血常规白细胞计

肿瘤浸润白细胞( Tumor Infiltrating Leukocytes, TIL) 作为深入实体肿瘤内部的免疫细胞群体，在肿瘤-免疫学研究中占据重要地位。MACS Technology以卓越的技术致力于高质量TIL新发现，并助力肿瘤微环境研究。Agenda：肿瘤微环境与肿瘤浸润白细胞研究肿瘤浸润白细胞的目的肿瘤浸润白细胞研究的困难及挑战美天旎肿瘤浸润白细胞研究解决方案Q&A主讲人简介：田瑜博士，Ph.D., Product Manager, Miltenyi Biotec复旦大学神经生物学国家重点实验室取得博士学位，后就职于Prof. Brian Seed研究室从事单克隆抗体表达系统的研发工作。2016年进入生命科学产品营销领域，现任美天旎中国产品经理。直播时间：2020年3月26日（本周四）下午3：00—4：00报名方式：扫描上方二维码，即可报名参与！

白细胞介素- 1（interlenkin 1，1L-1）的间接作用，可使内毒素引起机体发热。本篇文章介绍IL-1的受体分泌及调节介绍。IL-1的受体有两种：IL-1RⅠ和IL-1R Ⅱ。三种IL-1都能与受体结合，IL-1Ra与受体结合后不引发信号转导效应，但可抑制IL-1α和IL-1β同受体结合。上述两种受体常常表达在同一细胞中，但不同的细胞仅优势表达某一种受体。IL-1RⅠ是相对分子质量为80000的糖蛋白，人的基因位于2号染色体长臂上。主要表达在内皮细胞、平滑肌细胞、T细胞，肝细胞、成纤维细胞、角质细胞和表皮树突状细胞等。IL-1RⅠ高度糖基化，阻止糖基化会降低其生物学活性。IL-1R Ⅰ的胞质内肽链较长，并参与信号转导，与Toll受体的胞质区显著同源，故称为Toll/白细胞介素同源区域（Toll /in-terleukin-1 homologous region，TIR），缺乏酪氨酸激酶的活性。人IL-1R Ⅰ mRNA约5kb，编码569个氨基酸残基，细胞外320个氨基酸残基构成3个免疫球蛋白样功能域，跨膜区有19个氨基酸残基，其余230个氨基酸残基在胞质内。IL-1受体辅助蛋白（interleukin-1 receptor accessory protein，IL-1RAcP）其胞外和胞质结构域与IL-1RⅠ具有同源性，IL-1与IL-1RⅠ结合亲和力较低，可使构象发生改变，并被IL-1RAcP识别，参与受体复合物的形成，能够增强其亲和力，使之发挥生物学效应。IL-1RⅡ主要表达在B细胞、单核细胞和中性粒细胞中。IL-1R Ⅱ的 mRNA约1803bp，编码386个氨基酸残基，是相对分子质量为68000的糖蛋白。该蛋白质含有5个糖基化位点，经过N-糖苷酶处理使糖链分解后，相对分子质量为55000。IL-1RⅡ细胞外的332个氨基酸残基构成3个免疫球蛋白样功能域，其胞内只有很短的29个氨基酸残基，没有信号转导功能。用抗IL-1RⅡ抗体不能阻止IL-1的信号转导，用抗IL-1RⅡ抗体能够有效地阻止IL-1的信号转导。IL-1RⅡ是一个诱骗分子，可为IL-1的自身负反馈。将IL-1RⅡ的细胞外部分与IL-1RⅠ的胞质内部分嵌合构建的嵌合受体能够与IL-1结合并能转导信、号效应。可溶性IL-1受体：健康人和某些病理组织液中可检查到IL-1R Ⅰ和 IL-1RⅡ的胞外结构部分为可溶的IL-1受体，但其具体的生物学作用不是很清楚。IL-1的信号转导途径用图9-1表示。

点击进入流式细胞仪优选专场——————————————————————————————协和《新冠肺炎诊疗参考方案（2022年12月版）》12月26日，北京协和医院“协和呼吸”发布北京协和医院呼吸与危重症医学科新冠肺炎诊疗参考方案（2022年12月版）。新冠病毒感染的诊断：新冠病毒感染：流行病学史+临床症状+核酸/抗原。新冠病毒肺炎：新冠病毒感染+肺部符合新冠肺炎的新发影像学异常。新冠病毒感染者推荐的实验室检查：必要：生命体征、心电图、血气分析（注意记录吸氧条件）、血常规、凝血、D二聚体、肝功、肾全、LDH、CRP、ESR推荐：铁蛋白、CK、cTnI、NT-proBNP/BNP、TB淋巴细胞亚群、IL-6。可选：IL-8、IL-10、球蛋白、补体；抗MDA5抗体；抗磷脂抗体谱；胸CT（没有72小时之内影像资料且病情危重的患者）重症及危重症的预警：出现严重肺部表现的患者常在症状出现后第2周内发展为危重症，需要警惕。出现以下情况需要考虑病情加重可能：低氧血症加重或吸氧需求增加；呼吸困难症状加重；炎症指标（CRP、铁蛋白、血沉）或乳酸显著升高；心肌酶、肝酶和肌酐水平升高；淋巴细胞计数进行性下降；肺部影像学迅速进展。住院新冠病毒感染患者的管理(参见表2和图2)。表2 住院新冠病毒感染患者的治疗推荐图2. 住院新冠病毒感染患者治疗流程图何时考虑抗细菌治疗？首次就诊的新冠感染患者很少合并细菌感染，新冠本身也可引起长时间发热、脓涕或脓痰，如果患者没有合并白细胞增多、局灶性细菌感染影像表现、PCT升高等，抗菌素不是必须。临床医师应警惕院内感染风险，及时行细菌、真菌等病原学检查。是否进行抗凝治疗？所有新冠住院患者均应检测血小板计数、血色素、PT、aPTT、纤维蛋白原和D-二聚体。除非存在禁忌，否则所有新冠住院患者应接受血栓预防。首选低分子肝素或普通肝素。无VTE证据的患者在出院后无需常规接受血栓预防。华西《新型冠状病毒肺炎诊治手册（试行第一版）》12月25日，四川大学华西医院呼吸与危重症医学科发布《新型冠状病毒肺炎诊治手册（试行第一版）》辅助检查： • 血气、血常规、生化、DIC常规、心肌标志物、BNP、PCT、IL-6、CRP • 病原体检查：甲乙流、呼吸道病原病 毒核酸、痰涂片培养 • 影像学检查：胸部CT 、心电图血常规、⽣化、凝血、心肌标志物、BNP每3-5天⼀次肺部影像学5-7天⼀次临床分型评估：• 非重型：不满足重型或危重型的任何条件• 重型 符合下列任何一条: 1.出现气促，RR≥30 次/分；2.静息状态下，吸空气时指氧饱和度≤93%；3. PaO2/FiO2 ≤300mmHg 4．临床症状进行性加重，肺部影像学显示 24～48 小时 内病灶明显进展50%者• 危重型 符合下列任何一条: 符合以下情况之一者: 1.出现呼吸衰竭，且需要机械通气；2.出现休克；3.合并其他器官功能衰竭需ICU监护治疗。重型/危重型早期预警指标• 低氧血症或呼吸窘迫进行性加重；• 组织氧合指标恶化或乳酸进行性升高；• 外周血淋巴细胞计数进行性降低（600）或外周血炎症标记物如IL-6、CRP、铁蛋白等 进行性上升；• D-二聚体等凝血功能相关指标明显升高；• 胸部影像学显示肺部病变明显进展

喷雾干燥 & 冷冻干燥技术制备白细胞介素粉体研究趋化因子是一种小的(8-12 kDa)细胞因子，参与许多病理过程，因此是重要的靶点。它们通常由不同类型的细胞(如白细胞)分泌，并通过与同源 G 蛋白偶联受体的细胞表面结合来介导生物学效应。趋化因子配体和受体有 50 多种，根据其初级氨基酸序列的半胱氨酸残基排列进行分类和命名。趋化因子可用于(慢性)炎症性疾病、癌症和感染性疾病的治疗应用。目前，市场上有两种基于白介素的产品，即重组白介素-11预白介素(Neumega® )和重组人白细胞介素-2醛白介素(Proleukin® )。Neumega® 是一种由大肠杆菌重组 DNA 技术产生的血小板生成生长因子，可静脉给药。皮下应用的 Proleukin® 是一种淋巴因子，也是通过转基因大肠杆菌的重组 DNA 技术产生的。为了增加储存的稳定性、保持药物的生物活性，Neumega® 和 Proleukin® 都采用冷冻干燥的工艺，制成冻干粉制剂使用。虽然冷冻干燥（FD）是一种广泛使用的技术，具有多种优点，可以快速、温和干燥，但喷雾干燥(SD)可以缩短工艺周期，并可以在常压下进行加热处理。同时，颗粒的性质，如粒径、固体状态和残余水含量可以通过参数进行调节。这里必须指出的是，蛋白质的变性或/和展开也可能发生在 SD 过程中，SD 过程的放大是复杂和高成本的。SD 的另一个重要挑战是粉体回收率低于 100%，这对于高成本疗法和工艺开发来说是一个问题，特别是放大到最终设备上。对于白细胞介素，已经有了一些成功的冷冻干燥研究案例。然而，据我们所知，SD 作为一种替代方法尚未被研究过。这项工作的目的是开发一种 SD 工艺，使模型白介素以一种保留白介素结合亲和力和生物活性的方式干燥。为此，我们使用了模型白细胞介素，探索喷雾干燥工艺的潜在可行性，并对比分析冷冻干燥和喷雾干燥工艺对白细胞介素活性影响。1材料在磷酸盐缓冲盐水中提供野生型CXCL8（CXCL8，72个氨基酸，8.4kDa）、CXCL8的突变体（dnCXCL8，66个氨基酸，7.7kDa）等各种试剂。将蛋白质溶液用PBS稀释至最终蛋白质浓度为1mg/ml，即1% w/w。冷冻干燥机喷雾干燥仪：BUCHI B-90 HP▲ 步琦纳米喷雾干燥仪 B-90 HP2实验过程配方溶液分别采用如下冻干程序（表1）和喷干程序（表2）进行样品制备。干燥后的样品在 4-8℃ 的氩气干燥器中保存 12 周。并进行粉体的物性表征。表1，适用于所有配方中 FD 程序。箭头表示间隔内的压力或温度增减。间隔冻干工艺时间间隔[hh：mm]温度[℃] 压力[mbar]0速冻，放入小瓶～00:20-196atm.1冻结，平衡02:00-20atm.2初级干燥00:30↑ -15↓ 0.0453_01:00-150.0454_10:00↑ 00.0455_08:0000.0456二级干燥01:30↑ +200.0457_02:30+200.0458结束，封装小瓶_～+25atm.表2，SD 工艺参数及由此产生的过程变量。通过使用纯缓冲液进行测量来确定以 ml/min 为单位的喷射速率。实验过程中喷嘴温度升高，喷嘴温度是在 SD 过程结束时观察到的温度 。进口温度[℃]喷雾速率[%]空气流量[l/min] 粒度[μm]6030（～0.51ml/min）100±27.0过程变量出口温度[℃]压力[mbar]喷头温度[℃]29±131±152±23实验结果1、 通过激光衍射分析测定粒径SD 蛋白粉通过 HELOS 系统的激光衍射分析进行筛选。在 SD 后和第4周、第8周和第12周将粉末直接湿分散在甲苯中进行分析。通过对同一批次 SD 粉的三个样品进行测量，确定了 PSD 分析的标准误差。不分析 FD 粉末的粒度，因为冻干物通常是最终的药物剂型，没有对饼状进行研磨或破碎，只分析了 SD 粉。图1 通过激光衍射分析测定粉体粒径，在 10 次超声脉冲后进行测量，SD 粉末的 PSD 随储存时间的变化不大。除了在第0周分析的 SD dnCXCL8 喷雾粉末和在第8周分析的 SD HSA-dnCXCL8 外，所有干粉的跨度都小于 2.8。在测量这两个 PSD 时，一些较大的团块将分布分别向 517μm 和 129μm 的 x90 方向移动(图1b、图1c)，导致 PSD 变宽。2、 圆二色光谱测定结构利用圆二色谱(CD)对 SD 和 FD 后的蛋白质二级结构的变化进行评价，并将其与未处理蛋白质的光谱进行比较。CD 光谱在设备上记录，波长为 190-250nm，使用 1mm 石英比色皿，响应时间 4s。5 次扫描取平均值，并用 PBS 校正背景，计算平均残基椭圆率，并绘制不同曲线。由 图4 显示，经过 SD 和 FD 后的 CD 光谱显示只有轻微的结构变化。液体白细胞介素制剂在 90℃ 温度下热处理5分钟，SD 温度在 60℃ 温度下热处理 5 分钟，会产生轻微的沉淀，但结构保持完整 (图4A)。dnCXCL8 也出现类似的结果。SD 和 FD 均未引起二级结构的改变。即使加热蛋白质也未引起二级结构的变化(图4B)。虽然 HSA-dnCXCL8 具有更明确的α-螺旋结构，但 SD 和 FD 后没有变化。在 90℃ 热处理 5min 后二级结构发生了完全损失 (图4C)。3、 离液展开测定稳定性采用荧光光谱检测gdmhcl在0-6M范围内诱导展开，并在SD和FD后和储存3个月后测定蛋白质稳定性。将样品稀释至0.7μM，并在室温下平衡5min。CXCL8 和dnCXCL8 的激发波长为 280nm, HSA-dnCXCL8 的激发波长为 290nm。在 300-400nm 范围内测量所有3种蛋白的发射光谱，并将狭缝宽度设置为 5nm。蛋白质展开的特征是波长移位，并使用 Origin 2019b 的玻尔兹曼进行计算得到如下图谱。图5 显示，展开的过渡中点和 CXCL8 的相对协同性在很大程度上没有变化。对于 dnCXCL8，无法建立明确的过渡点。对于 FD HSA-dnCXCL8 也观察到了同样的情况。对于参考光谱和 FD 光谱（HSA-dnCXCL8 除外），显示了标准偏差，如图中的误差条所示。4、 趋化性测试：博伊登室测定为了检测 SD 和 FD 后以及储存三个月后的白细胞介素的活性，进行了趋化试验测定中性粒细胞的活化和迁移，预计 CXCL8 具有促迁移作用，而 dnCXCL8 和HSA-dnCXCL8 不应表现出任何中性粒细胞迁移激活。使用 NIS-Elements BR 3.2 软件进行细胞计数，计算每种情况下的平均值和标准偏差。上图显示储存 12 周后 SD CXCL8 的 CI 较对照显著增加 (图6a, p = 0.05)。SD 和 FD CXCL8 在中性粒细胞活化和迁移方面没有变化。对于 dnCXCL8, SD 和 FD 样本的 CI 与各自的参考 CI 相当。HSA-dnCXCL8 在 SD 后 (即W0) 的 CI 显著增加 (图6c, p = 0.04)。4结论本研究针对磷酸盐缓冲盐水配制的白细胞介素（未添加额外添加剂）采用 SD 和 FD 两种干燥方式分别进行深入评估。用纯缓冲液进行的 DoE 确定了一种最佳的 SD 工艺，在 60℃ 的干燥空气温度、100 L/min 的空气流速和 30% 的喷雾速率下具有较高产率，这表明即使是热不稳定的蛋白质也可以喷雾干燥。此外，SD 工艺比 FD 更快、更有效，理论上导致每分钟产量比 FD 高 130 倍（甚至考虑到 SD 的产量仅 63% 和 77% 之间）。FD 粉末呈现饼状结构，而 SD 粉末的粒度为 X5020μm。这为粒子工程提供了定义粒子特性的可能性，允许更广泛的应用。RM 是可比较的，同样二级结构没有改变，结合亲和力和活性保持至少 12 周，这些结果表明白细胞介素的 SD 是可行的。未来，将继续优化本研究中的工艺参数，并将其转移到具有工业型台式喷雾干燥器中，以更大规模地系统考察粉体产量和工艺时间，从而对 SD 进行全面评估，作为 FD 的替代方案，实现经济快捷高效的生产！5文献来源Comparing freeze drying and spray drying of interleukins using model protein CXCL8 and its variants

肥大细胞白血病（Mast cell leukemia，MCL）又称为组织嗜碱细胞白血病，约占恶性肥大细胞肿瘤的 15％。但因其罕见，在体内恶性增殖的晚期表现及症状，又与急性白血病相似，所以很容易与急性嗜碱性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病嗜碱性粒细胞急变或伴骨髓嗜碱粒细胞增多的 AML 混淆。那么，面对 MCL 有什么相应的诊断策略吗？有哪些特异性表现可以作为诊断的突破口吗？以下临床病例可为您详细解答：////病史介绍：患者男性，59 岁。反复腹泻、乏力、皮疹、消瘦 1 年；面色黝黑，贫血貌，睑结膜苍白，浅表淋巴结不大，B 超示脾脏肿大，肋下7 cm 可触及，肝脏肿大，肋下 2 cm 可触及。血常规 ：白细胞计数 18.2×109/L，红细胞计数 1.64×1012/L，血红蛋白 60 g/L，血小板计数 142×109/L。外周血白细胞分类：中性分叶核粒细胞 22%，淋巴细胞 30%，单核细胞 3%，嗜酸性粒细胞 2%，分类不明细胞 42%，原始细胞 1%，有核红细胞 2 个/100 个白细胞。初步检查及诊断：骨髓细胞形态学检查：骨髓增生极度活跃，粒、红二系增生受抑，巨系增生活跃。血小板散在或小簇可见。髓片中分类不明细胞约占 79%，散在或成堆分布。此类细胞胞体大小不一，呈圆形、椭圆形或梭形，胞核圆或不规则，可见单个核、双核、分叶核，部分胞核中可见核仁，胞质中充满深紫色大小不一的颗粒。细胞化学染色结果：POX（-）100%；PAS（-）10%，（+）14%，（+++）76%；NAS-DCE（+）100%；甲苯胺蓝染色（+）100%；图 1 骨髓染色基因检测：骨髓 KIT 基因 F522C 突变。骨髓活检：骨髓象提示造血组织增生明显活跃，未见幼稚细胞、淋巴细胞、浆细胞增多和聚集。可见一类细胞弥漫单一性分布，胞体小，胞质少，胞核呈圆形的细胞异常增生。巨核细胞数量大致正常，胞体中等，核有分叶，散在分布。骨髓间质骨小梁规则，未见明显纤维化。该细胞免疫组化结果：CD34（-），CD117（+），髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）显示粒系细胞阳性。综上分析考虑肥大细胞（mast cell，MC），提示 MCL 可能。流式检测方案及检测结果：以所有 WBC 设门，异常细胞比例约占 61.1%，该群细胞 CD45 强表达、SS 中等、FS 较大，强表达：CD9，CD33，CD117；表达：CD2，CD13，CD203c；不表达：CD3，CD4，CD5，CD7，CD19，CD56，CD11b，CD15，CD14，CD64，CD123，CD25，CD34，CD38，HLA-DR，CD138，MPO，CD79a，cyCD3图 2 流式细胞学检查结果（以上数据来自 Navios 流式细胞仪采集，Kaluza 软件分析）病例分析与诊断策略：参考*****的诊断标准，临床诊断为 MC。总结与思考：急性肥大细胞白血病很少见，容易与急性嗜碱性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病嗜碱性粒细胞急变或伴骨髓嗜碱粒细胞增多的AML混淆。在免疫表型上、形态学以及免疫组化的染色结果*******扫描下方二维码或点击「阅读原文」，即可查看完整诊断策略及病例思考。作者简介：吴婧硕士，主管技师，就职于上海交通大学附属瑞金医院血液研究所主要从事白血病和淋巴瘤免疫分型工作。////点击「阅读原文」，查看更多精彩病例、课程。注册学员即可学习更多临床病例、大咖课程！注册用户中，也将随机选取 30 位，送上「鼠」于你的精美公仔！责任编辑：杭璐阅读原文

7月26日，第74届美国临床化学年会暨临床实验医学博览会（2022 AACC）在美国芝加哥举行。帝迈首席运营官COO霍子凌女士带领国际营销团队如期赴约。作为AACC的老朋友，帝迈带来全新推出的全自动血细胞分析仪DH-615，邀请来自世界各地的现场观众先睹为快。当检验邂逅AI将会碰撞出哪些精彩火花？帝迈紧贴临床和用户需求，不断挖掘血细胞分析仪的应用价值，率先将AI技术应用于五分类血细胞分析领域。展会现场，全球新老客户纷纷来到帝迈展台，对DH-615的AI功能一探究竟。DH-615系列全自动血细胞分析仪，采用AI Cube 核酸荧光染色三维分析技术，并创新引入AI辅助分析技术，针对血常规繁多的检测信息进行综合分析，以图文的形式直观呈现血液疾病风险预警，并提供临床诊断分析依据，帮助临床医生快速准确解读报告，从而为恶性血液性疾病筛查判断助力。同时，DH-615实现微量血五分类+网织红细胞全自动检测，异常样本自动回退复检，无需人工干预。全自动末梢血智能检测，省心省力，支持模块化拓展，提供多形态解决方案，提高流程自动化，保证TAT时间。帝迈始终希冀通过自主研发的创新医疗技术和产品，为全球医疗贡献高效的“中国方案”，与国内行业同仁一道肩负中国品牌形象，彰显中国品牌硬核实力。本次展会，帝迈全新动物医疗系列产品也强势登陆AACC。DP-H10VET、DP-C30VET、DF56VET在现场接受新老客户检阅。新技术、新突破、新产品，2022 AACC仍在继续，帝迈展位841，期待您的莅临！迄今，帝迈已服务全球120多个国家和地区，通过日趋完备的联检产品解决方案，为医疗机构提供优质的产品与服务，以创新医疗呵护生命健康

作为液体活检的重要标志物之一,循环肿瘤细胞(CTCs)在外周血中的含量可以用来辅助判断患者的癌症病发状况。除此以外,CTCs对于肿瘤细胞转移行为等基础研究也具有非常重要的意义。然而人体血液中的CTCs含量极其稀少,通常仅有0~10个/mL,与之相对,红细胞、白细胞和血小板的含量则分别达到5×109 个/mL、4×106 个/mL和3×108 个/mL,而且肿瘤细胞在转移过程中可以通过上皮-间质转化(EMT)和间质-上皮转化(MET)来不断地改变自身的特征。正是由于其稀缺性和异质性,以及血液中复杂基质的干扰,CTCs的精准检测成为巨大的难题。 由于常规的光学分析手段在检出限和灵敏度上均难以达到直接检测的要求,因此通常在进行外周血中CTCs的检测之前,要通过一些样品前处理方法来实现其分离和富集。常采用的样品前处理方法可以分为物理法和化学法,物理法主要根据细胞在物理特征上的差异来进行分离,例如膜过滤分离和密度梯度离心,就是分别依据细胞的大小和密度来完成筛选。化学法则主要依靠生物大分子的特异性识别作用,例如抗原抗体相互作用,核酸适配体与靶标的选择性结合。　　上述样品前处理方法虽然能够在不同程度上实现CTCs的分离富集,但也存在着一定的缺陷。由于这些方法都是非连续性的,在吸附、洗脱和转移的过程中难免会造成细胞的丢失,加之CTCs本身的稀缺性,很容易导致假阴性结果的产生。利用微流控芯片功能集成的特点则可以很好地解决这一问题,CTCs的捕获、释放、计数及检测等操作均可在芯片上完成,连续的自动化处理可以有效减少人为误差的干扰。此外,微流控芯片所需要的进样量非常小,可以大大减少珍贵样品和试剂的消耗,降低检测成本。并且在微尺度下表面力的作用会明显放大,可以有效提高物质混合和反应的效率,实现快速高效的分离分析。因此,近年来多项研究尝试利用微流控芯片平台开展CTCs分离检测工作,取得了良好的效果。本文对微流控芯片技术用于CTCs分离检测的相关研究进展进行了综述,将采用的分离方法主要分为物理筛选和生物亲和两大类,同时囊括正向富集和反向富集两种策略。此外,对于近期发展的芯片原位检测CTCs新方法也进行了介绍。　　1、CTCs分离芯片研究进展　　作为商品化较为成功的CTCs分离检测系统,强生公司的CellSearch产品采用的是基于上皮细胞黏附分子(EpCAM)抗体特异性识别肿瘤细胞的方法,类似的方法在CTCs分离芯片中也被广泛使用,可以视作利用生物亲和作用进行CTCs分离富集的代表。　　另一方面,依据细胞在物理性质方面的差异,无须生物标志物的条件下即可实现CTCs的筛选,其中有无外力介入的被动分离方法,例如利用微尺度下流体力学中的惯性效应和黏弹性效应来进行筛分。　　也有外加物理场的主动分离方法,诸如介电泳、表面声波和光镊技术等。除了直接对CTCs进行特异性识别实现正向富集外,也可以通过选择性结合诸如白细胞等干扰,再将其排除,从而达到反向富集的效果。　　2、、芯片原位CTCs检测　　对于CTCs的检测,通常采取先进行细胞染色,再用荧光显微镜观察的方法,但该方法在灵敏度上有待提高,且重现性较差,需要手动操作和人工计数。　　此外,以荧光光谱为代表,一些常见的光谱检测手段也被广泛应用在芯片上CTCs的检测中。　　除了光学分析方法外,研究人员通过使用传感元件实现了CTCs芯片检测结果的数字化直读或可视化分析。　　3、总结与展望　　本文对CTCs分离微流控芯片的技术原理、分离策略和研究进展进行了综述。其技术原理主要分为物理筛选和生物亲和两大类,分离策略分为正向富集和反向富集两个方向。同时,介绍了CTCs芯片原位检测的主要技术方法和优化策略。随着微流控芯片技术的快速发展,其微尺度流体操控、微结构加工和集成传感检测能力得到极大提升,进一步推动了CTCs分离微流控芯片技术的发展。多项研究显示,以微流控芯片为平台来分离检测外周血中的CTCs,可以充分发挥芯片本身微量、高效、易于自动化和集成化的优势,最终实现对临床血液中CTCs的快速精准分析,在肿瘤早期诊断、复发与转移监测以及抗肿瘤药物评价等多个领域具有重要的应用空间。　　现阶段,CTCs芯片在筛选精度和筛选效率方面仍存在较大的提升空间。针对这一挑战,由于精准与高效二者难以兼得,未来的芯片设计应该更专注于单个目标的实现。一方面,针对基础研究,应当注重于提高CTCs筛选的细胞纯度及细胞活性。可以先利用惯性效应对血液进行粗分离,筛分出尺寸较大的白细胞和CTCs。再采用液滴分选的方法,通过免疫磁性分离实现CTCs的精确筛选。液滴分选技术能够达到单细胞分析的精度,利用液滴分选进行肿瘤细胞筛选也已有文献报道。另一方面,针对临床检测领域,研究重点则在于实现临床样本的高通量分析。可以采用电分析方法,依据不同种类细胞的比膜电容和细胞质电导率差异来设置恰当的阈值,对流经检测窗口的CTCs实现快速分析。此外,微流控芯片技术属于多学科交叉领域,CTCs芯片的发展同时也受益于微机电系统(MEMS)、材料学、流体力学和生物医学等研究领域的技术突破。随着相关领域研究技术的发展,CTCs芯片未来有望成为肿瘤基础研究和癌症早期临床诊断的重要平台。

迎战2019-nCoV，共抗时艰！/// 德国IKA助力病毒检测 自去年 12 月以来，“2019新型冠状病毒（2019-nCoV）”无时不刻牵动着每一个中国人的心。在本应万家同庆的春节，举国执行自觉、科学的居家隔离，通过互联网了解到的每一次疫情数据更新、每一个发生在身边的事件、每一步艰难的科学和临床探索，都在提醒我们——白衣天使们一直无惧生命威胁在一线奋斗，疾控系统一直在高负荷运转进行样品检测，全国人民一直在热切地互相支援。作为一家有120年历史的德国品牌，IKA同样希望能在2019-nCoV病毒检测中贡献一份力量。借用日本HSK事务局为武汉捐赠物资时的一句话：“山川异域，风月同天”。让我们一起迎战2019-nCoV！ （一）病毒检测参考方案目前对于疑似病例，医院首先会采取隔离措施并进行检测。检测项目包括多个维度：- 影像学检测（CT，检测对象为肺部）- 血常规检测（血常规检测仪、临床型流式细胞仪，检测对象为白细胞总数、淋巴细胞计数等）- 血清学检测（ELISA、免疫荧光法，检测对象为血清）- 病原学检测（实时荧光RT-PCR、高通量基因测序，检测对象为呼吸道或血液样本中提纯后的核酸） *对于初筛样本为阳性的情况，核酸层面的病毒检测仍是目前最可靠的病原学证据，是综合诊断中的重要一项，也是治疗过程中的指导性指标。在此，我们分享相关的样品前处理配套方案如下： 操作涉及步骤配套设备操作过程样品研磨液氮处理样品后研磨A 11 basic （可选配剪切刀头）√ 主机标配粉碎刀头和80 ml研磨杯√ 研磨过程高效强劲（15 - 30 sec）√ 刀头可autoclave灭菌，研磨腔体需采用化学湿法擦拭灭菌（参考备选方案）备选方案：适用于无需使用液氮的研磨Tube Mill control + MT 40.10 steril主机+40 ml 一次性无菌研磨杯（每包10个）√ 密闭研磨操作，严格确保操作者安全√ 专利产品，使用一次性透明无菌研磨杯√ 避免样品间的交叉污染风险√ 研磨杯可直接作为样品保存容器√ 主机可灵活编辑并保存研磨程序流体处理样本从采集管转移至离心管IKA Pette vario 0.1 - 2 μlIKA Pette vario 0.5 - 10 μlIKA Pette vario 2 - 20 μlIKA Pette vario 10 - 100 μlIKA Pette vario 20 - 200 μlIKA Pette vario 100- 1000 μl√ 专利可更换把手，操作舒适√ 位于下方的大显示屏，随时观察数值√ 移液精确、安全√ DLC涂层提供优异耐腐蚀性和耐磨蚀性√ 可整支灭菌或半支灭菌，易清洁维护√ 兼容多种RNase Free吸头配置PCR反应体系恒温孵育56℃孵育ICC control eco 18 主机带18L透明浴槽和浴桥√ 极佳的控温精度√ 极佳的温度均一性√ 适合无人值守操作高速离心1.5 ml Eppendorf管离心IKA G-L主机带标配12位转子（可选配八联管金属转子）√ 转速范围宽泛，同时处理12个样品√ 主机可储存9个程序√ 具备配平监测等多项安全功能涡旋振荡1.5 ml Eppendorf管涡旋VXR basic + VX 2E.n主机+夹具√ 高达2200 rpm√ 同时处理64个样品PCR 96孔板混匀MS 3 control + MS 3.5主机带标配底座 + 垫片√ 定时功能√ 同时显示时间和转速的设定值与实际值 （二）病毒灭活参考方案世界卫生组织（WHO）已宣布此次2019-nCoV为PHEIC（国际关注的突发公共卫生事件），这是自2005年《国际卫生条例》实施以来，WHO宣布的第6起PHEIC，足见其事件的重要影响（此前的5次分别是：甲型H1N1流感病毒、野生型脊髓灰质炎病毒、西非埃博拉病、巴西寨卡病毒、刚果（金）埃博拉疫情）。WHO提供了处理埃博拉病毒及其它高致病性病毒的通用病毒失活方案，病毒在失活前需要在BSL-4实验室内处理，灭活后样品即可转移至安全级别较低的BSL-3实验室、甚至是BSL-2实验室，这将极大提升有实验能力的实验室数量。我们也在此分享病毒灭活相关的样品前处理设备参考方案，如下：操作涉及步骤配套设备操作过程 恒温孵育 60℃恒温60分钟 干浴器DB 2 + 1个DB 6.3干浴器DB 4 + 2个DB 6.3 √ 干浴器适合在不方便取水的环境下操作√ 精确控温、升温迅速√ 定时功能√ DB 2可处理1个96孔PCR板 DB 4可同时处理2个96孔PCR板通用操作（请参考上表） 作为一名普通人，我们也同样经历了最初的恐惧甚至慌乱，经历了“离群索居”的煎熬，但这个过程中间的一点一滴都有意义——它试炼了我们独立思考的智慧，以及在重压下保持正念和温暖的能力。因此，“新冠”疫情虽然还没有结束，但我们有信心共抗时艰！让我们共同努力，携手迎接春拂大地的时刻！

细胞外囊泡（Extracellular Vesicles, EVs）作为蛋白质、mRNA、miRNA、脂质等信息物质在细胞间转运的载体, 是细胞与细胞间通讯的重要媒介，参与大量正常生理和病理过程，包括感染性疾病、自身免疫性疾病、心血管和其他炎症性疾病、癌症和凝血障碍等，因此研究EV在人类健康和疾病中的作用具有重要意义。EVs常分为三类外泌体 (30-150 nm) ，在胞体内区室中形成多囊泡小体，随后与质膜融合后从细胞中释放。微囊泡或微粒 (100-1000 nm) ，这是质膜起泡/出芽以及随后从细胞中释放的结果。凋亡小体 (1000-5000 nm) ，由凋亡细胞释放。目前还没有特异性标记物可以最终鉴定不同类型的囊泡。因此，我们把这些小的生物颗粒统称为细胞外囊泡。细胞外囊泡示意图EVs检测研究表明，不同疾病状态下，组织器官释放到体液中的EVs的数量及所包裹的物质是完全不一样的，因而通过检测分析EVs的特性即可对相关疾病进行精准诊断、预后判断及指导治疗。EVs具有尺寸小、异质性高且数量巨大等特点，一直以来，检测灵敏度都是EVs研究中的一个重大挑战。虽然一些关于EVs的检测是利用传统流式细胞术开展的，但也暴露出了明显的局限性，一方面由于传统流式仪器更适用于检测细胞，而细胞表面结合的荧光分子数量远远多于EVs表面；另一方面，一些传统流式仪器在检测小于500 nm单个颗粒上表现吃力。因此，想要准确的检测EVs，就需要更强大且具备高通量功能的检测工具。Amnis® 成像流式的技术优势近年来，随着Amnis® 成像流式技术的发展，越来越多的研究利用这项技术解决了EVs检测这一难题。Amnis® 技术的核心是使用时间延迟积分CCD (TDI-CCD)进行信号检测。与光电倍增管(PMT)相比，CCD具有更大的动态范围、更低的“噪声”和更高的量子效率，使其更适合测量微弱信号。与传统流式细胞术相比，这种方法信号整合时间更长，噪音低，灵敏度大幅增加，对研究EVs具有独特的优势。Amnis® 技术EVs应用案例分享以下研究体现了Amnis® 成像流式技术在小颗粒检测中的高灵敏度特点。检测脂质体和微球流式技术对比用常规流式技术 (A-B)和成像流式技术 (C-D)获得的200 nm大小的荧光标记脂质体和不同尺寸的聚苯乙烯珠(220、450、880和1300 nm)。Amnis® 成像流式可以清晰地分辨出缓冲液背景信号(灰色)以上的所有脂质体(粉色)，而常规流式仅能通过荧光分辨出一小部分脂质体。健康人类供体的血浆微粒检测(a)从6名健康供体中获取无血小板血浆，并使用CD235(红细胞)、CD41(血小板)、CD45(白细胞)和CD146(内皮细胞)标记物进行染色以确定微粒细胞的来源。(b)利用CD14(单核细胞)、CD66b(中性粒细胞)和CD3(淋巴细胞)标记物进一步对白细胞微粒进行表型分析，以确定其来源细胞。下方是图库中事件的代表性图片。(c)表为N = 6例供体的绝对计数±SEM。如图所示，Amnis® 成像流式技术可实现不同来源的外泌体的精准鉴定与计数。单核细胞内化外泌体检测(a)用Amnis® 成像流式技术分析PKH67标记的外泌体。BF和FITC荧光图像(E)所示。(b) PKH67预标记外泌体与外周血单个核细胞共孵育。使用Amnis® IDEAS® 软件内化功能测量外泌体的内化程度。Amnis® 成像流式技术不仅实现了PKH67标记的外泌体鉴定，同时也实现了单个核细胞内化外泌体检测，且呈现直观图像佐证结果准确性。小结综上，Amnis® 成像流式技术做到了真正意义上的流式数据可视化。既具备传统流式可大量检测样本的特点，又利用高灵敏度TDI-CCD技术针对每个检测到的外泌体颗粒进行成像，并可通过海量形态学数据分析EVs与亲本细胞或靶细胞间的相互作用。Cytek® Amnis® ImageStream® x Mk II 成像流式细胞分析仪以上研究均通过 Cytek® Amnis® ImageStream® X Mk II 仪器完成。通过将流式细胞术的表型分析能力、高速度和高灵敏度等优势，与荧光显微镜技术在细胞形态学细节的洞察力和针对细胞功能研究的深度有机结合在一起，Amnis® ImageStream® XMk II 平台可高速获取每个细胞的多个图像，包括明场、暗场 (SSC) 和多达 10 色荧光标记。ImageStream® X Mk II 通过高分辨率成像，可以定位荧光蛋白表达位置（细胞膜、细胞质或者细胞核），实现超乎想象的广泛应用需求。技术特点应用广泛：样本利用率高达 95%，可以更高效的方式分析稀有细胞。简单易用：简单友好的用户界面，可实时观察全部细胞图像和统计学数据。配置灵活：最高可升级至 6 根激光器。功能强大：提供数百种量化成像分析参数，实现无与伦比的广泛应用。参考文献：Erdbrügger, Uta, and Joanne Lannigan. "Analytical challenges of extracellular vesicle detection: A comparison of different techniques." Cytometry Part A 89.2 (2016): 123-134.Headland, S., Jones, H., D'Sa, A. et al. Cutting-Edge Analysis of Extracellular Microparticles using ImageStreamX Imaging Flow Cytometry. Sci Rep 4, 5237 (2014). https://doi.org/10.1038/srep05237.Clark, R. Imaging flow cytometry enhances particle detection sensitivity for extracellular vesicle analysis. Nat Methods 12, i–ii (2015). https://doi.org/10.1038/nmeth.f.380.Gurunathan, S. Kang, M.-H. Jeyaraj, M. Qasim, M. Kim, J.-H. Review of the Isolation, Characterization, Biological Function, and Multifarious Therapeutic Approaches of Exosomes. Cells 2019, 8, 307.https://doi.org/10.3390/cells8040307.

时下，各种自动化检验设备可谓日新月异，检测速度和准确性不断提高，传统的人工显微镜检查还有用武之地吗?在近日举行的2012年全国血液体液形态检验诊断学学术会议上，不少专家大声疾呼，在充分发挥现代自动化检验技术优势的同时，不应忽视以传统人工显微镜检查为主要手段的细胞形态学检查的重要价值。 　　一张小涂片解决了大问题 　　“一张小小的痰涂片，解决了困扰我一年多的慢性咳嗽。”会上，北京大学第一医院检验科王建中教授与大家分享了自己的经历， 　　一年前，王建中因受凉患了肺炎，此后一直断断续续地咳嗽，夜里常常咳得无法入睡。痰培养、胸透、肺功能、CT，该做的检查全做了，就是找不到原因，各种对症治疗也效果不佳。家人和同事甚至开始担心他得了肺癌。 　　直到有一天，王建中为自己做了一张痰涂片，显微镜下发现其中有大量嗜酸性粒细胞，表明咳嗽很可能是由过敏导致的。根据这一检验结果，在医生指导下服用相应抗过敏药物后，王建中终于治愈了病痛。 　　“形态学检验对疾病的诊断具有独到之处。”他深有感触地说。 　　据专家介绍，作为临床检验的核心和基础，形态学检验主要是在显微镜下对血液体液标本中的细胞或有形成分进行观察，是临床诊断、疗效观察、预后判断等的重要依据。 　　人工镜检结果还是一些疾病诊断的“金标准”。如在白血病的血液与骨髓标本中髓系原始细胞计数时，血液或骨髓涂片的显微镜下形态学检查和流式细胞仪分析两者均可用，但世卫组织最新的造血与淋巴组织肿瘤分类方案仍要求以形态学检查为准。 　　“即使是在临床检验技术自动化大发展的背景下，人工镜检依然是医学检验中不可缺少的重要手段。”王建中说，比如临床最常用的血尿常规检查，自动化仪器目前仍只能作为筛选手段，需要按照一定比例进行人工镜检的复检。 　　南方医科大学附属中山博爱医院检验科主任技师黄道连说，自动化仪器都是按照正常细胞的相关参数进行设定的，而病变细胞的结构和形态往往会发生改变，病得越重，变化越大，此时，自动化仪器就难以分辨，甚至张冠李戴，造成误诊、漏诊。 　　对于人工显微镜检查的重要性，很多专家不约而同地提到了曾在社会上引起轩然大波的“茶水发炎”事件。2007年和2012年，两度有记者用茶水代替尿液送到医院化验，结果被检测出炎症。虽然这一做法有违科学原理，但也从另一侧面向检验界敲响了警钟：显微镜检查的环节必不可少。“倘若检验人员能够对出现白细胞阳性的标本进行显微镜复检，也许就可以发现这一明显的谬误。”北京协和医院检验科张时民教授说。 　　河北医科大学第二医院检验科李顺义教授也举例说，抗凝剂在全自动血细胞分析仪上的使用，有可能造成假性血小板减少，如果不进行进一步镜检就直接发出检验报告，会导致患者接受不必要的辅助检查。 　　被忽视只因“费时费力还不挣钱” 　　让与会者感到的担忧的是，人工显微镜检查这一不可或缺的重要检验方式正在被严重忽视和弱化，成为许多医院检验科的“短板”。 　　这种忽视和弱化首先体现在人工镜检的比例大幅缩水，甚至被取消。“不少医院基本就不做了。”张时民说。 　　据了解，即使全血细胞分析仪判定为正常的标本中，也有5%是假阴性。2005年，世卫组织涂片复检协作组调查复检结果发现，每天有25%～30%的标本需要进行显微镜复检。但目前不少医院的复检率低于5%，甚至为0。 　　“自动化仪器主要看细胞数量的变化，而人工镜检则重点关注细胞‘质’的改变，两者本应是左右手的关系，但现在普遍是‘一手硬、一手软’。”黄道连说，他所在的检验科形态学检查做得不错，临床医生从中尝到了甜头，医院也因此非常重视人工镜检，“我们医院要求每一位住院病人在检查血常规时必须同时做血涂片。但据我了解，很少有医院这样要求”。 　　其次，检验人员对各种细胞的识别能力有限，难以为临床诊断提供有价值的信息。“认得出就认，认不出就当作没看见。”张时民说。 　　人工镜检被忽视的另一个突出表现是愿意干的人少，干着的人培训进修机会少，专业从事形态学检验的人员严重不足，不少医院采用轮岗、兼职的办法来安排人手。 　　“青黄不接是普遍现象。”黄道连曾对中山市4家三级医院的检验科人员进行问卷调查，仅有17%的人表示愿意从事形态学检查工作，约12%的人员接受过为期1个月以上的形态学检验诊断培训，而免疫、生化等其他检验项目的检验人员接受培训的比例则为25%～30%。 　　中国中医科学院广安门医院检验科刘贵建教授指出，过度倚重自动化设备，对仪器的局限性以及人工镜检的重要性认识不足，认为机器检查可以取代人工镜检，加之临床工作量激增，面对每天成百上千份的血尿标本，且要在1小时甚至半小时内出检验结果，检验人员超负荷工作，无暇完成进一步镜检，是人工镜检在检验科被忽视的主要原因。 　　另一个原因则是收费问题。目前，医院检验项目的收费标准主要按照耗费的物力成本计算，人工镜检所需试剂少、仪器简单，因而这一检验项目基本不收费或收费很低。在目前的医院运行机制下，对于“费时费力还不挣钱”的人工镜检，医院普遍缺乏关注热情。 　　张时民举例说，在该院做一套肝肾功能血脂检查的收费在300元左右，1小时自动化检验设备大约可以处理上百个标本，而一名检验医师1小时仅能处理约10个普通标本，复杂的标本甚至只能处理两三个。 　　“有时一张涂片看不到病变细胞，但根据经验判断觉得有问题，为了找到证据，就得多看几张甚至十几张片子，可能花费一天时间就为了找到一个恶性细胞。”黄道连说，“在美国，形态学检查被视为技术含量极高的检验项目，费用也相应较高，属于医保的限检项目。一套骨髓涂片的形态学检查收费为400美元～500美元，而我们的收费只有50元～60元。” 　　张时民指出，一名成熟的形态学检验技师需要至少10年的经验积累，而现在愿意待在显微镜前的人越来越少，非常不利于我国形态学检验诊断领域的发展。 　　形态学检查有广阔发展空间 　　“形态学检查是一门古老的学科，也有着广阔的发展空间，绝不应该是检验科的弱项。”上海交通大学医学院附属瑞金医院王鸿利教授说，在形态学检验的基础上发展起来许多新的检验方法，流式细胞仪就是典型代表。同时，细胞生物学、分子生物学等新兴技术领域都与形态学有关。“放弃了形态学，就放弃了临床检验学的基础。” 　　王建中表示，近年来逐渐发展成熟的全自动血细胞数字图像分析等现代技术，将为形态学检查的未来发展带来“革命性”的变化。“标本制备的全自动化、仪器自动获取细胞图像，可以减少人工制备标本时间，检验者可以在电脑屏幕上看到标本的显微图像，同时通过网络实现资料共享，同行间可以相互交流，这有助于提高检验诊断的效率和准确性。” 　　张时民认为，当前应着力加强形态学检验技术骨干的培养和基本技能的培训。在政策允许的情况下，提高形态学检查项目的收费，适当提高从事形态学检验人员的待遇。黄道连建议，应该在岗位安排、人才培养、进修培训、岗位津贴等方面实行政策倾斜，“让从事形态学检验的人员能够安心本职工作，不断提高业务水平，为临床医生提供更有价值的诊断信息”。

2009年8月11日，中国天津—全球科学服务领域的领导者赛默飞世尔科技(纽约证交所代码：TMO)近日宣布与亚洲目前最大的脐血干细胞库联合成立“干细胞应用合作示范中心”，双方欲协力继续推进中国脐带血干细胞储存和研究工作。 　　天津协和干细胞基因工程有限公司(简称“协和中心”)拥有亚洲目前最大的脐血干细胞库，也即世界上规模最大的干细胞库之一 —— 天津市脐带血造血干细胞库。赛默飞世尔与“协和中心”的合作由来已久，并为“协和中心”装备了所有的 液氮储存罐系统，用于脐带血干细胞的冷冻保存。同时，赛默飞世尔还为中心的液氮储存罐系统专门研制了液氮监测系统，实时监测以保证设备的正常工作。一直以来，凭借“Thermo Scientific”品牌良好的产品质量和服务，公司和“协和中心”建立了长久的合作关系，这个联名“干细胞应用合作示范中心”的揭牌是双方长期合作关系的进一步延续和升华。“我们一直都很关注国内外的干细胞研究工作，”赛默飞世尔科技中国区总经理迈世福先生说，“我相信我们提供的最好的脐带血干细胞储存环境能够帮助‘协和中心’的专家团队进行更好更深入地研究应用，我们可以一起推动生命科学领域最前沿技术的发展。” 　　天津市脐带血造血干细胞库是首批通过国家卫生部执业验收的脐带血造血干细胞库，也首批通过了亚洲脐带血库组织验收，日处理脐带血能力100份，总储存量达到30万份。 　　脐带血是继骨髓和外周血后的另一重要的造血干细胞来源。随着世界各地区的脐血库储存规模日益扩大，适合造血干细胞移植的患者找到适合的脐带血就有了更多的机会。脐带血干细胞移植需要脐血库储存的脐带血达到一定的规模，并能保持造血干细胞的活性和功能，以备患者找到HLA(人类白细胞抗原)相匹配的脐带血干细胞。造血干细胞的损伤与冷冻、储存温度、储存温度的波动和融化等因素有关，这就使得以实体库方式储存的脐带血干细胞的冷冻和保存质量，对脐带血能否被有效利用至关重要。 　　脐带血造血干细胞库副主任韩俊领曾经通过比较冷冻前后和冷冻保存年份对脐带血干细胞的影响来研究脐带血干细胞的最佳保存方式。“我们的研究表明以液氮为冷冻源的深低温液态保存方式，可以使脐带血干细胞的活性和功能得到很好的保存，使它不随冷冻保存年份的延长而发生明显改变，证明脐带血干细胞在深低温状态下是可以长时间保存的。”韩主任表示。 　　图：赛默飞世尔科技与天津协和干细胞基因工程有限公司联合成立“干细胞应用合作示范中心”。(从左到右：赛默飞世尔科技亚太区运营副总裁程强、赛默飞世尔科技实验室产品事业部业务总监陈洁、赛默飞世尔科技实验室耗品部门全球运营副总裁John Fry、赛默飞世尔科技实验室耗品部门全球总裁Chuck R. Kummeth、赛默飞世尔科技实验室产品事业部亚太区销售副总裁Ian Smith、赛默飞世尔科技中国区总经理迈世福(Michael Shafer)、协和干细胞基因工程有限公司总经理方健、天津市华苑开发区管委会主任刘女士、协和干细胞基因工程有限公司技术总监黄博士)。 　　更多关于赛默飞世尔的完整干细胞解决方案，欢迎访问www.thermo.com/stemcell 　　更多关于细胞培养 Excellence™ 产品信息，欢迎访问http://www.thermo.com.cn/Market24.html 　　关于Thermo Fisher Scientific(赛默飞世尔科技，原热电公司) 　　赛默飞世尔科技 (Thermo Fisher Scientific)(纽约证交所代码：TMO)是全球科学服务领域的领导者，致力于帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。公司年销售额超过105亿美元，拥有员工约3万4千人，在全球范围内服务超过35万家客户。主要客户类型包括：医药和生物公司，医院和临床诊断实验室，大学、科研院所和政府机构，以及环境与工业过程控制装备制造商等。公司借助于Thermo Scientific和Fisher Scientific这两个主要的品牌，帮助客户解决在分析化学领域所遇到的从常规测试到复杂研发的各种挑战。Thermo Scientific能够为客户提供一整套包括高端分析仪器、实验室装备、软件、服务、耗材和试剂在内的实验室综合解决方案。Fisher Scientific为卫生保健、科学研究、安全和教育领域的客户提供一系列实验室装备、化学药品及其他用品和服务。赛默飞世尔科技将努力为客户提供最为便捷的采购方案，为科学研究的飞速发展不断改进工艺技术，提升客户价值，帮助股东提高收益，为员工创造良好的发展空间。更多信息，请浏览公司网站：www.thermofisher.com(英文) 或www.thermo.com.cn(中文)

福斯的 FossomaticTM FC分析仪是目前唯一同时通过美国 NCIMS/FDA 认证及欧洲 Microval 认证的快速检测原料奶中体细胞数的仪器。Microval 是欧洲的一家认证组织，专业验证和审批食品与饮料中微生物分析法的替代方法。Fossomatic FC 的审批是在全面比照了参考标准：ISO 13366-1:2008 – 体细胞计数 –第1部分 显微镜检验法的基础上进行的。检验报告的摘要可在 Microval 的官方网站上查询。网址：www.microval.org.在取得欧洲 Microval 审批之前，Fossomatic FC已作为一种快速电子计数方法获得美国的 FDA/NCIMS 认证。它是目前唯一一种已斩获欧美两大权威机构双重认证的原料奶体细胞计数法。Fossomatic 的测量原理基于流式细胞技术。采用该技术，悬浮细胞经染色处理，在压力下通过流通池，并在传感器前被照射发光。每个通过的细胞由光电转换器记录。Fossomatic 分析仪可在一小时内对600个样品进行测试。降低乳腺炎产生的成本体细胞是白细胞（白血球）和来自乳腺分泌组织的细胞（上皮细胞或分泌细胞）。它们大量出现可消除感染并修复由细菌造成的组织损伤。细胞计数有助于发现牛群中罹患乳腺炎的奶牛。提供体细胞计数检测是原奶检测中心的重大使命，它可以帮助奶农避免奶牛疾病所带来的严重后果，其中包括兽医诊治费用、抗生素、牛奶滞留损失、奶牛产量下降、质量下降以及牛奶交易量减少和屠宰。为 Fossomatic 7 解决方案获得认证铺平了道路福斯是第一家开发 Fossomatic 体细胞计数方法的公司，早在20世纪80年代初就将此法作为奶牛群体改良方案的一部分引入常规检测，从而大大降低了牛奶的损失率。然而，加强奶牛的乳腺炎管控，任重而道远。为此，福斯近日又宣布推出新一代分析仪 Fossomatic 7 和 Fossomatic 7 DC (link)，其中包括一种全新的更先进的体细胞计数检测形式，可以更详细地显示乳腺炎的实际状态。这样就有可能开发新的工具以帮助奶农加强乳腺炎管理。新一代的 Fossomatic 分析仪采用与 Fossomatic FC 分析仪完全相同的测量原理，目前也正在接受欧洲 Microval 和美国 NCIMS/FDA 的双重认证检测。

结核病问题的解决仍是一个长期的世界性的难题。从20世纪90年代初世界卫生组织宣布全球进入结核病公共卫生紧急状态起,在相当长的一个时期内公众普遍乐观地认为,通过推行直接面视下短程化疗(DOTS)措施就可以有效解决结核病的问题。但是随着全球范围结核病防治工作的普遍开展和实践,到2011年前后,全球逐渐形成解决结核病问题需要将公共卫生管理和技术工具开发相结合的共识。结核病的有效防治需要在诊断、预防、治疗等3个方面(新诊断技术、新疫苗和新药物)下力气。在传染病相关的行政管理中,中国的模式和行政效率在世界上都是领先有效的。在行政手段有效保障的基础上,进一步提高控制能力的任务就需要客观具体的技术产品来实现了。随着我们对结核病、耐药结核病、耐多药结核病、广泛耐药结核病研究的日益深入,对其认识也是逐步提高的。在应用已有手段解决普遍性问题的同时,针对新发现的尚缺乏有效诊治手段的结核病类型,我们就需要研究更多新技术并开发更多的新产品,从技术能力上切实解决这些问题。免疫学诊断方法免疫分子用于结核病诊断新进展：在活动性结核病患者体内结核分枝杆菌特异性单阳性TNF-α+和双阳性IFN-γ+/TNF-a+CD4+T细胞的比例显著高于潜伏性感染者和未感染者。此外，表达IL-17的CD4+T细胞（主要为单阳性IL-17+和双阳性IL-2+/IL-17+表型）的频率在活动性结核病患者中高于其他两种组。分枝杆菌特异性CD4+T细胞的数量和功能特征在结核病感染和未感染结核的儿童之间以及潜伏和活动性结核病之间存在显着差异【1】。细胞因子和可溶性粘附分子谱和生物标志物用于治疗监测再治疗涂阳肺结核患者。复治期间，IFN-γ、IL-2、IL-7和可溶性CD54水平以及IL-2/IL-10和IFN-γ/IL-10比率呈上升趋势，可作为复治是否有效的血清指标【1】。IP-10和RANTES的组合可能被用作诊断和治疗监测肺结核中的生物标志物。肺结核患者血浆IP-10和RANTES水平显着高于健康对照组，IP-10和RANTES的组合在训练组中的AUC为1.0时表现**。响应治疗时，IP-10和RANTES均显着水平在6个月内减少【2】。γ-干扰素释放试验（IGRAs）用于结核病诊断新进展：IGRAs的原理是当机体内被结核菌抗原致敏的效应T细胞，在体外受到相同抗原的刺激（在APC细胞辅助下）后，会分泌大量的γ干扰素。通过IFN-γ的检测来判断结核感染的情况。IGRAs试验灵敏度高，特异性高，快速简便，是一种值得推广的检测方法，为潜伏性感染和活动性结核的辅助诊断，阴性结果对排除结核感染有一定的帮助。IGRAs试验用于筛查潜伏性感染时不受卡介苗接种的影响，但不适用于流行病学筛查。但是IGRAs预测哪些患者将来进展为活动性结核病的方面的应用较少。最近的一个大样本研究评估IGRAs和TSTs显示在低发病率国家，IGRAs和TST的阴性预测值＞99%，但阳性预测值仅为3%-4%【3】。下一代IGRAs发展前瞻需考虑以下几个方面：增加预测潜伏性感染到活动性结核的能力；能够检测结核分枝杆菌感染的临床阶段；监测潜伏感染或结核病的治疗效果；增加新抗原（如Rv3873、Rv3879和Rv3615）及增加更多细胞因子（IP-10，MCP-2，MIG等）来提高IGRA的敏感性。此外，随着结核分枝杆菌的菌量增加，结核特异性的CD8+ T细胞更容易检测到。CD8反应可以初步区别活动性与潜伏感染，与治疗效果相关【4】。双因子检测DeFine.TB 结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒结核分枝杆菌特异性细胞因子（IFN-γ和IL-2）检测试剂是 “十三五” 国家科技重大专项传染病防治专项成果转化产品。在检测时，将人外周血单个核细胞从全血样本中分离出来 ，消除血液本底干扰因素，通过计数单个核细胞数量，排除人群中免疫细胞数量的个体差异影响。将定量的单个核细胞与融合蛋白ESAT-6-CFP-10-Rv1985c在细胞培养板上共培养，结核特异性 T 细胞由于记忆反应而分泌γ-干扰素及白细胞介素-2因子，再利用双抗体夹心酶联免疫法，检测培养上清中的γ-干扰素、白细胞介素-2的浓度，来判断其是否存在结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应。用于结核病的辅助诊断，能够及时发现活动性结核患者，同时对于潜伏感染患者能够进行及时、准确的排筛。01 新的检测靶标IL-2特异性高达94.3%研究结果发现IFN-γ的ROC 曲线下面积为0.859，而IL-2 的ROC 曲线面积0.865（详见Fig. 2 ） ，IFN-γ的总体敏感性和特异性分别为83.8% 和81.5%，IL-2的特异性为94.3%，灵敏度为72.6%（详见Table2）。02 新的检测靶标IL-2提高结核病的检出率双因子检测的敏感性为87.9%，单因子检测敏感性为83.8%，敏感性的增加主要是由于引入新的检测靶标IL-2，表明约16%的活动性结核患者中IFN-γ结果为阴性，而这些患者中有1/4的IL-2 结果为阳性。当IFN-γ和IL-2 串联组合时，特异性进一步提高到96.0%，可与分子诊断的培养阳性检测结果相媲美，甚至可以对培养阴性的患者产生可靠的结果。03 并联检测敏感性高达87.9%，串联检测特异性高达96.0%进一步分析IFN-γ和IL-2联合应用对活动性结核病的诊断价值。对IFN-γ和IL-2 进行并联检测时，敏感性升至最高的87.9%，特异性达到79.8%，阳性预测值达93.9%；当IFN-γ和IL-2 进行串联检测时，718 例非结核患者中有689 例检测结果为阴性，特异性为96.0%，敏感性为68.5%，阳性预测值为98.4%。值得注意的是，串联检测在结核病确诊患者的敏感性（72.1%），高于临床诊断敏感性（65.8%），提示IFN-γ和IL-2串联检测的准确度与结核病的严重程度相关。04 双因子联合检测灵活性高，满足不同的检测场景研究团队根据活动性结核病不同流行模型，分别阐述了IFN-γ和IL-2联合检测在不同模型中诊断价值，并提出了适用于综合性医院和专科医院各自的诊断算法。在综合性医院中，约有10%的结核疑似患者最终确诊为活动性结核，与常规涂片镜检相比，使用具有更高敏感性的双因子并联检测可帮助临床医生发现更多活动性结核病患者（如图B）；在结核病专科医院，结核病疑似患者中活动性结核病的比例达到50%，使用具有高特异性的双因子串联检测可为活动性结核病患者特别是菌阴结核患者提供诊断依据（如图A）。在检测时，将人外周血单个核细胞从全血样本中分离出来 ，消除血液本底干扰因素，通过计数单个核细胞数量，排除人群中免疫细胞数量的个体差异影响。将定量的单个核细胞与融合蛋白ESAT-6-CFP-10-Rv1985c在细胞培养板上共培养，结核特异性 T 细胞由于记忆反应而分泌γ-干扰素及白细胞介素-2因子，再利用双抗体夹心酶联免疫法，检测培养上清中的γ-干扰素、白细胞介素-2的浓度，来判断其是否存在结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应。用于结核病的辅助诊断，能够及时发现活动性结核患者，同时对于潜伏感染患者能够进行及时、准确的排筛。

p style=" text-indent: 2em " 从二十世纪八十年代至今，世界上生产流式细胞仪的厂家几经变迁，BC & amp BD仍在，新玩家不断进入，并购重组各取所需，它们生产各种不同性能和功能的流式细胞仪。总体而言，呈现出以下的发展趋势： br/ /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 1. 应用对象从细胞到颗粒 /span /strong /p p 　　一般而言，流式细胞仪检测的对象是细胞，而且是呈独立状态的悬浮于液体中的细胞，即单细胞悬液。组织和器官中的细胞，必须用各种方法制备成单细胞悬液，才能进行检测。 /p p 　　细菌、浮游生物等也可以用流式细胞仪分析。 /p p 　　一些不是细胞的单个粒子，如病毒、细胞核、染色体、原生质体等也是流式细胞仪的检测对象。实际上，用“颗粒”而不仅仅是“细胞”来定义流式细胞仪的检测对象，显然更有代表意义。 /p p 　　因为流式细胞仪可以将“颗粒”视同为“细胞”来进行检测，在特制的微球上包被抗原，抗体或核酸探针，以微球为载体来检测各种可溶性蛋白、细胞因子、自身抗体、特定的核酸序列等，从而使流式细胞仪的检测对象扩展到分子范围。 /p p 　　Luminex公司的多重流式检测平台能够自一个微量反应孔中同时检测50、100甚至多达500种分析物，俨然成为这一技术的金标准。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 2. 检测颗粒尺度大大拓宽 /span /strong /p p 　　常规流式细胞仪检测颗粒的范围为0.5-50μm。 /p p 　　电荷分选流式细胞仪检测颗粒范围与喷嘴直径等相关，最大应到喷嘴直径的1/3-1/2，目前最大直径的喷嘴为200μm。 /p p 　　Union Biometrica公司的气流分选平台COPAS FP和BioSorter能够适应大到1500μm的颗粒，可以用于分选模式动物的卵和幼虫 模式植物种子与花粉 大体积细胞与细胞簇等。CytoBuoy公司的Cytosense也可以到1500μm。　　 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/aca8ce15-8bb8-42f4-8863-4675f7724835.jpg" title=" 01.jpg" alt=" 01.jpg" width=" 381" height=" 417" style=" width: 381px height: 417px " / /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(127, 127, 127) " Union Biometrica公司气流分选流式原理图 /span /p p 　　通过光路优化，采用多角度光散射，使用特殊荧光探针，甚至加装紫色激光收集散射光信号，有些流式细胞仪可以实现0.2μm颗粒与噪音信号的鉴别。 /p p 　　Apogee着力于微颗粒分析，其A50-Micro plus散射光的检测低限至80nm，可用于循环微粒，外泌体及特殊微生物检测。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/28e29df6-ee87-449c-b362-20f9785b26ec.jpg" title=" 02.jpg" alt=" 02.jpg" width=" 311" height=" 320" style=" width: 311px height: 320px " / /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(127, 127, 127) " Apogee A50-Micro plus /span /p p 　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　3.多种流路技术商品化 /span /strong /p p 　　绝大多数流式细胞仪基于鞘液流体动力学模式。 /p p 　　因为负压进样省去了庞大的压缩气源，可以灵活使用各种上样管，已经成为几乎所有公司新仪器的选择。 /p p 　　一般认为，流式细胞仪采用毛细管而非鞘液，容易被大的细胞或聚集细胞所阻塞，而且流动细胞难以准确聚焦，流速难以维持恒定。 /p p 　　Guava平台easyCyte(现被Luminex公司收购)通过负压进样，采用高压注射泵与PEEK管路，建立自稳流的微毛细管系统，据称解决了以上困扰，带来的好处是无需鞘液，产生废液也少。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/bebe5684-49c2-419d-aa5c-e4fc9f47041a.jpg" title=" 03.jpg" alt=" 03.jpg" / /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(127, 127, 127) " Guava easyCyte(Luminex) /span /p p 　　Thermo公司声波流式细胞仪Attune NxT ，该产品利用超声波将细胞聚集在样品流中轴线上。进样速度至1mL/min时，也可以避免基于鞘液的流式的所谓轴流加宽和细胞分散现象，这一技术的最大优势是快速检测，同时对稀有细胞的分析比较有利。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/407f47e9-043f-4bea-a5ab-dcd240aebc70.jpg" title=" 04.jpg" alt=" 04.jpg" / /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(127, 127, 127) " Thermo Attune NxT /span /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 4.从相对计数到直接绝对计数 /span /strong /p p 　　为满足统计学要求，流式细胞仪必须采集一定数量的细胞，仪器设定以细胞数为停止条件。传统流式细胞仪测试结果为相对计数，即目标细胞在某一总体系中的比值。 /p p 　　随着应用深入，人们发现比值的变或者不变，以及变化大小不能反映细胞的真实变化，绝对计数，即单位体积内的细胞数被证明更具实际价值。 /p p 　　最早是采用双平台法来解决以上问题，即用血细胞分析仪来获得白细胞，淋巴细胞等浓度，再结合流式细胞仪测定的百分比来计算被测细胞的绝对计数值。由于该法需要使用两种仪器，操作步骤多、变异系数大，不同实验室之间的差异也较大，因此应用受到限制。 /p p 　　后来人们采用微球法，即用已知浓度的微球作为参比，通过被测细胞和微球的比例关系来进行绝对计数，但因计数微球价格较为昂贵，实际应用受到限制。 /p p 　　近年来，厂家的共识回到了测定进样体积这一思路上来，替代微球法直接进行绝对计数，取得更为精确的结果。区别在于不同产品具体测定技术的差别。 /p p 　　蠕动泵：Accuri C6 Plus、CytoFlex /p p 　　注射泵：easyCyte、NovoCyte、CytoFlow /p p 　　流量传感器：FACSVerse、Bricyte E6 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/ccfa4c2d-589a-4fd1-8bcd-17e1112840b1.jpg" title=" 05.jpg" alt=" 05.jpg" / /p p style=" text-align: center " Sysmex CytoFlow系列TVAC体积测定原理 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 5.光路优化和光学新元件的应用 /span /strong /p p 　　庞大的水冷或气冷的激光器逐渐被小型化的固态激光器取代。 /p p 　　光纤传导应用越来越普遍。 /p p 　　光纤耦合让光能量传输更高效，而不为公司所专有。 /p p 　　雪崩光电二极管等等新检测器提供新的选择。请见专家分析： /p p 　　流式细胞仪是怎么“看见”光的? /p p 　　以及光学元件的神级组合让灵敏度达到新的高度。 /p p 　　MESF是仪器灵敏度衡量的标准，基于微球，基于鞘液。 /p p 　　不同公司没有约定俗成，不是那么容易比较，但就同一公司产品而言： /p p 　　BD FACSCelesta FITC 25 PE 15 /p p 　　Beckman Coulter CytoFlex FITC 30 PE 10 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 6.以多色分析为核心的新型光学技术的迅速发展 /span /strong /p p 　　早期流式细胞仪的主要应用还是细胞DNA含量测定，这一技术对设备要求不高，通常配备一个散射光和一个荧光信号的流式细胞仪就足以应付。随着新型荧光探针的不断开发和仪器软、硬件的逐步更新，流式细胞仪多色荧光分析得到了迅速发展，包括两个方面： /p p 　　单激光多色，如488nm激光同时激发7色，紫色激光同时激发10色 /p p 　　多激光：如10激光机器。 /p p 　　也包括两种新的光学设计机型： /p p 　　光谱流式，利用特殊的接受装置收集某范围内的全发射光谱，无需补偿，区别发射光谱重合度高的荧光染料对。目前有Sony公司SP6800Z和SA3800，Cytek公司的Aurora。 /p p 　　质谱流式，利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术。这个名为CyTOF的平台最初由DVS Sciences公司开发，后被Fluidigm公司收购。仪器采用同位素标记抗体来标记或识别细胞表面和内部的信号分子，并根据流式细胞原理分离单个细胞，再用感应耦合等离子质谱(ICP-MS)观察单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱的数据转换为细胞表面和内部的信号分子数据。2015年推出的Helios的检测通道达到135个，几乎没有信号重叠或背景噪音。 /p p 　　 img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/c79c2dc9-dc52-45a2-9c40-da860593a6cd.jpg" title=" 06.jpg" alt=" 06.jpg" style=" text-align: center " / /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(127, 127, 127) " 来自CyTek网站，不代表本人观念 /span br/ /p p 　　必须注意的是，多色分析提供了多种细胞特性的相互关系图，从而更加精确地界定一种细胞亚群，更好地对不同细胞进行分类。但是，同时检测的荧光染料越多，需准确调节各通道之间的补偿，技术难度更大，因为其中包含的信息量非常大，错误信号掺杂的概率也相应增加，所以数据分析时需格外注意，一般需采用不同的标记方案多次相互验证才能得出重要结论。光谱流式和质谱流式的出现克服了补偿问题。 /p p 　　但是，荧光染料匹配仍未解决，毕竟不是每个激光器都能如设计所愿，同时激发6色，7色到10色，甚至如光谱流式所希望的16色或者32色。所以，对20色以上多色分析仪器来说，标称往往都是理论，至少在目前还是设计师的想象。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 7.数据处理能力不断提升 /span /strong /p p 　　随着数字化技术的引入，以及数据处理系统的升级，流式细胞仪的数据处理能力得到极大提升。 /p p 　　数据处理速度：反映数据扫描频率，用Hz表示。 /p p 　　处理精度：信号采集精度，用比特表示，反映采集通道多少。目前仪器一般在20比特(2的20次方，100万通道)以上，最高达32比特(43亿通道)。 /p p 　　线性范围：目前一般在105以上，最高到107。 /p p 　　单文件存储能力：反映文件储存能力，对稀有细胞分析有利。 /p p 　　数据能力的提升直接影响到仪器的分析和分选速度。 /p p 　　速度的提升是光路，流路和数据采集系统三者共同优化改善的结果。 /p p 　　传统的流式细胞仪，分析速度不超过10000 events/s，新上市产品基本达到25000 events/s(注意：不是细胞/s)以上，如Beckman Coulter公司CytoFlex为30000 events/s，Cytek公司Aurora 为35000 events/s ，BD公司的LSRFortessa 为40000 events/s with beads，Bio-Rad公司ZE5为100000 events/s。 /p p style=" text-align: center " 　　 img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/eb697251-c070-476d-8a38-812717426182.jpg" title=" 07.jpg" alt=" 07.jpg" style=" text-align: center " / /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(127, 127, 127) " Bio-Rad ZE5 /span br/ /p p 　　BD公司FACSCalibur的机械分选，速度只有300/秒，对少量细胞收集困难，须配用浓缩系统进行细胞回收 捕获管的移动和浓缩系统对细胞的机械损伤大，影响分选目的细胞功能特性 由于捕捉器移动不可避免地影响到流路稳定，造成不确定性 机械装置较难彻底清洗消毒。机械式分选已被速度更高的电荷分选所完全取代。 /p p 　　如BD公司FACSAria III(70 psi /90 kHz)和InFlux(60 psi /100 kHz) 四路分选，纯度& gt 98%，得率& gt 80%, 分选速度25000 events/s，继续提高分选速度，纯度不受影响，得率会按Poisson分布下降。 /p p 　　Beckman Coulter公司的MoFlo XDP和MoFlo Astrios EQ，据称有效分选速度达到70000细胞/s。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 8.仪器不断小型化到微流控 /span /strong /p p 　　追求小型化，几乎是所有流式制造商开发新产品的共识。 /p p 　　看一组数字：主机W x D x H /p p 　　 span style=" color: rgb(192, 0, 0) " strong BD /strong /span Accuri C6 plus / FACSVia /p p 　　37.5 x 41.9 x 27.9 cm /p p 　　 span style=" color: rgb(192, 0, 0) " strong BD /strong /span FACSVerse / FACSlyric /p p 　　63.2 x 57.9 x 57.9 cm /p p 　　 span style=" color: rgb(192, 0, 0) " strong BD /strong /span FACSCelesta /p p 　　58 x 61 x 59 cm /p p 　　 span style=" color: rgb(192, 0, 0) " strong Beckman Coulter /strong /span CytoFlex /p p 　　42.5 x 42.5 x 34 cm /p p 　　 span style=" color: rgb(192, 0, 0) " strong Miltenyi Biotec /strong /span MACSQuant /p p 　　60 x 35 x 40 cm /p p 　　 span style=" color: rgb(192, 0, 0) " strong Thermo /strong /span strong /strong Attune NxT /p p 　　58 x 43 x 40 cm /p p 　　 span style=" color: rgb(192, 0, 0) " strong Cytek /strong /span Aurora /p p 　　54 x 52 x 52 cm /p p 　　 span style=" color: rgb(192, 0, 0) " strong Mindray /strong /span BriCyte E6 /p p 　　50 x 55 x 50 cm /p p 　　“小”意味着节省空间，容易安装和转移，“小”更值得期许的是减少样本体积，降低试剂消耗，提高检测速度，以及缩小空间所带来的光电及液路的改善。 /p p 　　微流控技术兴起于上世纪90年代，顾名思义就是使用微通道(尺寸为数十到数百微米)处理或操纵微小流体。 /p p 　　On-chip公司于2012年推出了世界上第一台微流控芯片流式On-Chip Sort，以低压对细胞进行分选，降低对细胞的损伤 简化实验操作 容易实现系统的无菌 使用一次性交换型模块，减少样品间交叉污染 无需清洗流路通道。Miltenyi Biotec公司的MACSQuant Tyro、Namocell公司的Namocell等亦先后推出类似的微流控流式分选产品。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/4447d8ae-2611-4183-8988-ecc0f9183d53.jpg" title=" 08.jpg" alt=" 08.jpg" width=" 485" height=" 215" style=" width: 485px height: 215px " / /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(127, 127, 127) " on-chip公司之on-chip sort /span br/ /p p 　　Sony公司分选平台的两大核心技术即为所谓的CoreFinder全自动校准技术和可更换式微流体芯片的液路设计。最新型号MA900，全自动光路及液流校准 立体式双光斑四激光激发，最多同时检测12色荧光 四路分选。 /p p style=" text-align: center " 　　 img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/16b8cd31-0eb3-44ff-bd93-1450cf1ba662.jpg" title=" 09.jpg" alt=" 09.jpg" width=" 415" height=" 293" style=" text-align: center width: 415px height: 293px " / /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(127, 127, 127) " Sony MA900 /span br/ /p p 　　专门生产分析型微流控流式的制造商Handyem公司，针对微流控装置容易导致细胞黏附和堵塞的问题，于2015年推出HPC-150(国内品牌深圳芯凯瑞)，采用双高精度玻璃注射泵代替蠕动泵或单注射泵，据称克服了上一代产品易见的流路堵塞沉积等问题。 /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 9.融合显微成像技术和流式细胞术 /strong /span /p p 　　细胞生物学两大技术平台分别基于显微镜和流式，前者以形态分析为优，可提供详细的细胞图像信息，但解释主观、费时费力 后者以统计学见长，却缺乏成像能力，因此无法了解亚细胞定位。 /p p 　　融合显微成像技术和流式细胞术的图像流式细胞仪，以Amnis平台为代表(现被Luminex公司收购)，最新型号ImageStreamX Mark II，从细胞经过流动池开始即按线性分拆进行分线性照相，其冷CCD采用时间延迟积分方式进行信号采集，每一个样本的分析都生成该样本中所有细胞的荧光强度测量参数和图像数据库，包括“每个细胞”的明场、暗场以及荧光图像。 /p p 　　对于微弱荧光信号可以通过明视野细胞图像辅助设定遮罩，特定加强遮罩下细胞荧光信号，实现对微弱荧光图像的捕捉和分析。 /p p 　　系统可以对每个细胞分析超过500种量化参数，包括细胞整体的散射光和荧光信号强度，以及对细胞形态，细胞结构及亚细胞信号分布的分析。 /p p 　　图像流式细胞仪无须为了得到细胞群统计学资料而损失丰富的形态信息，也无须为了获得细胞细节而损失统计学功能。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/9d9b7215-7328-4a75-9018-1c4425cc45d0.jpg" title=" 010.jpg" alt=" 010.jpg" / /p p style=" text-align: center " span style=" color: rgb(127, 127, 127) " Amnis图像流式细胞仪ImageStreamX Mark II /span /p p 　　Sysmex公司最近推出MI-1000，自动检测多达10000细胞的图像荧光。 /p p 　　Union Biometrica公司的气流分选平台COPAS VISION也加入了明场图像。 /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 10.专业化和临床型仪器纷纷面世 /strong /span /p p 　　CytoBuoy公司生产多种用于水体微型生物分析的流式细胞仪，如CytoBuoy安放在浮标上 CytoSub具有特殊的耐压装置，以及内部鞘液循环处理装置，不需外部加入鞘液，可在水下200米使用。Bentley Instruments 公司和Delta Instruments 公司公司专门提供牛奶场使用的专项检测仪器。 /p p 　　临床市场是商品流式细胞仪最具潜力的发展方向。但是，诊断流式试剂的研发和报证，以及符合检验流程的仪器开发，与不断增长的临床应用需求并不匹配。 /p p 　　一些公司推出了专门的小型流式细胞仪，用于CD4细胞的快速计数，如FACSCount、CyFlow Counter等。 /p p 　　迈瑞公司面向临床用户工作流程和场景推出BriCyte E6，针对淋巴细胞亚群分群等临床常规分析，可以实现检验仪器常有的一键得结果，免去繁复的电压和补偿调整，其LIS的双向通信，数据管理都非常符合临床诊断的期望。类似思路在后来上市的BD公司FACSlyric也有体现。 /p p 　　老牌血球生产厂商Sysmex 在收购Partec后的第五年，推出了PS-10流式样本前处理系统，配合新款流式XF-1600，实现样本处理、离心和检测的全自动化流程。详情请见： /p p 　　全自动流式检测时代的来临! /p p 　　可以期待，流式细胞仪未来将会作为一个重要的组成部分被整合到血液细胞分析流水线上，在这个系统中，血液细胞分析仪提供血常规结果和异常报警信息，流式细胞仪则根据这些信息对异常细胞进行不同策略的精细鉴别。 /p p style=" text-indent: 2em " strong style=" text-decoration: underline color: rgb(0, 112, 192) " span style=" text-decoration: underline color: rgb(0, 112, 192) " 了解 a href=" https://www.instrument.com.cn/zc/144.html" target=" _self" style=" text-decoration: underline color: rgb(0, 112, 192) " 详情请进入流式细胞仪专场 /a /span /strong /p

生物、药物等许多的研究均需要通过观察细胞体积的变化或细胞数目增减的来判断和评估实验的效果。由于细胞所处环境的改变可促使其自身体积做出相应的变化，以便适应改变后的环境大致新的平衡。由于并不能清晰地知道该种细胞体积变化规律，因此必须检测其体积或细胞数目随条件、时间的变化。 　　细胞的发育与细胞分裂周期级数递增均需要连续不断的细胞增殖。 　　在培养液中正在增殖的细胞在其分裂前其体积将增大至原体积的两倍。然而对细胞发育与分裂的速度作如何调整才能保证细胞体积的不变并不明确。因此，测量细胞的体积的变化对了解与控制细胞的发育和周期非常重要。 　　细胞的死亡 　　细胞的增殖与细胞的死亡之间需要一个精细的平衡以保持足够的细胞数量。该种平衡容许细胞作最佳的状态调节以适应各样机能变化的需求。细胞死亡有两种清晰的机制，坏死与凋亡。坏死是一个病理生理的机制，包括细胞膨胀以及细胞膜破裂而释出内容物。凋亡则是一个程序式死亡的机制。凋亡的特征之一就是细胞收缩。细胞有缺陷的凋亡与过度凋亡，两者同样会导致严重疾病。 　　渗透压的补偿 　　任何种类的细胞都有可能因处于不利环境而死亡。细胞犹如多孔的网筛极易因渗入已溶解于周围环境的化学物而使渗透压受影响。细胞内外环境中该些溶解物颗粒数目的不平衡，将会导致水份透进细胞而使其体积涨大，或者是水份从细胞渗出使其体积收缩。 　　当细胞或微生物遭遇环境的变化，它们都会尝试通过自身调节来适应新的环境。 　　细胞平均体积(MCV)的变化 　　当细胞或微生物遭受环境变化时，它们将通过自身调整以图适应新的环境。一些例子中细胞需要改变自身体积以便达到适合的目标。 　　由贝克曼库尔特公司出品的Multisizer 3 库尔特细胞特性分析仪是目前最权威的细胞体积、细胞计数的分析仪器，应用文献多不胜数。无可逾越的领先技术更使Multisizer 3 成为分辨率最高的仪器。国外的用户统计表明，Multisizer 3 已成为细胞实验室必备的研究工具。 　　自华莱士• 库尔特先生发明 库尔特原理 以来，该原理已广泛应用于材料、生物、医学、制药等众多的领域。目前生物领域的细胞计数标准就是库尔特原理。美国材料实验协会ASTM将库尔特原理定为生物细胞计数的标准(ASTM-F2194)。国际血液学标准化委员会亦指定库尔特原理为计算红细胞与白细胞的标准实验室方法 (Clin. lab. Haemat. 1988. 10, 203-212.)。 　　作为库尔特原理及技术应用的鼻祖，美国贝克曼库尔特公司始终保持着技术领先的优势。† 库尔特计数仪(Coulter Counter)无论在研究还是在质量控制的应用均具有深远的影响力。在权威的研究机构及其发表的学术文献当中，库尔特计数仪均担当着不可或缺的角色。 　　多年来贝克曼库尔特公司在市场上推出了一系列的库尔特计数仪(Coulter Counter)，如：ZM、TA II、Multisizer II等系列型号，为科研与产品控制的实验室颗粒/细胞的检测提供最可靠的分析手段。Multisizer 3 型库尔特颗粒/细胞计数及粒度分析仪为当今所有计数仪、粒度分析仪当中分辨率最高的仪器。 　　库尔特原理(Coulter Principle) 　　又称为电感应区技术。 　　悬浮于弱电解液中的细胞被抽吸而经过一个小孔，因产生外加电压而形成“感应区”。细胞经过小孔时，细胞的体积替代了电解液的相应体积。因相应体积的电解液被替代，小孔感应区产生电压脉冲而导致电阻的改变。脉冲的强度与细胞的体积成比例的关系 。 　　Multisizer 3 先进的DPP 数码脉冲处理器，使测量过程中的数以百万计的脉冲信号无须经压缩而保存。数据因无损失而能实现再分析功能。DPP的功能使得Multisizer 3 能够实时监测样品在分析过程中的原始变化。 　　DPP同样可用于检测细胞体积的改变。在许多的生化过程中细胞体积是一个重要的参考因素。如细胞发育、细胞周期、细胞死亡、渗透压的补偿、致病机理和吞噬作用等。Multisizer 3 可以观测细胞粒径与体积从几秒到几小时内的变化。 　　DPP技术在低温生物学中的应用 　　这是在冷冻过程中受渗透压影响的细胞，其平均体积(MCV)的分布曲线和20秒内连续的脉冲峰值平均值的变化。 　　择任意的脉冲群可以将一个粒度分布“分割”成多重的分布。因此，可获得在分析全程中的某一时段的粒度分布。如图示，可获得细胞的平均直径随时间的变化。 　　使用Beckman Coulter 的Multisizer™ 3 库尔特体积粒度分析仪将能方便而精确地测量细胞平均体积(MCV)的各种变化。

博士Eric T. Ahrens表示，起初我们想观察这种技术联合作用对于新型细胞疗法的效果，而我们可以通过反馈细胞活性、改善剂量等途径来改善细胞疗法的效率；当前并没有有效的方法对人类机体中的细胞进行成像，早先可以利用基于金属离子的血管MRI对比制剂和放射性同位素来成像，但是其在体内就不能够对细胞进行有效区分了。hz-E10044 human soluble cluster of differentiation 28,sCD28 ELISAkit 人可溶性CD28(sCD28)检测试剂盒 hz-E10045 Human lymphocyte factor ELISAkit 人淋巴细胞因子检测试剂盒 hz-E10046 Human thymus activation regulated chemokine,TARC ELISAkit 人胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)检测试剂盒 hz-E10047 Human Neural cell adhesion molecule ligand 1,NCAM-L1 人神经细胞粘附分子配体1(NCAM-L1/CD171)检测试剂盒 ELISAkit hz-E10048 Human Cobra venom neuronal protective factor,CVNPF ELISAkit 人神经保护因子(CVNPF)检测试剂盒 hz-E10049 Human soluble Tumor Necrosis Factorαreceptor,sTNFαR 人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFαR)检测试剂盒 ELISAkit hz-E10050 Human soluble cytokine receptor,sCKR ELISAkit 人可溶性细胞因子受体(sCKR)检测试剂盒 hz-E10051 Human soluble Factor-related Apoptosis ligand,sFASL/Apo-1 人可溶性凋亡相关因子配体(sFASL)检测试剂盒 ELISAkit hz-E10052 Human inhibitor of apoptosis,IAP ELISAkit 人细胞凋亡抑制因子(IAP)检测试剂盒 hz-E10053 Human colony-stimulating factor,CSF ELISAkit 人集落刺激因子(CSF)检测试剂盒 hz-E10054 Human monocyte interferon gamma inducing factor,MIGF 人γ干扰素诱导单核细胞因子(MIGF/CXCL9)检测试剂盒 ELISAkit hz-E10055 Human Interferon inducible T-cell Chemoattractant,I- 人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)检测试剂盒 TAC ELISAkit hz-E10056 Human cluster Of differentiation,CDl4 ELISAkit 人CD14分子(CDl4)检测试剂盒 hz-E10057 Human apoptosis inducing factor,AIF ELISAkit 人凋亡诱导因子(AIF)检测试剂盒 hz-E10058 Human leukocyte common antigen,LCA/CD45 ELISAkit 人白细胞共同抗原(LCA/CD45)检测试剂盒 hz-E10059 Human cluster Of differentiation,CD4 ELISAkit 人CD4分子(CD4)检测试剂盒 hz-E10060 Human Placenta Cadherin,P-cad ELISAkit 人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白(P-cad)检测试剂盒 hz-E10061 Human Keratinocyte Growth Factor,KGF ELISAkit 人角化细胞生长因子(KGF)检测试剂盒 hz-E10062 Human Platelet-Derived Growth Factor-BB,PDGF-BB ELISAkit 人血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)检测试剂盒 hz-E10063 Human CXC-chemokine ligand 16,CXCL16 ELISAkit 人CXC趋化因子配体16(CXCL16)检测试剂盒 研究者表示，这项研究中他们利用全氟碳化合物(PFC)示踪技术和非侵入性磁共振成像成技术进行结合来直接检测标记细胞的氟原子，自然状态下氟原子在机体中的浓度极低，这就可以利用MRI技术对氟标记的细胞进行观察；而本文中研究者首次通过患者的白细胞制备了被修饰和标记的树突细胞，随后研究者将这些细胞注入到4期结直肠癌患者的机体中来刺激机体抗癌T细胞免疫反应。

在癌症诊断与治疗中，医生通常是利用活组织检查来进行确诊并跟踪治疗效果。这种方法不仅会给患者带来创伤，而且价格昂贵。循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell, CTC)检测打破了这一僵局。CTC是存在于癌症患者血液循环系统中的游离癌细胞，被认为是癌症生长、转移的一个重要因素。近年来，CTCs引发越来越多的研究者及商业公司的兴趣。 　　10月23日，在第三届&ldquo 千人计划&rdquo 创业大赛决赛上，美国泰勒影像生物技术有限公司创始人洪斌博士带来了关于CTCs的新项目&mdash &mdash 基于循环肿瘤细胞检测的快速、低成本癌症普查技术。生物探索记者对此进行了专访。 洪斌博士在千人计划大赛上展示自己带来的CTCs检测项目 　　循环肿瘤细胞，癌症无创检测新工具 　　对于科研及临床来说，CTC的概念并不陌生，早在1896年，澳大利亚学者Ashworth就首次提出CTC的概念。CTCs目前定义为自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞。 　　大量实验已经证实CTCs检测有助于肿瘤的早期诊断、判断患者预后、评估抗肿瘤药物的疗效及制定个体化治疗方案。与其他组织学标本如骨髓等相比，外周血标本容易获得，且创伤性小，是临床上常规检测较为理想的标本来源。 　　但是，CTC在外周血中的数量非常稀少，仅占外周血白细胞的1/106-1/107，并且它是连续产生的，在血液中呈动态分布，会出现滞后现象，具有很强的异质性，因此CTCs的检测一直受到挑战。 　　新技术实现CTCs快速检测 　　洪斌博士带来的技术可以解决这一问题。洪博士曾在美国豁达斯派克生物技术公司及美国艾卫迪医学检测公司工作，主导过政府支持的循环肿瘤细胞检测项目。他说，CTCs的少是相对的概念，并不是所有样品中都会少，这是一个误解。以前是因为产品、设备不够好，检测不到，所以才叫&ldquo 少&rdquo 。现在已经证明了，很多样品检测水平是以前平台的30倍到100倍，这样就不能称作&ldquo 少&rdquo 了。 　　不同于常规的细胞学检测手段，洪博士使用的是专利技术，肿瘤细胞无需分离、无需洗脱特异性染色和高清成像，不会对细胞产生物理损伤，没有样品损失。同时，他们开发了非抗体染色剂，无论染色时间长短对正常细胞都不会产生非特异性染色，不会产生染色背景。整个检测过程只需10分钟，保证了癌症检测的准确度、灵敏度、特异性和方便使用。 　　既往研究表明，外周血CTCs存在于肺癌、乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、膀肌癌和卵巢癌等多种恶性肿瘤中，因此洪博士的这项技术几乎可以检测所有癌症&mdash &mdash 只要能产生CTCs。医院、体检中心、诊所、中心实验室进行癌症筛查、诊断和治疗评价时均可使用这项技术。 　　一年左右进入临床 　　对一项医学技术来说，大家最为关注的永远都是何时能够进入临床，真正应用到患者身上，尤其是与癌症相关的技术。洪博士表示，这项技术预计一年左右在中国进入临床，经过临床试验、注册证审批等程序，再过一年半到两年时间即可推向市场。 　　洪博士提醒，虽然这项技术很先进，但是它不能完全取代现有的癌症检测技术。放射、影像、病理检查等每项技术都有自己的优势，在某些情况下，CTCs快速检测技术能够取代传统检测手段，更多情况下，CTCs快速检测技术希望做到与传统检测手段优势互补，最终实现癌症的准确检测&mdash &mdash 这也是癌症检测的最终目的。 　　在查看介绍资料时，记者注意到该技术有&ldquo 床边&rdquo 、&ldquo 快捷&rdquo 字样，因此产生疑问，该检测方法有可能给患者在家里使用吗?洪博士说，该检测使用形式多样，可以在专业实验室使用，也可以在病人床边使用，但是建议医生在专业实验室使用，以方便结果确认。 　　洪博士计划首先将产品推向全国各体检中心。被问及在中国推广这项技术可能会遇到哪些挑战，他说，挑战肯定会有，毕竟这是一个新产品，但它并不是市场上第一个这种类型的产品。经过多年发展，市场已经认可CTCs检测相关产品，他们只要努力证明这项技术好在哪里就行了。 　　CTCs检测不是一件易事，中国十年前就有公司介入CTCs检测领域，因为难度太大，到现在鲜有成功者。或许接下来十年，这种情况会得到改观。随着检测技术的不断改进，检测手段敏感性与特异性的提高，CTCs检测必将在临床肿瘤诊治中得到更广泛的推广应用，CTCs检测也将在人类战胜肿瘤的征途上写下新的篇章。 　　美国泰勒影像生物技术有限公司创始人洪斌 　　洪斌毕业于南京大学、北京化工大学、美国路易维尔大学。曾在美国豁达斯派克生物技术公司担任高级研究员、项目主管，在美国艾卫迪医学检测公司担任研发主管。洪博士获得了美国普渡大学药政管理与质量监督职业资格认证，美国药监局药政管理培训资格认证，多项中美创新创业大赛大奖，并入选美国大学名人录。他发表第一作者SCI核心期刊文章十余篇，发明专利四篇、知识产权一篇，是生物传感器和医学检测领域著名期刊 Biosensor & Bioelectronics的特邀审稿人。

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)导致的新冠肺炎（COVID-19）自2019年至今仍然在全球蔓延，其变异株Omicron由于高传播率目前已取代其它毒株成为全球新冠的主要流行毒株。各国已采取大规模疫苗接种，通过其产生的中和抗体和抗病毒T细胞来缓解和对抗新冠肺炎。有研究报道，病毒特异性T细胞在病毒清除（即SARS-CoV-1感染后17年）和在抗体滴度减弱的COVID-19患者中检测到SARS-CoV-2特异性T细胞会持续很长时间。因此需要充分了解新冠肺炎中T细胞免疫过程，对疫苗开发和免疫治疗具有重要意义。COVID-19患者中的T细胞免疫反应T细胞免疫反应是高度特异性的，在引发有效的抗病毒反应方面具有不可或缺的作用。在SARS-CoV-2感染的早期阶段，树突状细胞(DC)和巨噬细胞可以吞噬病毒感染的细胞，通过抗原呈递启动T细胞反应。随后，CD4+T细胞刺激B细胞产生病毒特异性抗体，细胞毒性CD8+T细胞靶向病毒感染的细胞。有研究报道，SARS-CoV-2特异性CD4+和CD8+T细胞在COVID-19症状发作后的前2周内的外周血中很明显。大多数SARS-CoV-2特异性CD4+T细胞表现出中枢记忆表型，主要产生Th1细胞因子，而CD8+T细胞具有更高水平的穿孔素表达的效应表型。另外有研究报道COVID-19患者T细胞活化的异质性，并提供证据表明CD4+和CD8+T细胞都能够产生有效的免疫反应，并出现受损或过度的T细胞反应。轻度COVID-19患者的T细胞升高，产生强大的抗病毒免疫反应。特别是CD8+T细胞表达更高水平的细胞毒性分子，例如颗粒酶A和FAS配体，它们有利于消除病毒感染的细胞。然而，在严重疾病病例中，CTL（Cytotoxic T cells，细胞毒性T细胞）比例减少，同时幼稚和中枢记忆CD8+T细胞的百分比也均较低。此外，与健康对照组相比，COVID-19患者的终末分化效应CD4+和CD8+T细胞的百分比更高。且重症COVID-19患者的调节性T细胞(Tregs)水平低于轻症患者。总之，T细胞亚群（包括Treg、Th1、幼稚和记忆T细胞）平衡中的这些失调可能导致严重的炎症状况，并可能导致COVID-19复发。尽管由CD4+和CD8+T细胞介导的早期抗病毒反应最有可能具有保护作用，但SARS-CoV-2有效的先天免疫逃避能力使T细胞难以通过限制I型和III型干扰素反应来产生有效的抗病毒反应。COVID-19恢复期患者和健康人中的T细胞免疫反应恢复康复患者的T细胞计数可以为T细胞在抗病毒反应中的作用提供重要参考。有研究报道，超过70%的COVID-19恢复期患者存在SARS-CoV-2特异性T细胞。100% CD4+T细胞和70% CD8+T细胞在康复患者中具有SARS-CoV-2 Spike特异性反应。功能测定证实CD4+T细胞表现为Th1表型并产生大量IFN-γ，和针对S蛋白较低水平的IL-4、IL-13、IL-5或IL-17A。同样，大多数SARS-CoV-2刺突特异性CD8+T细胞产生IFN-γ，绝大多数IFN-γ+CD8+T细胞也共表达颗粒酶B和肿瘤坏死因子α (TNFα)。这些数据表明，康复患者中的大多数CD4+和CD8+T细胞产生了针对S蛋白的大量抗病毒免疫反应，说明功能性T细胞在病毒清除和恢复中的重要性。此外，这些数据也说明利用SARS-CoV-2的S蛋白作为疫苗生产关键候选者的重要性。T细胞反应在无症状和未接触过的个体中观察到的T细胞反应最低。但是即使没有并发的体液反应，无症状/轻度恢复期的COVID-19患者也可以产生强大而持久的记忆T细胞反应来预防复发性感染。有研究报道，与有症状的个体相比，无症状患者的免疫反应较弱，并且相当一部分有症状的患者在恢复期早期表现出中和抗体量减少。COVID-19恢复期患者在出院后2周内也显示出与针对人ACE2的中和抗体滴度和病毒特异性T细胞计数的强相关性。细胞因子风暴细胞因子风暴是指在各种病理条件下检测到的大量促炎细胞因子和趋化因子，是在SARS-CoV-2感染患者中观察到的关键病理特征之一。在重症COVID-19患者中记录到高细胞因子水平。各种免疫细胞类型，包括巨噬细胞、中性粒细胞、DC，以及NK、B和T细胞，可导致COVID-19患者的细胞因子风暴和炎症反应的过度激活状态。由先天免疫细胞释放的TNFα、IL-6和IL-1β可能是SARS-CoV-2感染晚期患者发生细胞因子释放综合征和严重全身炎症反应的主要驱动力之一，其中一些可能是导致这些患者淋巴细胞减少或Th1反应不足的潜在机制之一。另据报道，在COVID-19重症病例中，血清TNFα和IL-6水平升高与总T细胞计数呈负相关，表明这些细胞因子可能参与淋巴细胞减少和T细胞丢失。相反，处于恢复期的患者上述细胞因子的血清水平显著降低，并显示T细胞计数恢复。鉴于这些发现，有人提出IL-6阻滞剂，如sarilumab、siltuximab和tocilizumab，以及IL-1β受体阻滞剂用于治疗重症COVID-19患者以解决过度炎症和控制炎症的传播。趋化因子和细胞因子水平升高，例如CCL2/3/5、CXCL8/9/10和IFN-γ、TNFα、IL-1β、IL-1RA、IL-6、IL-7、IL-8、IL-12 、IL-33、粒细胞/粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（G-CSF和GM-CSF）、血管内皮生长因子A（VEGFA）和血小板衍生生长因子亚基B（PDGFB），促进其它白细胞向组织的募集，导致组织损伤。基于T细胞反应的疫苗研究SARS-CoV-2完整基因组的快速可用性可用于开发多种疫苗，使其在刺激幼稚T细胞后产生效应和记忆T细胞，发挥免疫保护。成功的SARS-CoV-2疫苗应该产生对有效免疫反应具有高度特异性的SARS-CoV-2反应性T细胞，而不会产生炎症或疾病开始的不良影响。SARS-CoV-2的蛋白被确定为最适合疫苗开发的靶标，以触发病毒特异性T细胞反应和体液免疫反应。表达S蛋白的腺病毒病毒载体疫苗，即5型腺病毒(Ad5-nCoV)，在健康个体(NCT04313127)中检测其疫苗的安全性和耐受性，观察到2周后成功产生特异性抗病毒T细胞和体液免疫反应。Moderna开发了基于mRNA的疫苗，编码SARS-CoV-2抗原（S蛋白），通过脂质体递送系统给药。因mRNA疫苗可以模拟天然病毒感染，并仅编码抗原蛋白并且不能整合到宿主染色体中。因此，基于mRNA的疫苗更能发挥细胞免疫和体液免疫。T细胞免疫检测---细胞因子释放检测（CRA）疫苗中的抗体测试是常规进行的，但因为特异性病原体的T细胞在血液中存在的总T细胞（通常小于1-3%）中只占很小的一部分，需要在从全血中纯化的细胞中进行。而这些检测都需要复杂的设备和高度专业化的人员，这可能不是每个常规实验室都可以使用的。杜克-新加坡国立大学Antonio Bertoletti教授团队采用了一种快速和简单的替代方法，即基于Ella微流控ELISA技术的全血细胞因子释放测定(Cytokine release assay, CRA)实验：直接将刺激性抗原或肽添加到全血中，导致血浆中细胞因子（通常是IFN-γ）的分泌，然后进行定量。该检测方法通过简单地将Spike肽库添加到全血中，可以轻松快速地检测和相对定量接种疫苗个体中的Spike特异性T细胞反应。此方法检测时间比常规方法缩减了7个小时，总时间缩短了12个小时。总结因T细胞免疫反应在疾病的早期阶段表现出保护作用，也可能导致致命症的发生，因此COVID-19的治疗和预防中需要深入地了解疾病过程中的免疫反应。特别是在症状轻微的患者中阻断促炎细胞因子的早期治疗干预可能会产生有害影响，并导致免疫反应不足和病毒清除受损。在危重COVID-19患者中恢复T细胞耗竭和改善过度炎症反应的晚期治疗干预可能具有更好的临床结果。在疫苗开发中，也要充分考虑其是否可以增强抗病毒免疫和特定T细胞反应从而加强疫苗保护的持久性。参考文献Robust T Cell Immunity in ConvalescentIndividuals with Asymptomatic or Mild COVID‐19.Highly functional virus‐specific cellular immune response in asymptomatic SARS-CoV‐2 infection.T‐cell responses and therapies against SARS‐CoV‐2 infection.Rapid determination of the wide dynamicrange of SARS‐CoV‐2 Spike T cell responses in whole blood of vaccinated andnaturally infected.T cell immunity to SARS-CoV-2 followingnatural infection and vaccination.关于我们ProteinSimple是美国纳斯达克上市公司Bio-Techne集团（NASDAQ:TECH）旗下行业领先的蛋白质分析品牌。我们致力于研发和生产更精准、更快速、更灵敏的创新性蛋白质分析工具，包括蛋白质电荷表征、蛋白质纯度分析、蛋白质翻译后修饰定量检测、蛋白质免疫实验如Western和ELISA定量检测蛋白质表达等技术，帮助疫苗研发、生物制药、细胞治疗、基因治疗、生物医学和生命科学等领域科学家解决蛋白质分析问题，深度解析蛋白质和疾病相互关系。联系我们地址：上海市长宁路1193号来福士广场3幢1901室 电话：021-60276091热线：4000-863-973邮箱：PS-Marketing.CN@bio-techne.com网址：www.bio-techne.com

日本研究人员日前宣布，他们开发出了利用实验鼠的诱导多功能干细胞(iPS细胞)高效制造造血干细胞的技术。医生未来在治疗白血病时，有望利用这种技术制造大量造血干细胞，从而代替骨髓移植。 　　造血干细胞位于骨髓中，可以分化为红细胞和白细胞。东京都临床医学综合研究所与大阪大学的研究人员利用iPS细胞先制作出了中胚层细胞。这种细胞可以发育为血管和肌肉等组织。随后研究人员向中胚层细胞植入LhX2基因，最终生成了大量的造血干细胞。 　　研究人员接下来用放射线照射实验鼠，使其失去造血功能，再将用上述方法得到的造血干细胞移植到一部分实验鼠体内。结果显示，和没有接受造血干细胞移植的实验鼠相比，接受移植的实验鼠寿命大幅延长，生存了4个月。 　　研究人员指出，此前利用iPS细胞培养造血干细胞时，难以单纯生成造血干细胞，还会混杂其他细胞，而这次开发出的新技术使造血干细胞的生成效率达到了原有方法的四五倍。 　　目前在对白血病患者进行治疗时，主要是移植与患者血液类型接近的正常人骨髓，以利用其中的造血干细胞，帮助患者恢复。研究人员希望在确认安全性后，将这种新技术用于人类的白血病治疗。相关论文已刊登在新一期美国《血液》杂志网络版上。

人体内有各种各样各司其职的细胞，白细胞、淋巴细胞保护我们免受细菌及病毒的侵害，红细胞携带氧气，血小板可以凝血… … 除了这些，人体内还有一种细胞功能更复杂，那就是有“万-能细胞”之称的干细胞。要知道，人体内的细胞都是有寿命的，例如红细胞一般有120天左右的寿命，120天后全新的红细胞就会代替那些老去的红细胞。那么，新的红细胞从何而来？其实，新的红细胞就是由干细胞中的造血干细胞分化而来。这就不得不提干细胞的五个特征：一是自我更新，指细胞分裂增殖的过程，产生的子代细胞仍维持亲代细胞的原始特性，比如，肝移植供者切除3/4的肝脏，可以在两周内完全恢复成原样。二是克隆源性，即单个细胞具有创造更多相同细胞的能力，一个细胞能复制成两个完全一样的细胞。三是高度分化潜能，即能向不同的组织分化。例如我们临床上已经成熟应用的白血病治疗方法——造血干细胞移植，其实就是利用了造血干细胞的分化功能，相当于更换了正常的干细胞。四是可塑性，指干细胞具有分化为其他类型组织细胞的能力。例如骨髓造血干细胞可以在适合的环境下分化为和脑组织的神经同类型的神经细胞。五是生物学特征，干细胞要想维持自我更新和分化的特性，需要特定的干细胞微环境，在不同的微环境中，干细胞可以发挥不同的能力。干细胞还是个大家族，根据不同的标准，可有多种分类。例如，根据来源不同，干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞两大类。胚胎干细胞主要来自囊胚的内细胞团，是一种高度未分化细胞；成体干细胞是对胎儿、儿童和成人组织中存在的多潜能干细胞的统称。相比于胚胎干细胞，成体干细胞来源较广，相对容易获取，并且源于患者自身的成体干细胞在应用时不存在组织相容性的问题，可避免移植排异反应和使用免疫抑制剂。按照发育潜能，干细胞又可分为全能干细胞、多能干细胞、单能干细胞三大类。全能干细胞是指能够发育成具有各种组织器官的完整个体潜能的细胞，如受精卵；多能干细胞虽然能分化出多种细胞组织，但并不能发育成完整的个体，如胚胎干细胞；单能干细胞是指只能向单一方向分化、产生一种或几种密切相关类型的细胞，如造血干细胞、神经干细胞、心脏干细胞等。当前，干细胞研究已经成为医学领域和生物医学领域的热点之一。经过多年的研究积累，我国在干细胞研究领域也已取得了诸多成就，如利用干细胞开展脊髓损伤修复已初见成效。相信不久的将来，随着干细胞理论的日臻完善和干细胞技术的不断发展，“万能细胞”将为人类健康做出更多贡献。

html, body { -webkit-user-select: text } * { padding: 0 margin: 0 } .web-box { width: 100% text-align: center } .wenshang { margin: 0 auto width: 80% text-align: center padding: 20px 10px 0 10px } .wenshang h2 { display: block color: #900 text-align: center padding-bottom: 10px border-bottom: 1px dashed #ccc font-size: 16px } .site a { text-decoration: none } .content-box { text-align: left margin: 0 auto width: 80% margin-top: 25px text-indent: 2em font-size: 14px line-height: 25px } .biaoge { margin: 0 auto /* width: 643px */ width: 100% margin-top: 25px } .table_content { border-top: 1px solid #e0e0e0 border-left: 1px solid #e0e0e0 font-family: Arial /* width: 643px */ width: 100% margin-top: 10px margin-left: 15px } .table_content tr td { line-height: 29px } .table_content .bg { background-color: #f6f6f6 } .table_content tr td { border-right: 1px solid #e0e0e0 border-bottom: 1px solid #e0e0e0 } .table-left { text-align: left padding-left: 20px } 基本信息 关键内容： 血球分析仪,流式细胞仪,细胞计数器 开标时间： 2021-08-10 09:00 采购金额： 332.44万元 采购单位： 济源职业技术学院 采购联系人： 刘先生 采购联系方式： 立即查看 招标代理机构： 河南省正济工程咨询有限公司 代理联系人： 孔先生 代理联系方式： 立即查看 详细信息 [招标公告]济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目招标公告 河南省-济源市 状态：公告 更新时间：2021-07-17 [招标公告]济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目招标公告 【信息时间：2021-07-17 项目概况 济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目的潜在投标人应在全国公共资源交易平台（河南省.济源市）（网址：http://www.jyggjy.cn/TPFront/）获取招标文件，并于2021年8月10日09:00（北京时间）前递交投标文件。 一、项目基本情况 1.采购项目编号：济源采购-2021-719（入场交易项目编号：JGZJ-采-2021101） 2.采购项目名称：济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目 3.采购方式：公开招标 4.预算金额：3324400.00元 序号 包号 包名称 包预算（元） 包最高限价（元） 1 包一 济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目（包一） 1000700.00 1000700.00 2 包二 济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目（包二） 979300.00 979300.00 3 包三 济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目（包三） 605400.00 605400.00 4 包四 济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目（包四） 739000.00 739000.00 5.采购需求 包号 采购内容名称 主要设备简要内容及数量 包一 中医学实训室设备及护理实训室设备 一、中医基本技能操作辅助教学系统1套：采用LCD液晶触摸查询一体机，具有开放性、系统性、可交互性特点； 二、中医推拿按摩床25张：尺寸（mm）：1900×700×600 三、中医拔罐、刮痧、针灸训练模型2套：满足国家中医类别医师资格实践技能、中医执业资格鉴定及中医技能培训中心的训练及考核要求，可进行拔罐、艾灸、刮痧、砭术多项中医技能的训练及考核。 四、…… 包二 检验专业实训室设备、药学专业实训室设备、模拟药房实训室设备 一、全自动干式生化分析仪1台： 1光源：12V/20W，2500小时长寿命卤钨灯； 2.电源输入：AC 220V，50Hz； 3.…… 二、全自动血细胞分析仪1台 检测原理：采用库尔特原理检测白细胞/嗜碱性粒细胞数目以及体积分布；采用半导体激光流式细胞技术获得白细胞的四分类统计计数，采用免疫比浊法进行C-反应蛋白（CRP）测定； 三、医学检验演示平台1台：要求对现有和未来建设数字化教学资源具有兼容、学生使用、成绩统计与分析、项目申报和资源共享功能 四、…… 包三 康复实训室设备、言语治疗实训室设备 一、视觉障碍仿真套装4套： 1.高龄者模拟体验装置作用； 2.配套一些简单互动体验项目； 二、老年生活用具包（含日常起居餐饮特殊定制起居）2套； 三、简易护理模型人2套：环保PVC材质； 四、神经肌肉电刺激仪2台： 1.输出脉冲波形：双向不对称方波； 2.输出脉冲宽度：20μs～500μs，允差±20%； 3.…… 五、…… 包四 运动治疗实训室设备、作业治疗实训室设备 一、医用诊疗椅16套：用于治疗师对患者进行手法治疗时可移动式的坐具 二、站立架4套：用于截瘫、脑瘫等站立功能障碍患者站立训练，也可预防改善骨质疏松、压疮、心肺功能降低等 三、训练用阶梯（双向）3套； 四、下肢功率车（立式）6台； 五、…… 质保期：自安装完毕验收合格之日起一年免费质保 （因本项目各包采购内容品类较多，具体内容详见各包招标文件。） 6.合同履行期限：合同签订后30日 7.本项目是否接受联合体投标：否 8.是否接受进口产品：否 二、申请人资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.落实政府采购政策需满足的资格要求： 本项目不属于专门面向中小企业采购的项目，但执行促进中小型企业发展政策、助力扶贫企业政策、优先采购节能产品、优先采购环境标志产品、支持残疾人单位和监狱企业政策、优先采购国货等政府采购政策。 3.本项目的特定资格要求： 3.1若供应商为所投产品生产企业（制造商）须具有医疗器械生产许可证；若供应商为代理商（经销商）须具有医疗器械经营许可证或备案凭证； 3.2单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同供应商，不得同时参加本项目采购活动； 3.3根据《关于在政府采购活动中查询及使用信用记录有关问题的通知》（财库〔2016〕125号）的规定，对列入失信行为记录名单的供应商，拒绝参与本项目政府采购活动；【查询渠道：“信用中国”网站（www.creditchina.gov.cn）、中国政府采购网（www.ccgp.gov.cn）】等，信用信息查询的时间期限为参加政府采购活动近三年内。 三、获取招标文件 1.时间：2021年7月19日至2021年7月23日，每天上午00：00至12:00，下午12:00至23:59（北京时间，法定节假日除外）。 2.地点：供应商自行在网上获取招标文件。（全国公共资源交易平台（河南省.济源市）（网址http://www.jyggjy.cn/TPFront）） 3.方式：本项目只接受网上获取，不接受其他获取方式。 凡有意参加供应商需通过全国公共资源交易平台（河南省.济源市）（网址http://www.jyggjy.cn/TPFront）交易主体登录后获取。如果是初次参加采购活动的，需先在全国公共资源交易平台（河南省.济源市）点击交易主体登录界面进行会员注册（详见网站首页→重要通知栏目→关于进一步规范诚信库入库工作的通知）。在注册时请仔细参考操作手册，按要求对内容进行填报并上传，所填信息必须真实、完整、有效，否则《会员注册审核》不予通过，由此造成的损失由潜在供应商自行承担。 4.售价：0元 四、提交投标文件截止时间及地点 1.时间：2021年8月10日09:00（北京时间） 2.地点：济源市公共资源交易中心第四开标室 五、开标时间及地点 1.时间：2021年8月10日09:00（北京时间） 2.地点：济源市公共资源交易中心第四开标室 六、发布公告的媒介及公告期限 本次招标公告同时在《河南省政府采购网》、《全国公共资源交易平台（河南省.济源市）》、《____》和《河南省正济工程咨询有限公司网》发布。公告期限为五个工作日，2021年7月19日至2021年7月23日。 七、其他补充事宜 1.投标文件递交方式 本项目采用电子开评标，投标文件的递交方式详见招标文件供应商须知前附表9和11条款。请各供应商提前办理CA证书，提前学习电子投标文件制作，投标文件制作工具请到全国公共资源交易平台（河南省.济源市）网站“公共服务→下载专区”栏目下载。 为防止网络拥堵等不可控因素影响投标文件的上传，请各供应商尽量提前一至两天上传投标文件，因投标文件未及时上传导致投标失败的责任由供应商自行承担。 技术支持请联系：电话：0391-5507018；QQ：515146523（工作时间） 信安CA锁咨询电话：18939148645 2.变更 本项目如有变更，将在《河南省政府采购网》、《全国公共资源交易平台（河南省.济源市）》、《____》和《河南省正济工程咨询有限公司网》相应栏目同时发布，不再另行通知，请供应商注意随时关注。 3.本项目执行的政府采购政策： 财库﹝2020﹞46号文件、财库〔2019〕9号文件、财库〔2006〕90号文件、国办发〔2007〕51号文件、财库〔2014〕68号文件、财库〔2017〕141号、济管发统﹝2020﹞199号文件、豫政办〔2019〕13号文件、豫政〔2015〕60号文件、豫财购〔2016〕10号文件及其他相关政府采购政策功能。 4.防控要求 供应商应在《全国公共资源交易平台（河南省.济源市）》查阅“济源公共资源交易中心关于疫情防控期间有序恢复交易服务工作的通知”，并按该通知规定在参加开评标活动时自觉接受人员身份核验，携带身份证和健康证明（健康码），全程佩戴口罩，配合做好扫码、体温检测及登记等防控工作，服从现场管理人员引导。如有发热、咳嗽等体征异常或有感冒症状者，谢绝参加开标活动。 所有人员要保持1米以上距离，应注重个人卫生防护，完成交易活动后应尽快离开，在办公区域内不聚集、不攀谈、不逗留。 八、凡对本次招标提出询问，请按以下方式联系 1.采购人信息 名称：济源职业技术学院 地址：济源市济源大道中段88号 联系人：刘先生 联系方式：0391-6621033 2.采购代理机构信息 名称：河南省正济工程咨询有限公司 地址：济源市济源大道西段今晨精品酒店三楼 联系人：孔先生 联系方式：0391-6290116 3.项目联系方式 项目联系人：孔先生 电话：0391-6290116 发布人：河南省正济工程咨询有限公司 发布时间：2021年7月17日 × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 $('.clickModel').click(function () { $('.modelDiv').show() }) $('.closeModel').click(function () { $('.modelDiv').hide() })基本信息 关键内容：血球分析仪,流式细胞仪,细胞计数器 开标时间：2021-08-10 09:00 预算金额：332.44万元 采购单位：济源职业技术学院 采购联系人：点击查看 采购联系方式：点击查看 招标代理机构：河南省正济工程咨询有限公司 代理联系人：点击查看 代理联系方式：点击查看 详细信息 [招标公告]济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目招标公告 河南省-济源市 状态：公告 更新时间： 2021-07-17 [招标公告]济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目招标公告 【信息时间：2021-07-17 项目概况 济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目的潜在投标人应在全国公共资源交易平台（河南省.济源市）（网址：http://www.jyggjy.cn/TPFront/）获取招标文件，并于2021年8月10日09:00（北京时间）前递交投标文件。 一、项目基本情况 1.采购项目编号：济源采购-2021-719（入场交易项目编号：JGZJ-采-2021101） 2.采购项目名称：济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目 3.采购方式：公开招标 4.预算金额：3324400.00元 序号 包号 包名称 包预算（元） 包最高限价（元） 1 包一 济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目（包一） 1000700.00 1000700.00 2 包二 济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目（包二） 979300.00 979300.00 3 包三 济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目（包三） 605400.00 605400.00 4 包四 济源职业技术学院护理系2021年实训室设备采购项目（包四） 739000.00 739000.00 5.采购需求 包号 采购内容名称 主要设备简要内容及数量 包一 中医学实训室设备及护理实训室设备 一、中医基本技能操作辅助教学系统1套：采用LCD液晶触摸查询一体机，具有开放性、系统性、可交互性特点； 二、中医推拿按摩床25张：尺寸（mm）：1900×700×600三、中医拔罐、刮痧、针灸训练模型2套：满足国家中医类别医师资格实践技能、中医执业资格鉴定及中医技能培训中心的训练及考核要求，可进行拔罐、艾灸、刮痧、砭术多项中医技能的训练及考核。 四、…… 包二 检验专业实训室设备、药学专业实训室设备、模拟药房实训室设备 一、全自动干式生化分析仪1台： 1光源：12V/20W，2500小时长寿命卤钨灯； 2.电源输入：AC 220V，50Hz； 3.…… 二、全自动血细胞分析仪1台 检测原理：采用库尔特原理检测白细胞/嗜碱性粒细胞数目以及体积分布；采用半导体激光流式细胞技术获得白细胞的四分类统计计数，采用免疫比浊法进行C-反应蛋白（CRP）测定； 三、医学检验演示平台1台：要求对现有和未来建设数字化教学资源具有兼容、学生使用、成绩统计与分析、项目申报和资源共享功能 四、…… 包三 康复实训室设备、言语治疗实训室设备 一、视觉障碍仿真套装4套： 1.高龄者模拟体验装置作用； 2.配套一些简单互动体验项目； 二、老年生活用具包（含日常起居餐饮特殊定制起居）2套； 三、简易护理模型人2套：环保PVC材质； 四、神经肌肉电刺激仪2台： 1.输出脉冲波形：双向不对称方波； 2.输出脉冲宽度：20μs～500μs，允差±20%； 3.…… 五、…… 包四 运动治疗实训室设备、作业治疗实训室设备 一、医用诊疗椅16套：用于治疗师对患者进行手法治疗时可移动式的坐具 二、站立架4套：用于截瘫、脑瘫等站立功能障碍患者站立训练，也可预防改善骨质疏松、压疮、心肺功能降低等 三、训练用阶梯（双向）3套； 四、下肢功率车（立式）6台； 五、…… 质保期：自安装完毕验收合格之日起一年免费质保 （因本项目各包采购内容品类较多，具体内容详见各包招标文件。） 6.合同履行期限：合同签订后30日 7.本项目是否接受联合体投标：否 8.是否接受进口产品：否 二、申请人资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.落实政府采购政策需满足的资格要求： 本项目不属于专门面向中小企业采购的项目，但执行促进中小型企业发展政策、助力扶贫企业政策、优先采购节能产品、优先采购环境标志产品、支持残疾人单位和监狱企业政策、优先采购国货等政府采购政策。 3.本项目的特定资格要求： 3.1若供应商为所投产品生产企业（制造商）须具有医疗器械生产许可证；若供应商为代理商（经销商）须具有医疗器械经营许可证或备案凭证； 3.2单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同供应商，不得同时参加本项目采购活动； 3.3根据《关于在政府采购活动中查询及使用信用记录有关问题的通知》（财库〔2016〕125号）的规定，对列入失信行为记录名单的供应商，拒绝参与本项目政府采购活动；【查询渠道：“信用中国”网站（www.creditchina.gov.cn）、中国政府采购网（www.ccgp.gov.cn）】等，信用信息查询的时间期限为参加政府采购活动近三年内。 三、获取招标文件 1.时间：2021年7月19日至2021年7月23日，每天上午00：00至12:00，下午12:00至23:59（北京时间，法定节假日除外）。 2.地点：供应商自行在网上获取招标文件。（全国公共资源交易平台（河南省.济源市）（网址http://www.jyggjy.cn/TPFront）） 3.方式：本项目只接受网上获取，不接受其他获取方式。 凡有意参加供应商需通过全国公共资源交易平台（河南省.济源市）（网址http://www.jyggjy.cn/TPFront）交易主体登录后获取。如果是初次参加采购活动的，需先在全国公共资源交易平台（河南省.济源市）点击交易主体登录界面进行会员注册（详见网站首页→重要通知栏目→关于进一步规范诚信库入库工作的通知）。在注册时请仔细参考操作手册，按要求对内容进行填报并上传，所填信息必须真实、完整、有效，否则《会员注册审核》不予通过，由此造成的损失由潜在供应商自行承担。 4.售价：0元 四、提交投标文件截止时间及地点 1.时间：2021年8月10日09:00（北京时间） 2.地点：济源市公共资源交易中心第四开标室 五、开标时间及地点 1.时间：2021年8月10日09:00（北京时间） 2.地点：济源市公共资源交易中心第四开标室 六、发布公告的媒介及公告期限 本次招标公告同时在《河南省政府采购网》、《全国公共资源交易平台（河南省.济源市）》、《____》和《河南省正济工程咨询有限公司网》发布。公告期限为五个工作日，2021年7月19日至2021年7月23日。 七、其他补充事宜 1.投标文件递交方式 本项目采用电子开评标，投标文件的递交方式详见招标文件供应商须知前附表9和11条款。请各供应商提前办理CA证书，提前学习电子投标文件制作，投标文件制作工具请到全国公共资源交易平台（河南省.济源市）网站“公共服务→下载专区”栏目下载。 为防止网络拥堵等不可控因素影响投标文件的上传，请各供应商尽量提前一至两天上传投标文件，因投标文件未及时上传导致投标失败的责任由供应商自行承担。 技术支持请联系：电话：0391-5507018；QQ：515146523（工作时间） 信安CA锁咨询电话：18939148645 2.变更 本项目如有变更，将在《河南省政府采购网》、《全国公共资源交易平台（河南省.济源市）》、《____》和《河南省正济工程咨询有限公司网》相应栏目同时发布，不再另行通知，请供应商注意随时关注。 3.本项目执行的政府采购政策： 财库﹝2020﹞46号文件、财库〔2019〕9号文件、财库〔2006〕90号文件、国办发〔2007〕51号文件、财库〔2014〕68号文件、财库〔2017〕141号、济管发统﹝2020﹞199号文件、豫政办〔2019〕13号文件、豫政〔2015〕60号文件、豫财购〔2016〕10号文件及其他相关政府采购政策功能。 4.防控要求 供应商应在《全国公共资源交易平台（河南省.济源市）》查阅“济源公共资源交易中心关于疫情防控期间有序恢复交易服务工作的通知”，并按该通知规定在参加开评标活动时自觉接受人员身份核验，携带身份证和健康证明（健康码），全程佩戴口罩，配合做好扫码、体温检测及登记等防控工作，服从现场管理人员引导。如有发热、咳嗽等体征异常或有感冒症状者，谢绝参加开标活动。 所有人员要保持1米以上距离，应注重个人卫生防护，完成交易活动后应尽快离开，在办公区域内不聚集、不攀谈、不逗留。 八、凡对本次招标提出询问，请按以下方式联系 1.采购人信息 名称：济源职业技术学院 地址：济源市济源大道中段88号 联系人：刘先生 联系方式：0391-6621033 2.采购代理机构信息 名称：河南省正济工程咨询有限公司 地址：济源市济源大道西段今晨精品酒店三楼 联系人：孔先生 联系方式：0391-6290116 3.项目联系方式 项目联系人：孔先生 电话：0391-6290116 发布人：河南省正济工程咨询有限公司 发布时间：2021年7月17日

文章来源：中华检验医学杂志, 2022,45(8) : 790-801作者：中国中西医结合学会检验医学专业委员会摘要嵌合抗原受体（CAR）-T细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域一个举世瞩目的重大成果。流式细胞术（FCM）在CAR-T细胞免疫治疗相关检验的每一个步骤中都起到非常重要的作用，包括靶点筛查、CAR-T细胞产品成分鉴定、毒性预估、微小残留病（MRD）检测、免疫功能评价、免疫微环境研究等。为了深刻认识FCM在CAR-T细胞免疫治疗这一新兴领域的作用，规范每一项应用中的操作，进一步促进其在CAR-T细胞免疫治疗中的应用，中国中西医结合学会检验医学专业委员会制定了此专家共识。嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）-T细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域一个举世瞩目的重大成果［1, 2, 3, 4, 5, 6, 7］，尤其是CD19-CAR-T细胞免疫治疗难治复发B细胞急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）获得了90%左右的缓解率［1, 2, 3］，单独使用或者桥接异基因造血干细胞移植均极大程度地提高了患者的完全缓解率和生存率；CAR-T细胞免疫治疗其他类型白血病、淋巴瘤、骨髓瘤以及实体瘤也在不断探索并取得巨大进步［4, 5, 6, 7］。流式细胞术（flow cytometry，FCM）在CAR-T细胞免疫治疗相关检验的每个步骤中都起到非常重要的作用 ［1, 2, 3, 4, 5, 6, 7］。作为一项免疫治疗，CAR-T细胞免疫治疗相关检验中涉及的FCM与临床常规不同，体现在靶点评估需要精确设门并且同时关注正常细胞的表达，CAR-T细胞免疫治疗后微小残留病（minimal/measurable residual disease，MRD）需要考虑靶点丢失以及输入的CAR-T细胞影响，而CAR表达细胞比例和数量的检测以及免疫相关检测均缺乏规范化，给临床工作带来不确定性等。为了能使更多相关领域的科研、临床和实验室检测人员认识FCM在CAR-T细胞免疫治疗中的作用和注意事项，规范在每项检验中的实验方案和技术操作，进一步促进其在CAR-T细胞免疫治疗中的应用，中国中西医结合学会检验医学专业委员会组织专家结合文献学习和多家医疗机构的临床工作实践制定了本专家共识。适用范围、术语和定义一、适用范围各类医疗机构临床实验室、商业化实验室和科研单位在使用FCM进行CAR-T细胞免疫治疗相关临床检验时，均可采用或参照使用本专家共识。鉴于CAR-T细胞生产过程中的创新性和复杂性，并且该步骤极少在临床诊断实验室中进行，本共识不涉及此研发过程。二、术语和定义1.多参数流式细胞术（multiparametric flow cytometry，MFC）：虽然MFC的术语出现于20世纪80年代，当初指代两色以上FCM，后期对此也没有明确定义，但是现在普遍建议采用三激光八色或者以上机型。2.CAR-T细胞免疫治疗：人体免疫细胞（来自自体或异体均可），在体外经过基因修饰后具备了特异性识别和杀伤表达特定抗原的肿瘤细胞的能力，输入患者体内以实现清除肿瘤细胞或者其他病态细胞的免疫治疗方法［1, 2, 3, 4, 5, 6, 7］。CAR-T细胞免疫治疗技术包括几个步骤：（1）从患者或者供者血液中分离出自体或者异体T淋巴细胞；（2）用CAR编码的病毒载体进行体外修饰、培养；（3）最后输入患者体内。近年来为了增强治疗效果降低副作用，已发展到第4代CAR-T细胞免疫治疗技术。3.细胞因子：细胞因子是由多种免疫细胞分泌的一类小分子蛋白质，具有介导和调节免疫过程等作用。目前已经发现的人类细胞因子有200多种。根据结构和功能一般可分为白细胞介素（interleukin，IL）、干扰素（interferon，IFN）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、集落刺激因子、趋化因子和生长因子等。4.细胞因子释放综合征：细胞因子释放综合征（cytokine release syndrome，CRS）是一种发生在任何免疫治疗后，由于内源性或者输注的T细胞和/或其他免疫效应细胞活化或者聚集导致的超生理反应。症状多样，但是必须包括初发时发热，可能伴有低血压、毛细管渗漏（低氧）和终末器官衰竭。尽管没有将细胞因子检测纳入定义，而CRS分级也主要是根据临床表现，但是鼓励进行C反应蛋白、细胞因子、铁蛋白等相关检测，便于为将来的研究提供依据［8］。5.趋化因子及其配体：趋化因子是能使细胞发生趋化运动的小分子细胞因子，其配体很多是免疫功能检测中区分淋巴细胞亚群的重要标志物，例如半胱氨酸-半胱氨酸基序趋化因子受体（cysteine-cysteine motif chemokine receptor，CCR）系列，半胱氨酸-氨基酸-半胱氨酸基序趋化因子受体（cysteine-X-cysteine motif chemokine receptor，CXCR）系列［9］。6.抗原表达率：精确设门后，特定细胞上抗原表达的百分比。临床工作中由于受到抗体和荧光素选择、抗原抗体结合过程、温度光照和放置时间导致荧光信号改变、仪器设置、设门精确度、个体差异、细胞异质性、对照细胞群、检测目的等多种因素影响，以诊断为目标的临床实验室，一般由流式操作人员排除各种影响因素后，按照表达、部分表达、不表达进行定性描述［10］，以方便临床和实验室对目的细胞群进行简单直观的性质判断。7.抗原表达强度：与某种抗原分子在细胞上表达量的多少有关，FCM的直观体现为荧光强度。根据抗原表达强度将阳性细胞表达分为强表达（bright，bri）、中等强度表达、弱表达（dim）和异质性表达［10］，可能会随着治疗和疾病或者活化状态发生改变。8.单链可变区片段（single-chain variable fragment，scFv）：构建CAR-T细胞需要将CAR基因通过病毒载体或非病毒系统转染并整合到T细胞基因组上。CAR基因正常表达时，形成跨膜的CAR结构，细胞外域的重链可变区和轻链可变区通过15~20个氨基酸短肽连接而成的部分即为scFv。编码的scFv元件既是CAR-T细胞识别肿瘤抗原的重要成分，也可作为FCM评价CAR表达情况的检测靶点之一。9.同型阴性对照：用于检测抗体与细胞表面可结晶段受体非特异性结合导致背景信号的阴性对照。应该用与检测抗体相同标记、同种属来源、相同亚型、相同浓度的免疫球蛋白进行染色，如果是间接标记抗体，还需要做二抗的荧光素背景对照，其作用是设置仪器条件，消除背景染色。对于正常标本中不存在的未知标志或者与阴性细胞界限不清的标志，或者标本中比例极低需要精确检测的标志，同型阴性对照是普遍采用的对照。CAR-T细胞免疫治疗相关检验中的FCM项目CAR-T细胞的生产研发、临床治疗每个环节都与FCM检测密不可分，包括靶点筛查、患者选择、CAR-T细胞成分鉴定、毒性预估、MRD检测、回输物和患者标本免疫功能评价、免疫微环境和复发机制研究等。鉴于CAR-T细胞治疗这一全新领域集合了肿瘤细胞和正常细胞免疫表型、肿瘤干细胞免疫表型、免疫细胞亚群、细胞因子检测、CAR-T细胞检测、因部分病例靶点丢失甚至系别转变导致需要调整方案的FCM MRD检测、肿瘤异质性和免疫微环境检测等（表1），以及CAR-T细胞治疗设计的多样性和复杂性、临床工作中使用不同靶点或者联合靶点CAR-T细胞治疗、使用其他细胞因子或者信号分子靶向药物控制副作用等，这些都对FCM检测提出更高的要求。因此深入了解每个环节需要使用的标本类型、检测方案以及最低检测要求，将有助于进一步规范检测流程，提高检测水平，保证检测质量。FCM在CAR-T细胞免疫治疗靶点筛查中的应用随着CAR-T细胞治疗技术的不断完善，CAR-T细胞的功能和治疗的安全性都有了很大提升，并有CAR-自然杀伤（natural killer，NK）细胞、双特异性靶点CAR-T细胞等类似靶向细胞免疫治疗产品出现。但是作为特异性免疫治疗，胞外抗原识别区的设计，尤其是有效靶点的选择始终是每一种CAR-T细胞治疗相关产品的关键环节。理想的靶点应该满足下述要求：高覆盖率（某种疾病的群体中，肿瘤细胞表达该抗原的患者比例高）、高表达率（阳性个体中几乎所有肿瘤细胞都表达）、高表达强度（在肿瘤细胞表面抗原分子数量多，表现为同一种荧光标记时，荧光强度高）、高特异性（在正常细胞中不表达或者少表达，对患者不会造成严重影响）［11］。FCM作为一项快速、简便、直观、定性定量的技术，是目前实现这一目的的重要检测手段，而CAR-T细胞治疗靶点的选择虽然都是在免疫分型或者MRD的基础上进行，但是比常规临床诊断有更严格的特殊注意事项［12, 13］。共识2：为了尽可能给CAR-T细胞免疫治疗提供客观评价，建议一项研究或治疗过程中尽量采用相同的方案，至少是关键抗体和组合相似的方案。同一患者的随访监测尽量在同一台仪器上进行，且尽量仪器条件（包括补偿）相同，或者进行仪器间条件比对。推荐强度：建议执行。）专家组成员（按姓名字母顺序排列

德国ibidi的ibiPore可以实时观察流动、剪切情况下的细胞侵袭、迁移、细胞相互作用等实验。对实验结果进行观察统计时，不需要将膜取下，也不需要将另一边的细胞擦掉（经常将膜擦破，导致实验失败），可直接将μ-Slide放于显微镜下观察统计。细胞可以通过两种方式，选择贴壁于氮化硅膜的上下两侧。可以把细胞种植在膜下边，避免自由落体的说法，大大提高了实验的准确性。21世纪注定是一个生命科学的世纪，科研工作者们如果想在这个世纪去决胜，能做到一点，不仅要好的idea，领先的技术，更需要得心应手的好工具。所谓工欲善其事必先利其器，今天为大家介绍德国ibidi的μ-Slide ibipore SiN (图1), 一款具有多孔氮化硅膜的μ-Slide载玻片，可用于实时观察流动、剪切力条件下的细胞侵袭、迁移以及细胞相互作用的可视化的“ transwell ”，更多应用请参阅文中（Intended Use的相关内容）。图1. ibipore及ibipore SiN氮化硅膜培养细胞的染色结果。图片背景为在ibipore氮化硅膜上培养细胞的荧光染色结果，规则排布的白色圆点为氮化硅膜的孔隙ibipore有上下两个独立的通道（见图2），两个通道 overlap 的区域由一个孔径大小均一的氮化硅膜隔离开（见图3）。两个通道可以分别培养细胞，通过两种方式，细胞可以贴壁于氮化硅膜的上下两侧。在细胞侵袭实验中，普通的transwell只能将细胞培养在上侧，这样所得到的实验结果并不能明确的说明是由于重力作用还是侵袭能力本身造成的。而ibipore考虑到这一因素，建议实验者在氮化硅膜的下侧进行细胞培养，检测细胞向上侧通道进行迁移的能力，进而巧妙的排除了重力作用对侵袭实验的影响。配合ibidi流体剪切力系统以及加热孵育系统，可以在流动、剪切力条件下实时的观察细胞的侵袭以及迁移等实验。德国ibidi公司为满足不同实验的需求设计了不同孔径的氮化硅膜（见图4）。ibipore与传统的transwell实验最大区别有三点：①. ibipore可以在上下两个通道中培养细胞，这样可以观察细胞向上的侵袭情况，排除以往实验中重力作用的影响；②. ibipore中间的氮化硅膜具有良好的光学特性，可以实时成像观察侵袭情况，也可以进行免疫荧光染色实验；③. ibipore可以配合ibidi流体剪切力系统，观察淋巴细胞等在流动状态下的侵袭情况。ibipore产品介绍ibipore产品特点：* 透过薄而多孔的薄膜获得卓越的光学性能* 有着广泛的应用，细胞可完全粘附到顶部-基底* 对于不同细胞类型有多种孔径大小可以选择应用：1.流动状态下跨内皮细胞迁移2.2D或3D凝胶内细胞层的共培养和传输分析3.顶部-基底细胞极性分析4.顶部-基底梯度的细胞屏障模型分析5.细胞迁移分析（例如，用于研究肿瘤侵袭或转移）在μ-Slide ibiPore IV型胶原涂层3μm孔径中人类内皮细胞的免疫荧光染色，相位对比度、DAPI（蓝色）、VE钙粘蛋白（绿色）和F肌动蛋白（红色）的叠加图像。技术特点：1.SiMPore的微孔氮化硅膜2.中间具有多孔光学膜的跨通道结构3.优异的光学性能，堪比盖玻片4.孔径大小0.5μm，3μm，5μm，8μm供选择5.中间膜0.4µ m（400 nm）6.使用工作距离0.5mm的物镜7.与ibidi泵系统（流体剪切力系统）完全兼容8.下部通道中明确的剪切力和剪切速率范围µ -Slide ibiPore SiN工作原理µ -Slide ibiPore SiN由插入两个通道之间的水平多孔膜组成。上部通道是膜上方的静态储液池。下部通道是灌注通道，用于对附着在膜上的细胞施加限定的剪切应力。上部通道和下部通道仅通过隔膜彼此连通。图2. ibipore组成示意图多孔膜由氮化硅（SiN）制成，这种材料具有非常高的化学和机械稳健性。400nm厚的氮化硅膜非常适合成像和显微镜观察，没有任何自发荧光或透明度问题（如玻璃）。SiN材料可以直接用于贴壁细胞培养，也可以选择用ECM蛋白包被。应用建议：孔径 & 孔密度什么是孔密度孔密度是指膜的空隙体积分数。是孔隙的体积除以膜的总体积。下面的图形为采用相同的放大倍数。图3. 不同孔径的氮化硅膜不同应用的建议孔径：不同的细胞大小和直径不同，根据具体实验请选择不同孔径图 4. 为不同应用推荐的不同孔径的氮化硅膜Intended Use经证实的应用这些应用已由ibidi研发团队或者我们的用户进行过试验。Endothelial Barrier Assays内皮屏障分析在膜一侧培养单层细胞。细胞可以在静止或者流动剪切力条件下培养。Co-Culture and Cell Barrier Assay共培养和细胞屏障分析在膜的两侧分别培养单层细胞。通过这种方法可以进行信号传递、共培养以及迁移实验（例如，分析药物通过上皮或内皮屏障的传递）。Apical-Basal Cell Polarity Assays顶端-?基底端细胞极性分析3D凝胶基质中的化学因子可以导向在膜另一侧培养的单层细胞的极性发生。Potential Use潜在应用以下示例将讲述该产品进一步的潜在应用。ibidi仍需在内部测试这些应用，因此我们无法提供特定的实验方案。但是，从技术角度来看，这些应用应该是可行的。Trans-Membrane Migration in 2D/2D跨膜迁移在膜的一侧培养单层细胞。可以观察悬浮的白细胞在流动状态下的滚动、粘附以及侵袭情况。Cell Transport in a 3D Gel Matrix细胞在3D凝胶基质中的传递3D凝胶基质中的细胞迁移：在流动状态下，观察白细胞的滚动、粘附以及向3D凝胶基质中肿瘤细胞方向的迁移情况。Application Examples 应用实例MDCK和NIH-3T3细胞的相差显微镜观察Madin-Darby犬肾（MDCK，左）和NIH-3T3（右）细胞在μ-Slide ibiPore SiN，孔径0.5μm的玻片中，无蛋白质包被。接种后，将细胞在静态条件下在培养箱中保持20小时。相差显微镜，4倍物镜。请注意，这张图像中的中心多孔区域看起来更暗，因为0.5μm的孔隙无法用低分辨率物镜分辨。流动条件下HUVECS的相差显微观察人脐静脉上皮细胞（HUVEC）在μ-Slide ibiPore SiN中，孔径3μm的玻片中，有纤连蛋白包被。将细胞接种并在具有ibidi泵系统/流体剪切力系统的流动条件（10达因/cm2）下在培养箱中保持12小时。固定后的相位对比显微镜，10倍物镜。流动下HUVECs F肌动蛋白细胞骨架的荧光显微镜观察人脐静脉上皮细胞（HUVEC）在μ-Slide ibiPore SiN，孔径5μm玻片中的免疫荧光染色，有纤连蛋白包被。将细胞接种并在具有ibidi泵系统/流体剪切力系统的流动条件（10达因/cm2）下在培养箱中保持12小时。绿色：肌动蛋白（鬼笔肽），蓝色：细胞核（DAPI）。荧光显微镜，20倍物镜。选择指南：ibidi跨膜分析实验解决方案参考文献：Salvermoser, Melanie, et al. "Myosin 1f is specifically required for neutrophil migration in 3D environments during acute inflammation." Blood, The Journal of the American Society of Hematology 131.17 (2018): 1887-1898. 10.1182/blood-2017-10-811851Rohwedder, Ina, et al. "Src family kinase-mediated vesicle trafficking is critical for neutrophil basement membrane penetration." Haematologica (2019). 10.3324/haematol.2019.225722Non-Recommended Applications不建议的应用因技术原因，本产品不适用于以下应用，应避免使用.本产品不适用于：1.上通道灌流2.两个通道的灌流3.跨膜流动4.筛选应用订购信息

美国亚特兰大12月9日召开的第54届美国血液协会年会暨博览会上，天普大学医学院报告了他们在研究慢性骨髓性白血病（CML）治疗方面的进展。他们设计出一种关闭CML干细胞活性的方法，以此遏制病情的进一步发展。研究人员指出，该发现有望带来攻克癌症干细胞耐药性的个体化新疗法。 　　在CML中，骨髓干细胞中的基因ABL1和BCR融合在一起产生了一种叫做BCR-ABL1的酶，在其驱动下产生了过多白细胞。尽管在治疗上，伊马替尼（imatinib）是一种比较成功的药物，但患者始终处在病情复发的风险中。论文高级作者、天普大学医学院微生物学与免疫学教授托马斯· 斯科斯基解释说，白血病有一个小型干细胞库来对抗治疗，残余的白血病干细胞会积累大量致命的DNA变异，并能够有效地自我修复，从而在DNA中埋下致命隐患，最终导致病情恶化。 　　为此，研究小组用了一种不会伤害正常细胞的方法攻击了白血病干细胞修复DNA的路径，而正常细胞的修复机制与白血病细胞不同。他们用小鼠做了一系列实验，显示出瞄准一种特殊的蛋白质RAD52，能遏制白血病干细胞的自我修复过程。&ldquo 我们希望这种方法能根除白血病干细胞，治愈慢性骨髓性白血病患者。&rdquo 斯科斯基说。 　　&ldquo 我们早期的研究也发现，RAD52基因是白血病发展的关键因素。&rdquo 论文第一作者、该校微生物学与免疫学博士后金伯利· 克莱姆说，小鼠骨髓细胞在缺乏RAD52时，CML会停止发展，这表明CML要依靠RAD52来实现自身DNA修复。 　　一种最普遍的DNA损伤是&ldquo 双链断裂&rdquo ，当RAD52蛋白发生变异时，就不能再与DNA结合修复断裂。研究人员用一种&ldquo 适配子&rdquo 加入到BCR-ABL1阳性骨髓细胞中，发现RAD52被阻止与DNA结合，白血病骨髓细胞会累积过多的双链断裂，最终死亡，而适配子对正常细胞则没有影响。 　　克莱姆说：&ldquo 用这种方法，最终可能生产出一种小分子抑制剂，从其致瘤根源上瞄准白血病细胞。&rdquo 斯科斯基补充说，该方法也有望扩展到其他癌症。

近日，为进一步加强政府采购进口产品管理，提高进口产品审核效率，四川省发布《省级2021-2022年政府采购进口产品清单论证意见公示（医疗卫生设备类）》，四川省财政厅会同医疗卫生行业主管部门统一组织专家论证（论证专家组由2名主任医师、1名副主任医师、1名主任药师、1名律师组成），形成进口产品统一论证清单。其中，新增省级政府采购进口产品23项，多数为医疗卫生实验室仪器类设备，包括全自动核酸检测分析仪、基因测序仪、自动化多通道移液工作站、全自动动物血常规分析仪、全自动凝血分析仪（动物）、吹扫捕集装置、热脱附仪、气相色谱多功能进样器、苏玛罐系统、微波消解装置、顶空进样装置、氢气发生器、氮气发生器、毛细管电泳仪、全自动酶免分析系、大容量冷冻离心机、全自动化学发光免疫分析仪、细胞计数仪等。这些国产设备论证结论基本可归纳为：与进口存在差距，难以满足医疗卫生实验室要求。具体专家论证结论如下：1.断层DR摄影系统 用于透视造影、DR摄影、长骨拼接、血管介入等检查 国产与进口产品区别:国内DR类产品均为普通拍片功能，无断层功能。 选择进口产品的理由:DR系统在一次扫描下获得连续多层面的高清晰断层图像，应用于骨科解决普通平片检查所难以显示的复杂结构，明确诊断。对于有外固定和金属植入物的部位，可避免伪影，显示细微结构。2.加速器质控设备对直线加速器设备进行准确度控制和校准，是保障加速器安全有效运行的必备设备 国产与进口产品区别:进口产品在测量时稳定性强，不会出现国产产品常出现的读数跳动的问题，可以更为准确的得到检测所需要的数据。而且进口产品的年平均数值的稳定性强，且不会随着年份的推移发生改变，国产产品随着年份的增加稳定性会进一步变得更差。同时，进口产品早操作方便性、安全性、故障率、使用寿命等方面均远优于国产设备。 选择进口产品的理由:进口产品准确度高，运行稳定，为保障放射卫生技术服务检测工作的顺利开展，以及患者检测的成功率、准确性和时效性，建议允许购买进口产品3.全自动核酸检测分析仪 围绕核酸快速自动化检测、基因突变和SNP分析的需求，构建集核酸提取、扩增以及实时荧光检测一体化的新型自动化核酸分析系统，建立一种操作简单、分析速度快、样本使用量低的核酸分析平台，满足生命科学研究、检验检疫和临床检测的需求。 国产与进口产品区别:1)进口设备全自动一体化，对PCR实验室要求低；FFPE切片或血浆可直接上样，不需要提取和扩增，不要额外试剂和耗材，不需要专业的PCR操作人员进行操作，也不存在污染问题。国内同类产品由于涉及实验步骤繁琐，故对PCR实验室条件要求严格，很多医院病理科，分子科或者检验科不具备开展肿瘤分子检测的条件；国产产品需要专业的PCR操作人员，分步进行核酸提取和扩增后再上样进行检测，人力成本较高，试剂耗材较多。 2)进口设备整体检测时间2h左右，检测快速，很短的报告周期能够满足临床紧急的用药需求。国产设备目前检测时间较长（5个工作日），而且存在污染等问题。 3)进口设备只需要常温运输和常温保存，给检测科室代来极大的便利性。国产产品检测试剂大多需要冷链运输，且低温保存，存在需要占地较大的冰箱，物流需要冷链等问题。选择进口产品的理由:进口产品对实验室、操作人员要求较低，且使用成本、检测速度、检测试剂明显优于国产设备 4.基因测序仪 用于测定DNA片段的碱基顺序、种类和定量的仪器。主要应用在人类基因组测序、人类遗传病、传染病和癌症的基因诊断、法医的亲子鉴定和个体识别、生物工程药物的筛选、动植物杂交育种等方面。 国产与进口产品区别:进口产品在测量速度、稳定性、便利性、准确度等方面明显优于国产设备 选择进口产品的理由:基因测序要求精确度及稳定性较高，国产产品相比于进口产品还有一定差距5.手术动力系统 用于术中需要切割/切开、削磨、钻孔、锯开骨质和其他组织的外科手术 国产与进口产品区别:国产产品的稳定性及持久性相比进口产品差距较大 选择进口产品的理由:手术用器具要求稳定性、持久性高，进口产品更能保障患者安全6.自动化多通道移液工作站 用于从不同来源（EP管、储液槽、孔板及多层板等）到不同目标（6-386孔板、1.5及2 mL EP管、离心管等）的移液操作，移液间距可变，并搭载液面探测，可自动、高效完成样本移液操作，并具备单道移液功能，配置了离心管架和分液器，能够完成样品前处理、液体分装、浓度均一化等工作。 国产与进口产品区别:国产的移液站不可变间距，只能整板加样。而进口产品移液器各通道间距可在一定范围内任意设置，可根据吸液、移液对象自动变换。方便地进行离心管、样本管、深孔板、PCR板、96孔细胞板等实验容器之间的液体转移。而且可适配4、6、8、12、16通道道电动移液器移液，能实现从不同来源（EP管、储液槽、孔板及多层板等）到不同目标（6-386孔板、1.5及2 mL EP管、离心管等）的移液操作,多达10种移液头选项可轻松切换，以满足各种应用对通道数和量程范围的不同需求。 选择进口产品的理由:进口产品还具有加样精度高 、稳定性强、密封性高、扩展性强、紧凑小巧移动方便等优点，能够有效消除操作员之间的变异性和人为错误，增强实验过程的可控性，提高实验准确度。7.全自动动物血常规分析仪 用于动物血液与体液分析检测，包括但不限于大鼠、小鼠、兔、猴等动物。 国产与进口产品区别:1)进口检测速度可达200测试/小时以上，国产设备只能达到60测试/小时； 2)进口产品有相匹配的溯源质控品和校准品，国产仪器暂时不能满足需求； 3)由硬件故障导致结果异常、初检可信度低等情况，进口产品仪器能自动重新检测。而国产动物血常规分析仪暂时不能满足需求。选择进口产品的理由:进口产品能更好的应对大样本数据的快速处理，且能很好的对使用的校准项目进行精准溯源，保证实验数据的溯源性和准确性。 8.全自动凝血分析仪（动物） 用于实验动物凝血检测及分析。 国产与进口产品区别:1)国产产品检测参数不急进口产品广泛，如SD大鼠等实验动物PT、APTT、FIB、D-Dimer、VWF等参数不能全覆盖，不能满足实验室对所有项目的检测需求。 2)国产的凝血分析仪检测通道仅能支持4或者6通道，进口的可以满足16通道。 3)因标本保存有时效性，需大样本量检测，要求处理能力大于200样本/小时，进口仪器可达到≥400测试/小时，而国产用于动物凝血参数检测仪器一般只能达到200测试/小时。4)因实验室结果需要进行组间比较，故需要无中断的连续装载、卸载样本和试剂，保证实验分析的连续性和及时性，国产设备多为半自动，无法满足需求。选择进口产品的理由:进口凝血分析可保证全参数检测项目的进行和快速处理测试样本的能力，可有效提高实验效率及准确性。 9.吹扫捕集装置吹扫捕集是用于从液体或固体样品中分离低沸点的挥发性或半挥发性有机物，具有富集功能，是痕量有机检测的重要前处理方式。国产与进口产品区别:1)捕集管是吹扫捕集装置的重要核心部件，其吸附剂的质量是影响回收率、灵敏度和可捕集物种类的重要因素。国产设备的性能尚存在差距。2)待测物在捕集管的解吸不充分及管路的残留是引起交叉污染的重要原因之一。国产设备在某些化合物的交叉污染控制上尚不能完全满足要求。3)部分样品在吹扫时可能发生起泡现象。高效除泡设备，能够解决样品大量起泡的问题。国产设备尚不能完全满足要求。 选择进口产品的理由:公共卫生实验室利用吹扫捕集装置检测的痕量有机物种类多、含量低、样品基体复杂、数据要求高。因国产设备尚不能完全满足要求，故选择进口产品。 10.热脱附仪 　热脱附仪是用加热和惰性气体吹扫将挥发物从采样管中解吸出来,并在捕集管中富集的一种脱附方法，是痕量有机检测的重要前处理方式。国产与进口产品区别:1）捕集管是热脱附仪的重要核心部件，其吸附能力是影响回收率、灵敏度和重复性的重要因素。国产设备的性能尚存在差距。2）待测物在捕集管的解吸不充分及管路的残留是引起交叉污染的重要原因之一。国产设备在某些化合物的交叉污染控制上尚不能完全满足要求。3）解吸效率是热脱附仪的重要性能指标，直接影响待测物的回收率。国产设备对部分化合物特别是高沸点化合物的解吸效率尚不能完全满足要求。 选择进口产品的理由:公共卫生实验室利用热脱附仪检测的痕量有机物种类多、含量低、数据要求高。因国产设备尚不能完全满足要求，故选择进口产品。 11.气相色谱多功能进样器 在集成化平台上整合多种进样方式，用于挥发性有机物定性定量分析。国产与进口产品区别: 1）气相色谱多功能进样器可整合液体进样、在线衍生、固相微萃取、液液萃取、顶空进样等多种前处理和进样方式。国产设备在整合功能上不能完全满足要求。 2）气相色谱多功能进样器要求X,Y,Z三轴步进式马达控制精准，不掉瓶、不撞针、重复性好、可靠度高，适合持续性大量样品自动前处理及自动进样分析。国产设备尚不能完全满足要求。 选择进口产品的理由:公共卫生实验室的气相色谱检测方法中涉及多种进样方式，多功能进样平台具有集成优势，大大提升检测便捷性和效率。因国产设备尚不能完全满足要求，故选择进口产品。 12.苏玛罐系统用于采集存储VOCs气体（挥发性有机化合物）的一种空气采样罐及其附属装置，是突发事件应急检测的重要装备。国产与进口产品区别: 1）苏玛罐在采集平均时段样品时，需控制气样进入采样罐的流速，使气体在整个采样期间以等流量进入罐中，对流量均匀性控制要求较高。国产设备尚不能完全满足要求。2）苏玛罐内部的惰性涂层质量对多种VOCs样品空白值、回收率、留样稳定性、控制交叉污染都有重要影响。国产设备成熟度尚不够。 选择进口产品的理由:公共卫生实验室承担有突发事件应急职责。因国产设备尚不能完全满足要求，故选择进口产品。 13.微波消解装置 消解各类样品，是重金属分析的重要前处理手段。国产与进口产品区别: 进口微波消解装置主要具有国内产品尚难以满足的特点：1）可消解大质量样品。 2）可同时消解多种不同性质的样品。 3）可大通量消解。 选择进口产品的理由:公共卫生实验室需要检测食品、化妆品、土壤、生物样品等多种复杂基质中的重金属。因国产设备尚不能完全满足要求，故选择进口产品。 14.顶空进样装置 　通过加热升温使挥发性组分从样品基体中挥发出来，在气液（或气固）两相中达到平衡，直接抽取顶部气体进行色谱分析，是痕量有机检测的重要前处理方式。国产与进口产品区别: 1）控温精度是顶空进样装置的重要性能指标，其对重复性有重要影响。国产设备的性能尚存在差距。 2）待测物在管路的残留是引起交叉污染的重要原因之一。国产设备在某些化合物的交叉污染控制上尚不能完全满足要求。选择进口产品的理由:公共卫生实验室需要检测水、化妆品、土壤、生物样品等多种复杂基质中的挥发性物质。因国产设备尚不能完全满足要求，故选择进口产品。 15.氢气发生器 为气相色谱的火焰离子化检测器（FID）提供氢气。国产与进口产品区别: 进口氢气发生器主要具有国内产品尚难以满足的特点： 1）氢气纯度大于99.999%。 2）气体产气量可大于200mL/min。 3）压力及流量稳定性好。 4）无故障工作时间长。 选择进口产品的理由:因国产设备尚不能完全满足实验要求，故选择进口产品。 16.氮气发生器为液相色谱串联质谱仪（LC-MS/MS）提供氮气。国产与进口产品区别: 进口氮气发生器主要具有国内产品尚难以满足的特点 1）氮气纯度大于99.5%。 2）气体流量大于30L/min。 3）压力及流量稳定性好。 4）无故障工作时间长。 选择进口产品的理由:因国产设备尚不能完全满足实验要求，故选择进口产品。 17.毛细管电泳仪用于微生物实验室PCR核酸产物的分析 国产与进口产品区别:进口产品通量高、检测速度快、检测精度高。 选择进口产品的理由:微生物实验室在分子分型和溯源上对DNA/RNA片段分析有较高精度要求。同时由于分析量大，应急样本及时性要求高，需采用全自动进样系统以减少检验时间，以完成大量样本的分析工作。18.全自动酶免分析系用于献血者标本酶免项目（包括乙肝表面抗原、抗丙肝抗体、抗艾滋抗体、抗梅毒螺旋体抗体）的检测国产与进口产品区别: 1）进口产品即使有当相同模块出现故障时，可以用替代的模块继续进行工作，最大程度保障系统不停机；国产设备的功能模块无法替换，一旦某个功能出现故障会导致整个实验停摆，影响工作效率；2）进口设备孵育系统、试剂耗材成本、洗板、读数分辨率等关键性能指标上具有明显优势。 选择进口产品的理由:目前国内同类产品在技术指标上存在差距，不能满足工作需要。19.大容量冷冻离心机 主要用于制备各类成分血国产与进口产品区别: 国产设备最大容量为6*400ml；设备不具备人机功效，不能自动关门；不平衡容忍度不超过50g。而国外同类产品设备容量大，最大甚至可达16*500ml，极大的提高了成分血制备的效率，避免造成血液浪费；且进口设备具备人机功效，能自动开、关门，可有效降低工作人员，尤其是女性工作人员的劳动强度；进口设备的不平衡耐受度更高，可达125g，可以更有效的保护离心机在不平衡状态下不损害驱动轴；此外，进口设备在腔门开启时压缩机能自动关闭，达到节能降耗。 选择进口产品的理由:目前国内同类产品在技术指标上存在差距，在工作效率、自动化、安全和节能方面较落后，不能满足工作需要。20.釆血秤 用于采集血液时称量、匀浆、终止、报警、记录等国产与进口产品区别: 进口设备具备缓冲防震技术、多重供电保障、采集预设量在小区范围内进行调整和自动标签核对功能等国产设备不具备的功能 选择进口产品的理由:采血称是血液采集的主要精密设备，是血液工作的最前沿，做为血液制备的源头，血液采集质量也直接影响成分血的质量。目前国内产品无法保证在釆血车等移动工作场所长期稳定运行。21.血细胞分离机 将全血进行不同血液成分的分离，以便于根据需要采集其中部分血液成分 国产与进口产品区别:在采集过程中献血者离体血量、抗凝剂管理、献血不良反应、白细胞混入量等方面，进口设备更优于国产设备；进口设备有红细胞预警监测机制，可有效防止红细胞混入现象，更能达到《全血与成分血质量要求（2012版）》。 选择进口产品的理由:进口设备更符合本单位日常机采工作的要求，保证血液质量，确保献血者安全。22.全自动化学发光免疫分析仪 用于血液标本中的传染性指标的抗原、抗体进行定性或定量检测。 国产与进口产品区别:国产设备尚未成熟，进口产品全自动程度和抗原、抗体检测种类及准确度远高度国产设备 选择进口产品的理由:能够提高实验工作效率和准确性。23.细胞计数仪 用于细胞、细菌、藻类、微泡等颗粒的粒度和数目检测，作为生命科学研究的必备仪器，广泛应用于制药、肿瘤研究、细胞生物学、蛋白质组学、疫苗等研究领域。 国产与进口产品区别:进口产品采用的库尔特计数原理在测试过程中不受待测样品颜色、形状、成份和折光率的影响，可准确获得实时的细胞大小、数目、浓度等分布，能更为准确的进行样品数据分析，国产设备目前在功能、性能上无法达到。 选择进口产品的理由:能够提高实验工作效率和准确性。

html, body { -webkit-user-select: text } * { padding: 0 margin: 0 } .web-box { width: 100% text-align: center } .wenshang { margin: 0 auto width: 80% text-align: center padding: 20px 10px 0 10px } .wenshang h2 { display: block color: #900 text-align: center padding-bottom: 10px border-bottom: 1px dashed #ccc font-size: 16px } .site a { text-decoration: none } .content-box { text-align: left margin: 0 auto width: 80% margin-top: 25px text-indent: 2em font-size: 14px line-height: 25px } .biaoge { margin: 0 auto /* width: 643px */ width: 100% margin-top: 25px } .table_content { border-top: 1px solid #e0e0e0 border-left: 1px solid #e0e0e0 font-family: Arial /* width: 643px */ width: 100% margin-top: 10px margin-left: 15px } .table_content tr td { line-height: 29px } .table_content .bg { background-color: #f6f6f6 } .table_content tr td { border-right: 1px solid #e0e0e0 border-bottom: 1px solid #e0e0e0 } .table-left { text-align: left padding-left: 20px } 详细信息 医疗设备采购（KLBH2022-J1-0010）竞争性谈判公告 广西壮族自治区-北海市-银海区 状态：公告 更新时间： 2022-08-11 项目概况：医疗设备采购项目的潜在供应商应在北海市北海大道科技大厦三楼广西科联招标中心有限公司北海分公司购买竞争性谈判文件，并于2022年8月15日15时30分（北京时间）前提交响应文件。 一、项目基本情况 项目编号：KLBH2022-J1-0010 项目名称：医疗设备采购 采购方式：√竞争性谈判 □竞争性磋商 □询价 预算金额：A分标￥710.00 万元；B分标￥848.40万元；C分标￥145.60万元；D分标￥266.70万元；E分标￥25.78万元。 最高限价：A分标￥710.00 万元；B分标￥848.40万元；C分标￥145.60万元；D分标￥266.70万元；E分标￥25.78万元。 采购项目需求： 分标号 标的名称 数量及单位 简要技术需求或者服务要求 A 血液透析设备等一批 一批 血液透析机21台、血液净化滤过机（双泵机）7台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：血液透析设备：1.具备作碳酸氢盐、醋酸盐常规透析功能。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 B 心电监护仪等一批 一批心电监护仪6台、呼吸机1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：心电监护仪：1.要求整机无风扇设计，配置提手。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 C 血细胞分析仪等一批 一批 血细胞分析仪1台、全自动生化分析仪1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：血细胞分析仪：1.检测原理：采用三角度激光散射法对白细胞进行五分类检测，采用乳胶免疫比浊法进行C-反应蛋白（CRP）测定。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 D 纤支镜等一批 一批 纤支镜1台、冰毯机4台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：纤支镜：1.具备呼吸系统疾病诊断功能。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 E 动态血压监测仪等一批 一批 动态血压监测仪2台、空气波压力治疗系统1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：动态血压监测仪：1.具备24小时血压记录系统。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 合同履行期限：自签订合同之日起15天内完成安装、调试并交付使用。 本项目（是/否）接受联合体：否。 二、申请人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无； 3.本项目的特定资格要求：具有国家主管部门颁发的有效的医疗器械生产许可证，或按《医疗器械经营监督管理办法》（国家食品药品监督管理总局第8号令）医疗器械分类管理要求具有有效的第二类医疗器械经营备案凭证及医疗器械经营许可证。 三、获取谈判文件 时间：2022年8月10日至2022年8月12日，每天上午8:00至12:00，下午15:00至18:00（北京时间，法定节假日除外） 地点：北海市北海大道科技大厦三楼广西科联招标中心有限公司北海分公司 方式：现场购买 （1）购买竞争性谈判文件须递交的材料：法定代表人（负责人）身份证复印件（法定代表人（负责人）办理时须提供）或委托代理人身份证复印件及法定代表人（负责人）授权委托书原件（委托代理时须提供）、营业执照副本复印件，以上材料均须加盖单位公章。 （2）如需要邮购，请将以上要求的材料扫描件发送至klbh3832133@126.com，邮件须注明 公司名称+项目名称+报名材料 ，并提供收件人姓名、联系电话、收件地址、开票信息。供应商报名成功后，采购代理机构将竞争性谈判文件的电子版发送至供应商报名时的电子邮箱。 售价：谈判文件工本费每本250.00元，售后不退。如需邮寄竞争性谈判文件纸质版，每本另加邮费50.00元【谈判供应商须于竞争性谈判文件发售截止时间将工本费及邮费汇到广西科联招标中心有限公司指定账户，汇款、转账时请备注项目名称或项目编号信息】。购买竞争性谈判文件的价款及邮费交纳的指定账户： 开户名称：广西科联招标中心有限公司北海分公司 开户银行：中国建设银行股份有限公司北海北部湾东路支行 银行账号：45050165510109188888 四、响应文件提交 截止时间：2022年8月15日15时30分（北京时间） 地点：将响应文件密封提交到广西科联招标中心有限公司北海分公司开标厅（北海市北海大道科技大厦三楼）。谈判供应商的谈判代表参加谈判，法定代表人(负责人)或委托代理人必须持有效证件[法定代表人(负责人)凭身份证或委托代理人凭法定代表人(负责人)授权委托书原件和身份证]依时到达指定地点等候当面谈判。 五、公告期限 自本公告发布之日起3个工作日。 六、其他事项： 1.疫情防控要求：到我公司获取文件及开标的供应商须佩戴口罩、配合进行体温检测、主动出示 健康码 绿码、行程码，广西区内邕外（14日内有本土新冠病例报告所在的县、市、城区）的人员，须提供24小时内核酸检测阴性证明。来自非涉疫区域到我公司开标人员，须提供14日内没有涉疫区旅居史的承诺书，否则须提供48小时内核酸检测阴性证明。 2.本项目不收取谈判保证金。 3.网上查询地址：____（http://____/）、广西科联招标中心有限公司（http://www.gxkl.com/）。 4.本项目需要落实的政府采购政策： （1）促进中小企业发展； （2）促进残疾人就业政策； （3）支持监狱企业发展； 5.单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同供应商，不得参加同一合同项下的政府采购活动。为本项目提供过整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的供应商，不得再参加本项目上述服务以外的其他采购活动。 6.对在 信用中国 网站(https://www.creditchina.gov.cn/) 、中国政府采购网(http://www.ccgp.gov.cn/)被列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为记录名单及其他不符合《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定条件的供应商，不得参与政府采购活动。 七、联系事项： 1.采购人信息 名称：北海市第二人民医院 地址：北海市银海区新世纪大道116号 联系方式：王华坤 0779-2022377 2.采购代理机构信息 名称：广西科联招标中心有限公司 地址：北海市北海大道科技大厦三楼 联系方式：简良； 0779-3832133/3830266 3.项目联系方式 项目联系人：简良； 0779-3832133/3830266 广西科联招标中心有限公司 2022年8月9日 × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 $('.clickModel').click(function () { $('.modelDiv').show() }) $('.closeModel').click(function () { $('.modelDiv').hide() }) 基本信息 关键内容：血球分析仪,细胞计数器 开标时间：2022-08-10 00:00 预算金额：710.00万元 采购单位：北海市第二人民医院 采购联系人：点击查看 采购联系方式：点击查看 招标代理机构：广西科联招标中心有限公司 代理联系人：点击查看 代理联系方式：点击查看 详细信息 医疗设备采购（KLBH2022-J1-0010）竞争性谈判公告 广西壮族自治区-北海市-银海区 状态：公告 更新时间： 2022-08-11 项目概况：医疗设备采购项目的潜在供应商应在北海市北海大道科技大厦三楼广西科联招标中心有限公司北海分公司购买竞争性谈判文件，并于2022年8月15日15时30分（北京时间）前提交响应文件。 一、项目基本情况 项目编号：KLBH2022-J1-0010 项目名称：医疗设备采购 采购方式：√竞争性谈判 □竞争性磋商 □询价 预算金额：A分标￥710.00 万元；B分标￥848.40万元；C分标￥145.60万元；D分标￥266.70万元；E分标￥25.78万元。 最高限价：A分标￥710.00 万元；B分标￥848.40万元；C分标￥145.60万元；D分标￥266.70万元；E分标￥25.78万元。 采购项目需求：分标号 标的名称 数量及单位 简要技术需求或者服务要求 A 血液透析设备等一批 一批 血液透析机21台、血液净化滤过机（双泵机）7台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：血液透析设备：1.具备作碳酸氢盐、醋酸盐常规透析功能。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 B 心电监护仪等一批 一批 心电监护仪6台、呼吸机1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：心电监护仪：1.要求整机无风扇设计，配置提手。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 C 血细胞分析仪等一批 一批 血细胞分析仪1台、全自动生化分析仪1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：血细胞分析仪：1.检测原理：采用三角度激光散射法对白细胞进行五分类检测，采用乳胶免疫比浊法进行C-反应蛋白（CRP）测定。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 D 纤支镜等一批 一批 纤支镜1台、冰毯机4台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：纤支镜：1.具备呼吸系统疾病诊断功能。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 E 动态血压监测仪等一批 一批 动态血压监测仪2台、空气波压力治疗系统1台等一批医疗设备的采购及安装。简要技术需求或者服务要求：动态血压监测仪：1.具备24小时血压记录系统。...如需进一步了解详细内容，详见采购项目需求。 合同履行期限：自签订合同之日起15天内完成安装、调试并交付使用。 本项目（是/否）接受联合体：否。 二、申请人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无； 3.本项目的特定资格要求：具有国家主管部门颁发的有效的医疗器械生产许可证，或按《医疗器械经营监督管理办法》（国家食品药品监督管理总局第8号令）医疗器械分类管理要求具有有效的第二类医疗器械经营备案凭证及医疗器械经营许可证。 三、获取谈判文件 时间：2022年8月10日至2022年8月12日，每天上午8:00至12:00，下午15:00至18:00（北京时间，法定节假日除外） 地点：北海市北海大道科技大厦三楼广西科联招标中心有限公司北海分公司 方式：现场购买 （1）购买竞争性谈判文件须递交的材料：法定代表人（负责人）身份证复印件（法定代表人（负责人）办理时须提供）或委托代理人身份证复印件及法定代表人（负责人）授权委托书原件（委托代理时须提供）、营业执照副本复印件，以上材料均须加盖单位公章。 （2）如需要邮购，请将以上要求的材料扫描件发送至klbh3832133@126.com，邮件须注明 公司名称+项目名称+报名材料 ，并提供收件人姓名、联系电话、收件地址、开票信息。供应商报名成功后，采购代理机构将竞争性谈判文件的电子版发送至供应商报名时的电子邮箱。 售价：谈判文件工本费每本250.00元，售后不退。如需邮寄竞争性谈判文件纸质版，每本另加邮费50.00元【谈判供应商须于竞争性谈判文件发售截止时间将工本费及邮费汇到广西科联招标中心有限公司指定账户，汇款、转账时请备注项目名称或项目编号信息】。购买竞争性谈判文件的价款及邮费交纳的指定账户： 开户名称：广西科联招标中心有限公司北海分公司 开户银行：中国建设银行股份有限公司北海北部湾东路支行 银行账号：45050165510109188888 四、响应文件提交 截止时间：2022年8月15日15时30分（北京时间） 地点：将响应文件密封提交到广西科联招标中心有限公司北海分公司开标厅（北海市北海大道科技大厦三楼）。谈判供应商的谈判代表参加谈判，法定代表人(负责人)或委托代理人必须持有效证件[法定代表人(负责人)凭身份证或委托代理人凭法定代表人(负责人)授权委托书原件和身份证]依时到达指定地点等候当面谈判。 五、公告期限 自本公告发布之日起3个工作日。 六、其他事项： 1.疫情防控要求：到我公司获取文件及开标的供应商须佩戴口罩、配合进行体温检测、主动出示 健康码 绿码、行程码，广西区内邕外（14日内有本土新冠病例报告所在的县、市、城区）的人员，须提供24小时内核酸检测阴性证明。来自非涉疫区域到我公司开标人员，须提供14日内没有涉疫区旅居史的承诺书，否则须提供48小时内核酸检测阴性证明。 2.本项目不收取谈判保证金。 3.网上查询地址：____（http://____/）、广西科联招标中心有限公司（http://www.gxkl.com/）。 4.本项目需要落实的政府采购政策： （1）促进中小企业发展； （2）促进残疾人就业政策； （3）支持监狱企业发展； 5.单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同供应商，不得参加同一合同项下的政府采购活动。为本项目提供过整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的供应商，不得再参加本项目上述服务以外的其他采购活动。 6.对在 信用中国 网站(https://www.creditchina.gov.cn/) 、中国政府采购网(http://www.ccgp.gov.cn/)被列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为记录名单及其他不符合《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定条件的供应商，不得参与政府采购活动。 七、联系事项： 1.采购人信息 名称：北海市第二人民医院 地址：北海市银海区新世纪大道116号 联系方式：王华坤 0779-2022377 2.采购代理机构信息 名称：广西科联招标中心有限公司 地址：北海市北海大道科技大厦三楼 联系方式：简良； 0779-3832133/3830266 3.项目联系方式 项目联系人：简良； 0779-3832133/3830266 广西科联招标中心有限公司 2022年8月9日

p 　　白血病是一种极难治疗的致命癌症，大量的白细胞在血液中四处游荡，随着时间的推移慢慢的杀死我们的身体。但这个“杀人凶手”并不是毫无弱点。许多的白细胞表面都有一个称之为“CD19”的分子。当CD19被激活后，它所附属的白细胞就会被我们杀死。 /p p 　　CD19对于癌症生化学家来说，就像是一个向世界广播的小型无线电信号，不断的说着“这是白血病，快来杀它。”而当白血病患者体内具备了可以接受CD19信号的特异性免疫细胞时，特异性免疫细胞就能追踪并杀死带有CD19的白血病细胞。 /p p 　　斯坦福大学生物工程和生物化学系的助理教授Stanley Qi和他的团队就使用了CRISPR基因编辑技术为免疫细胞配备了一个导航系统来追踪白血病细胞。 /p p 　　目前这项研究以“Engineering cell sensing and responses using a GPCR-coupled CRISPR-Cas system, Nature Communications”为名发表在了《Nature Communications》上。 /p p style=" text-align: center " img title=" 1.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/59d1d5b3-b33a-40ef-8700-26b3d13a885b.jpg" / 　　 /p p 　　 strong 生化通讯中“黑客”GPCR /strong /p p 　　G偶联蛋白受体(GPCR)是人类生理学中最大和最重要的化学受体家族之一，它可以感知各种各样的配体，包括内源激素，生长因子和天然或合成的小分子等。 /p p 　　GPCR就像细胞触角一样，不断寻找生物化学信号，使细胞能够相互沟通，并作为组织一起发挥作用。当触角分子识别特定的信号(例如像CD19这样的分子)时，他们就会启动一系列的细胞与细胞核的通讯，从而引发一系列的遗传结果，从免疫反应到化学生成再到细胞繁殖。目前我们已经在人类基因组中鉴定出了至少800个GPCR。而市场上40%左右的药物都是与GCRP有关。 /p p 　　而先前对于GPCR工程的研究主要是用蛋白水解可切割的人工转录因子(例如GAL4，rtTA)取代胞内结构域，并创建一个受体活性的遗传报道分子，称为Tango系统。但这样的操作往往限制了对内源性靶点的调节，同时一个“一个配体在一个转录因子中”的模式也使得效率非常低。 /p p 　　Qi和他的团队则专注于利用GPCRs作为一个普通的合成装置，这弥补了先前内源性基因无法表达的缺陷，可以响应不同的配体。在本次实验中，研究人员通过CRISPR-dCas9技术利用GPCR来将细胞外信号感测转换为程序化的转录反应。 /p p 　　 strong CRISPR ChaCha /strong /p p 　　实验设计了两个函数：GRCP Tango和GRCP ChaCha。通过对这两个的测试，结果显示 ChaCha优于 Tango，它不仅能有效的激活内源性基因，还能激活多个基因。随后研究人员测试了ChaCha设计的通用性，发现它能感应多个不同的GRCPs，其中包括涉及到的血管加压素，促甲状腺激素释放激素等配体。 /p p style=" text-align: center " img title=" 2.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/2dbefc2e-42e8-416a-a092-6d6aaf150dd4.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong GRCP ChaCha优于Tango /strong /p p style=" text-align: center " img title=" 3.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/990bd6ef-30eb-4055-839d-f56a4efea0aa.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong ChaCha系统支持个体和多种基因的激活 /strong /p p 　　Qi及其团队的早期的临床试验具有不错的前景，并且引导了新的白血病疗法。然而，最具革命性的是使用活细胞作为治疗方法，它开启了一个超越传统化学疗法的世界。在未来，不仅仅是白血病，从血液癌症到实体瘤到神经系统疾病，我们都可以期待CRISPR能为我们带来新的疗法。(转化医学网360zhyx.com) /p p 　　参考文献： /p p 　　1.New kind of homing beacon targets cancerous cells and other diseases /p p 　　2.Nathan H. Kipniss, P. C. Dave P. Dingal, Timothy R. Abbott, et al. Engineering cell sensing and responses using a GPCR-coupled CRISPR-Cas system, Nature Communications, 20 December 2017. /p

细胞因子(cytokine,CK)是y类能在细胞间传递信息、具有免疫调节和效应功能的蛋白质或小分子多肽。在nmol/L或pmol/L水平即显示生物学作用，可广泛调控机体免疫应答和造血功能，并参与炎症损伤等病理过程。 细胞因子研究具有非常广阔的应用前景，它有助于阐明分子水平的免疫调节机理；有助于疾病的预防、诊断和治疗；特别是利用基因工程技术生产的重组细胞因子，已用于治疗肿瘤、感染、炎症、造血功能障碍等，并收到良好疗效。为此，百灵威与世界上z大的细胞因子生产商之y的Peprotech强强联手，引进细胞因子系列产品，包括生长因子、白细胞介素、集落刺激因子等，满足广大生物研究l域客户。 权威产品，SCI引用9833篇 承接分装业务，规格多样化，g内现货充足 提供相应的配套产品，例如抗体、试剂盒等 拥有无动物成分的重组蛋白、临床j别的蛋白等特色产品 ■ 生长因子 产品名称 产品编号 产品名称 产品编号 Animal Free Human EGF AF-100-15 Human HGF 100-39 Murine EGF 315-09 Human TGF-α 100-16A Human FGF-acidic 100-17A Human TGF β1 100-21 Murine FGF-acidic 450-33A Human TGF β1 100-21C Human FGF-basic 100-18B Human VEGF 165 100-20 Murine FGF-basic 450-33 Murine VEGF165 450-32 ■ 白细胞介素 产品名称 产品编号 产品名称 产品编号 Human IL-1α 200-01A Human IL-4 200-04 Murine IL-1α 211-11A Human IL-6 200-06 Human IL-1β 200-01B Murine IL-6 216-16 Murine IL-1β 211-11B Human IL-12 200-12 Human IL-2 200-02 Murine IL-12 210-12 Murine IL-2 212-12 ■ 集落刺激因子 产品名称 产品编号 产品名称 产品编号 Human G-CSF 300-23 Human M-CSF 300-25 Murine G-CSF 250-05 Murine M-CSF 315-02 Human GM-CSF 300-03 Human SCF 300-07 Murine GM-CSF 315-03 Murine SCF 250-03 ■ 其它细胞因子 产品名称 产品编号 产品名称 产品编号 Human IFN-γ 300-02 Human TNF-α 300-01A Murine IFN-γ 315-05 Murine TNF-α 315-01A Human sRANKL 310-01 更多产品欢迎致电400-666-7788垂询！

p style=" text-indent: 2em " 在过去的一年中，循环肿瘤细胞(CTC)捕获和检测市场飞速增长，多个公司将此类技术推向临床并应用于癌症的诊断，与此同时，一大批新兴公司凭借其独有技术从科研机构中脱颖而出，开启了循环肿瘤细胞捕获和检测的商业化之路。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201901/uepic/80851a5e-ad37-4e21-86db-fe75c5d75d14.jpg" title=" 细胞.jpeg" alt=" 细胞.jpeg" width=" 419" height=" 279" style=" width: 419px height: 279px " / /p p 　　传统上，临床医生采用组织活检进行癌症诊断。但这种方法对患者具有侵入性，不仅耗时且价格高昂。在过去的十年中，液态活检技术的发展为这些问题带来了突破性的解决方案，并有望为不同患者的疾病提供了更加精准的个体化信息。 /p p 　　加拿大多伦多大学生物化学教授Shana Kelley一直致力于CTC捕获和检测技术的研究，她认为，“ strong 液体活检将有望带来一次彻底的模式转变，因为患者可以在接受治疗的同时以一种非侵入式的方式进行持续监测 /strong 。这样可以监测肿瘤的动态特征，帮助医生们制定更多治疗方案，而组织活检由于技术的风险和侵入性无法做到这些。”她还表示：“ strong 我们发现越来越多的技术能够在单细胞水平分析CTCs的基因型和表型特征 /strong 。考虑到这些细胞的异质性以及追踪患者样本中目标亚群微量水平的重要性，这一点极其重要。” /p p 　　一般而言，研究人员可以通过CTC的生物或物理特征(如基因表达、大小、密度、变形性或电荷)进行正向富集或负向富集，然后利用免疫、分子或功能性实验对这些细胞进行检测。虽然CTC富集和捕获技术前景广阔，但与利用ctDNA的液体活检技术相比，研究人员却遇到了挑战。 /p p 　　2017年发表在Cancer Discovery期刊的一项研究中，来自德国汉堡大学医学中心的Klaus Pantel及其研究团队对CTCs在液体活检领域的临床应用进行了研究，并指出了 strong CTCs应用的局限性 /strong ： strong 建立癌细胞系或异种移植需要成百上千个CTCs，这使该方法适用于极少数疾病的晚期患者身上 /strong 。作者还指出，对基于CTC生物学发现的新技术研发的关注，常常会延缓CTC检测进入临床诊断的进程。但研究人员也表示，有关CTC生物学的新研究已经开始衍生出“集CTCs富集、检测和定性于一体”的平台。 /p p 　　美国医疗和生命科学咨询公司Health Advances副总裁Kristen Amanti认为，CTCs临床应用的问题和障碍主要取决于如何使用这些细胞。“ strong 如果公司试图利用CTCs来进行癌症筛查，而不是监测已经被诊断出患有某种特定癌症患者的治疗，那么公司将面临更大的困难 /strong 。”Kristen Amanti说到，“如果没有针对特定类型癌症的筛查机制，那么在证明临床证据有效方面会很困难。如果你提前了解已有一个筛查机制，那你可能还要去证明你比这种筛查更好，或者能够提供某种经济优势。” /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(192, 0, 0) " 商业化进程加速 /span /strong /p p style=" text-indent: 2em " 虽然在临床开展上面临着不少障碍，但是CTC富集和检测的商业前景仍然十分强劲。2018年，多家公司都在CTC捕获和检测技术的临床转化方面取得了重大进步。 br/ /p p 　　美国Epic Sciences公司的CTC技术在2018年取得了一系列积极进展。2018年6月，Epic Sciences公司及合作伙伴发布了一项多机构队列研究，验证了基于CTC的AR-V7检测方法的有效性。根据该公司的信息， strong 这项研究是首个证实液体活检能够预测治疗效果并显示对患者具有生存受益的研究之一 /strong 。此外，Epic Sciences在2018年初时曾获得5200万美元E轮融资，目前该公司正在将其技术用于研究血液中肿瘤细胞和人类免疫细胞的综合分析，进而用于免疫治疗药物的研发和伴随诊断中。2018年11月，该公司还与加拿大四家乳腺癌治疗中心合作进行了一项临床试验，以检测其技术是否能预测转移性乳腺癌患者的复发风险。 /p p 　　与此同时，美国液体活检公司Celsee Diagnostics在CTC富集工具商业化方面取得了进展。在与单细胞诊断公司IncellDx达成一项可行性研究合作后，Celsee Diagnostics在2018年1月份签订了一系列产品的 strong 联合商业化协议，包括基于CTC的乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌和其他癌种的筛查产品 /strong 。 /p p 　　2018年5月，CellMax Life公司启动了一项美国临床试验，用于验证其基于CTC的结直肠癌筛查产品。该公司CMx平台目前只在亚洲销售，采用于一种“混合微流体芯片”，能够从10亿个正常细胞背景中分离出1~10个CTCs。CellMax Life还在2018年4月份与IncellDx达成合作，共同开发和和销售几种实体瘤的CTC检测产品，用于个性化治疗方案选择和监测。近日，CellMax Life还宣布，作为公司细胞疗法临床试验的一部分，公司已经与台湾Medigen Biotech公司达成合作。Medigen将结合Cellmax Life的CMx平台及其液体活检panel，用于患者的的治疗决策及疗效监测。 /p p 　　另一家计划进军CTC液体活检领域的公司是Precision for Medicine。2018年9月，Precision for Medicine收购了ApoCell公司及其ApoStream CTC富集技术。 strong 该技术可利用介电电荷差分离肿瘤细胞和正常细胞 /strong 。根据Precision for Medicine公司高级副总裁Darren Davis的说法，公司收购ApoCell主要在于其开发的一款基于免疫组织化学和免疫荧光成像的新型液体活检技术。 /p p 　　Vortex Biosciences也在推广基于CTC的VTX-1液体活检平台方面取得了进展。该公司在2018年3月份与BioView合作开发一种整合流程，以识别CTCs的临床生物标志物。2017年11月份，该公司和Stratec Consumables签订了一项供货协议，计划开发一款适用于Vortex平台的微流体芯片。该芯片最初由加州大学洛杉矶分校(UCLA)开发，新版芯片将帮助该平台适用于商业生产规模。此外，在2018年早些时候，Menarini Silicon Biosystems公司宣布已经将最近收购的技术整合到一款细胞型液体活检流程中，其中包含CellSearch CTC纯化工具。该公司表示，CellSearch strong 利用细胞外抗原表位和免疫磁珠，以一种自动化方法从血液样本中提取肿瘤细胞 /strong 。 /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(192, 0, 0) " 初创公司潜力巨大 /span /strong /p p style=" text-indent: 2em " 位于美国密歇根州的初创公司Akadeum计划通过公司的微气泡平台进入液体活检市场。公司称微气泡平台可以识别和分离CTCs和其他分子分离。目前Akadeum的这款工具只限于研究使用，与微流控芯片不同的是，该平台使用的是低密度的玻璃板和空气泡，气泡表面带有特定抗体，能够与靶细胞结合，然后“浮到表面”。Akadeum公司CEO Brandon McNaughton表示，该公司计划在未来两到三年内在全美国推广产品甚至销往国外。 br/ /p p 　　来自威斯康星大学的 Capio BioSciences公司也开发了一种类似的技术，名为CapioCyte。该技术整合了细胞滚动和多价结合功能。Capio BioSciences创始人Seungpyo Hong解释道，CapioCyte与其他CTC捕获技术不同之处在于，该技术结合了仿生学和纳米技术。癌症筛查和早期诊断是一个极大的市场，但Hong指出，每个患者的CTCs所呈现的高度变异数量和表型表明，CTCs的预后价值将在未来得到进一步探索。 /p p 　　除此之外，美国堪萨斯大学还在2018年5月公布了一项关于 strong 微流体平台的研究 /strong ， strong 该平台可以对包括多发性骨髓瘤在内的克隆性浆细胞疾病患者的循环浆细胞进行检测 /strong 。在堪萨斯大学大学化学与机械工程专业教授Stephen Soper主导下，研究团队在2016年创建了Biofuidica公司，进一步开发一款使用正弦微流控技术的诊断工具。 /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(192, 0, 0) " 学术成果不断涌现 /span /strong /p p style=" text-indent: 2em " 商业进程之外，关于CTC的学术成果在去年同样不断涌现。例如，来自加拿大英属哥伦比亚大学的研究人员便开发了一款 strong CTC富集系统 /strong 。研究团队认为，通过结合生物物理富集和激光捕获显微切割(LCM)，该系统在一定程度上克服目前液体活检技的局限性。在本研究中，课题组通过溶解红细胞从前列腺癌血样中富集CTCs，使用一种特殊的微流体细胞分类方法分离白细胞和CTCs。为了提取单个CTC用于激光捕获显微切割，研究小组通过免固定染色选择肿瘤细胞，将细胞样本嵌入水凝胶基质中，使细胞固定。随后，研究小组然后使用一款短距离散焦UV激光提取包埋的细胞。 br/ /p p 　　此外，在去年4月份，来自加拿大多伦多大学的一个研究小组发布了一项关于 strong mRNA细胞计数法的检测方法 /strong ，将CTC分离和基因表达分析结合起来。研究人员使用两种磁性颗粒，选择性杂交肿瘤细胞中mRNA的不同区域，帮助分离细胞并评估每个细胞中RNA的含量。研究小组利用免疫荧光法以及mRNA方法或EpCAM捕获法检测到CTCs。研究人员发现mRNA细胞计数方法能够同时提供CTC数量和临床相关mRNA的缺失或存在的准确情况。但研究小组表示，他们还将需要在CTCs含量较少的早期癌症患者中测试这种方法。 /p p style=" text-align: center " strong span style=" color: rgb(192, 0, 0) " 结语 /span /strong /p p style=" text-indent: 2em " 肿瘤液态活检的概念起源于CTC，相比ctDNA，发现较早却浮沉多年的CTC在几番打磨后逐渐发挥出自己的优势。借着二代测序技术的东风，ctDNA后来者居上占尽风头，但是CTC也完全没有落后。CTC分离和鉴定技术的发展使得相关研究再次成为肿瘤领域的焦点。如今，越来越多新的检测产品正在被使用，未来可能还会出现更多。随着更多数据的积累与临床证据的支持，液体活检的使用或将变得更加常规化。 br/ /p

文章来源：中华检验医学杂志, 2023,46(08)：792-801.作者：国家医学检验临床医学研究中心（中国医科大学附属第一医院） 中华医学会检验医学分会 国家卫生健康委临床检验中心 中华检验医学杂志编委会摘要流式细胞术在临床血液及免疫相关疾病的精准诊治中具有重要作用。随着流式细胞仪普及程度的不断提高，临床实验室开展流式细胞术检测，服务临床诊疗的能力和水平也逐渐提升。为适应流式细胞术临床应用的进展和需求，加强质量控制，结合近年来国内外相关领域研究进展，对2013年发表的《流式细胞术的临床应用共识》进行更新，制定此共识。随着医学的进步及疾病精准化诊治需求的增加，我国临床实验室流式细胞仪的普及水平得到提高，开展流式细胞术检测服务临床诊疗的能力和水平亦不断提升。为适应流式细胞术临床应用的进展和临床检验需求的更新，我们延续2013年《流式细胞术临床应用的建议》［ 1 ］的编写初衷，并在此前版本的基础上，经专家组讨论，适时对相应内容进行修订和扩增。本共识由国家医学检验临床医学研究中心、中华医学会检验医学分会、国家卫生健康委临床检验中心及中华检验医学杂志编委会组织专家进行讨论撰写并发布。一、流式细胞仪及器材的准备（一）流式细胞仪的选择2017年12月，我国颁布《流式细胞仪》国家行业标准［ 2 ］，规定了流式细胞仪的产品分类、技术要求、试验方法及使用方法等。在临床检验工作中，应选择有临床注册证的流式细胞仪，满足检测灵敏度和收集速率等的要求；根据检测项目所需参数，确定适宜激光器和检测器，使其检测参数与临床使用的荧光抗体匹配；考虑操作的简便性和兼容性，以及未来可升级满足新检测需求的空间；兼顾临床实验室场地、仪器维护、人员培训、试剂和耗材供应稳定性、售后服务等因素。（二）流式细胞仪的设置1.仪器质控：流式细胞仪的仪器性能与检测结果准确与否密切相关。为保证仪器运转正常，每日开机流程后应运行仪器的质控微球等，保证仪器处于最佳性能状态，变异系数小于仪器软件中的可接受范围。如有可接受范围外的偏离，应及时进行校准和维修。2.仪器维护：（1）环境温湿度可影响激光器、光纤和棱镜等光学元件，使用时可参考仪器说明书推荐的温湿度，推荐室温18~25 ℃；（2）灰尘可损伤激光器和光学元件，降低检测的灵敏度，日常工作中注意仪器的整洁，清洁频率依据环境而定；（3）使用1%的次氯酸或75%医用乙醇每日清洁进样针，宜定期（或按需）清洁流动室，避免黏性大和聚集成团的细胞堵塞进样针；（4）过滤器影响荧光信号的稳定性和压缩空气的供应，在需要时排除气泡并定期更换；（5）鞘液桶、废液桶需维持密闭性，定期清洁和更换；（6）电脑数据定期备份，存储数据不超过硬盘的一定容量，避免损坏和拖慢系统性能；（7）定期对仪器性能进行全面评估、校准和保养，并应出具书面报告。3.补偿设置：传统的多色流式细胞仪存在荧光溢漏，合适的补偿是获得可靠数据的关键［ 3 , 4 , 5 ］。（1）补偿对照可以使用新鲜血细胞制品（更贴近待检测细胞）和商品化的荧光微球（操作简便）。使用荧光微球建立的补偿，宜用待检细胞进行优化；（2）如流式细胞仪具备“自动补偿”功能，可采用自动补偿进行条件设置并进一步手动优化；（3）同一通道检测的相似荧光，建立补偿时不能互相替代，如PE-Cy5、PerCP、PerCP-Cy5.5等，应分别建立补偿；（4）补偿设置的染色处理过程宜与待测项目一致，细胞膜染色和经过固定、破膜的胞浆（或胞核）染色会有不同，建议分别设置补偿；（5）补偿矩阵并非永久适用，当建立新的实验或仪器性能出现允许范围外的变化，应重新建立补偿。（三）移液器、离心机、标本前处理系统等的维护及定期校准上述仪器除日常清洁维护，应按照实验室认可标准（例如ISO15189）的相关要求，定期对不同量程的移液器、离心机和标本前处理系统的性能进行全面评估和校准，并出具书面报告。共识1 临床检测选用的流式细胞仪应有国家有关机构核发的注册证。建议根据临床实验室及流式细胞术检测项目的特点，选择技术性能符合使用要求的流式细胞仪，宜同时考虑相关技术培训及售后服务等。流式细胞仪的使用应注意每次检测过程中的仪器质量控制，应按要求进行维护保养和校准评估。流式细胞术检测相关的器材也应注意日常清洁维护和定期校准评估。推荐强度：强烈建议。二、流式细胞术检测试剂（一）荧光抗体的选择和搭配流式细胞术使用的抗体应符合国家相关标准［ 6 ］。在搭配多色抗体组合时需要考虑［ 5 ］：（1）流式细胞仪的检测通道特性：根据流式细胞仪的配置，选择可使用的荧光抗体；（2）荧光染料本身的强弱、荧光标记物的稳定性、荧光素分子大小、荧光抗体克隆号等，例如同一荧光标记物，不同克隆号抗体对某些抗原的检测效果也会出现差异［ 7 , 8 ］；（3）待测抗原表达强弱：弱表达抗原选择强荧光标记，强表达抗原可选择弱荧光标记；（4）尽量避免光谱重叠多的荧光染料搭配如PE-Cy5和APC等，对细胞共表达的抗原进行染色时，尽量避免选用串色和荧光溢漏大的通道［ 5 ］。（二）抗体的滴定设置通过抗体滴定计算染色指数（stain index，SI），判断荧光染色后阴性群和阳性群的分离效果，是确定最佳抗体使用浓度的重要方法。SI计算公式为：［中位荧光强度（median fluorescent intensity，MdFI）阳性群-MdFI阴性群］/（2× rSD阴性群）［ 5 ］。SI受荧光强度、抗原表达强度、抗体结合力及流式细胞仪设置等影响［ 5 ］。在更换抗体或抗体批号之前，宜进行抗体滴定以确定最佳浓度，避免因抗体浓度不合适，导致弱表达抗原检测不到或强抗原超出检测限。（三）对照的设置和选择选择适宜的对照是流式细胞术检测中正确获取和分析数据的基础［ 5 ］。“荧光减一”（fully stained minus one fluorochrome或fluorescence minus one，FMO）对照是目前确定阴性和阳性细胞群cutoff值的最佳对照，对于弱阳性或阳性细胞比较少的情况尤为适用，可排除交叉干扰等；同型对照可评估Fc受体或蛋白的交叉反应，排除非特异性染色。生物品对照如血液制品质控，可根据制品的cutoff值来确定检测样品的阴阳性。（四）其他试剂红细胞裂解是流式细胞术检测血液白细胞或骨髓有核细胞时不可或缺的过程［ 9 , 10 ］，宜选择相应品牌的裂解液或自行配制。由于裂解液可对粒细胞和单核细胞等造成不同的影响，也会影响染色的效果［ 9 , 10 ］，建议根据检测目的不同进行比对，择优选用。细胞的稀释、洗涤和重悬需使用缓冲液或稀释液［ 11 , 12 , 13 ］，宜依据反应的最适pH值（如中性）、副作用（如磷酸盐缓冲液会导致一些激酶反应的抑制）、可能的络合作用、对光谱的吸收以及成本等进行选择［ 13 ］。日常工作中可选用商品化的缓冲液或PBS，依据检测目的确定是否添加胎牛血清/牛血清白蛋白，以及是否加入叠氮化钠用于保存。此外，细胞培养基和医用生理盐水等也可用作稀释液和缓冲液。不同于细胞表面（细胞膜）的染色，对细胞内（细胞浆或细胞核）的分子进行染色，需要经过“固定”（如甲醛等），保持目标抗原的位点和结构，再通过“破膜”（如Triton-X）使抗体进入细胞。不同品牌破膜剂对细胞内染色有不同程度的影响，建议根据检测效果进行比对，择优选用［ 14 ］。共识2 流式细胞术检测中，建议合理选择和搭配所需荧光抗体，通过滴定确定抗体使用的最佳浓度，并合理选择和设置对照；染色过程中，选择适宜的红细胞裂解液、缓冲液以及固定破膜剂。推荐强度：强烈建议。 三、标本的采集、存储、运输及制备（一）外周血标本（1）患者准备：流式细胞术检测同其他项目外周血采集无异，因脂血等会对检测结果造成影响，采血前尽量清淡饮食；（2）抗凝剂选择：同时进行白细胞分类和流式细胞术检测时，建议使用乙二胺四乙酸盐（EDTA）抗凝真空管进行标本采集，室温保存，尽快送检［ 15 ］。如进行T细胞功能的检测如IFN-γ分泌时，因EDTA可螯合钙离子，影响T细胞激活效果，建议采用肝素钠等抗凝。（二）其他标本骨髓标本、造血干细胞采集物的抗凝剂选择可以参照外周血。脑脊液标本一般不需要抗凝剂，渗出液性质的浆膜腔积液常有凝块，建议抗凝处理。因体液标本久置会导致细胞破裂，影响细胞计数、分类等检测结果，所以需要尽快送检。一般要求在采集后立即送检［ 16 ］，如使用特殊保存剂，可以适当延长送检时间［ 17 ］。样品应离心浓缩调整细胞浓度后进行染色。对于淋巴结等组织标本，一般不需要抗凝剂，活检取材后应尽快送检。标本可经过物理研磨法和酶消化法获得单细胞悬液，调整细胞浓度后进行细胞染色。体外培养的细胞（如胞内细胞因子染色时，需刺激后加入蛋白转运抑制剂），根据细胞储存状态（冻存与否）、细胞特性（贴壁或悬浮），进行复苏或消化、洗涤，调整细胞浓度后染色。（三）标本制备流式细胞术标本的制备，需考虑新鲜度和检测项目的要求。（1）细胞浓度：一般不建议超过1×106 cells/ml（参照试剂说明书）；（2）全血体积：一般建议50~400 μl［ 18 ］；（3）活细胞染料：常规新鲜外周血可以不使用活细胞染料，但造血干细胞计数、白血病微小残留病（minimal residual disease，MRD）筛选与监测等，建议添加活细胞染料如7-AAD等，以去除死细胞的干扰；（4）细胞染色、固定与破膜：需考虑细胞膜染色、细胞浆染色和细胞核染色的区别，选择相应适宜的固定破膜剂；（5）染色温度：一般室温染色即可［ 18 ］，但造血干细胞染色、使用某些固定破膜剂时，要求在融冰或4 ℃完成；一些特殊项目（如中性粒细胞吞噬二氢罗丹明辅助诊断慢性肉芽肿）需经过37 ℃孵育；（6）染色时间：受荧光抗体和染色体积影响，一般建议10~30 min［ 18 ］。根据目的抗原的位置分布不同（细胞膜、细胞浆和细胞核），染色时间不同，可依据说明书及检测需求，探索最优染色时间。另外，如染色体积在200 μl以上，可适当延长抗体孵育时间［ 18 ］。共识3 建议根据检测标本的种类及实验需求的差异，选择适宜的抗凝剂，采样后应尽快送检；样品制备时确保细胞浓度在合理的范围内，根据检测项目的特性，选择最优的染色方法和染色条件。推荐强度：建议执行。四、流式细胞术的临床应用（一）淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析是目前流式细胞术临床应用范围最广泛的项目，可获得淋巴细胞亚群，包括CD3+总T细胞、CD3+CD4+辅助T细胞（Th）、CD3+CD8+细胞毒性T细胞（Tc）、CD3-CD19+B淋巴细胞和CD3-（CD16+CD56）+NK细胞的相对百分比（%）和细胞绝对值（cells/μl），在临床诊治中发挥了重要作用。国家卫生健康委员会发布的《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》［ 19 ］（该行标处于修订过程中），以及《流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用共识（2019版）》［ 20 ］和《TBNK淋巴细胞检测在健康管理中的应用专家共识》［ 21 ］等，对此项目的开展及应用具有重要的指导意义。（二）免疫细胞精细分型1.淋巴细胞：（1）T细胞：对T细胞的精细分型，根据细胞表面标记区分T细胞，如调节性T细胞（Treg）、滤泡辅助性T细胞（Tfh）、Th1、Th2、Th9、Th17和Th22［ 22 ］，初始（naive）、效应（effector）、效应记忆型（effector memory）和中央记忆型（central memory）亚群、活化细胞亚群等［ 22 , 23 , 24 , 25 ］。（2）B细胞：根据CD27、IgD、CD24、CD38、CD5等表达，可以将B细胞分为不同亚群［ 23 ， 26 , 27 , 28 , 29 ］。（3）NK细胞：根据CD16和CD56表达的不同，可以将NK细胞细分为不同亚群 ［ 23 ， 30 , 31 ］。目前精细分型的方案并未统一， 表1 汇总了文献报道的常见淋巴细胞精细分型方案，可供参考。2.髓系细胞：（1）粒细胞：根据CD45和SSC，CD13和CD16以及CD66、CD123、CD203c、HLA-DR等的表达不同，可以将粒细胞分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞［ 23 ， 30 ］。（2）单核细胞：根据CD45和SSC，CD13、CD14和CD16的表达不同，可以将单核细胞分为不同亚群［ 23 ， 30 ］。（3）树突状细胞（dendritic cell，DC）：使用系列抗原（lineage：CD3、CD14、CD16、CD19和CD56）排除T细胞、B细胞、NK细胞、单核、粒细胞等，再根据CD123、HLA-DR、CD11c、CD1c、CD141等的不同表达，可以将DC细胞分为不同亚群 ［ 23 ， 30 ， 32 ］。（4）髓源抑制细胞（myeloid-derived suppressor cell，MDSC）：根据CD14、CD15、CD11b、HLA-DR、CD33等指标的表达，可以将MDSC分为3个不同亚群 ［ 33 , 34 ］。 表1 汇总了文献报道的常见髓系细胞精细分型方案，可供参考。（三）白血病免疫表型分析及微小残留病监测1.白血病免疫表型分析：（1）急性白血病：对于急性白血病免疫分型，2013版《流式细胞术临床应用的建议》［ 1 ］及《四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（2015年版）》［ 35 ］均有详细介绍。在上述《建议》和《共识》中，对白血病免疫表型分析均主要推荐采取“2步法”，但对于某些跨系别表达的抗原或是混合表型的白血病，可能会因为检测抗原不足导致漏检的现象。国家卫生健康委发布的《儿童急性淋巴细胞白血病诊疗规范（2018年版）》［ 36 ］和《儿童急性早幼粒细胞白血病诊疗规范（2018年版）》［ 37 ］，对于急性白血病免疫分型，建议使用多色流式细胞仪，至少检测上述《诊疗规范》提及的35个CD分子，视情况增加更多抗原检测，同时检测的CD分子越多，准确性相对越高。（2）慢性淋巴细胞白血病（Chronic lymphocytic leukemia，CLL）/非霍奇金淋巴瘤：流式细胞术检测的抗原可以参考《流式细胞术在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用专家共识（2017版）》［ 38 ］。但是对于B淋巴细胞，由于慢淋/非霍奇金淋巴瘤的细胞可能来源于淋巴结的多个结构部位［如DLBCL分为生发中心型GCB型、非生发中心non-GCB型和活化B细胞样（ABC）型］，需注意其免疫表型的多样性［ 39 ］；对于T细胞，如出现异常免疫表型或TCRVβ的单克隆，需要与病毒感染等鉴别。（3）霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma，HL）：对于HL，因背景含有大量表型相对正常的淋巴细胞，寻找低比例的Reed-Sternberg细胞存在一定困难。Reed-Sternberg细胞在免疫表型上可以表现为CD45-CD30+CD15+CD71+CD40+CD95+CD3-CD19-等免疫学特征，需要与其他一些表达CD30+的肿瘤细胞进行鉴别［ 40 ］，多色流式细胞术在HL中具有一定的辅助诊断价值，HL最终诊断需要结合组织病理学。2.白血病微小残留病（MRD）监测：（1）急性白血病MRD监测：基于白血病相关免疫表型（leukemia-associated immunophenotype，LAIP，根据非白血病细胞的表达背景来定义）和/或细胞“异于正常（different from normal，DFN）”的表型，可以鉴定出异常的细胞群，进行MRD细胞监测［ 41 ］。急性白血病MRD监测可以参考已发表的中国专家共识［ 42 , 43 ］。（2）慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤MRD监测：典型的CLL免疫表型为CD19+CD5+CD23+CD22+CD200+CD43+CD79blow/-且CD10-FMC7-CD103-CD20lowsIgMlow［ 44 ］，可用于CLL诊断和MRD监测。上述表型可以通过固定的MRD组合进行监测，推荐方案包括CD5/CD19/CD20/CD38/CD81/CD22/CD79b/CD43等［ 44 , 45 ］，需注意美罗华（Rituximab，利妥昔单抗）治疗会使CD20出现假阴性，鉴于CD200在CLL和其他CD5+淋巴瘤如套细胞淋巴瘤中的作用，也可推荐CD200［ 46 ］和CD160［ 47 ］作为CLL的MRD监测指标。对于免疫表型不典型的淋巴瘤等进行MRD监测，需结合其初发时的免疫表型特征。淋巴瘤的分布具有异质性（如可能涉及外周血、骨髓、淋巴结、肝脏、脾脏等），当采样不同时，MRD监测结果可能也不一致。目前，骨髓是使用最广泛的MRD监测标本，但脾脏、肝脏和淋巴结中的MRD监测亦可在疾病复发中起重要作用［ 45 ］。（3）多发性骨髓瘤MRD监测：可参考已经发表的相关共识进行检测［ 42 ］。MRD监测需要获取足够的细胞数，确定检测的最低检出限（limit of detection，LOD）和最低定量限（lower limit of quantification，LLOQ），推荐固定和规律的取样时间进行MRD监测 ［ 45 ］。（四）细胞因子检测通过流式细胞术检测细胞因子，主要包括2类方法：（1）基于流式微球阵列技术（Cytometric beads array，CBA），可检测血清、血浆或体液等标本中细胞因子水平。其原理为样品中细胞因子与细胞因子抗体预包被的微球及荧光标记检测抗体结合，形成“双抗体夹心”复合物。此方法使用标本量少，2个荧光检测通道可以同时检测多种细胞因子。（2）可检测激活后胞内细胞因子如IFN-γ等表达，用于评估免疫细胞的功能等。此方法需要新鲜肝素抗凝外周血或分离获得的外周血单个核细胞，使用刺激剂激活细胞，并用阻断剂阻断胞内蛋白质转运，使得刺激产生的细胞因子聚集在细胞内。细胞膜抗原染色后，再使用固定破膜剂固定及破膜对胞内细胞因子如IFN-γ等进行染色。共识6 流式细胞术检测的质量控制应贯穿始终，包括检验前的标本、试剂和仪器，检验中的染色、数据获取和数据分析，检验后的报告发放和结果解释，重视人员质控。推荐强度：强烈建议。