干涉次级成像过程,已由CM100的共扼面改变成CM300FL的共扼面。也就是说像平面上不是L,的像,而是标本0的像了。 总之,相干成像过程的第一步是形成衍射斑,而第二步是相干干涉.当然未染色生物标本细节的折射率有很小的差异,在像平面上的对比度非常小。为了提高物像的对比度(反差),荷兰物理学家(F. Zernike(1935)设计了相差显微镜的基本部件如环状光栏和位相板。 从阿贝成像原理已经知道尼康显微镜的聚光镜前焦面上放置孔径光栏时,这个平面就成为物镜后焦面的共扼面。F. Zernike在这个平面上放置了环状光栏,按空间滤波概念,称带通滤波器。 环状光栏给物镜后焦面提供的是照射在环形甲像平面上的相干光束。照射在环形像平面上的相图10-20显徽镜的成像光路干光束,不同于线形窄缝所提供的相干光束.前者不能造成带有方向性衍射斑.在共扼面上的光分布强度也不像窄缝衍射那种零级强度。它所造成的衍射光是均匀的无方向性的. F. Zernike在相差尼康显微镜的物镜后焦面上放置了位相板。恰巧位相板的吸收环变成环状光栏的成像平面。其结果就像F. Zernike指出的,如果人工地改变照射到不吸光物体而形成初级成像光束的光波,以此来改变衍射光和直射光的位相和振幅,使之近似乎吸光物体的初级成像光束时,那么其结果就造成完全像吸光物体的次级成像,也就是加强了物体细节的反衬度。巧妙地使用位相板,就能够使物像平面上的光强度分布与物体细节的位相信息成为线性关系.也就是人工地用物体细节的位相分布调整像平面的光强分布。甚至巧妙地选配不同类型的位相板,使之适合于物体细节的折射率时,可以强使物像平面上的反衬度出现逆转,即由明反差改变为暗反差,或者反之。
物镜((objective)对于传统显微镜来说应算最贵重的部件。一只高性能物镜的价格占这类显微镜本身的1/3-1/2。因为显微镜的最基本性能—成像和分辨本领决定于物镜。为了消除成像过程中的球面差和色差、物镜的透镜组由单透镜发展为许多层次的复合透镜组.由3-4透镜已增加到7-9片透镜或透镜复合体。物镜的镜体上都刻有物镜的性能,物镜的镜口率、放大倍数以及特殊物镜的标记字样。 消色差物镜的外壳上刻有英文,德文,法文Achromat字样或俄文AXP字样。这种物镜能够消除光谱中的红光和青光所造成的色差而不能消除其他色光形成的色差。 复消色差物镜是性能最好,价格最贵的物镜.其外壳上刻有英、德、法文Apochromat 字样或俄文字样。其透镜质料好,透镜组层次最多,组合得精确能够消除红光、黄光、蓝光造成的色差。这种物镜配用补偿目镜时能够发挥光学显微镜的最高性能。 荧石物镜外壳刻有英、德、法文Fluormat(或Flur)字样.这是能透过紫外光的专用于荧光显微镜的物镜。如果当普通物镜使用,则分辨率太低. 平像场系列物镜刻有Planochromat字样。Opton公司出售的有平像场荧石消色差物镜(Plan-Neofluor),平像场复消色差物镜(Plan-Achromat),平像场荧石消色差偏光物镜(Plan-Neofluor pol)等。 相差显微镜必须配备相差物镜.这种物镜刻有英、德、法文Pha或俄文0字样。单色物镜(monochromat)是全部透镜用融熔水晶制成的贵重物镜。这种物镜是透过紫外线的专用于紫外光干涉显微镜或用于紫外光显微分光光度计上。如果这种物镜不能到手时,可用复消色差物镜代替。 带有可变光栏的物镜的镜体上装有螺纹转动圈。转动圈的标号可移动在0.5-1.0之间.这种物镜是适用于暗视野显微镜.倒置显微镜的物镜是长焦距物镜。其他种类的物镜焦距短要求盖玻片的厚度不能过大(ti I 7pm)。倒置显微镜的物镜可以观察培养瓶壁上的贴壁生长细胞。
微分干涉差显微镜 - 简介 1952年,Nomarski在相差显微镜原理的基础上发明了微分干涉差显微镜(differential interference contrast microscope)。DIC显微镜又称Nomarski相差显微镜(Nomarki contrast microscope),其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比,其标本可略厚一点,折射率差别更大,故影像的立体感更强。 DIC显微镜的物理原理完全不同于相差显微镜,技术设计要复杂得多。DIC利用的是偏振光,有四个特殊的光学组件:偏振器(polarizer)、DIC棱镜、DIC滑行器和检偏器(analyzer)。偏振器直接装在聚光系统的前面,使光线发生线性偏振。在聚光器中则安装了石英Wollaston棱镜,即DIC棱镜,此棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光(x和y),二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致,在穿过标本相邻的区域后,由于标本的厚度和折射率不同,引起了两束光发生了光程差。在物镜的后焦面处安装了第二个Wollaston棱镜,即DIC滑行器,它把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振面(x和y)仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装置,即检偏器。在光束形成目镜DIC影像之前,检偏器与偏光器的方向成直角。检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光,从而使二者发生干涉。x和y波的光程差决定着透光的多少。光程差值为0时,没有光穿过检偏器;光程差值等于波长一半时,穿过的光达到最大值。于是在灰色的背景上,标本结构呈现出亮暗差。为了使影像的反差达到最佳状态,可通过调节DIC滑行器的纵行微调来改变光程差,光程差可改变影像的亮度。调节DIC滑行器可使标本的细微结构呈现出正或负的投影形象,通常是一侧亮,而另一侧暗,这便造成了标本的人为三维立体感,类似大理石上的浮雕。
[font=SimSun]请问我需要一台生物显微镜[/font]200[font=SimSun]倍检查公猪精子活力[/font]1000[font=SimSun]倍位相差检查头帽完整性[/font][font=SimSun]那么就奥林帕斯[/font]cx31[font=SimSun]或[/font]cx41[font=SimSun]系列[/font]Nikon e100[font=SimSun]或[/font]e200[font=SimSun]系列[/font][font=SimSun]以及徕卡[/font]DM500[font=SimSun]显微镜[/font][font=SimSun]哪一台经济又适合呢[/font]??
相衬显微镜的定义及与普通显微镜的区别: 相衬显微镜是一种特殊的显微镜,特别适用于观察具有很高透明度的对象,例如生物切片、油膜和位相光栅等等。光波通过这些物体,往往只改变入射光波的位相而不改变入射光波的增幅,由于人眼及所有能量检测器只能辨别光波强度上的差别,也即振幅上的差别,而不能辨别位相的变化,因此用普通显微镜是难以观察到这些物体的。 ------------------------------------- 透明度很高的物体,也称为位相物体。相衬法(也叫位相反衬法)是通过空间滤波器将物体的位相信息转换为相应的振幅信息,从而大大提高透明物体的可分辨性,所以从这个意义上说,相衬法是一种光学信息处理方法,而且是最早的信息处理的成果之一,因此在光学的发展史上具有重要意义。1935年泽尔尼克根据阿贝成像原理,首先提出位相反衬法,由改变频谱的位相以改善透明物体成像的反衬度,1953年泽尔尼克因此获诺贝尔物理学奖。这是诺贝尔物理学奖中少数几项与光学有关的奖项之一 ----------------------------------------- 工作原理: 实际的做法可以是,在玻璃基片的中心处加一滴液体,液滴的光程引起一定的相移,这样就形成了一块位相板,将这块位相板放置在显微镜的后焦面上,当作一个空间滤波器。在相干光的照射下,像面上出现与物的位相信息相关的图像。像面上的强度分布与样品位相成线性关系,也就是说,样品的位相分布调制了像面上的光强。 相衬法不是在使用显微镜的过程中发现的,而是泽尔尼克在工作于别的光学领域时发现的。这要从1920年泽尔尼克对衍射光栅产生兴趣时说起。这种反射式光栅是由平面或凹面镜片构成,镜片表面上刻有大量等距的刻痕。刻痕位置稍有差错,就会明显影响光栅的光学效果。刻机周期性重复出现的误差,使光程差发生相应的变化,观察者在观察镜面时,就会看到镜面似乎变得起伏不平。光栅表面细致的刻线直接用肉眼是看不见的,看到的只是在镜面上出现相隔较宽的粗线。用这样的光栅所形成的光谱,往往在每根强度谱线两侧伴随有一系列杂乱的弱线,这就叫“罗兰鬼线”。一块完善的光栅,像手掌那么大,拿在手里,在均匀照明之下,看上去色彩丰富,斑斓绚丽,展现出可见光谱里的各种颜色。可是,实际上有的光栅看上去却是“伤痕”遍布,在彩带上叠加了一条条粗线。1902年阿伦(H.S.Allen)曾宣称,这些粗线不是真实的,乃是主要谱线与其鬼线互相干涉抵消的结果。1920年泽尔尼克在研究光栅时,对这一说法表示异议。他认为这些带“伤痕”的表面视场要比照像底片拍摄所得的光谱照片提供了更多信息,表面视场给出了鬼线的相对位相,而照片丢失了鬼线的位相信息。泽尔尼克这时正在从事统计物理学研究,就把这一问题放在心里,留待以后研究。 大约在1930年,泽尔尼克的实验室得到了一块大凹面光栅,安装在支架上准备使用。很快人们就看到了光栅表面的“伤痕”。由于光栅距人眼6m,看不清楚,泽尔尼克试着用一台小型望远镜观察它。这时不期而遇的事情发生了。线条状的伤痕看得非常清楚,可是当把望远镜精确聚集在镜面表面时,线条却消失无遗!怎么回事?泽尔尼克想起了10年前的思考,他意识到这一现象的重要意义,立刻集中精力研究这个光学问题。他借助于阿贝的成像理论,经过一系列实验和计算,终于作出了成功的解释。原来这是由于波的位相差所引起的干涉现象。1935年,泽尔尼克进一步根据位相理论研究出了位相反衬法,发明了相衬显微镜。在他的第一次设计中,使用一个直线条带样的孔径光阑,并在物镜的后焦面放置一个相应的直线条带光阑。泽尔尼克在他的诺贝尔领奖词中提到这一发明的偶然性时说:“然而,这个装置使物体结构的显微像显示了晕,因为衍射效应使物体细节的带状物像——沿垂直于带的方向散开,从而使像上的小亮点成为短线段状。为了避免这种观象,我改用了环状光阑,此光阑导致晕圈向各方向散开,不过晕圈变得很微弱以致实际上完全没有意义。” 现在全世界生产相衬显微镜的公司很多,相衬显微镜已经广泛应用于生物学及医学方面作细菌学和病理学的研究,也在矿物晶体微形貌学中得到了有效的应用。用这种特殊的显微镜,可以进行晶体表面生长的动态观察。 其实相衬显微镜就是我们平时所说的相差显微镜。它是根据光线通过不同密度的物质时,其滞留程度不同(密度大则滞留时间长)的原理设计的。 相差显微镜,可以将这种光程差或相位差,转换成振幅差,增强对比度。它与普通光学显微镜最主要的不同点是在物镜后装有一块相差板,由于相差板上部分区域有吸光物质,通过其的偏转光线之间又增加了新的光程差,从而对样品不同密度造成的相位差起了“夸大”作用。最后两组光线通过透镜会聚成一束,发生相互叠加或抵消的干涉现象,从而表现出肉眼明显可见的明暗差别。 由于反差是以样品的密度差别为基础形成的,故相差显微镜的样品不需染色,可观察活细胞,甚至研究细胞核、线粒体等细胞器的动态。
最近在选购偏光显微镜,主要是高分子材料结晶用。考察了Olympus、蔡司和徕卡。感觉几家相互拆台的特别厉害,每一个都说别家的不好。想问问版内的伙计们,BX51和蔡司的A1比较的话,哪一个更好一些?大家用的是哪个厂家的呢?
相衬显微镜 摘要:本文详细介绍了相衬显微镜的光学结构、相衬装置、相衬原理、相衬显微分析的基本原理、相衬显微镜的操作以及其在金相分析中的应用。相衬显微镜是利用特殊相板的作用,使不同相位的反射光发生干涉或迭加,借以鉴别金相组织,又称“相差显微镜”。试样表面高度差大概在十埃到几百埃范围内均能清楚地被“相衬显微镜”所鉴别。 关键字:相衬显微镜、相衬原理、相衬装置 1. 相衬显微镜的光学结构 相衬显微镜的特点是在一般金相显微镜中加两个特殊的光学元件,在光源系统光阑的位置上,更换一块单环或同心双环遮板在物镜后焦面上放置一块相板,它是一块透明的玻璃片,在对应于圆环形遮板透光的狭缝处,真空喷镀两层不同物质的镀膜,称为“相环”,它起着移相合降低振幅的作用,当光线经遮板狭缝后形成环形光束射入显微镜,借助透镜调整遮板,使圆环狭缝正好聚焦在相板上,即使射入的环形光束与相板上的环状涂层完全吻合,为了调节方便,实际板上的环状涂层略大于狭缝的投影。 环形光束通过相环后经物镜投射在试样表面上,如果试样是一块平整光滑的磨面,那么反射光进入物镜光线必然与相环吻合,如果磨面有凸凹差别,,则不同部位的反射结果不同,凸出部分的反射光是直射光,经物镜后重又投在相环上,透过相环进入目镜,而凹陷部分的反射光包括直射光和衍射光两部分,直射光透过相环而衍射光则由各个方向进入物镜投射在相板的整个平面上,可见借遮板与相板的配合使反射光中的直射光裕衍射光在相板上通过不同的区域,即直射光通过相板上的相环部分,而衍射光则通过相板整个平面,通过和相环部分的直射光可借相环移相和降低振幅,达到提高衬度的效果。 2. 相衬装置 2.1 相板 相板是相衬显微镜中最重要的元件,它是一块圆形平面光学玻璃,在相环部位真空喷镀一层氟化镁,则通过相环部分的光线比通过其它部分的光线迟后一定位相,这就实现了移相,只要适当控制薄膜厚度,使相位刚好迟后π/2,这就是负相衬或明衬。如果镀膜加厚,使直射光迟后3π/2,这就是正相衬或暗衬。 除使直射光移相外,还需要降低振幅,使得迭加后的相衬效果更为明显,为此在相环上再喷镀一层银,使直射光通过镀银层振幅显著降低。 相板分为固定相板和活动相板,相板安置在物镜与垂直照明器之间,配有专用相衬物镜的相衬显微镜中,相板安置在物镜的后焦面上,但随着数值孔径的改变,相板与相环尺寸必须相应改变,才能得到正确的配合,因此每一物镜必须装有一个相应尺寸的相板,这种配有相板的专用物镜称相衬物镜,物镜上必须装有一个相应尺寸的相板,这种
1.荧光显微镜 (fluorescence microscope)是用来观察标本中的自发荧光物质或以荧光素染色或标记的细胞和结构。荧光显微镜是以高压汞灯产生的短波紫外线为光源,并配有激发、阻断、吸热和吸收紫外线等滤片系统,标本中的荧光物质在紫外线激发下产生各种颜色的荧光,借以研究该荧光物质在细胞和组织内的分布。组织中的自发性荧光物质如神经细胞和心肌细胞等内的脂褐素呈棕黄色荧光,肝贮脂细胞和视网膜色素上皮细胞内的维生素A呈绿色荧光,某些神经内分泌细胞和神经纤维内的单胺类物质(儿茶酚胺、5-羟色胺、组胺等)在甲醛作用下呈不同颜色的荧光,组织内含有的奎宁、四环素等药物也呈现一定的荧光。细胞内的某些成分可与荧光素结合而显荧光,如溴化乙锭与吖啶橙可与DNA综合,进行细胞内DNA含量测定。荧光显微镜更广泛用于免疫细胞化学研究,即以异硫氰酸或罗丹明等荧光素标记抗体(一抗或二抗),用该标记抗体直接或间接地与细胞内的相应抗原结合,以检测该抗原的存在与分布。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112151345_338335_2023037_3.jpg2.相差显微镜 (phase contrast microscope)是用于观察组织培养中活细胞形态结构的。活细胞无色透明,一般光镜下不易分辨细胞轮廓及其结构。相差显微镜的特点是将活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用,转换为光密度差异(明暗差),使镜下结构反差明显,影像清楚。组织培养研究常用的是倒置相差显微镜(inverted phase contrast microscope),它的光源和聚光器在载物台的上方,物镜在载物台的下方,便于观察贴附在培养器皿底壁上的活细胞。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112151345_338338_2023037_3.jpg3.暗视野显微镜 (dark-field microscope)主要用于观察因反差或分辨力不足的微小颗粒。此种显微镜主要是有一个暗视野集光器,使光线不直接进入物境,故呈暗视野。而标本内的小颗粒产生的衍射光或散射光进入物镜,暗视野中的颗粒呈明亮小点,如同在暗室可见一束光线中的微小尘粒一般。普通通光镜最大分辨率为0.2μm,暗视野显微镜则可分辨0.004~0.2μm的微粒,适用于观察细胞内线粒体运动及标本中细菌等微粒的运动等。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112151350_338342_2023037_3.jpg4.共集激光扫描显微镜 (confocal laser scanning microscope,CLSM)是近10年研制成的高光敏度、高分辨率的新型仪器。它以激光为光源,光束经聚焦后落在样品(组织厚片或细胞)不同深度的微小一点,并作移动扫描,通过电信号彩色显像,经过微机图像分析系统进行二维和三维分析处理。CLSM可对细胞进行三维结构图像分析,细胞内各种荧光标记物的微量分析,细胞内Ca2+、pH值等的动态分析测定,细胞的受体移动、膜电位变化、酶活性和物质转运的测定,并以激光对细胞及其染色体进行切割、分离、筛选和克隆。因此,CLSM是一种高技术产品,可对细胞的多种功能进行全自动、高效、快速的微量定性和定量测定。其他如偏光显微镜用于研究组织晶体物质及纤维等的光学性质,紫外光显微镜用于研究细胞内核酸的分布与定量等。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112151350_338343_2023037_3.jpg
显微镜是人类认识物质微观世界的重要工具,是现代科学研究工作不可缺少的仪器之一。显微镜自1666年问世以来已有300多年的历史了,其间随着科学技术不断发展,显微镜的品种不断增加,结构和性能逐步得到完善和提高。 根据不同的使用用途,光学显微镜可分为普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜、体视显微镜、偏光显微镜等10多种。目前,世界上许多国家都可以生产光学显微镜,牌名、种类繁杂,其中德国、日本等国制造的显微镜品质、数量占优势,但价格昂贵。 对于现代的光学显微镜,包括各种简单的常规检验用显微镜、万能研究以及万能照相显微镜等,首先要认识其构造及各部件的功能,同时要掌握正确的调试、使用和保养方法,才能在实际应用中面对各种要求时以不同的显微镜检方法,充分发挥显微镜应有的功能,提高常规检验工作效率。
[size=4][color=#DC143C][B]相衬显微镜的原理及其应用[/B][/color][/size] 相衬显微镜又叫相差显微镜。通常我们用金相显微镜观察试样的显微组织,是靠试样表面反射光的强弱(即黑白灰度的不同)来鉴别它。有的显微组织由于其反射率和吸收率不同,而产生不同的灰度。反射率较大者,则组织较明亮;反射率较小者,组织比较灰暗。当试样上两相的反射系数相同,仅有因轻微浸蚀或各相硬度不同而使抛光时形成微小凹凸,或者有塑性变形及第二类共格相变引起的表面浮凸,这时样品表面的反射光没有强度的差别,只有光程的微小差别。对此一般金相显微镜明场就不易鉴别,当表面高低起伏极小时,更难辨别,而相衬技术成功地解决了这一问题。一般表面高低差在100~1500范围内均能用相衬显微镜来观察。 相衬原理是荷兰的物理学家泽尔尼克(Zernike)于1934年建立,并在实际应用中获得巨大成就,曾获得1953年度的物理学诺贝尔奖。相衬显微分析是最成功的应用之一。
[center][B]显微镜的七种观察方式[/B][/center]一、明视野观察(Brightfield) 明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式,广泛应用于病理、检验,用于观察被染色的切片,所有显微镜均能完成此功能。二、暗视野观察(Darkfield) 暗视野实际是暗场照明发。它的特点和明视野不同,不直接观察到照明的光线,而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此,视场成为黑暗的背景,而被检物体则呈现明亮的象。 暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象,微尘在强光直射通过的情况下,人眼不能观察,这是因为强光绕射造成的。若把光线斜射它,由于光的反射,微粒似乎增大了体积,为人眼可见。 暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体,而是将光线改变途径,使其斜射向被检物体,使照明光线不直接进入物镜,利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。暗视野观察的分辨率远高于明视野观察,最高达0.02—0.004三、相差镜检法(Phasecontrast) 在光学显微镜的发展过程中,相差镜检术的发明成功,是近代显微镜技术中的重要成就。我们知道,人眼只能区分光波的波长(颜色)和振幅(亮度),对于无色通明的生物标本,当光线通过时,波长和振幅变化不大,在明场观察时很难观察到标本. 相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检,也就是有效地利用光的干涉现象,将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差,即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察,因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。 相差显微镜的基本原理是,把透过标本的可见光的光程差变成振幅差,从而提高了各种结构间的对比度,使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发生折射,偏离了原来的光路,同时被延迟了1/4λ(波长),如果再增加或减少1/4λ,则光程差变为1/2λ,两束光合轴后干涉加强,振幅增大或减下,提高反差。在构造上,相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处: 1.环形光阑(annulardiaphragm)位于光源与聚光器之间,作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥,焦聚到标本上。 2.相位板(annularphaseplate)在物镜中加了涂有氟化镁的相位板,可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。分为两种: 1) A+相板:将直射光推迟1/4λ,两组光波合轴后光波相加,振幅加大,标本结构比周围介质更加变亮,形成亮反差(或称负反差)。 2) B+相板:将衍射光推迟1/4λ,两组光线合轴后光波相减,振幅变小,形成暗反差(或称正反差),结构比周围介质更加变暗四、微分干涉称镜检术(DifferentialinterferencecontrastDIC) 微分干涉镜检术出现于60年代,它不仅能观察无色透明的物体,而且图象呈现出浮雕壮的立体感,并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点,观察效果更为逼真。 原理: 微分干涉称镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等,光束分别在距离很近的两点上通过被检物体,在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小,而不出现重影现象,使图象呈现出立体的三维感觉。 DIC显微镜的物理原理完全不同于相差显微镜,技术设计要复杂得多。DIC利用的是偏振光,有四个特殊的光学组件:偏振器(polarizer)、DIC棱镜、DIC滑行器和检偏器(analyzer)。偏振器直接装在聚光系统的前面,使光线发生线性偏振。在聚光器中则安装了偌玛斯斯棱镜,即DIC棱镜,此棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光(x和y),二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致,在穿过标本相邻的区域后,由于标本的厚度和折射率不同,引起了两束光发生了光程差。在物镜的后焦面处安装了第二个偌玛斯斯棱镜,即DIC滑行器,它把两束光波合并成一束。 这时两束光的偏振面(x和y)仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装置,即检偏器。在光束形成目镜DIC影像之前,检偏器与偏光器的方向成直角。检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光,从而使二者发生干涉。x和y波的光程差决定着透光的多少。光程差值为0时,没有光穿过检偏器;光程差值等于波长一半时,穿过的光达到最大值。于是在灰色的背景上,标本结构呈现出亮暗差。为了使影像的反差达到最佳状态,可通过调节DIC滑行器的纵行微调来改变光程差,光程差可改变影像的亮度。调节DIC滑行器可使标本的细微结构呈现出正或负的投影形象,通常是一侧亮,而另一侧暗,这便造成了标本的人为三维立体感,类似大理石上的浮雕
显微镜的六种象差显微镜成象受各种象差的影响,显微镜的主要光学部件是物镜,而物镜有各种各样的型号,比如消色差物镜,平场物镜等等,这些物镜都是对应于要消除某种象差,从而提高成像质量的,例如消色差物镜是用来消除色差,平场物镜是用来消除场曲的.下面就介绍一下显微镜一般存在的象差一 色差(Chromatic aberration) 发生在多色光为光源的情况下,单色光不产生色差。白光由红 橙 黄 绿 青 蓝 紫 七种组成,各种光的波长不同 ,所以在通过透镜时的折射率也不同,这样物方一个点,在象方则可能形成一个色斑。消除方法:使用单色光(加入滤光片),,光学设计消除色差[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/03/200803291332_83138_1622447_3.jpg[/img]二 球差(Spherical aberration)球差是轴上点的单色相差,是由于透镜的球形表面造成的。球差造成的结果是,一个点成像后,不在是个亮点,而是一个中间亮 边缘逐渐模糊的亮斑。从而影响成像质量。消除方法:使用凸、凹透镜组合球差[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/03/200803291334_83139_1622447_3.jpg[/img]三 慧差(Coma)慧差属轴外点的单色相差。轴外物点以大孔径光束成象时,发出的光束通过透镜后,不再相交一点,则一光点的象便会得到一逗点壮,型如慧星,故称"慧差"。 消除方法:使用轴向平行光 彗差[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/03/200803291345_83140_1622447_3.jpg[/img]
以下内容摘自中国分析仪器网,供有兴趣的版友参考。一、显微镜的分类 (一)、按使用目镜的数目可分为单目、双目和三目显微镜。 单目价格比较便宜,可以作为初学爱好者的选择,双目稍贵点,观察的时候两眼可以同时观察,观察得舒适些,三目又多了一目,它的作用主要是连接数码相机或电脑用,比较适合长时间工作的人员选用。 (二)、根据其用途以及应用范围分为生物显微镜、金相显微镜、体视显微镜等。 1、生物显微镜是最常见的一种显微镜,在很多实验室中都可以见到,主要是用来观察生物切片、生物细胞、细菌以及活体组织培养、流质沉淀等的观察和研究,同时可以观察其他透明或者半透明物体以及粉末、细小颗粒等物体。生物显微镜供医疗卫生单位、高等院校、研究所用于微生物、细胞、细菌、组织培养、悬浮体、沉淀物等的观察,可连续观察细胞、细菌等在培养液中繁殖分裂的过程等。在细胞学、寄生虫学、肿瘤学、免疫学、遗传工程学、工业微生物学、植物学等领域中应用广泛。 2、体视显微镜又称为实体显微镜、立体显微镜,是一种具有正像立体感的目视仪器,广泛的应用于生物学、医学、农林等。它具有两个完整的光路,所以观察时物体呈现立体感。主要用途有:①作为动物学、植物学、昆虫学、组织学、考古学等的研究和解剖工具。②做纺织工业中原料及棉毛织物的检验。③在电子工业,做晶体等装配工具。④对各种材料气孔形状腐蚀情况等表面现象的检查。⑤对文书纸币的真假判断。⑥透镜、棱镜或其它透明物质的表面质量,以及精密刻度的质量检查等。 3、金相显微镜主要是用来鉴定和分析金属内部结构组织,是金属学研究金相的重要仪器,是工业部门鉴定产品质量的关键设备,专门用于观察金属和矿物等不透明物体金相组织的显微镜。这些不透明物体无法在普通的透射光显微镜中观察,故金相和普通显微镜的主要差别在于前者以反射光,而后者以透射光照明。不仅可以鉴别和分析各种金属、合金材料、非金属物质的组织结构及集成电路、微颗粒、线材、纤维、表面喷涂等的一些表面状况,金相显微镜还可以广泛地应用于电子、化工和仪器仪表行业观察不透明的物质和透明的物质。如金属、陶瓷、集成电路、电子芯片、印刷电路板、液晶板、薄膜、粉末、碳粉、线材、纤维、镀涂层以及其它非金属材在金相显微镜中照明光束从物镜方向射到被观察物体表面,被物面反射后再返回物镜成像。所以用金相显微镜来检验分析金属内部的组织结构在工业生产中是十分重要的。体视显微镜在工业生产中也可以用到,但是它只是用来观察金属表面划伤、划痕等,放大倍数一般在10X-50X之间,金相的放大倍数一般在40X-400X,有些可以达到800X。 (三)、按光学原理可分为偏光、相衬和微差干涉对比显微镜等。 1、偏光显微是鉴定物质细微结构光学性质的一种显微镜。凡具有双折射性的物质,在偏光显微镜下就能分辨的清楚,当然这些物质也可用染色法来进行观察,但有些则不可能,而必须利用偏光显微镜。主要用于研究透明与不透明各向异性材料。一般具有双折射的物质都可以用这种显微镜进行观察。双折射性是晶体的基本特征。因此,偏光显微镜被广泛地应用在矿物、化学等领域,如在植物学方面,如鉴别纤维、染色体、纺锤丝、淀粉粒、细胞壁以及细胞质与组织中是否含有晶体等。在植物病理上,病菌的入侵,常引起组织内化学性质的改变,可以偏光显微术进行鉴别。在人体及动物学方面,常利用偏光显微术来鉴别骨骷、牙齿、胆固醇、神经纤维、肿瘤细胞、横纹肌和毛发等。 2、相衬显微镜又称为相差显微镜,最大的特点就是可以观察未经染色的标本和活细胞。这些样品在一般的显微镜下是观察不到的,而相差显微镜则利用物体不同结构成分之间的折射率和厚度的差别,把通过物体不同部分的光程差变为振幅差,经过带有环状光阑的聚光镜和带有相位片的相差物镜来实现观测,简单的说它利用的是样品密度差别产生的反差来进行观察的,所以即使样品不染色也可以进行,这大大便利了活体细胞的观察,因此相衬镜检法广泛应用于倒置显微镜中。有相板的物镜称”相衬物镜”,外壳上常有”Ph”字样。相衬法是一种光学信息处理方法,而且是最早的信息处理的成果之一,因此在光学的发展史上具有重要意义。 3、微分干涉对比镜检术出现于60年代,它不仅能观察无色透明的物体,而且图像呈现出浮雕壮的立体感,并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点,观察效果更为逼真。 (四)、按光源类型可分为普通光、荧光和激光显微镜等。 1、普通光显微镜采用的就是普通光源,是最常用的。 2、荧光显微镜是以紫外线为光源,通常是照射被检物体(落射式),使之发出荧光,然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 3、激光共聚焦扫描显微镜,采用激光做为扫描光源,逐点、逐行、逐面快速扫描成像。因为激光束的波长较短,光束很细,所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力,大约是普通光学显微镜的3倍。 (五).按显微镜物镜的位置分正置和倒置显微镜 1、倒置显微镜是为了适应生物学、医学等领域中的组织培养、细胞离体培养、浮游生物、环境保护、食品检验等显微观察。由于上述样品特点的限制,被检物体均放置在培养皿(或培养瓶)中,这样就要求倒置显微镜的物镜和聚光镜的工作距离很长,能直接对培养皿中的被检物体进行显微观察和研究。因此,物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来,故称为”倒置显微镜”。倒置显微镜多用于无色透明的活体观察。如果用户有特殊需要,也可以选配其它附件,用来完成微分干涉、荧光及简易偏光等观察。倒置显微镜由于制作更加严密,价格也是比较贵的。目见倒置显微镜广泛应用于patch-clamp(膜片钳),transgeneICSI等领域。 (六).数码显微镜 1、数码显微镜又叫视频显微镜,它是将显微镜看到的实物图像通过数模转换,使其成像在计算机上。数码显微镜是将精锐的光学显微镜技术、先进的光电转换技术、普通的电视机完美地结合在一起而开发研制成功的一项高科技产品。从而,我们可以对微观领域的研究从传统的普通的双眼观察到通过显示器上再现,从而提高了工作效率。数码显微镜在观察物体时能产生正立的三维空间影像。立体感强,成像清晰和宽阔,又具有长工作距离,并是适用范围非常广泛的常规显微镜。它操作方便、直观、检定效率高,适用于电子工业生产线的检验、印刷线路板的检定、印刷电路组件中出现的焊接缺陷(印刷错位、塌边等)的检定、单板PC的检定、真空荧光显示屏VFD的检定等等,它将实物的图像放大后显示在计算机的屏幕上,可以将图片保存,放大,打印。
用倒置相差荧光显微镜能看到量子点吗?是什么样的,怎样与生物样品的荧光分看?有做过的大侠给发个图片看看吧
显微镜成象受各种象差的影响,显微镜的主要光学部件是物镜,而物镜有各种各样的型号,比如消色差物镜,平场物镜等等,这些物镜都是对应于要消除某种象差,从而提高成像质量的,例如消色差物镜是用来消除色差,平场物镜是用来消除场曲的.下面就介绍一下显微镜一般存在的象差一 色差(Chromatic aberration) 发生在多色光为光源的情况下,单色光不产生色差。白光由红 橙 黄 绿 青 蓝 紫 七种组成,各种光的波长不同 ,所以在通过透镜时的折射率也不同,这样物方一个点,在象方则可能形成一个色斑。消除方法:使用单色光(加入滤光片),,光学设计消除色差 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/02/200902180854_133784_1601358_3.jpg[/img]二 球差(Spherical aberration)球差是轴上点的单色相差,是由于透镜的球形表面造成的。球差造成的结果是,一个点成像后,不在是个亮点,而是一个中间亮 边缘逐渐模糊的亮斑。从而影响成像质量。消除方法:使用凸、凹透镜组合球差[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/02/200902180856_133785_1601358_3.jpg[/img] 三 慧差(Coma)慧差属轴外点的单色相差。轴外物点以大孔径光束成象时,发出的光束通过透镜后,不再相交一点,则一光点的象便会得到一逗点壮,型如慧星,故称"慧差"。 消除方法:使用轴向平行光 彗差 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/02/200902180857_133786_1601358_3.jpg[/img]四 象散(Astigmatism)象散也是影响清晰度的轴外点单色相差。当视场很大时,边缘上的物点离光轴远,光束倾斜大,经透镜后则引起象散。象散使原来的物点在成象后变成两个分离并且相互垂直的短线,在理想象平面上综合后,形成一个椭圆形的斑点。消除方法:通过复杂的透镜组合来消除。 五 场曲(Curvature of field)“象场弯曲”。当透镜存在场曲时,整个光束的交点不与理想象点重合,虽然在每个特定点都能得到清晰的象点,但整个象平面则是一个曲面。这样在镜检时不能同时看清整个相面,给观察和照相造成困难。研究用显微镜的物镜一般都是平场物镜,这种物镜已经矫正了场曲。 场曲[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/02/200902180858_133787_1601358_3.jpg[/img] 六 畸变(Distortion)前面所说各种相差除场曲外,都影响象的清晰度。畸变是另一种性质的相差,光束的同心性不受到破坏。因此,不影响象的清晰度,但使象与原物体比,在形状上造成失真。畸变[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/02/200902180859_133788_1601358_3.jpg[/img]
物镜是显微镜的核心光学部件,各个厂家其型号和规格名目繁多,下面来介绍一下分类,供大家参考。大致可以有以下四种分类方式: 1.按色差校正程度分类 (1)一般消色差物镜:这是最常见的物镜,尽管各厂家的标示不一样,但一般都有“Ach”字样。 (2)平场消色差物镜:一般这种物镜标有PLAN字样,这种物镜的视场平坦,非常适合显微照相,观察起来也比较舒适。(3)半复消色差物镜,一般带有FL字样,能校正红、兰两色的色差和球差。这种可用于荧光观察等,是比较高级的物镜。 (4)复消色差物镜:标有APO字样,是观察和显微照相用的一流物镜,它们的性能只受物理定律的限制。该物镜具有优良的修正性和极其高的数值孔径,所以在观察和显微照相术方面具有最大的分辨率、色彩纯度、对比度以及图象平直度。如奥林巴司 UPLAN SAPO 100X/1.40 OIL物镜。 2.按功能分类(1)相差物镜(Phase contrast),用来观察无色透明的标本或活细胞,倒置显微镜上使用广泛,一般带有PH标志,且字体用绿色。(2)DIC物镜,可以做DIC的物镜,一般要求半复消色差物镜,DIC观察无色样品或或细胞。(3)HMC物镜,标有HMC标志,一种类似相差物镜的物镜,观察效果有立体感比较强,但不能用于荧光观察。(4)偏光物镜,一般标有POL字样,这种物镜装配了克服应力设备,是专做偏光的物镜。(6)多功能物镜,有的厂家生产一种多功能物镜,比如可以同时做相差,DIC,荧光等,这种物镜要稍微贵些。一般带有U标志,比如奥林巴斯的”UPLFLN”物镜和蔡司的”EC PLAN –NEOFLUAR”系列物镜。 3.按工作距离分类 (1)普通物镜:工作距离可以看切片,但不能看培养皿。 (2)长工作距离物镜:一般有LD标志,例如奥林巴斯的LUCPLFLN-PH物镜和蔡司的LD-A-PLAN PH物镜。 这些物镜可以用于培养皿、培养瓶等容器的观察。工作距离高至10.6mm,并可以进行光学修正,适用于0~2mm厚度的盖玻璃,通常由修正环或特殊的玻璃盖帽完成修正。4.特殊用途物镜 (1)水浸式物镜,一般有W标志,这些水浸入式物镜同直立显微镜一起主要应用于生理学,如脑片等较厚样品的观察。奥林巴斯XLUMPLFL20×W 和蔡司ACHROPLAN 40X W都是浸水式物镜。 (2)TIRF用专用物镜,要求数值孔径要大,NA一般在1.45到1.65。如NIKON公司的APO TIRF 60X 1.49物镜。 (3)超级荧光物镜:这种物镜的荧光透过率非常高,物镜用于对离子位移进行定性和定量的分析以及用于特别关键的荧光技术(如人体染色体的研究以及细胞遗传学)。这些物镜的突出特点是它们对340nm起的波长有特别高的数值孔径和高传输率(340nm时约为70%!)。视场平直足以可以使用CCD相机。如蔡司的FLUAR 20X 物镜。 当然还有其他更特殊的物镜,比如金相显微镜用的无盖玻片物镜和反射暗视野物镜、超低倍物镜等。 5.物镜上有很多的参数标记,来帮助大家识别物镜的等级和功能。下面用NIKON的一款物镜做例子以解释物镜的重要参数: (1) NIKON ---制造商名称: 尼康公司 (2) PLAN APO---物镜的名称: 平场复消色差物镜 (3) 60X 放大倍数: 60倍 (4) 0.95 数值孔径: 0.95 (6) DIC M 功能: 可以做DIC (7) ∞/0.11-0.23 表示无限远筒长/盖玻片厚度 (8) WD 0.15 表示工作距离 d 物镜利用光线使被检物体第一次成像,因而直接关系和影响成像的质量和各项光学技术参数,是衡量一台显微镜质量的首要标准。所以在选择显微镜时不仅仅要选择主机的型号,也一定要仔细选择物镜,结合自己的实际用途考虑合适的物镜等级和功能.这样您就能买到称心的产品了.
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=48411]显微镜专用LED环形光源规格书[/url][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2007/04/200704091723_48412_1399248_3.jpg[/img]
工业显微镜和生物显微镜的区别,但就字面意思上能了解到它们最大的区别,就是用途不同,这里主要从其物镜上来说明它们的不同之处:物镜的鉴别能力可分为平面和垂直鉴别能力。物镜(objectivelens)物镜是决定光学显微镜基本性能及功能的最重要的光学单元。因此,为了满足各种需求和应用,我们研制出了有着最佳光学性能和功能(这对光学显微镜而言也是最重要的性能和功能)的物镜,推出了能满足不同使用目的多种物镜产品。 光学显微镜的用途大致分为“生物用”和“工业用”两大类。物镜也可以按照这两种用途,划分为“生物物镜用”物镜和“工业用”物镜。在工业用途中,一般是在金属矿物切片、半导体晶圆和电子零部件等标本没有被遮盖的状态下进行观察的。所以,工业显微镜用物镜采用了物镜前端和标本之间没有盖玻片状态的最佳光学系统设计。然而在生物用途中,一般是将生物标本放置在载玻片上,并从上面用盖玻片遮盖固定。由于生物用物镜需要透过盖玻片观察样本,所以采用了考虑到盖玻片的厚度(一般为0.17mm)的光学系统设计。 在这里说明生物显微镜和工业显微镜的物镜也是大有不同的,基本上物镜是按照用途、观察方法、倍率、性能(像差校正)等进行分类。其中,按照像差校正来分类的是显微镜物镜特有的分类方法。
相信很多显微镜采购者都还不是很清楚应该如何去选择适合的显微镜,而且我在平时也了解到很多客户一打电话进来,都会直接说要显微镜而没有很清楚自己要哪一种显微镜才是适合用的。针对这种情况,今天我倒想简单介绍一下在选购显微镜时应该如何去选择合适的供应商了。一、选择显微镜供应商时,您会遇到哪些风险?1 交货能力的风险。 2 货物质量控制的风险。 3 技术支持的风险。 4 售后服务的风险。对于显微镜的选购来说,好的供应商就是质量、售后、价格等一系列重要因素的保证。显微镜是经久耐用的精密光学仪器,其核心技术是光学技术和机械部位.这就要求有厂家有很强的技术实力和完善的售后服务. 现在市场上的显微镜的对外宣传的技术基本都一样,实际上质量相差很大,价格相差也大.有的甚至冒充著名厂家的牌子行骗.一个好的供应商能及时的交货,交出适合您使用的显微镜,能给您以质量和售后的保证,和这样的供应商合作无疑是愉快的,是一种享受。而一个不合适的供应商可能在产品价格上是低廉的,但是随之而来的就是产品供货时间的遥遥无期,产品质量的无保证,甚至连税票都无法出据,至于售后服务就更无法得到保障,而显微镜这种经久耐用的精密光学仪器的使用寿命是很长的,短则数年长则近十年,在这样长的时间内无售后保障将会给您带来一系列的麻烦和困扰。二:如何选择供应商?对供应商的考核方法,一般先就价格、品质、交货、协调等主要考核指标进行配分,比如价格占40%,品质占30%,交货占20%,协调占10%。建议现场考察,拿需要检测样品到公司来测试。俗话说"百闻不如一见",显微镜的种类很多,所以当自己选择显微镜的时候,最好是自己拿着样品在显微镜现场操作,亲自观看是否理想,是否可以满足要求。综合各个方面来决定。