蔬菜样品破碎后,装入封口袋中或装入塑料盒中,这两种装法各有利弊,塑料盒不会像封口袋会破损,有样品液流出,但清洗麻烦,而封口袋用完直接扔了,不用清洗。你用哪一种方法来装样品呢?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409291127_516269_1645480_3.jpg
超声波细胞破碎仪是利用超声波在液体中的分散效应,使液体产生空化的作用,从而使液体中的固体颗粒或细胞组织破碎。常规使用方法是把要破碎的材料放到烧杯中,开电源设定时间(震动时间和间歇时间),将破碎仪的探头放到材料中。使用过程中,超声波发生器电路将50/60Hz的市电转换成18-21KHz的高频高压电能,因此破碎过程中会大量产热,一般在冰浴下破碎。超声波细胞破碎仪的两大组成部件为超声波发生器和换能器(有的配置有隔音箱)。1、超声波发生器:工作原理:由信号发生器来产生一个特定频率的信号,这个特定频率就是换能器的频率,一般应用在超声波设备中的超声波频率为20KHz、25KHz、28KHz、33KHz、40KHz、60KHz。2、换能器组件:换能器组件主要由换能器和变幅杆组成。3、隔音箱:可以有效地的降低工作过程中的所发出的噪音,保持实验室安静。超声波细胞破碎仪在我国的行业推广已进入成熟阶段,而应用仍不够普及!该仪器(设备)应用范围非常广泛,这是其它仪器设备所不能比拟的。也正因如此,该仪器(设备)的市场潜力很大,所以生产厂家也日趋增多,这也同时造成了超声清洗行业及市场的相对混乱,可以用八个字来形容“鱼龙混杂,良莠不齐”!超声波细胞破碎仪分类如下:一、按探头(“tip”)直径分类处理不用体积的样品需要选择不同“tip”头的超声波破碎仪。由于各制造厂家的产品结构不同,其“tip”头直径不尽相同。一般“tip”头从微量5mm(适合1ml处理量)到25mm(适合1000ml处理量),有连续流探头,处理量可达80升/小时。可能会发生磨损的高能应用中会用到可更换“tip”头。当能量通过“tip”头被传递时,金属表面留下痕迹的地方会发生腐蚀。随着时间的推移,发生腐蚀的地方会产生轻微的蚀损斑。“tip”头可以用砂纸或纱布来打磨,除非是损坏到一定的程度;当这种情况发生时,“tip”头将很难进行调谐频率,取而代之的可能是发出长而尖的噪音,最终产生裂纹。 要有效地加工给定剂量的样品,有两个主要的因素需要考虑:“tip”头尺寸和输出功率。这两个因素必须同时匹配才能获得最佳效果。小功率大“tip”头,则“tip”头无法工作;而太大的功率则“tip”头可能损坏。购买时请注意所需型号附件。二、按功率分类超声波细胞破碎仪的功率大小是客户的首选指标,它决定着被破碎物的数量、大小、质量及效果。所以各生产厂家对此指标也都非常重视。一般情况下,实验室、化验室、研究所、药品检验所等科研单位,使用的功率都不大,(一般在500W以下);而生物公司、制药厂、化工企业等生产单位,所用的功率大都在500W-2000W左右。由于各制造厂家的产品结构不同,其功率的标注方法也不尽相同。不过按照用户常用的惯例,一般有以下几种:50W、100W、150W、250W、300W、350W、500W、1000W、2000W。一般超声波细胞破碎仪输出功率可根据需要适度调节。 标准超声波细胞粉碎机产品的额定工作频率是20千赫兹。一些超声波细胞粉碎机有自动调谐功能可以使频率在一个小的范围内变化。
我第一次做,真是纯小白,也没人教!我昨天破碎好两个样品,分正副样!我就放零下18冰柜了,今天早上来了想做样,一看冻成冰块了。。!请问大神你们都怎么储存,不是放冰柜吗?
大家谈谈固体样品的破碎研磨解决方案,所使用的仪器,其性能如何?备注:比如说把500g的块状岩石,体积是2×2×2cm,最终处理为细度是1um的样品,该怎么办?
急需金属、塑料样品破碎机1哪家公司有?
超声波细胞破碎仪是一种利用超声波在液体中产生空化效应的多功能、多用途仪器;用于多种动植物、病毒、细胞、细菌及组织的破碎,同时可用来乳化、分立、裂解、匀化、提取、消泡、清晰、纳米材料的植被、分散及加速化学反应等。主要技术参数:1.超声功率常用超声输出功率有150W、250W、650W、1000W、1200W、1800W不等,亦有功率可调类型。因此超声破碎仪可以按照功率大小分150W到1800W等各个型号; 2.破碎容量超声波细胞破碎仪的破碎容量有0.5-500ml、0.5-600 ml、10-100 ml、50-1000 ml、550-1200 ml不等,所配破碎杯根据实验样品的量选择;一般根据超声功率和破碎容量即可选定型号。 3.温度控制一般超声输出功率650W以上都配有温度控制功能,可以防止样品过热破坏样品;4.控制面板控制面板有传统的旋钮式操作面板与较先进的大屏液晶显示两种类型,液晶显示操作简便,并带有程序存储功能。
大家哪里来金属样品做ROHS测时,是怎么破碎的?
用于组织破碎,有哪种超声破碎仪好?匀浆机跟超声破碎仪有什么区别吗?
[b][url=http://www.f-lab.cn/cell-disruptors/sonic-2000wt.html]温控高功率超声波细胞破碎仪SONIC-2000WT[/url][/b]是一种利用超声波探针在液体中产生空化效应的而制成的Sonicator[b]温控型号高功率超声波细胞破碎均质仪器[/b],具有温度显示控制功能避免样品过热,广泛用于细胞均质破碎,由超声波发生器,超声波转换器和超声波探针均质器件构成。用于多种动植物、病毒、细胞、细菌及组织的破碎,可用来乳化、分立、裂解、匀化、提取、消泡、清晰、纳米材料的植被、分散及加速化学反应等。由超声波发生器,转换器和探针组成,具有温度检测器供选配,[img=超声波均质器]http://www.f-lab.cn/Upload/SONIC-1200W.jpg[/img]采用LCD屏清晰显示左右操作参数和选项:温度,时间,输出功率等,具有温度显示控制功能避免样品过热损坏[b]超声波细胞破碎仪:[url]http://www.f-lab.cn/cell-disruptors.html[/url][/b]
大肠杆菌表达外源蛋白,在超声破碎的时候,用含有1%triton-X-100的PBS悬浮,然后超声的效果较好,1%triton-X-100的作用还是很明显的,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌。 细菌沉淀直接加样品1buffer,再加5ul的巯基乙醇,混匀,离心,煮沸10min,直接上样,染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min 就可以。 在表达重组蛋白后超声波破碎细胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一会就产生大量泡沫,影响了破碎功率,pbs和tris缓冲液都是这样,最后都是破碎不完全,而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部,约1cm(我一般是距底部0.5mm)。功率根据仪器不同会有所不同,但你可以观察液面,有波动但不要太剧烈就好。2*破3S停10S,破个二三十次看看。 3*变幅杆位置摆放也要注意,听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。 在破碎时试着加大体积,强度最好不要超过60%. 4*尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说,你的方法很难散热,导致蛋白变性产生气泡,最好停顿时间稍长一些,这种情况多见于包涵体形式的蛋白。链霉菌(放线菌)超声破碎的,用的方法条件是什么?前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。使用超声破碎时采用的具体条件是:(1)取细菌的24 h培养液于5 000 r/min 下离心5 min收集菌体.(2)用pH 7.5的Na2HPO -NaH2PO 缓冲液洗涤3次,再用该缓冲液将菌体配成1:3的菌悬液.置于40 mL大塑料试管内.(3)将大塑料试管置于冰浴中,采用超声波破碎(功率200 W,1/2”探头,破碎30 s,间歇30 S).(4)破碎液于12 000 r/min下高速冷冻离心30 min,收集细胞碎片和上清夜. 超声破菌流程与 上述基本一致,就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris-HCl,洗涤一次就可以。另外,超声剂量随样品量、菌体改变比较大,功率可以到400-600w,超5s,停5s,冰浴,要加终浓度1 mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数,有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。 放线菌属于原核生物系统进化树上的(G+C)摩尔百分含量(mol%)高的革兰氏阳性菌(Eubacteria)分枝类群,它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性,但在其不同类群中,细胞壁的化学组分变化很大。 在做大肠杆菌超声时,采用的是400W,超5停5的方法,效果不错,但是用在链霉菌上,似乎没什么效果。会不会就是由于细胞壁组成差异造成的呢,因为大肠杆菌式属于革兰氏阴性菌的。 再有镜检是检验破碎效果,但是细胞破碎程度和我需要的酶获得之间有正比关系吗?破碎时间长也会影响到酶的活性。所以想问问anaisai战友,你提供的“功率200 W,1/2”探头,破碎30 s,间歇30 S”的条件好像是用于破碎链霉菌孢子的,也可以用于发酵离心后的菌泥吗?如果可以,你破碎的全程时间大概是多少呢? 如果你需要的是胞内酶,细胞破碎程度和需要的酶获得之间基本上有正比关系。破碎时间长的确会影响到酶的活性。这就需要在最佳的破碎时间和酶活性之间做出判断,最直接的办法是先绘制相关曲线(酶活性和时间的关系曲线)。 实验中,破碎的是棒状杆菌(也是很难破壁的G+菌),破碎时间控制在30min左右,酶活较好。
除了某些细胞外的多肽激素和某些蛋白质与酶以外,对于细胞内或多细胞生物组织中的各种生物大分子的分离纯化,都需要事先将细胞和组织破碎,使生物大分子充分释放到溶液中,并不丢失生物活性。不同的生物体或同一生物体的不同部位的组织,其细胞破碎的难易不一,使用的方法也不相同,如动物脏器的细胞膜较脆弱,容易破碎,植物和微生物由于具有较坚固的纤维素、半纤维素组成的细胞壁,要采取专门的细胞破碎方法。1.机械破碎(1)研磨研磨是将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中,加入少量石英砂研磨或匀浆,即可将动物细胞破碎,这种方法比较温和,适宜实验室使用。工业生产中可用电磨研磨。细菌和植物组织细胞的破碎也可用此法。(2)匀浆匀浆这是一种较剧烈的破碎细胞的方法,通常可先用家用食品加工机将组织打碎,然后再用10000r/min-20000r/min 的内刀式组织捣碎机(即高速分散器)将组织的细胞打碎,为了防止发热和升温过高,通常是转10秒-20秒,停10秒-20秒,可反复多次。(3)胶体磨胶体磨的基本原理是流体或半流体物料在离心力的作用下,强制通过高速相对运动的定齿与动齿之间,使物料受到强大的剪切力,磨擦力、高频振动和高速旋涡等复杂力等作用,有效地被粉碎、乳化、均质、混合,从而达到精细超微的效果。定转子间的高速相对运动是使胶体磨工作获得物理微细度的主要条件,只有提高磨盘的精密度与线速度,才能达到良好的加工效果。2. 物理破碎(1)压榨压榨是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。在1000×105Pa-2000×105Pa 的高压下使几十毫升的细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压,细胞将彻底破碎。这是一种较理想的破碎细胞的方法,但仪器费用较高。(2)冷热交替冷热交替是在90℃左右维持数分钟,立即放入冰浴中使之冷却,如此反复多次,绝大部分细胞可以被破碎,细菌或病毒中提取蛋白质和核酸时可用此技术。(3)反复冻融反复冻融是将待破碎的细胞冷至15℃-20℃,然后放于室温(或40℃)迅速融化,如此反复冻融多次,由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞破碎。(4)超声波超声波是借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。破碎微生物细菌和酵母菌时,时间要长一些,处理的效果与样品浓度和使用频率有关。使用时注意降温,防止过热。3.化学与生物化学破碎(1)有机溶剂有机溶剂是利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性溶剂或SDS(十二烷基硫酸钠)等表面活性剂处理细胞,可将细胞膜溶解,从而使细胞破裂,此技术也可以与研磨法联合使用。(2)自溶自溶是将新鲜的生物材料存放于一定的pH 和适当的温度下,细胞结构在自身所具有的各种水解酶(如蛋白酶和酯酶等)的作用下发生溶解,使细胞内含物释放出来,此法称为自溶法。该法使用时要特别小心操作,因为水解酶不仅可以使细胞壁和膜破坏,同时也有可能会把某些要提取的有效成分分解。(3)溶胀溶胀是在低渗溶液和低浓度的稀盐溶液中,由于存在渗透压差,溶剂分子大量进入细胞,将细胞膜胀破释放出细胞内含物。(4)酶解酶解是利用各种水解酶,如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶和酯酶等,于37℃,pH8,处理15分钟,可以专一性地将细胞壁分解,释放出细胞内含物,酶解破碎适用于多种微生物。例如从某些细菌细胞提取质粒DNA 时,可采用溶菌酶(来自蛋清)破细胞壁,而在破酵母细胞时,常采用蜗牛酶(来自蜗牛),将酵母细胞悬于0.1mmol/L 柠檬酸一磷酸氢二钠缓冲液(pH=5.4)中,加1%蜗牛酶,在30℃处理30分钟,即可使大部分细胞壁破裂,如同时加入0.2%疏基乙醇效果会更好。此法可以与研磨联合使用
使用前请详细阅读操作说明手册 1.超声波破碎仪的背后,电源调压开关必须设置到220V位置 2.S150D标配1/8"微探头,使用时振幅请勿超过70% 3.探头请勿接触容器壁,否则可能损坏探头,或使玻璃器皿破损,待测样品会漏出 4.请勿在无待测样品时,使破碎仪探头空转,容易损坏仪器 5.使用超声波时,请勿触摸探头,否则可能导致重伤。若要拆下或着加装此类探头,请确认开关在OFF的位置 6.仪器底部有散热通风口,请勿堵塞。定期对其进行清理,避免灰尘堵塞通气口 7.安装时,在连接换能器与探头时,需加入一个标配的圆形垫片,并拧紧
这两天要做80个蔬菜样品,当这些蔬菜到来时,用什么机器破碎?破碎成什么样子?
[align=center]【我爱创新】+流水线作业法破碎蔬菜[/align] 蔬菜中农残检测,每批一百个样品,蔬菜从基地采来,全部破碎成浆状,需要几个人几个小时,如何在有限的时间内提高工作效率呢?此次去N市采取蔬菜样品,在当地农业局破碎蔬菜样品时,他们的破碎蔬菜法让我耳目一新,笑称流水线作业法,我们也效仿了这个方法,大大提高了工作效率。 一、分组法 为了提高工作效率,我们买了两台破碎机,想着同时破碎,可以提高工作效率,这样安排人员,3人一组,每组1人切菜,1人开破碎机,1人装袋子,一共两组6人,一百个样品,全部破碎完要分上午与下午,大约6个小时,时间慢在破碎完,要洗破碎机的塑料桶,需要等待。[align=center][img=,464,463]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708231821_01_1645480_3.jpg[/img][/align][align=center]图1:分组法破碎蔬菜[/align] 二、流水线作业法 流水线法,需要再购买一台破碎机,不是需要这台破碎机,是需要破碎机上盛样品的塑料桶,这样就需要一台破碎机,三个塑料桶,2个人切菜,1人开破碎机,1人倒塑料桶里的样品,1人抻开样品袋,1人洗塑料桶,共6人,总共需要3个小时,为何能节省一半时间,是因为破碎机不停,塑料桶三个轮流上。洗塑料桶的人不停,洗完给切菜的人,装入蔬菜样。破碎过程中破碎机会发热,这时可更换第二台破碎机,破碎机也是轮流上,一上午时间就完成了。整个过程是一条龙,切菜、破碎、装袋、洗塑料桶,在一个工作台面上完成。 该法的要点是整个过程都要快,某个环节出问题会影响下一环节,比如桶洗的慢,切菜就快不了,装样品袋慢了,就洗不了桶,没有桶,就无法排队破碎,还有在传递过程中一定要注意桶里的样品与样品号相照应,编号不能出错。[align=center][img=,465,467]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708231822_01_1645480_3.jpg[/img][/align][align=center]图2:流水线作业法破碎蔬菜[/align] 三、结论 福特的创新是用于生产的流水线。放上零件的人不去固定它,放上螺栓的人不用装上螺帽,装上螺帽的人不用去拧紧它。正因为流水线有如此的速度,福特才得以在以后的十年中每年的生产量成倍地增长,并使零售价降低了三分之二。到1914年,路上行驶的每两辆汽车中就有一辆是福特汽车。 这个故事很多人都知道,但没想到会应用在蔬菜破碎上,相同的人数,相同的样品数量,不同的工作方法,差出一半时间,看来以后工作时还是要多动脑筋,在如何能节约时间,提高工作效率上面,多下功夫才行。
破碎大量样品、低温破碎大量样品、破碎坚硬或韧性较强的样品时,人工手动研磨就成了实验猿的噩梦。当然,也有很多实验猿已经尝试过市面一些研磨机/超声波粉碎机,发现自己那顽固的样品依然无法被完全破碎/破碎过程损坏了目标成分而十分心塞。 分享个高通量高效破碎动植物组织和微生物的方法,别逗,当然不是靠徒手研磨能做到的,必须入手个神器——tissuelyser系列和JXFSTPRP系列多样品组织研磨机。对于动植物组织和微生物,包括一些难以破碎的组织样品,都可以使用这个研磨机对其进行完全粉碎。 特别地,一些尤其坚硬/韧性比较强的样品,或要求维持低温条件进行破碎提取的样品,需要结合液氮进行研磨,如:皮肤、硬骨骼、软骨、血管、结缔组织、种子等;使用普通机械研磨方法,很难既保证研磨破碎效果又保证样品一直处于低温状态,尤其是提取RNA、酶等对温度敏感的物质时,低温状态的控制显得尤为关键。入手一台上海净信的多样品组织研磨机,这些都不再是问题了。看招:注:由于样品的具体差异及实验要求的不同,下文数据部分请咨询厂家。第一部分 破碎动物组织1)样品:猪肌肉组织2)仪器:Tissuelyser多样品组织研磨机(品牌:上海净信);耗材:***毫升离心管和直径***毫米的研磨钢珠3)步骤:a.取***克左右肌肉组织样品,均匀地剪切成少量样品块,分别放入若干***毫升的研磨离心管中。b.每个试管中放入***颗直径***毫米的研磨钢珠和800μLPBS裂解液,分别盖紧管盖后,置入24孔研磨适配器中,再将适配器固定在研磨机中。c.将Tissuelyser多样品组织研磨机的参数设置为***赫兹,研磨***秒,启动研磨器。d.研磨完全停止后,拿出研磨离心管,旋开管盖,取出研磨好的肌肉组织样品。4)结果:研磨后的效果如图1,猪肌肉组织成很细腻的泥浆状,说明Tissuelyser多样品组织研磨机对猪肉组织的研磨效果良好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150947_546190_3397_3.jpg图1 猪肌肉研磨对比第二部分 破碎植物组织1)样品:水稻叶片2)仪器: Tissuelyser多样品组织研磨机(品牌:上海净信);耗材:***毫升离心管和直径***毫米的研磨钢珠3)步骤:a.取***克左右叶片组织样品,均匀地剪切成少量样品块,分别放入若干***毫升的研磨离心管中。b.每个试管中放入***颗直径***毫米的研磨钢珠,分别盖紧管盖后,置入24孔研磨适配器中,再将适配器固定在研磨机中。c.将Tissuelyser多样品组织研磨机的参数设置为***赫兹,研磨***秒,启动研磨器。d.研磨完全停止后,拿出研磨离心管,旋开管盖,取出研磨好的叶片组织样品。4)结果:研磨后的效果如图2,叶片组织成很细腻的泥浆状,说明Tissuelyser多样品组织研磨机对叶片组织的研磨效果良好。顺带附上研磨黄豆(坚硬的植物种子)的研磨对比图。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150948_546191_3397_3.jpg图2 水稻叶片研磨对比http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505150948_546192_3397_3.jpg图3 黄豆研磨对比第三部分 结合液氮使用tissuelyser研磨机 当样品死活无法破碎完全/样品傲娇要低温环境时,Tissuelyser多样品组织研磨机+液氮=问题轻松解决。以血管和植物叶片为例,具体操作方法如下: 血管: 取0.1克新鲜血管,用剪刀剪成若干小块,然后放入2毫升离心管中,加入1颗6mm研磨钢珠,盖上管盖。将整个试管放入液氮中冷冻1分钟左右或直到液氮不沸腾,然后放入机器处理30秒钟。取出样品管可见样品被破碎成乳白色粉末,然后加入提取缓冲液,可以进行接下来的后续提取,加入缓冲液之前能保证样品温度一直处于-20℃以下。 叶片: 取0.2克植物叶片,清洁叶片表面后放入离心管中,加入1颗直径5mm不锈钢研磨钢珠,盖上管盖。将整个试管和适配器放入液氮中冷冻1分钟左右或直到液氮不沸腾,然后取出放入研磨机器中机器处理30秒钟。取出样品管可见叶片被破碎成绿色粉末,然后加入提取缓冲液,进行接下来的后续提取即可,加入缓冲液之前能保证样品温度一直处于-20℃以下。后记 想入手这个神器,但又对研磨效果有所犹疑的小伙伴,现在上海净信部分研磨机产品可申请试用,是时候下手了。激动人心的还有,近期研磨机好价,试用爽了直接入手一台也是毫不含糊的。
随着分子生物学的快速发展,许多实验的目标物质都是细胞内物质,要进行实验研究或产物收集就必须将细胞破壁,使产物得以释放,才能进一步提取,因此细胞破碎就变成了提取胞内产物的关键步骤,破碎方法的得当与否,直接影响到所提取产品的产量、质量和生产成本。现将常用的几种细胞破碎方法介绍如下。1.超声波破碎 利用超声波高强度声能产生的空化现象引起冲击波和剪切力进行细胞破碎。超声破碎的效率与超声频率、超声功率、处理时间、细胞浓度及处理量等因素有关。 不足及须加强的问题:超声波破碎在实验室规模应用较普遍,处理少量样品时操作简便,液量损失少,但超声波产生的化学自由基团可能使某些敏感性活性物质变性失活影响实验结果。且大容量装置声能利用率低,装置散热性差。2.生物酶溶法 就是用生物酶将细胞壁和细胞膜消化溶解的方法。常用的溶酶有溶菌酶β-1.3-葡聚糖酶、蛋白酶等。 不足:易造成产物抑制作用,这可能是导致胞内物质释放率低的最主要因素。而且溶酶价格高,限制了大规模利用。若回收溶酶,则又增加分离纯化溶酶的操作。另外酶溶法通用性差,不同菌种需选择不同的酶。3.物理珠磨法 微生物细胞悬浮液与极细的研磨剂在搅拌浆作用下充分混合,珠子之间以及珠子和细胞之间和互相剪切、碰撞,使细胞壁破碎,释出内容物,在珠波分离器的协助下,珠子被滞留在破碎室内,浆液流出,从而实现连续操作,破碎中产生的热量由夹套中的冷却液带走。缺陷:效能利用率仅为1%左右,且破碎过程产生大量的热能无法利用。4.化学渗透法 某些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使细胞内容物物有选择地渗透出来。其作用机理;化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结构与组成。 不足:时间长,效率低;化学试剂毒性较强,同时对产物也有毒害作用,进一步分离时需要用透析等方法除去这些试剂;通用性差。
这两天做蔬菜中农药残留,用NY/T761做前处理,做到一半,取样人员取来很多蔬菜,让破碎成菜样,放冰柜里冷冻,我们就在同一个前处理室进行破碎,这样合适吗?会给蔬菜带来污染吗?
笋瓜的四分法破碎应该如何操作?如果有4个笋瓜,如何破碎,如何四分法,有无详细步骤。它属于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品吗?[img=,632,138]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/08/202208262154152531_9846_1645480_3.jpg!w632x138.jpg[/img]
实验室常用来破碎大肠杆菌,用于提取表达外源蛋白等试验,在超声波破碎大肠杆菌过程中常常温度探头测得大肠杆菌菌液中温度逐渐升高,有可能会致使热敏物质失活,该怎么解决呢?今天来谈谈在超声波细胞破碎仪处理大肠杆菌过程中降低温度的解决措施。 超声波细胞破碎仪在处理大肠杆菌过程中,由于超声波的空化效应会产生大量的热使菌液的温度逐渐升高,所以我们在处理样品的时候一定要采用冰浴或者其他降温方法,在这您提供两点建议,一种是用实验室的碎冰来做冰浴,示意图如下:(同学们的智慧是无穷的,此图来自于中国药科大学某实验室正在处理大肠杆菌) http://www.shunmayq.com/Upload/image/dachangganjun.jpg (图中液体为冰水混合物,也可以用碎冰) 另外一种方法一般适用于50或者50毫升以上超声细胞破碎仪处理大肠杆菌时使用。图片中超声波细胞破碎仪,。您可以将菌液放置于我们特制的双层夹套反应杯中,在冷却水循环系统上设置好您需要的温度,就可以放心实验不必担心菌液的温度升高啦 http://www.shunmayq.com/Upload/image/1234.jpg 与此同时,在处理大肠杆菌过程中实验条件摸索也来得尤为重要。功率是根据您的处理量多少来调节的,我们建议如果可以用小功率来处理样品切忌用大功率,功率越小对应的超声波的热效应也会相对降低,另外超声时间尽量放短,间隙时间尽量放长,例如超声1秒停2-3秒。
我看到一篇外文文献提到,将碳纳米管转移到塑料离心管,用探头超声破碎仪将碳纳米管分散到水中,然后又离心分离该悬浮液(根据英文翻译,大概是这个意思) 不清楚超声破碎仪是干啥的,以上这一步是什么作用? 谢谢。
目前国内对细胞破碎机的研究局限于实验研究,仅对某种结构均质阀的均质效果进行验证与分析,或是选择结构参数。实验研究的局限性使这种分析不够全面。高压细胞破碎机是目前生物工程领域广泛使用的一种细胞破碎机。作者结合近期国外对高压细胞破碎机的理论研究工作,应用半经验半理论的方法,分析探讨了高压细胞破碎机的均质理论。高压细胞破碎机的结构及工作原理: 高压细胞破碎机由高压泵和破碎阀两部分组成,高压泵通常采用柱塞往复泵,其结构与一般柱塞泵相同。破碎阀安装在柱塞泵的排出管路上,一般由阀芯和阀座构成,阀芯和阀座的结构形式对破碎效果、能耗以及阀的磨损影响极大。国外对破碎阀的结构进行了大量研究,设计出许多不同结构的破碎阀,研究主要围绕下列问题进行:1,在较低操作压力下提高破碎效果2,提高阀的使用寿命。意大利Niro Soavi公司为此,开发出R型细胞破碎阀,经过多年的实际使用,获得用户的认可。高压细胞破碎机工作原理: 高压细胞破碎机有一个或数个往复运动的柱塞,物料在柱塞作用下进入可调节压力大小的阀组中,经过特定宽度的限流缝隙(工作区)后,瞬间失压的物料以极高的流速(1000米/秒,最高可达1500米/秒)喷出,碰撞在阀组件之一的碰撞环上,产生三种效应: 空穴效应:被柱塞压缩的物料内积聚了极高的能量,通过限流缝隙时瞬间失压,造成高能释放引起空穴爆炸,致使物料强烈粉碎细化。(主要应用于均质) 撞击效应:物料通过可调节限流缝隙的以上述极高的线速度,喷射到用特殊材料制成的碰撞环上,造成物料粉碎。(主要应用于细胞破碎) 剪切效应:高速物料通过泵腔内通道和阀口狭缝时会产生剪切效应。(主要应用于乳化)经过这三种效应处理过的物料可均匀细化到0.1μm-2μm粒径。
随着重组DNA技术得到广泛应用以来,生物技术发生了质的飞跃。很多基因工程产物都是胞内物质,必须将细胞破壁,使产物得以释放,才能进一步提取,因此细胞破碎是提取胞内产物的关键步骤,破碎方法的得当与否,直接影响到所提取产品的产量、质量和生产成本。现将近年来常用的几种细胞破碎方法介绍一下。 1. 高压匀浆法 设备是高压匀浆器,它由高压泵和匀浆间组成,美国Microfluidics公司和ATS公司均有产品出售。其破碎机理:细胞在一系列过程中经历了高速造成的剪刀,碰撞以及由高压到常压的变化从而造成细胞的破碎。 存在的问题;较易造成堵塞的团状或丝状真菌,较小的革兰氏阳性首以及有些亚细胞器,质地坚硬,易损伤匀浆阀,也不适合用该法处理。 2. 高速珠磨法 设备是珠后机,瑞士WBC公司和德国西门子机械公司均制造各种型号的珠磨机,其破碎机下:微生物细胞悬浮液与极细的研磨剂在搅拌浆作用下充分混合,珠子之间以及珠子和细胞之间和互相剪切、碰撞,促使细胞壁破碎,释出内含物,在珠波分离器的协助下,珠子被滞留在破碎室内,浆液流出,从而实现连续操作,破碎中,生的热量由夹套中的冷却液带走。 存在的问题:操作参数多,一般赁经验估计并且珠子之间的液体损失30%左右。 3. 超声破碎 频高于15-20KHz的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎。其破碎机理:可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。 存在问题;超声波破碎在实验室规模应用较普遍,处理少量样品时操作简便,液量损失少,但是超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传递,散热均有困难。 4. 酶溶法 就是用生物酶将细胞壁和细胞腊消化溶解的方法。常用的溶酶有溶菌酶β-1.3-葡聚糖酶、蛋白酶等。 存在的问题;易造成产物抑制作用,这可能是导致胞内物质释放率低的一个重要因素。而且溶酶价格高,限制了大规模利用。若回收溶酶,则又增加百分离纯化溶酶的操作。另外酶港法通用性差,不同菌种需选择不同的酶。 5. 化学渗透法 某些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使内合物有选择地渗透出来。其作用机理;化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结构与组成。 存在的问题;时间长,效率低;化学试剂毒性较强,同时对产物也有毒害作用,进一步分离时需要用透析等方法除去这些试剂;通用性差:某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。 本文介绍了几种细胞破碎的方法,可谓各有千秋,在实际应用中,应尽量考虑全面,选择最科学、有效的方法。
超声波细胞破碎仪是利用一种超声波在液体中产生的空化效应而使目标细胞破碎的多功能、多用途的仪器。超声波细胞破碎仪的原理:由换能器将电能转换为超声能,超声能量作用于液体介质产生密集的空泡,随着空泡的生长破裂,产生巨大的剪切力及高温高压,从而起到将目标细胞破碎乳化的目的。超声波细胞破碎仪用途广泛:1、超声波提取生物纳米在超声波化学反应中,由空化效应产生的强压力脉冲,能够产生许多化学合成所要求的高温高压,超声波化学合成所利用的正是空化效应的能量,利用这些能量能在一些特殊粉末表面合成出需要的纳米粒子。 2、超声波制药(1)注射用药的细化、均化——将磷脂类与胆固醇混合用适当方法与药物混合在水溶液中,经超声细化、均化得到更小的利于静脉注射的微小药物粒子。(2)中草药提取——利用超声分散破坏植物组织,加速溶剂穿透组织作用,提高中草药有效成分提取率。如金鸡纳树皮中全部生物碱用一般方法侵出需5小时以上,采用超声分散只要半小时即可完成。(3)制备混悬剂——在超声空化和强烈搅拌下,将一种固体药物分散在含有表面活性剂的水溶液中,可以形成1um左右口服或静脉注射混悬剂。例如“静注喜树碱混悬剂”、“肝脏造影剂”、“硫酸钡混悬剂”等。(4)疫苗制备——将细胞或病菌借助于超声作用将其杀死以后,再用适当方法制成疫苗。 3、超声波对化妆品的分散为了更进一步提取药物精华和粒子微细化,并节约生产成本,达到分散、乳化效果,使化妆品更深入渗透到肌肤里层,让肌肤很好的吸收,发挥药物的效力和作用,采用超声波乳化可达到非常理想的效果。 4、超声波对酒的醇化酒味醇厚的主要影响因素是酸的形成、酯化。刚出厂的白酒含有戍醇,有辛辣味,传统制造时,这种气味要经过很长时间贮藏才能使酒味变醇。而利用超声波处理的白酒可使酒的老熟时间缩短1/3到1/2。超声波细胞破碎仪可以并且已经被广泛用于生物化学、微生物学药理学、物理学、动物学、农学、医学、制药等领域的教学、科研、生产。
[b][font=微软雅黑][size=10.5pt]一、机械破碎法:[/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器[/font] [font=微软雅黑]等将细胞破碎开来[/font] [font=微软雅黑]。[/font][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]1. 高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]2. 玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。[/size][/font][b][font=微软雅黑][size=10.5pt]二、物理破碎法:[/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=10.5pt]指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]1.用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂(借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器)。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]机制:可能与强声波作用溶液时,气泡产生、长大和破碎的空化现象有关,空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]超声波破碎的效率取决于声频、声能、处理时间、细胞浓度和细胞类型等。(使用时注意降温,防止过热)。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]2. 高压破碎:细胞悬浮液从高压室的环状隙喷射到静止的撞击环上,被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切的碰撞及高压到常压的变化,从而破碎释放内含物。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]这是一种温和的、彻底破碎细胞的较理想的方法。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]3. 反复冻融法:将细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。[/size][/font][b][font=微软雅黑][size=10.5pt]三、化学破碎法:[/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]指利用甲醛、丙酮等有机溶剂或表面活性剂作用于细胞膜,使细胞膜的结构遭到破坏或透性发生改变[/font] [font=微软雅黑]。[/font][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]有些动物细胞,例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠([/font]SDS)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏。浓度一般为1mg/ml。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]四、酶学破碎法[/font] [font=微软雅黑]:[/font][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]选用合适的酶,使细胞壁遭到破坏,进而在低渗溶液中将原生质体破碎开来。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]细菌细胞壁较厚,可采用溶菌酶处理效果更好。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]裂解液标准配方[/font]: :50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在这个pH范围内比较好发挥作用) 。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]综合叙述:无论用哪一种方法破碎组织细胞,都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中,使大分子生物降解,导致天然物质量的减少,加入二异丙基氟磷酸([/font]DFP)可以抑制或减慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入PMSF也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且应该在破碎的同时多加几次;另外,还可通过选择pH、温度或离子强度等,使这些条件都要适合于目的物质的提取。[/size][/font]
条形酵母是将酵母通过小孔注入到装有液体氮的气罐中压缩制成的。将有1mm的筛子扣入到装有10-20 ml球状酵母的50ml破碎罐的顶部,经过离心破碎变成了2L的条状物。压力是由人工用60ml的自由活塞注射器注入罐内,条状可以在-80C°下被保存。 使用上海净信JXFSTPRP全自动样品快速研磨仪对酵母进行研磨,将不锈钢钢珠和样本分别装入研磨钢罐中,然后放入到用聚苯乙烯盒子盛放的液氮中,当预冷冻过程结束后,时间一分钟左右,或者直到原来沸腾的液体氮恢复平静,将破碎罐从液氮中取出,并要将破碎罐沾有的液体全部清理干净,以避免在破碎过程中发生爆炸。研磨钢罐最好用坩埚钳或大镊子夹取出来,而且通常要带经过冷冻的手套,冻伤以免。 研磨钢罐中酵母量不要太多,否则可能会研磨不充分,留有残渣,一般为研磨钢罐的1/3左右为宜,把刚从液氮中取出的钢罐安装在净信JXFSTPRP全自动样本快速研磨仪中,分5次进行研磨,设置频率55hz,20s,每次间隔都把研磨罐放入液氮中冷却。 在每次破碎后都要将破碎罐取下,放入到液氮中进行冷冻,当液氮不在沸腾时,可以将钢罐取出,破碎可以继续进行。 经过100秒的破碎后,我们通过显微镜观察可以发现95%的酵母已经达到破碎效果,用于下一步的实验过程。剩余的酵母可以储存,备用。研磨钢罐和钢珠都可重复利用,破碎罐和破碎球可以用温的乙醇清洗,放到干燥处贮存。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502051131_534361_2983531_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502051131_534362_2983531_3.jpg
[color=#333333]组织破碎提取法是在常温液体状态下利用高速破碎、高速研磨、高速搅拌和超分子渗透等技术,数分钟内对药材进行组织破碎、研磨至细微颗粒,通过细胞组织的破裂和组织外围溶剂的快速渗透与溶解,使药材组织细胞内的目标生物活性成分以最快的速度、最低的能耗、最大的收率迅速从细胞中解离出来进入溶剂体系中,实现药材组织细胞内外有效成分分子浓度的平衡,且不会破坏热敏成分、并达到快速绿色提取的效果。[/color]
作为精密科研仪器,大家在使用LC-CS650超声波细胞破碎仪时要注意哪些呢?下面就是几点常见的注意要点。1、切记将超声变幅杆插入样品后才能开机,防止空载对仪器的损伤。2、变幅杆探头入水深度:1到2 厘米之间,液面高度宜30mm以上,探头居中不可贴壁。3、超声参数设置: 1)时间:时间设定应以超声短时多次原则,超声工作时间应小于5秒,间隙时间应大于或等于超声时间,以便于热量散发。2)超声功率: 不宜太大,以免样品飞溅或起沫。小于10ml样品容量,功率应在200w以内,选用2mm超声探头(2MM的小探头功率严禁超过350W);10-200ml样品容量,功率应在200-400w,选用6mm超声探头;200ml以上的样品容量,功率在300-600w,选用10mm超声探头;(2MM的小探头功率严禁超过350W)3)破碎容器选择:根据样品量选择破碎杯(可用烧杯代替);参数设定实例:如100ml大肠杆菌样品设置参数:300W, 70次,超声5秒,间隙5秒(总时间为10分钟)。
我有一台GC-MS今天在维护衬管的时候发现衬管在仪器里破碎了。该怎样把玻璃碎片完全取出呢?
我想问超声破碎仪能用于细胞器分离吗?有人做过相关实验吗?其中的原理是怎么样的呢,是用不同的能量打碎不同的细胞器吗?还是……?
细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式,一种是在强启动子条件下的高效表达,由于蛋白的过度表达,使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲,以固体颗粒的形式堆积于胞间质中,这就是所说的包涵体,另外一种是间质内的可溶性表达,即可以发生正常折叠,具有生物活性。一般情况下,细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。超声破碎的条件一般是300 w,10 s/10 s,20分钟,具体条件可根据自身情况而定。 超声前菌体的准备:菌液离心后,先用PBS将菌沉淀洗2-3遍,然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体,裂解液的成分:50 mMTris-HCl, pH8.0, 2 mM EDTA,100 mM NaCl,加溶菌酶至100 ug/ml,0.1%Triton X-100。切记冰浴超声! 如何判断是否超声完全:根据网友的经验,一般有以下几个方面: 1. 外观判断:超声前菌悬液是浑浊的,超声完全后变的透明、清澈。2. 液体的粘滞性:超声后菌液从枪头滴下不粘连。3. 高速离心:有用高速离心检测超声破碎程度的(一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点)。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。 4. 染色:破碎后的菌液涂片,革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟,镜检。超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。一些需要注意的问题: 1. 蛋白以包涵体形式表达,追求的是高破碎率,要求细胞碎片很小,而另一种蛋白是可溶形式表达,所以细胞碎片不能很小,两种情况要求不同但目的相同,都是便于后期的固液分离。2. 如果超声时出现黑色沉淀,说明超声功率太强。3. 超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。4. 尽量防止泡沫的产生。