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荧光定量仪

仪器信息网荧光定量仪专题为您提供2024年最新荧光定量仪价格报价、厂家品牌的相关信息, 包括荧光定量仪参数、型号等,不管是国产,还是进口品牌的荧光定量仪您都可以在这里找到。 除此之外,仪器信息网还免费为您整合荧光定量仪相关的耗材配件、试剂标物,还有荧光定量仪相关的最新资讯、资料,以及荧光定量仪相关的解决方案。

荧光定量仪相关的论坛

  • 如何选择荧光定量PCR仪

    在基因扩增仪的几种类型中,荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确,受到越来越多的分子生物学研究者青睐。   实验者要购买一款合适的荧光定量PCR,需要考虑各方面的因素,首先要分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算,更要详细研究各种各样的宣传资料。   面对各种不同性能的产品,我们该如何选择呢?   首先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区:   误区一:荧光定量PCR仪无需梯度功能   对于使用染料法的定量PCR反应,虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值),但运用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差异会很大。   引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化,对于特殊片断,经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果,退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响,因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。   梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化,根据结果,一步就可以摸索出最适合的反应条件。   不单是退火温度,连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要,因为Taq和校正酶的最佳反应温度可能有显著差异,优化延伸温度就显得很重要。   使用有梯度功能的荧光定量PCR可以一次完成以往多次实验才能完成的优化过程,简化了摸索 PCR反应条件的繁琐实验,既节省实验时间提高效率,又节省实验成本。   误区二:仪器通道越多越好   随着PCR技术的成熟运用,多重扩增越来越热闹,荧光定量PCR仪也不能幸免。   从最初ABI公司推出的单通道荧光定量PCR仪发展到如今各个厂家都推出4通道、5通道甚至6通道荧光定量PCR仪,眼花缭乱的选择让人无所适从,就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。   在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时,为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye ,这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。   所以,真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个,而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。   有的荧光定量PCR的检测通道是只为自已厂家的专用的荧光染料或试剂开放的,有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。   在购买前确认荧光定量PCR仪器的有效检测通道尤为重要,不能单单只听宣传。   考虑多重荧光定量PCR的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发,多重PCR并非人人适用、人人可用,因为它使实验复杂化了。   当我们看清误区,在选择一款最适合自己需求的荧光定量PCR仪时,我们又该关注些什么呢?

  • 【原创】OUM-智能Ⅱ型近红外纸张定量水分测量仪

    在造纸行业中,定量水分测量仪是纸张生产过程中监测及控制系统的眼睛,红外定量水分测量仪是一种用于造纸生产线上进行在线连续动态检测纸张定量、水分的专用仪表。仪表采用一个传感器同时测量纸张定量水分两个参数,克服了传统的同位素测量仪对周围环境造成放射性污染,危害人体健康的缺点。仪表传感器采用多光束测量技术,测量面积大,克服了色差变化,环境因素变化对测量精度的影响,从而保证了测量结果的准确性。仪器采用红外线测量原理,不受静电影响。信号全数字化处理,仪器采用进口器件,优化设计,从而进一步保证了工作的稳定性和可靠性。另外,仪表具有四十五种标定曲线存储功能,使得使用更加方便。方便的标准物理量标定,提高了仪表测量的准确性。同时,仪表还具有自检功能和超限报警功能,使用和维护更加方便。仪表配有0~10mA, 4~20mA标准输出接口,还配有国际标准的RS485标准串行输出接口。便于与控制系统及其它记录设备连接。一、仪表结构仪表分为传感器和信号处理两大部分。传感器分为发射探头和接收探头。探头安装于造纸生产线上,主要完成测量光信号的生成、光电信号的转换及信号放大。信号处理单元安装于控制室或其它便于观察的地方,主要完成将探头接收到的数据信号处理,以数字方式显示出被测纸张的定量、水分值。同时,输出信号给控制系统。 发射探头234mm×153mm×266mm传感器结构尺寸: 接收探头232mm×153mm×144mm信号处理单元结构尺寸: 356mm×160mm×400mm二、定量水分测量仪性能指标:★、测量范围:纸页定量10~500g/㎡★、定量测量精度Q: 10g/㎡≤纸页定量100g/㎡ Q ≤±0.5g 100 g/㎡≤纸页定量500g/㎡ Q ≤±1%★、水分测量精度Q′:纸页定量200 g/㎡ Q′≤±0.2% 200 g/㎡≤纸页定量500g/㎡ Q′≤±0.5%★、测量响应时间:t≤50ms★、输出接口配置: 0 ~10mA、 4~ 20mA标准输出信号标准RS485串行通信接口三、仪器适用范围:★、环境要求:环境温度 ≤ 55℃ 环境湿度 ≤ 80%★、工作电压:~220V±10% 50Hz (最好使用稳压电源)★、消耗功率:30W四、仪器配置 发射探头主机:传感器 接收探头信号处理单元 附件:通信电缆(长度根据厂家使用要求而定)电源电缆导纸辊(为防止打断纸页而特殊设计)精密净化交流稳压电源(选配)部分标准件(紧固件)轴流风机(两台)输出配置:标准接口0~10mA 或 4~20mA 标准RS485串行接口五、安装要求将传感器的发射探头与接收探头分别安装在纸张的两侧,发射头和接收头之间的距离为10~15mm,发射探头和接收探头的相对位置不能改变,否则,应对仪表重新标定。六、仪器特点1、仪器电气性能特点:仪器内部所使用的电子元件,都是经过严格老化处理及筛选,其它光学零件终身无需调校。这样使得仪器能长期稳定的工作,使用户使用成本极低。仪器探头为铸铝外壳,其密封性能良好,可安装于恶劣的生产现场。2、仪器可组成检测系统该仪器是一种智能仪器,可提供准确的测量信号,其探头也可作为最基本的测量单元构成一个检测系统。检测系统将探头输出的测量信号通过计算机显示出被测纸页水分的变化情况,系统可将各测量点的数据贮存、打印。3、本仪器安装方便,成本低,并克服了传统的同位素测量仪对周围环境造成放射性污染,危害人体健康的缺点。所以,被广泛应用于造纸行业。七、计算机远程实时动态监控系统该系统将红外线定量水分测量仪输出的定量、水分信号及生产过程中的其它参数传输给计算机。计算机采集这些参数,经过专用程序处理,并将这些参数变化曲线按时间顺序在计算机上显示出来,并能将显示值与曲线存贮起来,以备调用。这样,管理人员办公室可通过计算机随时了解生产过程中的纸张定量、水分变化情况及整个纸机的生产状况,更加方便地指导生产,使产品的产量、质量得以提高。

  • 【求购】求购微量核酸定量仪

    公司欲购买微量核酸定量仪一台,请大家帮个忙,有在使用这个仪器的,可以把仪器牌子型号说一声,给俺参考下http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09502.gif。仪器厂家销售商也可以联系15095049758

  • 荧光定量PCR仪选择要点及误区

    荧光定量PCR仪选择要点及误区 荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确,受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天,也许对你来说,最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算,更要详细研究各种极富诱惑力的宣传资料。面对各种不同性能的产品,您又该如何选择呢? 首先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区:

  • 化学计量仪器分类及特点

    化学计量仪器分类 化学计量仪器是指检测物质的组成、结构和某些物理特性的仪器,目前已在工业、农业、国防、科研、食品、制药、环境监测、医疗卫生及资源勘探等领域广泛应用。根据化学检测理论和制造原理,大致可分为以下几类: 1.电化学仪器 它根据被测试样溶液的电化学性质及其变化,测量溶液的电位、电导、电量、电流等电化学参量与被测物质含量之间的定量关系。根据所测电化学参数的不同,常用电化学仪器有酸度计、离子计、电导率仪、电解仪、电位滴定仪、库仑仪、极谱仪等。 2.分子光谱仪器 它根据物质的最小微粒分子与辐射能发生相互作用后,分子吸收不同辐射频率的能量而发生不同能级跃迁,产生吸收或散射光的波长或强度信号来检测物质含量或确立复杂化合物结构。这类仪器种类、型号及规格很多,且国内外经典的仪器也很多,如可见分光光度计、单光束、双光束、紫外可见分光光度计、光栅分光光度计、双光束近红外分光光度计、傅立叶红外光谱仪、荧光分光光度计、磷光光谱仪等。 3.原子光谱仪器 它是依据组成物质分子的原子吸收能量以后,由基态跃迁到激发态,引起辐射光强度改变,而特殊光谱的强度又与发光物质的含量存在定量关系的原理设计制造的。这一类仪器又可分为原子发射光谱仪(如看谱仪、摄谱仪、光电直续光谱仪、电感耦合等离子体发射光谱仪等)、原子吸收光谱仪(如多种型号的原子吸收分光光度计、原子荧光光谱仪、X-射线荧光光谱仪等)。 4.波谱类仪器 它是依据物质在外界磁场作用下,呈现出一定磁特性的原理制造的,如核磁共振波谱仪、电子顺磁共振波谱仪等。磁式仪器通过测定原子核在频率逐渐变化的磁场中的强度就可测定不同原子核吸收的频率,从而获得有关化合物分子结构、化学位移等相关信息。 5.色谱仪 它是依据物质在固定相和流动相之间分配性质的差异,使混合物中的多种成分相互分离、分析和制备的仪器。色谱仪国内外的型号和规格繁多,且自动化程度高。如国内的SP、GC、SQ等系列气相色谱仪,LC、SY等系列液相色谱仪,IC系列离子色谱仪等。 6.质谱仪器 它是通过将待测物质分子离子化,然后按质荷比(m/z)对这些离子进行分离和检测的一种仪器,如质谱仪、ICP质谱仪、气相色谱-质谱联用仪等。 7.气体分析仪器 这类仪器种类繁多,其原理各不相同。它是依据气体试样与光、电、磁、热相互作用后,气体分子发生物理化学特性变化的原理而设计制造的。这一类仪器在石油、化工、环境监测、安全防护等方面广泛应用,如光干涉型甲烷测定仪,汽车排放气体测试仪,一氧化碳、二氧化碳红外线气体分析器,硫化氢气体分析仪等。 8.物理特性仪器 这类仪器制造原理与检测参数各异。如各种类型的黏度计、热量计、熔点仪、浊度仪、露点仪、温度仪、水分仪等。

  • 【云唐】atp测量仪是什么仪器

    [img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403070915305401_3453_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]  ATP测量仪是一种用于测量环境中ATP(三磷酸腺苷)浓度的仪器。ATP是生物体内能量转换的重要分子,广泛存在于各种生物体内,包括细菌、病毒、真菌等微生物。因此,ATP测量仪通常被用于环境监测、食品安全、医疗卫生等领域,以检测微生物的存在和数量。  ATP测量仪的工作原理是基于荧光素酶和荧光素的反应。荧光素酶能够催化ATP与荧光素发生反应,产生荧光信号。荧光信号的强度与ATP的浓度成正比,因此可以通过测量荧光信号的强度来推算ATP的浓度。  ATP测量仪具有快速、简便、灵敏度高、可重复性好等优点,因此在环境监测、食品安全、医疗卫生等领域得到了广泛应用。在环境监测方面,ATP测量仪可以用于检测水、土壤、空气等环境中的微生物污染情况,为环境保护提供科学依据。在食品安全方面,ATP测量仪可以用于检测食品中的微生物污染情况,保障食品的安全性和卫生质量。在医疗卫生方面,ATP测量仪可以用于检测医疗器械、手术室、病房等环境中的微生物污染情况,为医疗卫生提供有效的监测手段。  除了以上应用领域,ATP测量仪还可以用于其他领域,如生物研究、制药工业等。在生物研究方面,ATP测量仪可以用于研究细胞代谢、微生物生长等方面的问题。在制药工业方面,ATP测量仪可以用于检测药品生产过程中的微生物污染情况,确保药品的质量和安全性。  总之,ATP测量仪是一种重要的环境监测仪器,具有广泛的应用前景。随着科学技术的不断发展,ATP测量仪的性能和应用范围也将不断提高和扩大,为环境保护、食品安全、医疗卫生等领域的发展提供有力的支持。

  • 【分享】X荧光光谱仪定量分析

    X射线荧光光谱法进行定量分析的根据是元素的荧光X射线强度Ii与试样中该元素的含量Ci成正比:Ii=Is×Ci式中Is为Ci=100%时,该元素的荧光X射线的强度。根据上式,可以采用标准曲线法、增量法、内标法等进行定量分析。但是这些方法都要使标准样品的组成与试样的组成尽可能相同或相似,否则试样的基体效应是指样品的基本化学组成和物理化学状态的变化对X射线荧光强度所造成的影响。化学组成的变化,会影响样品对一次X射线和X射线荧光的吸收,也会改变荧光增强效应。例如,在测定不锈钢中Fe和Ni等元素时,由于一次X射线的激发会产生Nika荧光X射线,Nika在样品中可能被Fe吸收,使Fe激发产生Feka。测定Ni时,因为Fe的吸收效应使结果偏低,测定Fe时,由于荧光增强效应使结果偏高。

  • 荧光定量PCR仪,进口or国产

    从1996年ABI公司推出了全球第一款荧光定量PCR以来,经过10几年的发展,由于荧光定量PCR仪的在科研、检测和诊断领域的广泛应用,市场规模也不断扩大。已有多家国内外生产厂商涉足研发生产,就连Eppendorf公司也于2006年底推出了自己的荧光定量PCR仪。这些产品良莠不齐,令研究人员选择是不免挑花了眼。于是很多资金充足的实验室为了保险起见都选择购买了几家最有名气公司的产品,如ABI的7500和7900,罗氏Lightcycler2.0,Lightcycler480,Eppendorf mastercycler等产品。但是这些名牌产品因为品牌溢价所以价格都高高在上,另很多经费不是很充足的实验室望而却步。这些产品的性能有大量文章做过比较,在这里就不做过多描述。但是品牌不是唯一,科研工作者更不应该迷信品牌,依靠自己真实的实验体会做的选择才是最准确的。下面综合大量的科研人员的实验体会着重向广大科研工作者介绍一些现在市场上高性价比的几款荧光定量PCR仪。 进口篇1.Bio-rad伯乐在国际上属于中端品牌,在中国最初由于电泳系统被广大科研用户所熟知。伯乐的PCR产品线也比较丰富,收购MJ Rearch之后进一步丰富的PCR的产品线。目前伯乐的IQ5荧光定量PCR仪是一款性价比较高的产品,采用96孔Peltier半导体加热,5通道,12bit CCD检测,而且还带有梯度功能。售价也是远远低于ABI7500,所以这两年来用户较多。但有用户反应说这款仪器的检测灵敏度不太好,另外维修率比较高。实际情况大家还可以通过多咨询老用户进一步了解2.BIONEER国内的用户可能听说过这个品牌的不多,只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家,引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子生物学领域,目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较,很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM 96,产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热,5通道,16bit CCD检测,也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样,而且检测的CCD像素还要高于IQ5, 理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些,号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少,了解起来不太容易。有兴趣的客户可以联系他们的子公司柏业贸易(上海)有限公司进行试用,新公司都注重是售后服务,大家毕竟要亲身体会到才是最可靠的。3.StratageneStratagene现在为安捷伦公司的子公司,也是专著于分子生物学研究产品开发的公司。在国内它的试剂产品卖的不多,处于推广阶段。Stratagene的荧光定量PCR产品Mx3005P同以上两种产品技术参数也差不多96孔Peltier半导体加热,5通道,PMT检测器,但是没有梯度功能,用户不能在这台仪器上优化反应条件。另外有客户反应该仪器做工较粗糙,噪音比较大,而且边缘的孔做实验的效果不太好,但是只要使用热模块中间的孔做实验效果还是不错的。这样的问题问题在ABI7500仪器上也同样存在,但是Stratagene的价格要实惠很多。国产篇  现在国内的生命科学研究市场基本上是被国外的跨国公司所垄断,国内的厂商只能靠底价来占领一小部分市场,平心而论国内的厂商在技术和工艺上面确实和国外厂商有一定的差距。但这也是由于我国的基础研究水平和制造工艺起步都比较晚的客观原因造成的,再加上国内厂商的经营和财力等问题,所能提供的员工待遇与跨国公司也有一定的差距,所能吸引的人才也受到限制。有国内生产仪器公司的老总就直言不讳的提出,他们暂时还没有能力请国际一流的设计师和改进生产工艺的能力,只能是靠低价来占领一部分市场待原始积累达到一定程度之后再改进产品争取进入更高一个级别的市场中。当然我们也看到国内的厂商也是在不断的进步之中,随着越来越多的一流人才加入到生物技术领域中,相信生物技术市场也会像当年的家电市场一样慢慢的将国外厂商的垄断局面打破并夺回大部分的市场。下面就介绍几款国内厂商生产的荧光定量PCR仪1.杭州博日(Bioer)提到国产PCR仪就不得不提到杭州博日公司,和Takara一样属于日本在华投资较早的生物技术企业。博日公司一度在低端PCR仪领域占领了很大的市场,虽然近年来随着其他国产品牌的冲击,市场占有率已经严重下降,但是总体上还是处于领先的水平。该公司的荧光定量PCR仪产品FQD-48A是4通道,48孔Peltier半导体加热。相对于前面介绍的几款进口产品相比较样品通量和检测光路均较低,但也可以满足实验样本不是很大的用户使用。而且博日产品的价格比前面介绍的几款进口产品的价格也要更低一些。2.西安天隆西安天隆的荧光定量PCR产品TL988是一款真正的依靠国内自主研发而成多通道荧光定量PCR仪,TL988设计比较灵活,可选36孔与96孔加热模块,但通道和多通道几种组合模式。最多可达5通道,但不足之处是还是使用单激发虑光片,激发光特异性不好,导致检测灵敏度较低。据了解在国内的医疗系统还是一些用户,科研系统的用户比较少。3.上海宏石上海宏石生产的SLAN®实时荧光定量PCR是一款在国内市场反应不错的仪器,在国产荧光定量PCR仪的性能比较中是属于检测灵敏度和重复性最受认可的仪器。不足之处是光路通道和样品孔数量比较小。最大只有三通道和48个样品孔的机型,不能满足较大样品量的客户需求。目前在医院临床检验科中是国产荧光定量PCR仪销量最高的仪器,在科研系统用户比较少。小节:目前大部分的市场份额还是被国外厂商所占领,尤其是在科研, CDC和血站等系统,国外厂商更是处于垄断地位。但是目前国内的厂商也在医院临床检验系统占有一席之地。科研人员和医疗工作者还是要根据自己的实际需求和亲身体会做出选择,“选对的,不选贵的”这句名言用于购买荧光定量PCR仪也同样适用。

  • 荧光定量PCR仪

    荧光定量PCR仪

    [img=,412,404]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707061725_01_3194653_3.png[/img] SaCycler-96 [url=http://www.fameinstrument.com.cn/Product/1543022830.html]荧光定量PCR仪[/url]系统特点:- 4个或5个检测通道可以同时检测样孔中5色荧光;- 灵活性强,适于96孔板、试管和测试条等- 最先进的系统,保证最高的灵敏度- 独特设计保证优化的信噪比和消除信号串扰- LED灯寿命超过100,000小时,无需维护- 使用综合曝光方法实现光谱检测,优化了信号配准,大大简化甚至避免了荧光配准;- 人性化的软件系统对于新手上手容易,对于熟练人员可以开启全功能模式- 使用户在程序运行中可以查看之前的分析结果- 断电保护,程序可以自动恢复运行- 数据输出兼容标准的图标或文本形式,方便数据分析- 可以联机使用,最多一台电脑可以控制8台荧光定量PCR仪技术参数:1. 测样品量: 96个样品2. 样品管类型: 0.2ml3. 光学系统: 四或五通道,具备同时检测5色荧光的能力4. 光源: LED5. 检测器: CCD6. 检测通道: 4或57. 检测灵敏度: 0.05*10E-12M8. 温度分辨率: 0.1℃9. 升温速率: 最大3.5℃/s10.降温速率: 最大2.5℃/s11.温度均一性: ±0.15℃ at 95℃12.温控准确性: ±0.2℃ at 95℃13.功率: 500W14.模块温度范围: 0-105℃15.热盖温度: 105℃±1℃16.热驱动: 半导体原件17.电脑接口: USB接口发射/检测荧光组合 470/520,530/570,585/633,633/670,690/750仪器重量 27kg仪器尺寸 210 x 540 x 540mm(W x H x D)PLoS ONE 9(1): e86047. doi:10.1371/journal.pone.0086047

  • 【分享】测量仪器的准确度

    定义 指“测量仪器给出接近于真值的响应的能力”(见JJF1001-1998《通用计量术语及定义》7.18条,以下简称条款)。也就是指测量仪器给出的示值接近于真值的能力,即测量仪器由于仪器本身所造成的其输出的被测量值接近被测量真值的能力。由于各种测量误差的存在,通常任何测量是不可能完善的,所以实际上真值是不可知的,当然接近于真值的能力也是不确定的,因此测量仪器准确度是反映了测量仪器示值接近真值的一种程度,所以在该定义的注中说明准确度是一个定性的概念。 测量仪器准确度是表征测量仪器品质和特性的最主要的性能,因为任何测量仪器的目的就是为了得到准确可靠的测量结果,实质就是要求示值更接近于真值。为此虽然测量仪器准确度是一种定性的概念,但从实际应用上人们需要以定量的概念来进行表述,以确定其测量仪器的示值接近于其真值能力的大小。在实际应用中这一表述是用其他的术语来定义的,如准确度等级、测量仪器的示值误差、测量仪器的最大允许误差或测量仪器的引用误差等。准确度等级是指“符合一定的计量要求,使误差保持在规定极限以内的测量仪器的等别、级别”(7.19条)。即就是按测量仪器准确度高低而划分的等别或级别,如电工测量指示仪表按仪表准确度等级分类可分为0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.5、5.0等七级,具体说就是该测量仪器满量程的引用误差,如1.0级指示仪表,则其满量程误差为±1.0%FS。如百分表准确度等级分为0、1、2级,则主要是以示值最大允许误差来确定。如准确度代号为B级的称重传感器,当载荷m处于0≤m≤5000v时(v为传感器的检定分度值),则其最大允许误差为0.35v。又如一等、二等标准水银温度计,就是以其示值的最大允许误差来划分的。所以准确度等级实质上是以测量仪器的误差来定量表述测量仪器准确度的大小。有的测量仪器没有准确度等级指标,则测量仪器示值接近于真值的响应能力就是用测量仪器允许的示值误差来表述,因为测量仪器的示值误差就是指在规定条件下测量仪器示值与对应输入量的真值之差,这和测量仪器准确度定义概念是完全相对应的,如长度用半径样板,它就是以名义半径尺寸来规定其允许的工作尺寸偏差值来确定其准确度。因为真值是不可知的,实际上测量仪器可以用约定真值或实际值来计算其误差的大小,通过示值误差、最大允许误差、引用误差或准确度等级来定量进行表述。实际上准确度等级也只是一种表述形式,这些等级的划分仍是以最大允许误差、引用误差等一系列的特性来定量表达的。 这里要注意,从名词术语的名称和定义来看,测量仪器准确度和准确度等级、测量仪器的示值误差、最大允许误差、引用误差等其概念是不同的,测量仪器准确度术语是定性的概念,严格讲要定量地给出测量仪器接近于真值的响应能力,则应该指明给出量值是什么量,是示值误差、最大允许误差、引用误差或准确度等级,不能笼统地称为准确度。我们可以认为测量仪器准确度是它们这些特性概念的总称,测量仪器准确度可以用其它相应的术语来定量表述,这二者是有区别的。准确度1级应称为准确度等级为1级,准确度为0.1%称为其引用误差为0.1%FS。但有时为了制定表格或方便表述,表头则也可写“准确度”,表内填写准确度等级或规定的允许误差。要说明一点,测量仪器准确度是测量仪器最最主要的计量性能,人们关心的就是是否准确可靠,如何来确定这一计量性能大小?通常它是用其它的术语来定量表述而已。

  • 什么是荧光定量PCR

    什么是荧光定量PCR

    [font=arial, helvetica, sans-serif][color=#3333ff][b] [/b][/color][/font][align=center][font=arial, helvetica, sans-serif][b][size=24px]什么是荧光定量PCR[/size][/b][/font][/align][align=center][font=arial, helvetica, sans-serif][b][size=24px][/size][/b][/font][/align][font=arial, helvetica, sans-serif][color=#3333ff][color=#3333ff][b] [url=http://www.woyao17.com.cn/chanpinzhanshi/peitaoxiantiao/24.html]荧光定量PCR[/url][/b][/color][/color]又称qPCR,[color=#333333]是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次[/color]聚合酶链式反应[color=#333333]([/color][url=http://www.woyao17.com.cn/chanpinzhanshi/peitaoxiantiao/][color=#3333ff][b]PCR[/b][/color][/url][color=#333333])循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。[/color][/font][size=16px][b][font=微软雅黑, sans-serif]荧光定量PCR的由来[/font][/b][/size][color=#333333] [/color][url=http://www.woyao17.com.cn][img=,690,460]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009270913440814_9803_4137464_3.jpg!w690x460.jpg[/img][/url] 2020年,一场突如其来的新冠疫情,让“[url=http://www.woyao17.com.cn/chanpinzhanshi/peitaoxiantiao/24.html][color=#0000ff][b]核酸检测[/b][/color][/url]”这一疾病检测方法一夜间为大家所公知。它在这次疫情防控中发挥了重大作用,成为临床诊断的 “金标准”。而实时荧光定量PCR则是此次核酸检测的主要应用方法,用以检测、判定临床样本中是否含有新冠病毒。今天小编先带大家初步了解一下什么是实时荧光定量PCR。 它的由来是这样的从20世纪90年代初开始,许多实验室开始致力于相对准确的定量PCR技术的研究。在这一过程中,应用较多的是半[url=http://www.woyao17.com.cn/chanpinzhanshi/peitaoxiantiao/24.html][color=#0000ff][b]定量PCR技术[/b][/color][/url]。引入管家基因,通过电泳后比较目的基因和管家基因的产物相对量,得到起始模板在量的差异。随后,为了进一步提高定量的准确性,人们开始设想在PCR过程中加入荧光物质,荧光物质会参与到第一轮PCR循环中,随着循环的进行和产物的增加,检测到的荧光物质也在发生变化,从而通过对荧光物质的检测实现全程监控PCR进程,最终可以计算出初始的模板量。1993年Higuchi等人将这一设想付诸实现!它的定义是这样的实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。 [b][font=微软雅黑, sans-serif][size=16px]荧光定量PCR的原理[/size][/font][/b] 它检测的原理是这样的原理,包括探针类和非探针类两种。探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加;非探针类则是利用荧光染料或者特殊设计的引物来指示扩增产物的增加。探针法由于增加了探针的识别步骤,特异性更高,而非探针类则简便易行。例如: 1.SYBRGreenⅠ法:SYBRGreenⅠ是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料。在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。特点:非特异性,需检测熔解曲线;单通道检测;使用方便,经济便宜;常用于实验室研究。 2.TaqMan探针法:TaqMan探针是一种寡核苷酸探针,它的荧光与目的序列的扩增相关。它设计为与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。特点: 特异性好;可以多通道检测;单独设计探针;价格较高;常用于临床检测。随着荧光检测[url=http://www.woyao17.com.cn/chanpinzhanshi/peitaoxiantiao/24.html][color=#3333ff][b]PCR仪[/b][/color][/url]的商品化,实时荧光定量PCR进入了一个特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应和由计算机软件进行快速统计的全新时代,实现了PCR从定性或半定量到准确定量的飞跃。它的特点和优势是这样的 1)特异性强:引物和探针的“双保险”,避免检测的假阳性。 2)灵敏度高:分析PCR产物的对数期,自动化仪器收集荧光信号,避免了许多人为因素干扰。 3)避免污染:全封闭反应,无须PCR后处理。 4)实现定量:运用标准品获得标准曲线,结合Ct值进行准确定量。 5)高效低耗:可实现一管多检。 6)操作简便:在线式实时监测扩增结果,不必接触有害物质。 7)快速:反应时间1.5小时。[size=16px][b][font=微软雅黑, sans-serif]在分子生物学领域的研究应用[/font][/b][/size][list=1][*]定量核酸浓度:传统方法是用琼脂糖凝胶电泳或者分光光度计测定核酸浓度,其结果不准确而且易污染,实时荧光定量PCR可以解决这些问题,它的准确性、灵敏度高且无污染,对一些传染性疾病进行定量分析、病原微生物和病毒含量检测,此项技术都是首选 。[*]研究基因表达:应用实时定量PCR技术可以对基因时间、空间表达水平差异进行比较。例如,对特定基因用物理、化学、药物等不同方法处理后的差异进行比较,为人们的科学研究提供依据 。[*]用于单核苷酸多态性(SNP)检测分析:人们对疾病的易感性和对同一种药物治疗同一种疾病的效果是有差异性的,遗传物质DNA的多态性RELP,STR,ABO血型和SNP是个体差异的遗传基础。SNP在人类基因组中广泛存在,是人类可遗传变异中最常见的一种,在遗传性疾病的研究中具有重要意义 。[*]DNA甲基化检测:DNA甲基化是表观遗传学重要的标记信息,通过实时荧光定量PCR技术获得基因组甲基化水平数据对表观遗传学的时空特异性研究具有重要意义。[/list][url=http://www.woyao17.com.cn/chanpinzhanshi/][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009270916423385_1359_4137464_3.jpg!w690x517.jpg[/img][/url]

  • 【求助】荧光定量PCR与全自动微生物鉴定仪的不同

    请问不同点在哪里?高通量实时荧光定量PCR系统:瑞士,Roche,型号是Ligtcler 480全自动荧光法微生物鉴定药敏分析系统:英国,SENSITITRE,型号是ARIS是不是前者可用于致病菌,微生物的定性定量检测,而后者只能是定性的筛选快速检测啊?并且想具体问下PCR如何用于致病菌、转基因食品的检测?大概原理,因为我本身不是读这个专业的,单位决定买这两台仪器,但是单位派我去开个什么购买仪器专家听证会之类的,所以想问问,因为资料上我看得不是很明白

  • x射线荧光光谱仪无标样定量

    布鲁克的ARTAX 400 X射线荧光光谱仪,有无标样的定量软件或者方法吗,本人咨询过工程师,都对这个型号的不了解。大家可以讨论下,有没有经验型的方法可以自己去半定量,除过标样法

  • PikoReal荧光定量PCR仪

    PikoReal设计小巧,反应速度快,灵敏度高。具有绝对定量,相对定量,溶解曲线分析,等位基因检测分析功能,是一款性能优越,并能成倍节省实验成本的高性价比荧光定量PCR系统。整体式设计,系统稳定可靠  PikoReal 五通道实时荧光定量PCR仪;光学检测系统和PCR系统高度整合,几乎没有移动部件。仪器长途运输或搬动也不会导致光路系统偏移,无需光路校正。  PCR系统快速高效;  超快的反应速度能成倍节省实验时间。独特的设计能使反应体系小到5ul,节省试剂,耗材和能源消耗。

  • 便携式实时荧光定量PCR仪特点及规格参数

    [url=http://www.f-lab.cn/pcr/rpcr-m8.html][b]便携式实时荧光定量PCR仪rpcr-m8[/b][/url]是一款便携式实时荧光定量PCR检测系统和实时PCR仪,为客户提供高效而精确的PCR测试结果,在任何时间,任何地点都能快速提供PCR检测能力。[b]便携式实时荧光定量PCR仪rpcr-m特点[/b]:●便携式:12V直流,高效节能。●用户友好:简单的界面。●小尺寸:便携式设计,可携带到任何地点工作,也可用实验室台面,只有2.1kg 。●灵敏度高:低至1COPY。●样本容量:8x0.2ml PCR管●两个通道:SYBR/FAM, ROX/Texas Red[img=便携式实时荧光定量PCR仪]http://www.f-lab.cn/Upload/RPCR-M8.jpg[/img]●开放系统:与大多数商业试剂兼容。[b]便携式实时荧光定量PCR仪rpcr-m规格参数[/b]光源:高功率LED探测器:光电二极管探测器加热/制冷模式:peltier最大升温速率:最大3℃/s热均匀性:+/-0.2℃温度精度:+/-0.2℃温度范围:4-100℃样品类型:8孔反应容积:10-150微升加热时间:1分钟探测灵敏度:1copy高分辨率融化:支持最高分辨率为0.5℃倍增性能:可探测2种染料,同时探测470/520nm(SYBR/FAM)和565/625nm(ROX/Texas Red)尺寸: 205x190x98mm重量:2.1kg计算机要求:WIN7,WIN8或Win2000工作温度:15-30℃工作湿度:15-90%更多PCR仪请浏览官网:[url]http://www.f-lab.cn/pcr.html[/url]

  • 荧光定量PCR:简介、原理、应用

    荧光定量PCR简介荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间,而其应用一直都没广泛展开,究其原因,无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期,尤其是08年以来,仪器和试剂是遍地开花,这也使科研人员均跃跃欲试,都想借此技术使自己的研究能突飞猛进,发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据有关统计,在 Medline 数据库中,用“Taqman” 或 ”real time PCR” 作为关键词检索,1996 年是19 篇,1999 年157 篇,到2003 年就高达2984 篇,2009年会是多少呢?我们不得而知。但其迅猛的发展势头却是不可更改的,本公司真诚希望能和众多研究人员共同努力,抓住这一大好时机,为科研事业的发展贡献自身的力量。基于这一目标,本公司长期以来对荧光定量PCR,无论是技术还是多年来的产品,均进行了深入地研究,并及时推出更加优异的荧光定量 PCR技术服务。荧光定量PCR原理荧光定量PCR最早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值(如下图所示)。荧光域值(threshold)是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,但一般荧光域值的缺省设置是PCR反应前3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍,即:threshold。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364674.jpgCt 值:是指每个反应管内的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数。Ct值与起始模板的关系:研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代表Ct值如下图所示。因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364675.jpg荧光定量检测荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术(分子信标技术,以美国人Tagyi为代表)、 TaqMan探针(以美国ABI公司为代表)和FRET技术(以罗氏公司为代表)等;荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料,非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ;饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。嵌合荧光染料法(SYBR GreenⅠ)SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料,与双链DNA非特异性结合。在游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光,但一旦与双链DNA结合,其荧光增加1000倍。所以,一个反应发出的全部荧光信号与出线的双链DNA量呈比列,且会随扩增产物的增加而增加。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364672.gifSYBR Green I荧光染料与DNA双链的结合双链DNA结合染料的优点:实验设计简单,仅需要2个引物,不需要设计探针,无需设计多个探针即可以快速检验多个基因,且能够进行熔点曲线分析,检验扩增反应的特异性,低的初始成本,通用性好,因此国内外在科研中使用比较普遍。荧光探针法(Taqman 技术):PCR扩增时,加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸,两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收,PCR 仪检测不到荧光信号; PCR扩增时(在延伸阶段),Taq 酶的 5' - 3' 切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条 DNA 链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步,这也是定量的基础所在。其过程如下图所示http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364673.gif荧光定量PCR的应用分子生物学研究1、核酸定量分析。 对传染性疾病进行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的检测 , 比如近期流行的甲型H1N1流感, 转基因动植物基因拷贝数的检测,RNAi 基因失活率的检测等。2 、基因表达差异分析。 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 ( 如药物处理、物理处理、化学处理等 ) ,特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证3 、SNP 检测。检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义,因分子信标结构的巧妙性,一旦SNP 的序列信息是已知的,采用这种技术进行高通量的 SNP 检测将会变得简单而准确。4、 甲基化检测。甲基化同人类的许多疾病有关,特别是癌症, Laird 报道了一种称作 Methylight的技术,在扩增之前先处理 DNA ,使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影响,用特异性的引物和 Taqman探针来区分甲基化和非甲基化的 DNA ,这种方法不仅方便而且灵敏度更高。医学研究1、 产前诊断:人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗,到目前为止,还只能只能通过产前监测,减少病婴出生,以防止各类遗传性疾病的发生,如为减少X连锁遗传病患儿的出生,从孕妇的外周血中分离胎儿DNA,用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法,易为孕妇所接受。2、 病原体检测:采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。3、 药物疗效考核:对乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析显示:病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达,干扰素治疗作用不敏感,而HCV低滴度,干扰素作用敏感;在拉米夫定治疗过程中,HBV- DNA的血清含量曾有下降,随后若再度上升或超出以前水平,则提示病毒发生变异。4、 肿瘤基因检测:尽管肿瘤发病的机理尚未清楚,但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。癌基因的表达增加和突变,在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量 PCR不但能有效地检测到基因的突变,而且可以准确检测癌基因的表达量。目前用此方法进行过端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病WT1基因、肿瘤 ER基因、前列腺癌PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。

  • 荧光定量PCR技术及其应用

    荧光定量PCR(也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR)是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术,该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的,与变通PCR相比,FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简要叙述。一、特点FQ-PCR不仅具有普通PCR的高灵敏性,而且由于荧光探针的应用,可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果,所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性,克服了常规PCR的许多缺点。如一般PCR产物都需通过琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色紫外光观察结果或通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测,不仅需要多种仪器,而且费时费力,所使用的染色剂溴化乙锭对人体又有害,这些繁杂的实验过程又给污染和假阳性提供了机会。而FQ-PCR只须在加样时打开一次盖子,其后的过程完全是闭管操作,不需要PCR后处理,避免了常规PCR操作中的诸多弊端。实验一般使用PE公司研制的ABI7100型PCR扩增仪。该仪器具有以下特点:①应用广泛:可用于DNA和RNA的PCR产物定量、基因表达研究、病原体检测及PCR条件的优化等。②独特的定量原理:采用荧光标记探针,经激光激发后荧光量随PCR循环而累积,从而达到定量目的。③工作效率高:内置9600型PCR扩增仪,电脑控制1~2小时全自动同步完成96个样品的扩增及定量。④无须凝胶电泳:无须对样品进行稀释和电泳,只须通过特殊探头在反应管内直接检测。⑤无管道内污染:采用独特全封闭反应管及光电传导系统,无须顾及污染。⑥结果重现性好:定量动态范围高达五个数量级。所以自从此项技术研制成功以来,受到许多科研工作者的重视并在多个领域得到应用。二、原理和方法FQ-PCR的工作原理是利用Taq酶的5’→3’外切酶活性,在PCR反应系统中加入一个荧光标记探针。该探针可与引物包含序列内的DNA模板发生特异性杂交,探针的5’端标以荧光发射基因FAM(6-羧基荧光素,荧光发射峰值在518nm处),靠近3’端标以荧光淬灭基团TAMRA(6-羧基四甲基若丹明,荧光发射峰值在582nm处),探针的3’开端被磷酸化以防止探针在PCR扩增过程中被延伸。当探针保持完整时,淬灭基团抑制发射基团的荧光发射。发射基团一旦与淬灭基团发生分离,抑制作用被解除,518nm处的光密度增加而被荧光探测系统检测到。复性期探针与模板DNA发生杂交,延伸期Taq酶随引物延伸沿DNA模板移动,当移动到探针切断,淬灭作用被解除,荧光信号释放出来(见图)。模板每复制一次,就有一个探针被切断,伴随一个荧光信号的释放。由于被释放的荧光基团数目和PCR产物数量是一对一的关系,因此用该技术可对模板进行准确定量。实验仪器一般使用PE公司研制的ABI7100型 PCR扩增仪,也可用其它PCR仪。如果用ABI7700型反应型反应系统进行实验,反应结束后,通过电脑分析,可直接给出定量结果。如果用其他PCR仪,则需要同时使用荧光探测仪测量反应管中的荧光信号,计算出RQ+、RQ-、△RQ。RQ+代表样品管荧光发射基团发光强度与淬灭基团发光强度的比率,RQ-代表空白管中二者的比率,△RQ(△RQ=RQ+-RQ-)代表PCR过程中荧光信号变化量,经过数据处理,即可得出定量结果。由于荧光探针的引入,显著提高了实验的特异性。探针设计一般应符合以下条件:①探针长度应在20~40个碱基左右,以保证结合的特异性。②GC碱基含量在40%~60%,避免单核苷酸序列的重复。③避免与引物发生杂交或重叠。④探针与模板结合的稳定程度要大于引物与模板结合的稳定程度,因此探针的Tm值要比引物的Tm值至少高出5℃。另外,探针的浓度、探针与模板序列的同源性,探针与引物的距离都对实验结果有影响。 http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/07/21/1216476450.gif图.TaqMan PCR反应模式 (A)聚合反应;(B)链置换;(C)裂解; (D)聚合完成(R:FAM;Q:TAMRA,FP:上游引物;RP:下游引物)

  • 荧光定量PCR仪浅谈之一-仪器性能比较

    荧光定量PCR仪在国内市场推广从98年开始已经经历了6年,从开拓者PE(ABI)到ROCHE,再到后来鱼龙混杂,各种荧光定量PCR仪纷纷登陆我国市场,使得中国市场成为世界上最为繁荣的荧光定量PCR技术应用市场,笔者由于从一开始就从事该项技术再中国的推广,就亲身经历的几种仪器来谈谈他们的优缺点,抛砖引玉使大家在应用这项技术的过程中提供一定的帮助。荧光定量PCR仪的鼻祖是PE7700(ABI公司推出)。而后从其进入我国市场的时间顺序上分别产生了PE5700、ROCHE的lightcycler、biorad的icycler、澳洲的ROTOR GENE3000等,还有就是在01、02年之后任何一台荧光PCR仪都在中国赚得盆满钵满之后许多荧光pcr仪纷纷进入中国,枫岭、MJ等等许许多多,不一而足。每种仪器在市场推广过程中都会“制造”许多与其他产品不同得优势以获得相对得比较优势,但从笔者多年得使用经历和比较中得出一个结论,那就是无论厂商如何宣传,判断一台荧光PCR仪的好坏的依据不是PCR反应时间(它不是百米赛跑),不是PCR体系大小(它不是蔬菜),不是PCR仪器大小(它不是彩电),而是PCR扩增水平(非仅仅升降温速度)、荧光检测水平和荧光数据分析水平(软件)这三方面。这里笔者先谈谈PCR扩增水平。PCR扩增水平是荧光pcr仪的基础,扩增水平的高低将直接影响整个仪器PCR过程的定量水平。荧光PCR仪与一般PCR仪对PCR扩增水平的要求并不一致。荧光PCR仪除了一般PCR仪对扩增的要求之外,更对不同管的PCR均一性有非常高的要求,管间差是衡量荧光定量PCR仪在扩增方面最主要的技术指标。就以管间差而言,国内目前这些荧光定量PCR仪中,以PE(ABI)和ROCHE的仪器管间差最小。PE公司的仪器无一不是以PE9600为基础,而所有使用过9600的人都不会否认其在扩增方面卓越的品质,特别是在扩增的均一性方面使得PE出品的扩增仪的管间差都非常小,PE7700所达到的水平是其他仪器都很难达到的。也正因为此,PE公司才能够在推出7700标准型之后,在中国推出5700的7700型简化版仪器(全球仅在中国市场销售)。即使5700与7700比较在软件、光路检测系统等等诸多方面十分简陋,5700在实际使用过程中仍能得到较好的结果。可以说,如果没有PE公司在扩增水平上的超强优势,PE公司根本不会生产5700这种简化版垃圾仪器,即便如5700这样简陋的仪器,在当时国内市场中仍没有多少竞争对手。在大家无法承受7700高昂价格的无奈情况下,5700也不韪是一个较为折中的选择,这种局面一直维持到ROCHE的Lightcycler的出现才被打破。ROCHE的Lightcycler为大家除了忍受PE公司的蛮横高价之外提供了第二种选择的机会。笔者认为ROCHE的Lightcycler是除7700之外唯一具有创造力和想象力的产品。ROCHE的Lightcycler原为德国宝灵曼公司自主研制开发的,后因宝灵曼整体被ROCHE兼并才成为ROCHE的品牌产品。所以我们看到ROCHE拥有的PCR和Taqman专利而Lightcycler却与Taqman有很大的差别这样非常奇怪的现象。这只是因为PE最早向ROCHE购买了Taqman和PCR的专有使用权逼得宝灵曼只能另辟蹊径的想出空气加热和毛细管反应系统。也正因为此,让我们通过ROCHE的Lightcycler真正领略了德国人在机械制造方面的创造力和想象力以及高超的机械制造水平。均匀的空气加热解决了半导体加热不一致的问题,毛细管体系用加大接触面积解决了空气作为热源其热效不高的问题。一环扣一环,其技术涵养可见一斑。然而毕竟与我们常规PCR有着巨大的不同,使得我们在使用时无法与常规系统(离心管)进行比较。在常规PCR摸好的条件在ROCHE的Lightcycler上可能得重头来过。并且最突出的问题是毛细管使用不方便和价格昂贵。至于其他仪器,我们或多或少都可以看到其在某些方面对PE7700和ROCHE的Lightcycler的模仿。至于模仿水平的高低,我们以后再说。

  • 【分享】品牌不是唯一,高性价比的荧光定量PCR仪选购指南

    中国心 品牌不是唯一,高性价比的荧光定量PCR仪选购指南从1996年ABI公司推出了全球第一款荧光定量PCR以来,经过10几年的发展,由于荧光定量PCR仪的在科研、检测和诊断领域的广泛应用,市场规模也不断扩大。已有多家国内外生产厂商涉足研发生产,就连Eppendorf公司也于2006年底推出了自己的荧光定量PCR仪。这些产品良莠不齐,令研究人员选择是不免挑花了眼。于是很多资金充足的实验室为了保险起见都选择购买了几家最有名气公司的产品,如ABI的7500和7900,罗氏的Lightcycler2.0,Lightcycler480,Eppendorf mastercycler等产品。但是这些名牌产品因为品牌溢价所以价格都高高在上,另很多经费不是很充足的实验室望而却步。这些产品的性能有大量文章做过比较,在这里就不做过多描述。但是品牌不是唯一,科研工作者更不应该迷信品牌,依靠自己真实的实验体会做的选择才是最准确的。下面综合大量的科研人员的实验体会着重向广大科研工作者介绍一些现在市场上高性价比的几款荧光定量PCR仪。进口篇1.Bio-rad伯乐在国际上属于中端品牌,在中国最初由于电泳系统被广大科研用户所熟知。伯乐的PCR产品线也比较丰富,收购MJ Rearch之后进一步丰富的PCR的产品线。目前伯乐的IQ5荧光定量PCR仪是一款性价比较高的产品,采用96孔Peltier半导体加热,5通道,12bit CCD检测,而且还带有梯度功能。售价也是远远低于ABI7500,所以这两年来用户较多。但有用户反应说这款仪器的检测灵敏度不太好,另外维修率比较高。实际情况大家还可以通过多咨询老用户进一步了解2.BIONEER国内的用户可能听说过这个品牌的不多,只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家,引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子生物学领域,目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较,很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM 96,产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热,5通道,16bit CCD检测,也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样,而且检测的CCD像素还要高于IQ5, 理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些,号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少,了解起来不太容易。有兴趣的客户可以联系他们的子公司柏业贸易(上海)有限公司进行试用,新公司都注重是售后服务,大家毕竟要亲身体会到才是最可靠的。3.StratageneStratagene现在为安捷伦公司的子公司,也是专著于分子生物学研究产品开发的公司。在国内它的试剂产品卖的不多,处于推广阶段。Stratagene的荧光定量PCR产品Mx3005P同以上两种产品技术参数也差不多96孔Peltier半导体加热,5通道,PMT检测器,但是没有梯度功能,用户不能在这台仪器上优化反应条件。另外有客户反应该仪器做工较粗糙,噪音比较大,而且边缘的孔做实验的效果不太好,但是只要使用热模块中间的孔做实验效果还是不错的。这样的问题问题在ABI7500仪器上也同样存在,但是Stratagene的价格要实惠很多。国产篇现在国内的生命科学研究市场基本上是被国外的跨国公司所垄断,国内的厂商只能靠底价来占领一小部分市场,平心而论国内的厂商在技术和工艺上面确实和国外厂商有一定的差距。但这也是由于我国的基础研究水平和制造工艺起步都比较晚的客观原因造成的,再加上国内厂商的经营和财力等问题,所能提供的员工待遇与跨国公司也有一定的差距,所能吸引的人才也受到限制。有国内生产仪器公司的老总就直言不讳的提出,他们暂时还没有能力请国际一流的设计师和改进生产工艺的能力,只能是靠低价来占领一部分市场待原始积累达到一定程度之后再改进产品争取进入更高一个级别的市场中。当然我们也看到国内的厂商也是在不断的进步之中,随着越来越多的一流人才加入到生物技术领域中,相信生物技术市场也会像当年的家电市场一样慢慢的将国外厂商的垄断局面打破并夺回大部分的市场。下面就介绍几款国内厂商生产的荧光定量PCR仪1.杭州博日(Bioer)提到国产PCR仪就不得不提到杭州博日公司,和Takara一样属于日本在华投资较早的生物技术企业。博日公司一度在低端PCR仪领域占领了很大的市场,虽然近年来随着其他国产品牌的冲击,市场占有率已经严重下降,但是总体上还是处于领先的水平。该公司的荧光定量PCR仪产品FQD-48A是4通道,48孔Peltier半导体加热。相对于前面介绍的几款进口产品相比较样品通量和检测光路均较低,但也可以满足实验样本不是很大的用户使用。而且博日产品的价格比前面介绍的几款进口产品的价格也要更低一些。2.西安天隆西安天隆的荧光定量PCR产品TL988是一款真正的依靠国内自主研发而成多通道荧光定量PCR仪,TL988设计比较灵活,可选36孔与96孔加热模块,但通道和多通道几种组合模式。最多可达5通道,但不足之处是还是使用单激发虑光片,激发光特异性不好,导致检测灵敏度较低。据了解在国内的医疗系统还是一些用户,科研系统的用户比较少。3.上海宏石上海宏石生产的SLAN实时荧光定量PCR是一款在国内市场反应不错的仪器,在国产荧光定量PCR仪的性能比较中是属于检测灵敏度和重复性最受认可的仪器。不足之处是光路通道和样品孔数量比较小。最大只有三通道和48个样品孔的机型,不能满足较大样品量的客户需求。目前在医院临床检验科中是国产荧光定量PCR仪销量最高的仪器,在科研系统用户比较少。小节: 目前大部分的市场份额还是被国外厂商所占领,尤其是在科研, CDC和血站等系统,国外厂商更是处于垄断地位。但是目前国内的厂商也在医院临床检验系统占有一席之地。科研人员和医疗工作者还是要根据自己的实际需求和亲身体会做出选择,“选对的,不选贵的”这句名言用于购买荧光定量PCR仪也同样适用。

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