色谱分离

各位有色谱方法开发经验的前辈：现有两个问题需请教1.对于高浓度主峰，峰宽很宽，有6分钟样子，在紧随其后有1杂质峰，与主峰分离度只有0.8，色谱条件除了色谱柱可以更换外，其他条件均不能改变，那么用何种色谱柱可以提高两者的分离度为1.5以上；2.哪类色谱柱更适合于分析高浓度化合物；谢谢各位赐教，不胜感激！

1、色谱长度色谱长度与分离度通常成正比。色谱柱越长，组分之间分辩效果越好，但色谱柱越长压降越大，而输入的压力是有限的。色谱柱过长会增大进出口压力比，相反会降低分离度。通常采用的柱长2m~4m，内径2mm，毛细管柱长度可达20m～150m，内径为0.2mm。2、色谱柱填料颗粒大小填料的粒子越细，由于表面积增加，分辩效果越好，分离度就越高。但是颗粒极细时可能会增大柱压降，也会起反作用。一般采用惰性、多孔的固体颗粒。多由硅藻土或玻璃珠制成，分析不同极性的微生物化合物，为了获得最适的分离条件，要求有不同固定相的载体。3、柱温气体在液体中的溶解度或在固体表面的吸附程度都随温度增高而降低，在气液色谱分析中，当超过一定温度时，静态的液体通常会从色谱柱中挥发掉，所以选择柱温时应考虑到样品的沸点。一般是略低于样品沸点的平均值。4、载气种类常用的载气有 氮气、氢气等。其中氢气、氦气的分子量较小，有利于提高分析速度，但浓度较高的介质易在其间形成扩散，影响分离度，所以在实际测量中氢气、氦气一般都用在介质浓度较低的区域并提高其流速，减少扩散的影响。5、载气流速介质在固定相上的滞留时间，主要取决于介质自身的特性(挥发性，极性等)和载气的流速。所以流速快慢直接影响分离度。

氢型，钙型，钾钠，铵型阳离子色谱的分离特性，不同色谱填料的分离效果（文献资料最好）

在生物大分子纯化分析特别是蛋白质纯化分析中，色谱是非常重要而且常用的一种技术。 一、凝胶过滤　　凝胶过滤又叫分子筛色谱，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤色谱柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。 二、离子交换色谱　　离子交换色谱是在以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。 三、吸附色谱　　1、 吸附柱色谱　　吸附柱色谱是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种色谱方法。 2、 薄层色谱　　薄层色谱是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种色谱方法。这种色谱方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，然后按纸色谱操作进行展层。 3、 聚酰胺薄膜色谱　　聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。色谱时，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，就能导致分离物质达到分离目的。　　四、 亲和色谱 　　亲和色谱是根据生物大分子和配体之间的特异性亲和力，将某种配体连接在载体上作为固定相，而对能与配体特异性结合的生物大分子进行分离的一种色谱技术。亲和色谱是分离生物大分子最为有效的色谱技术，分辨率很高。 亲和色谱的原理与众所周知的抗原一抗体、激素一受体和酶一底物等特异性反应的机理相类似，每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底物的反应中，特异的废物（S''）才能和一定的酶（E）结合，产生复合物（E－S''）一样。在亲和色谱中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力，并产生复合物。而亲和色谱与酶一底物反应不同的是，前者进行反应时，配体（类似底物）是固相存在；后者进行反应时，底物呈液相存在。实质上亲和色谱是把具有识别能力的配体L（对酶的配体可以是类似底物、抑制剂或辅基等）以共价键的方式固化到含有活化基团的基质M（如活化琼脂糖等）上，制成亲和吸附剂M－L，或者叫做固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。 因此，当把围相载体装人小色谱柱（几毫升到几十毫升床体积）后，让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中对配体有亲和力的物质S就可借助静电引力、范德瓦尔力，以及结构互补效应等作用吸附到固相载体上，而无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来，并形成了第一个色谱峰。然后，恰当地改变起始缓冲 液的PH值、或增加离子强度、或加人抑③剂等因子，即可把物质S从固相载体上解离下来，并形成了第M个色谱峰（见图6－2）。显然，通过这一操作程序就可把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固相载体具有亲和力（其大小有差异）时，采用选择性缓冲液进行洗脱，也可以将它们分离开。用过的固相载体经再生处理后，可以重复使用。　　上面介绍的亲和色谱法也是特异性配体亲和色谱法。另外还有通用性配体亲和色谱法。这两种亲和色谱法相比，前者的配体一般为复杂的生命大分子物质（如抗体、受体和酶的类似底物等），它具有较强的吸附选择性和较大的结合力。而后者的配体则一般为简单的小分子物质（如金属、染料，以及氨基酸等），它成本低廉、具有较高的吸附容量，通过改善吸附和脱附条件可提高色谱的分辨率。　　五、聚焦色谱　　聚焦色谱也是一种柱色谱。因此，它和另外的色谱一样，照例具有流动相，其流动相为　多缓冲剂，固定相为多缓冲交换剂。　　聚焦色谱原理可以尝试从PH梯度溶液的形成、蛋白质的行为和聚焦效应三方面来阐述。 1、PH梯度溶液的形成　　在离子交换色谱中，PH梯度溶液的形成是靠梯度混合仪实现的。例如，当使用阴离子 剂进行色谱时，制备PH由高到低呈线性变化的梯度溶液的方法是，在梯度仪的混合室（这色谱柱者）中装高PH溶液，而在另一室装低PH极限溶液，然后打开色谱柱的下端出口，让洗脱液连续不断地流过柱体。这时从柱的上部到下部溶液的PH值是由高到低变化的。而在聚焦色谱中，当洗脱液流进多缓冲交换剂时，由于交换剂带具有缓冲能力的电荷基团，故PH梯度溶液可以自动形成。 　　2．蛋白质的行为　　蛋白质所带电荷取决于它的等电点（PI）和色谱柱中的PH值。当柱中的PH低于蛋白质的PI时，蛋白质带正电荷，且不与阴离于交换剂结合。而随着洗脱剂向前移动，固定相中的PH值是随着淋洗时间延长而变化的。当蛋白质移动至环境PH高于其PI时，蛋白质由带正电行变为带负电荷，并与阴离子交换剂结合。由于洗脱剂的通过，蛋白质周围的环境PH 再次低于PI时，它又带正电荷，并从交换剂解吸下来。随着洗脱液向柱底的迁移，上述过程将反复进行，于是各种蛋白质就在各自的等电点被洗下来，从而达到了分离的目的。 　　不同蛋白质具有不同的等电点，它们在被离子交换剂结合以前，移动之距离是不同的，洗脱出来的先后次序是按等电点排列的。

操作条件对于色谱分离有很大影响。 柱长，柱内径：一般讲，柱管增长，可改善分离能力，短则组分馏出的快些；柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。分析用柱管一般内径为3-6毫米，柱长为1-4米。 柱温：是一个重要的操作变数，直接影响分离效能和分析速度。选择柱温的根据是混合物的沸点范围，固定液的配比和鉴定器的灵敏度。提高柱温可缩短分析时间；降低柱温可使色谱柱选择性增大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高，柱寿命延长。一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温为较合适，对易挥发样用低柱温，不易挥发的样品采用高柱温。 载气流速：载气流速是决定色谱分离的重要原因之一。一般讲流速高色谱峰狭，反之则宽些，但流速过高或过低对分离都有不利的影响。流速要求要平稳，常用的流速范围每分钟在10-100亳升之间。 固定相：固定相是由固体吸附剂或涂有固定液的担体构成。（1）固体吸附剂或担体粗细：一般采用40-60目、60-80目、80-100目。当用同等长度的柱子，颗粒细的分离效率就要比粗的好些。（2）固定液含量：固定液含量对分离效率的影响很大，它与担体的重量比一般用15%-25%。比例过大有损于分离，比例过小会使色谱峰拖尾。 进样：一般讲进样快，进样量小，进样温度高其分离效果好。对进液体样，速度要快，汽化温度要高于样品中高沸点组分的沸点值，一次汽化，保证色谱峰形不致展宽、使柱效高。当进样量在一定限度时，色谱峰的半峰宽是不变的。若进样量过多就会造成色谱柱超载。一般讲柱长增加四倍，样品的许可量增加一倍。对于常规分析，液体进样量为1-20微升；气体进样量为0.1-5毫升。

优化液相色谱（HPLC）的分离效果是确保分析结果准确性和重现性的关键步骤。以下是一些常用的策略来优化HPLC分离效果： 1. 选择合适的色谱柱： 根据待分离化合物的性质选择合适的色谱柱类型（如反相色谱柱、离子交换柱、亲和色谱柱等）。 色谱柱的尺寸（内径、长度）、填料粒度和类型都会影响分离效果。 2. 调整流动相组成： 改变流动相的组成，如溶剂比例、pH值、离子强度等，可以优化分离。 使用缓冲液可以帮助控制pH值，改善峰形和分离度。 3. 优化梯度洗脱程序： 设计合适的梯度洗脱程序，使各组分在色谱柱上逐渐分离。 避免过快的梯度变化，以免造成峰展宽或保留时间的不稳定。 4. 调整流速： 流速影响色谱柱的柱压、分离效率和保留时间。通常，降低流速可以提高分离度，但会增加分析时间。 5. 优化柱温： 控制色谱柱的温度可以改善分离度，减少峰展宽，并提高保留时间的重现性。 6. 改进样品制备： 确保样品纯净，避免杂质干扰。 使用适当的样品制备方法，如固相萃取、液-液萃取等，以富集目标化合物或去除干扰物质。 7. 使用合适的检测器： 根据分析物的性质选择合适的检测器（如紫外检测器、荧光检测器、电喷雾检测器等）。 以下是一些具体的优化步骤： 初步分离：首先使用等度洗脱或简单的梯度洗脱程序来观察样品的初步分离情况。 峰优化：针对特定峰，调整流动相的组成和梯度程序，改善峰形和分离度。 系统适应性：在确定最佳条件下，测试系统适应性，确保分离效果在不同时间、不同批次之间稳定。 方法验证：对优化后的方法进行验证，包括专属性、线性、范围、准确度、精密度和耐用性等参数。 通过上述步骤，可以逐步优化[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱的分离效果，达到最佳的分析性能。

液相色谱中死时间几种测定方法1：有响应的溶剂出峰时间为死时间。2：进样后的阀切换峰，对应的时间为死时间。3：工作站中输入色谱柱的空余体积或孔隙率，自动计算。（对于C18柱，也可以用硝酸钠或硫脲等在色谱柱上完全不保留组分的出峰时间来测定死时间。）影响分离度的因素有三个因素控制两个色谱峰之间的分离度——容量因子，选择性，柱效容量因子反映样品分子和固定相及流动相之间的作用力，选择性是说明色谱系统区分两个或多个色谱峰的能力，柱效与色谱峰的宽度有关，很明显要达到一定的分离度，宽色谱峰要比窄色谱峰需要更大的分离度选择性。理论塔板数越高柱效越高，柱效的高低受柱内效应和柱外效应的影响。选择性是固定相区分两个被分离样品组分的能力，用容量因子之比进行计算，它是两个被分离色谱峰顶点距离的量度，如果选择性是Ⅰ，则两个组分完全不能分离。选择性数值越高，分离越好。由于选择性取决于被分离物的物理和化学结构，流动相和固定相，流动相组成，PH，色谱柱温度，流动相添加剂，因此，尽量优化实验条件提高选择性以降低成本。容量因子为物质的特性，当分析条件一定时，容量因子为固定值。溶剂的洗脱强度与其极性有关：反相色谱：溶剂的极性越强，洗脱强度越弱。正相色谱：溶剂的极性越强，洗脱能力越强。（注意：不可以使用纯水作为正想色谱的流动相）一般样品分析要求：容量因子大于2小于5

美国赛分科技（Sepax Technologies Inc. ）致力于开发生产化学与生物分离科学、生物表面科学和蛋白质组学研究（proteomics）领域的产品，包括高分辩率的高效液相仪器、色谱柱、配件和用于DNA测序和蛋白质分离的新型毛细管涂布材料与毛细管电泳仪，以及为微芯片分离和DNA、蛋白质微序列提供最好的表面技术与分离技术。 Sepax Technologies Inc.创新的尺寸排阻色谱柱（凝胶色谱柱）的填料是以刚性的高纯度球型硅胶为基质，利用独特的表面修饰技术在表面通过共价化学键合亲水性基团而成，该固定相具有亲水性并且是中性的，可以消除与生物大分子（特别是蛋白质）的非特异性相互作用，Sepax Nanofilm SEC系列尺寸排阻色谱柱具有分离的高效率与高选择性。pH适用范围为2-8.5，可使用与水完全互溶的有机溶剂，如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。Sepax Nanofilm SEC系列尺寸排阻色谱柱适用于分离蛋白质和多肽类生物大分子样品以及天然与合成高分子物质。Sepax CNT SEC尺寸排阻色谱柱可以用于分离制备纳米物质，如碳钠米管、钠米棒。流动相不仅可以用缓冲溶液，也可以使用有机溶剂，如乙腈、甲醇、四氢呋喃等。 Sepax Proteomix系列离子交换色谱柱的填料是以刚性、球形、化学和机械性能都非常优异的高度交联的聚苯乙烯-二乙烯基苯（PS/DVB）聚合物为基质、树脂表面涂覆一层纳米厚度的中性的亲水性聚合物薄膜、在亲水性薄层的表面通过共价化学键合致密且均匀的离子交换功能基团而成。亲水性的薄层完全覆盖疏水的树脂表面，可以消除与生物分子之间的非特异性结合作用，从而达到高效分离，并且可以获得非常高的回收率。PS/DVB 树脂分为无孔与有孔两种。Sepax Proteomix离子交换固定相有键合磺酸根的强阳离子交换（SCX）、羧酸根的弱阳离子交换（WCX）、季胺的强阴离子交换（SAX）、叔胺的弱阴离子交换（WAX）四种。Sepax Proteomix系列离子交换色谱柱可以耐受高温（80℃）与高压（4,000psi），其pH适用范围为2-12，适用于分离蛋白质、低聚核苷酸和多肽类生物样品。流动相的选择范围广，可以是水，也可以是乙腈、甲醇等有机溶剂，还可以是缓冲盐溶液，如磷酸盐、tris、醋酸盐等。 Sepax Technologies Inc.已开发出独特的表面涂布技术，使聚合反应仅在表面上发生，可用于涂布目前市场上最细的毛细管柱（直径小于5μm）。此独特的技术能够在毛细管的内表面均一涂布厚度可控（1～50nm）的中性、阳性或阴性聚合物薄层。这些涂布的毛细管柱具有可控或可逆转的EOF，在毛细管电泳中是一高度可靠和高效率的分离工具，它已广泛应用于高通量分析中，如蛋白质组学研究。 在生物化学分离领域，Sepax Technologies Inc.也为小分子分离提供完整系列的、高质量的正相与反相HPLC柱，包括C18、C8、C4、C2、苯基柱、腈基柱、氨基柱、硅胶柱、混合型的离子交换柱HP-SCX与SAX以及宽pH范围的聚合物填料（poly-PS/DVB）柱等。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=19417]产品资料[/url]

1. 是不是所以的混合物均可用柱色谱分离？柱色谱是万能分离方法吗？2.含有金属物质的分离一般用什么样的溶剂较好？

反相色谱的分离原理？

[color=#444444]各位大佬，有机磷盐能用柱色谱进行分离吗。[/color]

氢型，钙型，钾钠，铵型阳离子色谱的分离特性，不同色谱填料的分离效果（文献资料最好）

为什么说色谱分离技术的分离效率最高

操作条件对于色谱分离有很大影响。 柱长，柱内径：一般讲，柱管增长，可改善分离能力，短则组分馏出的快些；柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。分析用柱管一般内径为3-6毫米，柱长为1-4米。 柱温：是一个重要的操作变数，直接影响分离效能和分析速度。选择柱温的根据是混合物的沸点范围，固定液的配比和鉴定器的灵敏度。提高柱温可缩短分析时间；降低柱温可使色谱柱选择性增大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高，柱寿命延长。一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温为较合适，对易挥发样用低柱温，不易挥发的样品采用高柱温。 载气流速：载气流速是决定色谱分离的重要原因之一。一般讲流速高色谱峰狭，反之则宽些，但流速过高或过低对分离都有不利的影响。流速要求要平稳，常用的流速范围每分钟在10-100亳升之间。 固定相：固定相是由固体吸附剂或涂有固定液的担体构成。（1）固体吸附剂或担体粗细：一般采用40-60目、60-80目、80-100目。当用同等长度的柱子，颗粒细的分离效率就要比粗的好些。（2）固定液含量：固定液含量对分离效率的影响很大，它与担体的重量比一般用15%-25%。比例过大有损于分离，比例过小会使色谱峰拖尾。 进样：一般讲进样快，进样量小，进样温度高其分离效果好。对进液体样，速度要快，汽化温度要高于样品中高沸点组分的沸点值，一次汽化，保证色谱峰形不致展宽、使柱效高。当进样量在一定限度时，色谱峰的半峰宽是不变的。若进样量过多就会造成色谱柱超载。一般讲柱长增加四倍，样品的许可量增加一倍。对于常规分析，液体进样量为1-20微升；气体进样量为0.1-5毫升

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=171584]蛋白质的多维色谱分离[/url]蛋白质的多维色谱分离通常生物体内提取的蛋白质样品成分复杂，应用多维色谱进行分离的方法必将流行。文章简单介绍了多维色谱分离的理论，算是一个入门材料吧。

色谱分离的原理

各位大大： 混甲酚的分离选用什么样的色谱柱呢？我现在有一款备选的FLB-cd-5025-1 这款色谱柱好贵12000一根，又没有价格适中一点的色谱柱型号推荐推荐啊！谢谢各位大大！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09509.gif

离子色谱的分离机理主要是离子交换，有3种分离方式，它们是高效离子交换色谱（HPIC）、离子排斥色谱 （HPIEC）和离子对色谱 （MPIC）。那选用色谱柱是否要根据这个来呢？

求高手指点： 目标分离物：丁酮&乙酸乙酯目前使用色谱柱为：Elite-624 PE 600参数：柱子：50摄氏度 保留9min 以4摄氏度/分 升温至180 载气：N2目前还未能将其分离，保留时间一致；可有高人做过此分离，恳请分享下参数！ [em09511]

根据三种不同分离机理，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]可分为高效离子交换色谱（HPIC），离子排斥色谱（HPIEC）和离子对色谱（MPIC）。用于三种分离方式的柱填料的树脂骨架基本上都是苯乙烯－二乙烯基苯的共聚物。HPIC用低容量的离子交换树脂，HPIEC用高容量的树脂，MPIC用不含离子交换基团的多孔树脂。[em21]

色谱分离模式研究进展 高效液相色谱法（HPLC）是分离科学中最常用的方法之一，已经广泛应用于生命科学、环境监测、食品安全、脂质组学、蛋白质组学、药物分析等领域。本文总结与归纳了色谱分离模式研究进展。 目前液相色谱常见的分离模式包括反相液相色谱（RPLC）、正相液相色谱（NPLC）、亲水相互作用色谱（HILIC）、离子交换色谱（IEC）、尺寸排阻色谱（SEC）等。在单一的分离模式下，分析物与固定相之间往往存在一种作用力或以一种作用力为主。以最常用的RPLC为例，其对于疏水性物质具有很好的分离效果，但却不适用于强极性和离子型物质的分离分析。近年来，混合模式色谱（MMC）因其具有高选择性和高负载能力而受到越来越多的关注。基于MMC的多保留机制，可以在单一色谱柱中实现多模式分离分析，可满足多分离应用的目的。近年来报道的混合模式色谱包括RPLC/IEC、RPLC/HILIC、HILIC/IEC以及RPLC/HILIC/IEC等。 Shi等以不同比例甲基三甲氧基硅烷（MTMS）和巯丙基三甲氧基硅烷（MPTMS）功能化的聚倍半硅氧烷介孔微球为基础，通过“硫醇-烯”点击化学反应，制备了具有不同氨基密度的新型RPLC/IEC混合模式固定相，与硅胶基氨基键合柱（S-NH2）相比，合成的新型氨基固定相在高碱性条件下表现出更高的水热稳定性和更长的使用寿命，适用于极性药物和离子型药物的分离，并成功应用于复方药物中多种物质的同时分离。 Wei等以2,4,6-三（4-氨基苯基）-1,3,5-三嗪（TAPT）和2,5-二羟基对苯二甲醛（DHTA）为单体构建了亚胺连接的COF材料，进一步将其键合在氨基化硅胶（SiO2-NH2）上，制备了新型多功能固定相TAPT-DHTA-COF@SiO2（图1）。设计的TAPT-DHTA-COF@SiO2色谱固定相具备RPLC/HILIC混合分离模式，能够有效分离疏水性苯基酮、邻苯二甲酸酯和类固醇激素。此外，TAPT-DHTA-COF中的极性氨基和羟基基团也提高了对于亲水性核苷/碱基的分离选择性。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410102227049704_3414_5389809_3.jpeg图1 RPLC/HILIC混合模式TAPT-DHTA-COF@SiO2色谱固定相[/align]Fig. 1 RPLC/HILIC mixed mode TAPT-DHTA-COF@SiO2 chromatographic stationary phase Bo等使用4-苯乙烯磺酸钠（NASS）和甲基丙烯酸二甲氨基乙酯（DMAEMA）为功能单体，采用表面引发原子转移自由基聚合（SI-ATRP）法将聚（NASS-co-DMAEMA）键合在二氧化硅表面，制备了HILIC/IEC混合模式色谱固定相，并实现了核苷、β-激动剂和红花注射液的分离。此外，通过调控NASS和DMAEMA的比例，可以实现固定相电荷和极性的调节，DMAEMA还赋予了色谱柱温敏响应特性，可进一步改善分离选择性。 Chen等以1,3,5 -三甲酰基间苯三酚（Tp）和二羟基联苯胺（BD-(OH)2）为前驱体，采用原位生长法制备了SiO2@TpBD-(OH)[font='times new roman']2色谱固定相。填充的SiO2@TpBD-(OH)2色谱柱具有RPLC/HILIC/IEC三种保留机制，与传统的单模式色谱柱相比，对苯系物、多环芳烃、核苷类、碱类和酸性有机化合物具有良好的选择性和较高的分离性能，此外，SiO2@TpBD-(OH)2色谱柱可实现湖泊水体中多种有机污染物的基线分离，在环境检测中具有一定的应用潜力。 Wang等采用表面引发自由基聚合法，将带有双键的阳离子和阴离子组成的ILs与二氧化硅材料结合在一起，制备了固定相PIm-Br和PIm-VBS，可用于RPLC/HILIC/IEC混合模式分离分析，最高柱效可达83,810 N/m。Zeng等使用马来海松酸甲基丙烯酸缩水甘油酯（MPAG）和聚乙烯亚胺（PEI）作为配体，制备了Sil-MPAG-PEI色谱固定相。由于PEI的存在，该材料同时表现出阴离子交换和亲水相互作用特性。在不同流动相条件下，可以[back=#ffffff]从RPLC模式切换到RPLC/HILIC/IEC混合模式。Sil-MPAG-PEI可提供多种相互作用，包括疏水、π-π、氢键、亲水、离子交换和静电相互作用，可以实现核苷/碱基类、黄酮类、烷基苯类、酚类、苯胺类和多环芳烃类物质的高选择性分离，并具有良好的稳定性。

要正确地选择色谱分离方法，首先必须尽可能多的 了解样品的有关性质，其次必须熟悉各种色谱方法的主要特点及其应用范围。选择色谱分离方法的主要根据 是样品的相对分子质量的大小，在水中和有机溶剂中的溶解度，极性和稳定程度以及化学结构等物理、化学性质。一、相对分子质量对于相对分子质量较低（一般在200以下），挥发性比较好，加热又不易分解的样品，可以选择[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法进行分析。相对分子质量在200 ~ 2000的化合物，可用液固吸附、液-液分配和离子交换色谱法。相对分子质量高于2000，则可用空间排阻色谱法。二、溶解度水溶性样品最好用离子交换色谱法和液液分配色谱法；微溶于水，但在酸或碱存在下能很好电离的化合物，也可用离子交换色谱法；油溶性样品或相对非极性的混合物，可用液-固色谱法。三、化学结构若样品中包含离子型或可离子化的化合物，或者能与离子型化合物相互作用的化合物（例如配位体及有机螯合剂），可首先考虑用离子交换色谱，但空间排阻和液液分配色谱也都能顺利地应用于离子化合物；异构体的分离可用液固色谱法；具有不同官能团的化合物、同系物可用液液分配色谱法；对于高分子聚合物，可用空间排阻色谱法。

影响色谱分离度的因素有哪些？各位大侠支招！

气相色谱和液相色谱、离子色谱、毛细管电泳在分离原理和分离效果上有什么区别与联系？

[color=#444444]两个极性相近的物质，想要调整实验条件，把色谱峰分离开来，流动相乙腈，0.1%的甲酸水溶液，C18柱，[color=#444444]分离不好，可以分的开，就是两个峰很近，保留时间相差0.8min。[/color][/color]

[color=#444444]液相色谱改变流动相配比后需要重新走基线吗？液相峰分不开可以采取哪些措施来分离？[/color]

色谱分离基本方程的含义是什么，它对色谱分离有什么指导意义？

反相色谱分离原理