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细菌药敏鉴定仪

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细菌药敏鉴定仪相关的论坛

  • 【转帖】新生物传感器可检测细菌生长及药敏性

    美国密歇根大学的研究人员近日发明出一种新型生物传感装置,利用该装置,无需显微镜即可测量出细菌的生长过程及药敏特征。研究结果发表在1月15日的《生物传感器与生物电子学》期刊上。 科学家将这种装置称为“异步磁珠转动(AMBR)传感器”,它采用了一种可以在磁场中异步旋转的磁性小珠,任何附着到这种磁珠的物质都会降低其转速。在这项研究中,研究人员将杆状大肠杆菌附着在磁珠上,然后用AMBR传感器进行检测。“当单个细菌附着上去后……将极大地阻碍磁珠,使磁珠旋转速率减慢到原来的四分之一”,领导这项研究的Raoul Kopelman教授解释,“若细菌再长大一点点,阻碍力将持续增大,转速也将随之变化,因而我们可测量出细菌的这种纳米级生长变化”。利用同样的原理,该装置也可用于检测细菌的药敏性。当细菌受到药物影响停止持续生长,进而使得磁珠转速发生变化,于是研究人员便能在数分钟内知道药物是否对细菌产生了作用。“采用这种方法,我们可以检测到小至80纳米程度的细菌生长变化,远比一台光学显微镜管用——显微镜的解析度也就大约250纳米”,文章第一作者Paivo Kinnunen说,“这种方法可以应用到任何微米级或纳米级的大小变化检测中”。研究人员表示,这种新型生物传感装置或将有助于加快细菌感染治疗。(科学网 张笑/编译)相关仪器:IX71型倒置光学显微镜 异步磁珠转动传感器完成人:拉乌尔·科普曼课题组实验室:美国密歇根大学化学系、生物医药工程系、化学工程系、病理学系、应用物理计划兰道实验室 密歇根大学卫生系统临床微生物学与病毒学实验室群

  • [研究进展] 新生物传感器可检测细菌生长及药敏性

    美国密歇根大学的研究人员近日发明出一种新型生物传感装置,利用该装置,无需显微镜即可测量出细菌的生长过程及药敏特征。研究结果发表在1月15日的《生物传感器与生物电子学》期刊上。科学家将这种装置称为“异步磁珠转动(AMBR)传感器”,它采用了一种可以在磁场中异步旋转的磁性小珠,任何附着到这种磁珠的物质都会降低其转速。在这项研究中,研究人员将杆状大肠杆菌附着在磁珠上,然后用AMBR传感器进行检测。“当单个细菌附着上去后……将极大地阻碍磁珠,使磁珠旋转速率减慢到原来的四分之一”,领导这项研究的Raoul Kopelman教授解释,“若细菌再长大一点点,阻碍力将持续增大,转速也将随之变化,因而我们可测量出细菌的这种纳米级生长变化”。利用同样的原理,该装置也可用于检测细菌的药敏性。当细菌受到药物影响停止持续生长,进而使得磁珠转速发生变化,于是研究人员便能在数分钟内知道药物是否对细菌产生了作用。“采用这种方法,我们可以检测到小至80纳米程度的细菌生长变化,远比一台光学显微镜管用——显微镜的解析度也就大约250纳米”,文章第一作者Paivo Kinnunen说,“这种方法可以应用到任何微米级或纳米级的大小变化检测中”。研究人员表示,这种新型生物传感装置或将有助于加快细菌感染治疗。相关仪器:IX71型倒置光学显微镜 异步磁珠转动传感器完成人:拉乌尔·科普曼课题组实验室:美国密歇根大学化学系、生物医药工程系、化学工程系、病理学系、应用物理计划兰道实验室 密歇根大学卫生系统临床微生物学与病毒学实验室群http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09505.gif

  • 药敏试验方法

    药敏试验常用K-B法:1从孵育16-24小时的琼脂平板上(血平板),挑出单个菌落,直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。2在15分钟内,用无菌棉拭子蘸取调好的菌液,在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次,以从中挤出过多的菌液。3用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种,再重复操作两次,每次将平板转动60度,每次接种都应保证接种物均匀分布,最后用棉拭子涂抹平板的边缘。4将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下,以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触,不应再移动。5贴完纸片后,应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属,链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。6孵育24小时以后,测量各药敏纸片抑菌圈直径,与NCCLS手册比较,作出结果判断。说明:细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准,所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作,否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法.

  • 求抗微生物药敏感试验方法 最好是国标

    求抗微生物药敏感试验方法 最好是国标最近打算开展抗生素对大肠杆菌 金黄色葡萄球菌药敏试验,验证细菌对药物是否敏感。虽然找了一些方便,但都来源于江湖,http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09507.gif没找到有标准文本的支持,请教各位!求抗微生物药敏感试验方法 最好是国标。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09509.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/emyc1010.gif

  • 【原创大赛】点滴不要任意打,鱼肉不要随便吃——浅谈细菌耐药性检测

    【原创大赛】点滴不要任意打,鱼肉不要随便吃——浅谈细菌耐药性检测

    在刚刚闭幕的G20杭州峰会上,细菌对抗生素耐药性与英国脱欧、气候变化、难民、恐怖主义等5项被列举为影响世界经济的深远因素。那么,为什么细菌耐药性如此深受重视呢?1928年,弗莱明发现了青霉素,标志着人类进入了“抗生素时代”。然而,近些年来医院抗生素的过量使用,以及因畜牧业及水产养殖行业的抗生素滥用导致我们在日常食用鱼类、肉类等动物制品时无意中摄入了过量的抗生素,这使得越来越多的“超级细菌”(多重耐药菌)出现在公众的视线中。据《华盛顿邮报》报道,美国出现了第一例耐多粘菌素大肠杆菌感染病例。多粘菌素被称为“抗生素的最终防线”之一,而耐多粘菌素抗药菌在抗生素使用相对严格的美国出现,基本等于耐药末日已至。2016年英国政府发布抗生素耐药性噩耗,到2050年抗生素耐药性引发死亡可达每年千万!超过癌症!同样在今年,我国国家卫生计生委、发展改革委等14个部门联合印发了《遏制细菌耐药国家行动计划(2016-2020年)》。旨在为加强抗菌药物管理,遏制细菌耐药,维护人民群众健康,促进经济社会协调发展。目前面对细菌感染,人们依然要依赖抗生素,要想克服细菌耐药,就必须“综合治理”。就抗生素的应用与防止耐药而言,目前需要的是:优化抗生素治疗——即掌握治疗时给抗生素的剂量、疗程和给药方法。同时,畜牧业领域也必须控制抗生素的使用量,以减少食源性摄入的可能。另一方面,医院和疾控部门要加强耐药细菌监控。这是了解细菌耐药性趋势、正确制定治疗指南和恰当评定措施有效性的关键因素。不论是为测定出有效的给药量,还是要监控耐药细菌,都要进行的便是药敏实验。通过药敏实验得出的最低抑菌浓度(MIC),是控制抗生素给药剂量的重要参考依据。同时,这也是监控耐药细菌时需要参考的重要理论数据。如今,在实验室进行药敏实验主要通过以下几种方法:(1)纸片扩散法:含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上,纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散,形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制,形成透明的抑菌圈。其直径大小与药物浓度的对数呈线形关系。判断标准遵循CLSI折点标准。(2)稀释法:以一定浓度的抗菌药物与含有被试菌株的培养基进行一系列不同倍数稀释(通常为双倍稀释),经培养后观察最低抑菌浓度。包括琼脂稀释法、常量肉汤稀释法和微量肉汤稀释法。(3)E-test法:将抗菌药物按双稀释倍放置于 5mm×50mm塑料载体上,操作步骤同琼脂扩散法。(4)自动化药敏测定仪:基本原理-----利用光学测量法测定抗菌药物对细菌的作用。此方法使用的仪器较为昂贵,同时需要使用大量的专用试剂盒,故只被规模较大的实验室或医院科室采用。其中,稀释法因其能够实现仪器操作、快速批量测定、费用成本低等的特点,在大规模的实验室药敏实验中得到较多应用。稀释法中又分为琼脂稀释法、常量肉汤稀释法、微量肉汤稀释法,其中琼脂稀释法与微量肉汤稀释法被科研和药剂检验领域广泛采用。针对实验中的接种需求,目前国内外多家厂家推出了自动多点接种仪器。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609081436_608849_3129005_3.png上面列出的三款仪器是目前市面上具有代表性的三个品牌的多点接种仪。有专家预计,距下一代抗感染治疗方法出现,还需要20-30年的时间。可以预见的是,这段时期内,人们面对细菌感染会变得越来越“脆弱”。有不少人,到医院里点滴不敢打,在家鱼、肉也都不敢随便吃,生怕遇到耐药细菌的时候无药可医,但是改进治疗手段以及防控养殖行业抗生素滥用都需要有可参考的剂量,否则的话只能是事倍功半。积极开展药敏实验,能够为这些手段提供最有效的理论依据。在药敏实验这方面,西方国家起步早。近年来我国有关部门也逐渐重视起来,督促各方积极开展药敏实验,已经取得了一些进展,并还在不断的努力研究。相信在各方努力之下,耐药细菌终会被抑制,我们依然可以安心看病用药,尽情的大快朵颐!

  • 【金秋计划】药敏试验之E-试验

    [size=12px]E-试验(E-test)跟纸片扩散法和稀释法一样,也是药敏试验之一。E-试验是结合了纸片扩散法和琼脂稀释法的原理和特点,是一种抗生素浓度梯度稀释法直接测量MIC的药敏试验的体外药敏试验方法。 [b][b]一、E-试验原理[/b][/b]E-试验要用到E-试条,它是一条带有抗生素浓度梯度的塑料条。该条带表面涂有抗生素,浓度从条带一端的沿条带逐渐降低,形成连续的对数浓度梯度。将E试条放置于已接种有待测细菌的琼脂培养基上,经孵育后,可见一个以试条为中心的对称抑菌椭圆环,椭圆环边缘与试条交界处的刻度即为MIC值。 [font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][b]二[/b][/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][b]、E-试[/b][/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][b]验操作步骤[/b][/font]前面几个步骤跟纸片扩散法一样。[/size] [b][size=12px]1.菌液制备[/size][/b] [size=12px][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]采用划线法将大肠杆菌受试菌种和标准菌种接种于营养琼脂平板,35℃培养16-18h,然后挑取单菌落,重悬于3mL无菌生理盐水中,混匀后与标准比浊管比浊。[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]调整浊度与标准比浊管0.5麦氏相同。[/font][/size] [size=12px][b]2.倒平板[/b]将MH琼脂培养基溶化后倒平板,注意平皿中培养基厚度均匀,倒3套平板。[i]90mm×15mm,平板厚度均匀,约4mm厚,大约1/3高度。[/i][/size] [b][size=12px]3.涂平板[/size][/b] [size=12px] 用无菌棉棒蘸取菌液(金黄色葡萄球菌)。将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出,涂布在MH琼脂平板整个平面三次,每次旋转60度,最后沿周边绕两圈,保证涂均匀,平板加盖室温干燥5min。 [/size][align=center][size=12px] [/size][/align][size=12px][b]4.插入E试条[/b] 用无菌镊夹取试纸条柄端,将其垂直插入MH培养基,并确保E试条与培养基间无气泡。E试条抗菌药物面(通常标有浓度刻度)朝上,抗生素浓度高的一侧(有标记)靠培养皿。 E试条有垂直插入和平放两种,一般建议垂直插入方式。[/size] [b][size=12px]5.孵育[/size][/b] [size=12px][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][/font]将上述平板倒置于37℃恒温培养箱中培养,观察并记录抑菌圈大小。 [b]6.结果分析[/b]孵育后围绕着E试条可形成一个椭圆形的抑菌圈,抑菌圈与试条的横向相交处的读数刻度为 MIC值。[/size][align=center][size=12px] [/size][/align][size=12px][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, Helvetica Neue, PingFang SC, Hiragino Sans GB, Microsoft YaHei UI, Microsoft YaHei, Arial, sans-serif][b]三[/b][/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, Helvetica Neue, PingFang SC, Hiragino Sans GB, Microsoft YaHei UI, Microsoft YaHei, Arial, sans-serif][b]、E-试[/b][/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, Helvetica Neue, PingFang SC, Hiragino Sans GB, Microsoft YaHei UI, Microsoft YaHei, Arial, sans-serif][b]验与纸片扩散法和稀释法的异同[/b][/font]1.E试验、纸片扩散法和稀释法都是常用的药敏试验,都可以用来选择抗菌药物。[/size] [size=12px]2.E试验和纸片扩散法:操作相似,但E试验更简便,可以直接读取MIC值,相比,纸片扩散法比较繁琐,需要测量抑菌圈的大小。[/size] [size=12px]E试验和稀释法:虽操作上有差异,都可以确定MIC值,但E试条是带有抗生素浓度梯度的塑料条带,在琼脂平板上形成连续的浓度梯度,相比,稀释法比较繁琐,需要连续对倍稀释形成递减的抗生素浓度梯度。 [b]注意事项[/b][/size] [size=12px]1.E试条接触琼脂后,不能移动位置,以免影响抗菌药物在琼脂中的扩散和形成的浓度梯度。[/size] [size=12px]2.E试条需要按照说明书要求进行保存。3.E试条需要正规机构购买。4.平板中E试条的个数要根据平板大小,比如说90cm平板可以插入两条,150cm可以插入6条等。[/size]

  • 【分享】细菌鉴定仪出现“不能鉴定细菌”的处理

    [size=4] 我们对现今应用较为普遍的VITEK-AMS鉴定系统中报告“不能鉴定细菌”(UIO)菌株作了进一步分析,探讨其发生原因、处理方法,以期建立一套切实可行的仪器与手工方法相结合的细菌鉴定方法。[/size][size=4]  [b]一、材料与方法[/b][/size][size=4]  1. 仪器与试剂:VITEK-AMS 60型全自动细菌鉴定仪及其配套GNI、GPI、YBC试验卡(生物梅里埃公司产品)。[/size][size=4]  2. 试验菌株:1 025株本院1999.10.21-2000.3.3临床标本分离的菌株进行了Vitek- AMS鉴定,其中应用GNI 卡631例、GPI卡334例、YBC卡60例。[/size][size=4]  3.VITEK-AMS鉴定法:根据细菌表型特征,选择相应GNI+、GPI、YBC卡,严格按仪器操作说明进行,孵育后当检验地带网仪器报告结果为UIO时,挑取生长对照孔(GPI卡第1孔、GNI+卡第3孔、YBC卡第24孔)悬液于非选择性培养基上重新分离,观察是否纯培养,若是,分别按同法及以下两法鉴定。否则, 经纯培养后重新上机鉴定。[/size][size=4]  4. 双歧检索鉴定法:根据Vitek全自动微生物分析系统技术资料提供的双歧检索表,依生化结果检索至属或种。[/size][size=4]  5. 常规鉴定法:按照全国临床检验操作规程[1]进行,并经API系统(生物梅里埃公司) 复核鉴定至种。部分菌株鉴定依据文献[2]进行。 [/size][size=4]  [b]二、结果[/b][/size][size=4]  1. UIO发生机率:总共1025株细菌鉴定中,共出现UIO 44株,占4.3%。其中GPI卡334株,出现UIO16株,占4.8%;GNI+卡631株,出现UIO 24株,占3.8%;YBC卡60株,出现UIO4株,占6.7%。[/size][size=4]  2.UIO发生原因:在44株出现UIO中,9株(0.9%)为待检细菌不纯,3株(0.3%)为浊度不合要求,2株(0.2%)为接种物孵育时间过长(超过48h),2株(0.2%)为超出试验卡鉴定范围(均为臭鼻克雷伯菌),1株(0.1%)为菌悬液不乳化(粘液型绿脓假单胞),其他如冲液时气泡过多,或其他原因不确定者27株(2.6%)。[/size][size=4]  3.处理:(1)9株不纯菌株,经纯培养后,重新上机,均能成功鉴定。(2)35株纯培养但报告UIO菌株中,18株(1.8%)可通过双歧检索法获得结果,并与常规分类法结果完 全一致。3株(0.3%)浊度不合要求者经调整浊度后重新上机获得结果。 2株(0.2%)接种物超过48h菌株,经重新孵育后得以鉴定。1株(0.1%)为悬液不乳化菌株经|检验地带网|配制3个麦氏单位菌悬液,然后低速离心1~2 min(1 000r/min),取上清液比浊并调节到所需的浓度后,得以鉴定。(3)余下11株(1.1%)菌中,仅2株(1株为大肠埃希菌,另1株为臭鼻克雷伯菌)不能从双歧检索表中查出结果,其他9株(主要为洋葱假单胞菌、琼氏不动杆菌、木糖产碱氧化杆菌等),虽能从双歧检索表获得结果,但与常规鉴定法结果不相符合,或出现矛盾的生化结果,需增加试验项目,按常规鉴定方法及 API系统报告结果。[/size][size=4]  [b]三、讨论[/b][/size][size=4]  实验表明95.7%的临床分离菌株可通过VITEK-AMS正确鉴定,仅4.3%菌株无法一次性成功鉴定。细菌不纯是产生这部分菌株的主要原因(占近1/5),其他如待检菌菌龄、菌液浓度也是关系鉴定成败的关键。由于仪器本身原因(如对于罕见生物型、新种或不典型菌株无法鉴定)也不可忽视。正确处理这部分菌株,有重要的临床意义。实际应用自动化仪器时,必须挑取纯培养菌落,可提高鉴定率,对确认为纯培养而无法鉴定者,可通过传统分类法,参照双歧检索表能成功鉴定将近一半菌株,因此合理应用双歧检索表不失为一种较好的辅助方法。但仍有占总数1.1%菌株需用常规方法或其他方法如API系统重新鉴定。[/size][size=4]  参考文献[/size][size=4]  1,叶应妩,王毓三,主编. 全国临床检验操作规程. 第2版. 南京: 东南大学出版社,1997.5.[/size][size=4]  2,Patrick R. Manual of clinical Microbiology (7th Edition). Washington DC: American Society for Microbiology, 1999.316-647. [/size]

  • 菌种保藏中的细菌鉴定方法

    作为科研生产中最重要的基础性资源—菌毒种,其收集、保藏及相关的研究工作在我国正处于整理、整合以及全方面逐步正规化阶段.2003年7月23日,科技部在北京召开了“国家科技基础条件平台建设”部际联席会和专家顾问组成立大会,正式启动了国家科技基础条件平台建设工作.国家自然科技资源共享平台建设作为其中的一个重要组成部分同步启动.作为该项8的一个重要组成部分,微生物菌种资源整理、整合工作同期启动,在此项工作中,中国兽医药品监察所承担了兽医微生物资源整理、整合工作.本所在行业内发展了数家加盟单位,在整理、整合菌种资源的过程中遇到了一些实验室细菌鉴定结果出现偏差的问题.经分析调查,多是由于实验室人员结构以及实验室的硬件水平差别较大等原因,造成实验室间鉴定能力的参差不齐,致使鉴定项目完成情况不尽相同,细菌鉴定结果出现偏差. 细菌鉴定是指将分离培养获得的病原菌,通过纯化培养使其达到不含有其他微生物的纯培养程度,继而进行系统鉴定.而菌种保藏机构在收集一些已经冻干的菌种时,应在开启后经过两代的适应性培养方可进行复核性的系统鉴定.系统鉴定是通过细菌的形态结构、生长特性、抗原性、病原性以及目前流行的核酸测定方法等检测,并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型(群).目前菌种保藏机构通常使用的细菌鉴定方法大致有以下几种:

  • 【分享】全自动微生物鉴定系统在临床微生物检验中的应用

    [size=4] 传统的微生物分离、鉴定方法操作繁杂,周期长,准确性差,灵敏度低,对实验室技术人员的专业技术、操作技能、工作经验要求极高,快速和准确获得细菌的鉴定及药敏结果是非常必要的。近年来随着计算机的发展及广泛应用,微生物鉴定的自动化技术近十几年得到了快速发展。先后出现了许多全自动细菌鉴定与药敏系统,比如VITEK 系统、MicroScan WaikAway系统、MicroScan AS-4 微生物分析仪、PHOENIXTM系统等。这些技术的应用,为医学微生物检验工作提供了一个简便、科学的细菌鉴定程序,大大提高了细菌鉴定的准确性,在很大程度上提高了工作效率,但同时也应注意一些问题,本文对几种常用的鉴定系统在临床微生物检验中的应用情况做一综述。[back=rgb(243, 40, 255)]1 全自动微生物鉴定系统的基本原理 [/back] 全自动微生物鉴定系统是基于生物信息编码(数码)鉴定细菌的新方法。数码鉴定是指通过数学的编码技术将细菌的生化反应模式转换成数学模式,给每种细菌的反应模式赋予一组数码,建立数据库或编成检索本。通过对未知菌进行有关生化试验并将生化反应结果转换成数字(编码),查阅检索本或数据库,得到细菌名称。其基本原理是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。 鉴定系统的工作原理因不同的仪器和系统而异。不同的细菌对底物的反应不同是生化反应鉴定细菌的基础,而试验结果的准确度取决于鉴定系统配套培养基的制备方法、培养物浓度、孵育条件和结果判定等。大多鉴定系统采用细菌分解底物后反应液中pH的变化,色原性或荧光原性底物的酶解,测定挥发或不挥发酸,或识别是否生长等方法来分析鉴定细菌。 药敏试验分析系统的基本原理是将抗生素微量稀释在条孔或条板中,加入菌悬液孵育后放入仪器或在仪器中直接孵育,通过测定细菌生长的浊度,或测定培养基中荧光指示剂的强度或荧光原性物质的水解,观察细菌的生长情况。在含有抗生素的培养基中,浊度的增加提示细菌生长,根据判断标准解释敏感或耐药。[/size]

  • 【分享】细菌的分布及外界因素对细菌的影响

    一、细菌的分布: 微生物种类繁多,繁殖迅速,分布广泛,不论自然界的空气、土壤、水,生活中的食物、各种物体和器械表面,以及动物和人的皮肤粘膜、与外界相通的腔道中都广泛存在着数量极其庞大的各种微生物,其中以细菌、放线菌最多。因此,了解微生物在自然界及正常人体的分布,对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。 (一)空气中细菌的检查(设计性实验选题) (二)水中细菌的检查(设计性实验选题) (三)人体皮肤表面细菌的检查(设计性实验选题) 【附录】细菌菌落的计数方法 ①选择生长均匀,无片状菌苔生长的平皿观察。一般先用肉眼观察,用记号笔在平板底上进行点数(以免遗漏),然后再持放大镜检查有无遗漏的微小菌落。 ②如菌落多而密集,可用分区法或菌落计数器计数。分区法是用记号笔在平皿底部通过圆心做垂直线,分为http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123705956.gif四区,再分别选择菌落密集和稀疏的两个区,再做平分线,使每一小区为平皿面积的1/8 或1/16,然后再分别挑选菌落稀疏和密集的两小区 进行计数,所得数乘以8或16,即为该平皿的菌落总数。(图4-1) ③简易的菌落计数器是一块玻璃板上刻划有144个面积为1平方厘米的正方形小格。将长有菌落的培养皿放上,计算10个小方格内的菌落数,如为30个,则平均1小方格为3个菌落。若培养皿直径是9厘米,则半径为4.5厘米,整个培养皿上的菌数是3个×3.1416×(4.5)2=191个菌落。二、外界因素对细菌的影响微生物和外界环境有密切的关系,当外界环境适宜就能进行正常的新陈代谢生长繁殖;当外界环境条件发生巨大改变,可导致微生物的主要代谢活动发生障碍,生长停顿,甚至死亡。在医学上常用人工的方法造成对微生物不利的环境,来抑制或杀灭微生物,以达到消毒灭菌的目的。其方法大致可分为物理、化学和生物三大类。 (一)物理因素对细菌的影响 1、温度对细菌的影响2、紫外线杀菌试验 (二)化学因素对细菌的影响 化学消毒剂的杀菌作用(三)生物因素对细菌的影响 噬菌体的特异性裂解细菌试验 【材料】大肠杆菌、痢疾杆菌的肉汤培养物、痢疾杆菌噬菌体、普通肉汤、普通琼脂平板。 【方法】 (1)将琼脂平板划分成三等份,注明1、2、3。 (2)分别以接种环取菌后,在1、3处涂布痢疾杆菌,2处涂布大肠杆菌。http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123903343.gif(3)分别沾取一接种环的痢疾杆菌噬菌体加于1、2处中央,(注意不要交叉污染),另取一接种环的肉汤放于3处中央。 (4)置37℃孵育24小时后取出,观察噬菌斑出现的位置(见图4-2),并记录之。 (四)细菌对抗生素的敏感性试验---纸片扩散法   又称Bauer-Kirby法。是将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上,经培养后,可在纸片周围出现无细菌生长区,称抑菌圈。测量抑菌圈的大小,即可判定该细菌对某种药物的敏感程度。体外药敏结果可作为病人治疗选用药物的参考。 【材料】金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌18~24小时培养物、普通琼脂平板、小镊子;含有青霉素、庆大霉素、红霉素、复合磺胺、链霉素等抗生素的干燥滤纸片。 【方法】 (1)将金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌培养物密集均匀地涂布整个平板。 (2)将含有抗生素药物的滤纸片用烧灼灭菌的镊子分别贴于平板表面,相互间应间隔一定距离。 (3)37℃培养24小时后,观察结果。 【结果】 根据药物纸片周围抑菌圈直径的大小来判断该菌对各种药物的敏感程度。判断标准见表4-1 (五)中草药对细菌的抑菌作用测定

  • 气相色谱用于细菌鉴定分型

    [color=#444444]我想做水样里所有可培养细菌的鉴定分型,请问用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]可不可以啊?[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]做细菌的鉴定分型可以做到什么程度?比如说属、种、亚种?[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法在这方面比生化检测有什么优势?大家要帮帮我啊[/color]

  • 分离的细菌如何鉴定?

    问:分离的细菌如何鉴定?答:细菌的传统鉴定 1. 形态特征及染色结果 ①革兰氏染色 ②鞭毛染色 ③荚膜染色 ④细胞壁染色(NaCl法:1.取1d25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。2.挑一环培养6h的细菌在25%的NaCl中涂匀,自然凉干。3.滴加0.01%的结晶紫于其上,30s后水洗干燥,油镜观察。) ⑤抗酸染色 2. 培养特征观察取菌龄24-28h的菌3.6接种于PDA平板,PDA斜面,营养肉汤中培养24h,进行琼脂柱,明胶穿刺培养,30℃培养24h。 3. 生理生化实验需氧性测定和运动性测定:将斜面培养24h的待测菌用接种针穿刺到培养基管底,3d后观察变化。如果菌落沿培养基表面生长,表明为好氧菌,反应为阳性,如果菌落沿穿刺线生长,反应为阴性。培养基成分:蛋白胨0.2g,NaCl0.5g,K2HPO40.2g,琼脂0.5-0.6g,葡萄糖1.0g,水100ml。 4. 生长温度测定在肉汤培养基(外加1%葡萄糖)中用接种针接种,在恒温水浴锅中不同温度下([c

  • 【分享】数显生化培养箱 16s rrna细菌鉴定原理

    一、微生物数码鉴定法 早在七十年代中期,一些国外公司就研究出借助生物信息编码鉴定细菌的新方法。这些技术的应用,为医学微生物检验工作 提供了一个简便、科学的细菌鉴定程序,大大提高了细菌鉴定的准确性。目前,微生物编码鉴定技术已经得到普遍应用,并早已商品化和 形成独特的不同细菌鉴定系统数显生化培养箱。如API、Micro-ID、RapID、Enterotube和Minitek等系统。这种鉴定 系统是自动化鉴定系统的基础。 ( 一)数码鉴定法基本原理数码鉴定是指通过数学的编码技术将细菌的生化反应模式转换成数学模式,给每种细菌的反应模式赋予一组数码,建立数据库或编成检索 本。通过对未知菌进行有关生化试验并将生化反应结果转换成数字(编码),查阅检索本或数据库,得到细菌名称。其基本原理是计算并 比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。随着电脑技术的进步,这一过程已变得非常容易。 1.数显生化培养箱 简要介绍计算步骤:(1)出现频率(概率)的计算:将记录成阳性或阴性结果转换成出现频率:①对阳性特征,则除以100即得。②对阴性特征,除以1 00的商被1减去即可。③说明:对“0”和“100”,因这2个数太超量,为了使结果不出现过小或过大,而用相似值0.01或0 .99值代替。(2)在每一个分类单位中,将所有测定项目的出现频率相乘,得出总出现频率。(3)在每个分类菌群中的所有菌的总出现频率相加,除以一个分类单位的总出现频率,乘100,即得鉴定%(%id)(4)在每个菌群中,再按%id值大小顺序重新排列。将未知菌单次总发生频率除以最典型反应模式单次总发生频率,得到模式频率T 值,代表个体与总体的近似值。T值越接近1,个体与总体越接近,鉴定价值越大。按%id大小排序,将相邻两项的%id之比为R, 代表着首选条目与次选条目的差距,差距越大,价值越大。如果%id≥80,参考T及R值可作出鉴定。 2.在编码检索本中检索数据谱得出的结果有以下几种形式(以API鉴定系统为例)。 (1)有此数码谱:①有一个或几个菌名条目及相应的鉴定值(%id和T值)。②对鉴定结果好坏的评价,最佳……等。 ③用小括号列出关键的生化结果及阳性百分率。④有时,鉴定结果不佳或有多条菌名条目,需进一步补充试验项目才能得出良好的鉴定结 果。⑤指出某些注意要点,需用“推测性鉴定”,并将此菌送至参考实验室;需用“血清学鉴定”,作进一步的证实等。 (2)无此数码谱:可能有以下原因:①此生化谱太不典型。②不能接受,鉴定值低(%id<80.0)。③可疑。需进一步确认是否 纯培养,重新鉴定,可与供应商技术服务部联系。3. 结果解释(1)如果排序第一的细菌%id≥80.0,则可将未知菌鉴定在此条目中,并按%id值的大小对鉴定的可信度作出评价。%id≥ 99.9和T≥0.75为最佳的鉴定;%id 99.0~98.9之间,T≥0.5为很好的鉴定 数显恒温水浴锅 恒温培养摇床 omega试剂盒

  • 【资料】伯杰细菌鉴定手册

    伯杰细菌鉴定手册第八版中文版[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=191098]伯杰细菌鉴定手册(上).rar[/url]

  • 【原创大赛】细菌生化鉴定试验你了解几何?——三糖铁培养基的灵活应用

    细菌生化鉴定试验你了解几何?——三糖铁培养基的灵活应用摘要:糖类是细菌合成菌体成分必需的原料,各类细菌对各种糖类的分解能力也有差异,葡萄糖、乳糖、蔗糖是三糖铁培养基的三种糖,通过细菌对这三种糖的利用和分解产物做生化鉴定已经很有历史了。笔者通过对三糖铁培养基的应用,总结了三糖铁培养基在细菌鉴定中的灵活应用。总结:三糖铁培养基在肠道菌的鉴定中起到很重要的作用,只要灵活准确应用,将会在细菌的生化鉴定试验的第一步中起到关键性的作用。

  • 【求购】细菌检定分类系统

    领导要购买细菌检定分类系统,我不太懂,又不敢问,请各位大虾们帮忙看看哪里能买到这个东西,谢谢!急!![em06]

  • 34万!哈尔滨市疾病预防控制中心实验室用药敏培养基及试剂耗材采购项目

    [b][font=inherit]项目概况[/font][/b]实验室用药敏培养基及试剂耗材采购招标项目的潜在投标人应在公告期内凭用户名和密码,登录黑龙江省政府采购管理平台(http://hljcg.hlj.gov.cn/),选择“交易执行-应标-项目投标”,在“未参与项目”列表中选择需要参与的项目,确认参与后即可获取招标文件,并于 2023年08月30日 15时00分 (北京时间)前递交投标文件。[b][font=inherit]一、项目基本情况[/font][/b]项目编号:[230101]zzgj[GK]20230016项目名称:实验室用药敏培养基及试剂耗材采购采购方式:公开招标预算金额:301,480.00元采购需求:合同包1(实验室用药敏培养基及试剂耗材采购):合同包预算金额:301,480.00元[table=100%][tr][td]品目号[/td][td]品目名称[/td][td]采购标的[/td][td]数量(单位)[/td][td]技术规格、参数及要求[/td][td]品目预算(元)[/td][td]最高限价(元)[/td][/tr][tr][td]1-1[/td][td]其他非病人用诊断检验、实验用试剂[/td][td]药敏培养基套组[/td][td]800(套)[/td][td]详见采购文件[/td][td]196,000.00[/td][td]-[/td][/tr][tr][td]1-2[/td][td]其他非病人用诊断检验、实验用试剂[/td][td]药敏培养基套组[/td][td]160(套)[/td][td]详见采购文件[/td][td]55,200.00[/td][td]-[/td][/tr][tr][td]1-3[/td][td]其他非病人用诊断检验、实验用试剂[/td][td]中性罗氏培养基[/td][td]300(套)[/td][td]详见采购文件[/td][td]4,800.00[/td][td]-[/td][/tr][tr][td]1-4[/td][td]其他非病人用诊断检验、实验用试剂[/td][td]分子试剂[/td][td]96(支)[/td][td]详见采购文件[/td][td]23,040.00[/td][td]-[/td][/tr][tr][td]1-5[/td][td]其他医药品[/td][td]一次性口罩(N95或KN95)[/td][td]600(个)[/td][td]详见采购文件[/td][td]12,000.00[/td][td]-[/td][/tr][tr][td]1-6[/td][td]其他非病人用诊断检验、实验用试剂[/td][td]结核菌荧光染色液[/td][td]2(套)[/td][td]详见采购文件[/td][td]840.00[/td][td]-[/td][/tr][tr][td]1-7[/td][td]其他非病人用诊断检验、实验用试剂[/td][td]药敏培养基套组[/td][td]32(套)[/td][td]详见采购文件[/td][td]9,600.00[/td][td]-[/td][/tr][/table]本合同包不接受联合体投标合同履行期限:自合同签订之日起一年[b][font=inherit]二、申请人的资格要求:[/font][/b]1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定 2.落实政府采购政策需满足的资格要求: 无。3.本项目的特定资格要求:合同包1(实验室用药敏培养基及试剂耗材采购)特定资格要求如下:(1)供应商需提供医疗器械经营许可证(2)所投产品需提供合法渠道来源证明[b][font=inherit]三、获取招标文件[/font][/b]时间: 2023年08月09日 至 2023年08月16日 ,每天上午 00:00:00 至 12:00:00 ,下午 12:00:00 至 23:59:59 (北京时间,法定节假日除外)地点:公告期内凭用户名和密码,登录黑龙江省政府采购管理平台(http://hljcg.hlj.gov.cn/),选择“交易执行-应标-项目投标”,在“未参与项目”列表中选择需要参与的项目,确认参与后即可方式:在线获取售价: 免费获取[b][font=inherit]四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点[/font][/b]2023年08月30日 15时00分00秒 (北京时间)地点:黑龙江省政府采购管理平台线上提交[b][font=inherit]五、公告期限[/font][/b]自本公告发布之日起5个工作日。[b][font=inherit]六、其他补充事宜[/font][/b]1、投标人应在黑龙江省政府采购网(http://hljcg.hlj.gov.cn)提前注册并办理电子签章CA,CA锁用于制作标书时盖章、加密和开标时解密(CA办理流程及驱动下载参考黑龙江省政府采购网(http://hljcg.hlj.gov.cn)办事指南-CA办理流程)具体操作步骤,供应商在黑龙江省政府采购网(http://hljcg.hlj.gov.cn/)下载政府采购供应商操作手册。 2、投标人制作电子投标文件及其他相关操作说明,详见黑龙江省政府采购网(http://hljcg.hlj.gov.cn)下载专区--系统操作手册--黑龙江省政府采购管理平台-供应商操作手册。3、投标人需在项目开标时间截止前半小时登陆开标大厅进行签到,在规定时间进行解密,签名确认。4、本次招标公告在黑龙江省政府采购网、中国政府采购网上发布,其他网址转载内容与我公司无关,也不具备法律效力。[b][font=inherit]七、对本次招标提出询问,请按以下方式联系。[/font]1.采购人信息[/b]名称:哈尔滨市疾病预防控制中心地址:道外区卫星路30号联系方式:0451-85985465[b]2.采购代理机构信息[/b]名称:中资国际工程咨询集团有限责任公司地址:黑龙江省哈尔滨市市辖区经开区南岗集中区汉水路76-6号软件园二期A栋1-2层17号办公联系方式:0451-81888888 转 六部、邮箱:yw6@zzgj.net.cn[b]3.项目联系方式[/b]项目联系人:李女士、蒋女士电话:0451-81888888 转 六部、邮箱:yw6@zzgj.net.cn

  • [2013能力验证计划]番茄细菌性溃疡病菌鉴定

    项目编号:FATA PT-004 2013报名日期:2013-2-1——2013-12-31实施日期:2013-2-1——2013-12-31项目状态:报名中联系方式: 联系人:厉艳 甘琴华 电话:053280885609、80885606传真:0532-80885612E-mail:liyansd@sohu.com详细内容: 测试项目:番茄细菌性溃疡病菌对应的实验室领域代码:0602.03 对应的PT子领域:植物/细菌可能涉及的测试/测量方法:SN/T 2568-2010《番茄细菌性溃疡病菌检疫鉴定方法》中的PCR检测

  • 【原创大赛】细菌的实验室检测方法进展——金黄色葡萄球菌的鉴定方法

    细菌的实验室检测方法进展——金黄色葡萄球菌的鉴定方法摘要:金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界,多存在于人和动物的鼻腔、咽喉、皮肤及与外界相通的腔道。能引起人和动物机体局部、脏器的化脓性感染,重者可引起败血症、脓毒血症等全身感染。金黄色葡萄球菌也是国内外最常见的细菌性食物中毒病原菌之一,在我国由金黄色葡萄球肠毒素引起的食物中毒占细菌性食物中毒事件的前几位。典型的金黄色葡萄球菌为球型,显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌肠毒素被分为7 个血清型,A、B、C(C1、C2、C3)、D、E。目前实验室对金黄色葡萄球菌的检验有传统培养法,金黄色葡萄球菌肠毒素的检测方法,脉冲场凝胶电泳检测分型方法和聚合酶链式反应(PCR)技术对金黄色葡萄球菌的检测方法。

  • 美国药典24版细菌内毒素检查法

    本文是USP24细菌内毒素检查法(BACTERLAL ENDOTOXINS TEST)的译文,但目前执行的标准是USP24版第二增补本(USP—NF19 Second Supplement)的细菌内毒素检查法,读者可对照学习,从中可看出USP24细菌内毒素检查的不足之处。本文将介绍用鲎试剂检测样品内或样品上存在的细菌内毒素浓度的方法。鲎试剂(Limulus Amebocyte,LAL)来自鲎的循环细胞,经水提取而行,制备和检验后,用于凝固法。反应的终点是将供检样品稀释后,与平行稀释的参考内毒素标准进行直接比较得到的。测得的内毒素含量用规定的内毒素单位表示。鲎试剂也是用浊度法或显色法来读取数据的,这些试齐只要能满足这些选择方法的要求,就可以使用。在做试验时,需要先做出一条标准曲线,并用该曲线计算供检样品的内毒素含量,包括样品和对照液加鲎试剂后的培育时间和在分光光度计上读取光密度时使用的波长等操作,都应该事先规定好。如果是终点浊度法,则到达培育期后,应立刻读取读数。而动力学检测(凶手浊度法和显色法),光密度的测定是贯穿于整个反应期间,而用于计算结果的百分数就是从这些读数中计算出来的。在用终点法的显色法检测时,在到达事先规定的反应时间后,添加停止酶反应的试剂使反应停止后,再读取数据。1、参考内毒素标准与对照内毒素标准参考内毒素标准(Reference standard endotoxin,RSE)是美国药典(USP)的内毒素参考标准,其效价为每瓶10 000个USP内毒素单位(EU)。每瓶参考内毒素标准加5ml鲎试剂用水(LAL Reagent Watet),用旋转搅拌器间歇搅拌30min使其溶解,制成原液,用这一原液制作合适的系列稀释。原液应保存于冰箱中,用于以后的稀释,但保存时间不得超过14d。用前,用旋转搅拌器强力搅拌至少3min,每一步稀释,至少搅拌30s,然后才能用它稀释下一步。经稀释的参考内毒素不得贮存待以后使用,因为吸附作用会使其失去活性。对照内毒素标准(Contuol standard endotoxin,CSE)是以参考内毒素标准为标准另行制备的。一批新的对照内毒素标准在使用前应进行检定。检定时使用的鲎试剂应为试验中使用的同批鲎试剂。参考内毒素标准对照内毒素标准进行检定时,可使用鲎试剂的凝固法,按“试验操作”进行。每批对照内毒素标准,至少取1瓶与1瓶参考内毒素标准进行对比。参考内毒素标准的每个稀释度作4管。每瓶或每个样品的对照内毒素标准的每个稀释度也都要4管。参考内毒素标准终点的对数Log10的平均值和对照内毒素标准终点的对数Log10平均值之间的差值的反对数等于对照内毒素标准效价的标定值。可根据情况,将其变换成每ng干燥制剂的单位数或每瓶所含的单位数。适宜的对照内毒素标准的效价应不小于2EU/ng也不大于50EU/ng。2、试验的准备鲎试剂的灵敏度应经过确证。试验中使用的所有容器和用具,都必须在≥250℃的烤箱中,用足够的时间进行加热处理、破坏这些用具表面上可能存在的外源性内毒素。内毒素试验的结果是否可靠,还必须从试验使用的各种用具、溶液、洗涤用品中取样或提取样品,并用适当的方法证明它们对反应没有抑制或拉强或其它干扰作用。可按下述方法进行抑制试验或增强试验。试验中应设置阴性对照。如果鲎试剂的原材料、生产方法或处方发生改变时都要重新进行试验。3、鲎试剂灵敏度的确认试验为了确认鲎试剂标签上的灵敏度,每批至少取1瓶样品进行检定。参考内毒素标准(或对照内毒素标准)作2倍系列稀释,稀释成2.0λ,1.0λ,0.5λ和0.25λ。其中λ是鲎试剂标签上的灵敏度EU/ml。上述4个稀释度和阴性对照都要重复做4管。所得结果的几何平均值的对数应大于或等于0.5λ,小于或等于2.0λ。每一批新的鲎试剂,使用前都必须作标签灵敏度的确认试验。4、抑制试验和增强试验用不超过地大有效稀释而检测不出内毒素的样品,不加或内毒素,使最后浓度等于2.0λ,1.0λ,0.5λ和0.25λ。按照试验操作(Test Procedure)项的规定用标准内毒素进行检定。不加和加内毒素的样品管至少做4管。同时,用水稀释上述相同浓度的内毒素和阴性对照各两管,做平行两管试验。按照计算和判定项的方法,计算样品终点内毒素浓度的几何平均值。如果所得结果大于或等于0.5λ,小于或等于2.0λ,则该样品适合作细菌内毒素检查。用中和、灭活或除去干扰物质方法或用不超过最大有效稀释度稀释检品后,可重做抑制试验和增强试验。如果用不超过最大有效稀释法,对已知加量的内毒素可以克服抑制和增强作用。则样品可以经过稀释后,再作内毒素检查。如果在试验条件下,对未处理的样品检查出有内源性内毒素。则该样品不适合用于作抑制或拉强试验。不过,这种样品可用超过滤法将存在的内毒素去掉或做适当稀释、使之适合于作抑制或增强试验。稀释未处理样品(像开瓶溶解或在使用前注射前稀释那样),稀释到检验不到内毒素但不超过最大有效稀释倍数。再用这些已稀释的样品重作抑制试验或增强试验。5、最大有效稀释度(MVD) 最大有效稀释度是指在使用时将药物溶解或稀释成恰好用于注射或其它非经口途径使用的浓度。有时为了避免给药量的体积(EU/ml)计算。用试剂标签上的灵敏度(EU/ml)λ除限定浓度,就可以得到MVD因子。如果某一试剂的限量浓度是按重量或按药品的活性单位

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