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细菌培养器

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细菌培养器相关的论坛

  • 细菌在培养基上生长特性

    1．固体培养基标本或液体培养物划线接种到固体培养基表面后，单个细菌经分裂繁殖可形成一个肉眼可见的细菌集团，称为菌落（colony）。(1)菌落的形态特征：大小、形状（露滴状、圆形、菜花样、不规则等）、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白色、黑色、绿色、无色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。据细菌菌落表面特征不同，可将菌落分为3型： ①光滑型菌落（S型菌落）：菌落表面光滑、湿润、边缘整齐，新分离的细菌大多呈光滑型菌落。②粗糙型菌落（R型菌落）：菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹或颗粒状，边缘大多不整齐。R型菌落多为S型细菌变异失去菌体表面多糖或蛋白质形成。R型细菌抗原不完整，毒力和抗吞噬能力都比S型细菌弱。但也有少数细菌新分离的毒力株就是R型，如炭疽孢杆菌、结核分枝菌等。③粘液型菌落（M型菌落）：菌落粘稠、有光泽、似水珠样。多见于厚荚膜或丰富粘液层的细菌、结核杆菌等。(2)菌落溶血特征：菌落溶血有下列3种情况。①α溶血：又称草绿色溶血，菌落周围培养基出现1~2mm的草绿色环，为高铁血红蛋白所致；②β溶血：又称完全溶血，菌落周围形成一个完全清晰透明的溶血环，是细菌产生的溶血素使红细胞完全溶解所致；③γ溶血：即不溶血，菌落周围的培养基没有变化，红细胞没有溶解或缺损。(3)色素：有些细菌产生水溶性色素，使菌落和周围的培养基出现绿色、金黄色、白色、橙色、柠檬色等颜色，产生的色素有水溶性或脂溶性。(4)气味：某些细菌在培养基中生长繁殖后可产生特殊气味，如铜绿假单胞菌（生姜气味）、变形杆菌（巧克力烧焦的臭味）、厌氧梭菌（腐败的恶臭味）、白色假丝酵母菌（酵母味）和放线菌（泥土味）等。

  • 【资料】微生物检测实验室无菌室可以放培养箱培养细菌及镜检吗

    我们是引用水分析实验室，在实验室的建设规划图上，看到在微生物区域的无菌操作室，也就是放超净工作台的房间，设置了镜检及细菌，大肠菌的培养箱。第一次看到感觉很吃惊，一般说来，培养箱都是放在外面的，我个人认为既然是无菌室，还在里边培养细菌，进行镜检，那还能是无菌室吗？简单的紫外照射可以去除空气中因培养镜检所带入的污染源吗？不知道这种安排出于什么理论，请大家赐教。

  • 细菌柠檬酸利用试验用的培养基

    枸橼酸盐培养基( 1 )成分 氯化钠 5g 枸橼酸钠（无水） 2g 硫酸镁 0.2g 1.0 ％溴麝香草酚蓝指示液 10ml 磷酸氢二钾 1g 琼脂 14g 磷酸二氢铵 1g 水 l000ml ( 2 )制法 除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为6.9 士0.1 ，加入琼脂，加热溶胀，然后加入指示液，混匀，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成斜面．（3 ）用途 用于鉴别细菌能否利用枸橼酸盐作为碳源和氮源而生长繁殖。 方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，一般培养48 ～ 72 小时，凡能在培养基斜面生长出菌落，培养基即由绿色变成蓝色者为阳性反应；无菌落生长，培养基仍绿色者为阴性反应，阴性反应者应继续培养观察至7 天。

  • 【求助】谁知道水中硝化细菌的培养基和检测方法

    请问各位,有做过水中的硝化细菌的培养和检测的么?如何确定水中有硝化细菌的存在,如何确定其数量,如何辨别其菌种?有没有相关资料和标准提供一下,谢谢~如果能快速测定和检出的更好,有仪器可以做的推荐一下也可以....

  • 【原创大赛】细菌生化鉴定试验你了解几何？——三糖铁培养基的灵活应用

    细菌生化鉴定试验你了解几何？——三糖铁培养基的灵活应用摘要：糖类是细菌合成菌体成分必需的原料，各类细菌对各种糖类的分解能力也有差异，葡萄糖、乳糖、蔗糖是三糖铁培养基的三种糖，通过细菌对这三种糖的利用和分解产物做生化鉴定已经很有历史了。笔者通过对三糖铁培养基的应用，总结了三糖铁培养基在细菌鉴定中的灵活应用。总结：三糖铁培养基在肠道菌的鉴定中起到很重要的作用，只要灵活准确应用，将会在细菌的生化鉴定试验的第一步中起到关键性的作用。

  • 【讨论】“水中的细菌学测定”中的“阳性和阴性对照培养检查试验”是怎么检查的？

    《水和废水监测分析方法》四版中的“水中的细菌学测定”有提到要对培养基进行“阳性和阴性对照培养检查试验”，举个例子（摘自：表 5-2-4）： 对照培养细菌类别 阳性 阴性粪大肠菌类 大肠埃希氏菌 产气肠杆菌是不是说要在培养基中分别加入大肠埃希氏菌和产气肠杆菌，看它们是否分别呈现阳性和阴性反应，如果阳性和阴性反应都符合要求的话培养基就合格？大家讨论一下，谢谢！

  • 纺织品进行抗菌试验时细菌接种培养全过程及注意事项

    一、灭菌1、 洗净两个250mL锥形瓶。（注：1提前准备好，以节约时间；2可开启培养箱37℃）2、 用滤纸称量1g蛋白胨、0.5gNaCl（也可直接加入到锥形瓶中称量，但是速度较慢，需防止过量），倒入锥形瓶中。3、 称量0.3g牛肉浸膏，用玻璃棒沾少许，滴加到锥形瓶中（因取量较少，所以玻璃棒不宜沾多，以防过量）。4、 加入100mL去离子水，稍加热溶解（注：1营养琼脂培养液需加热至沸腾使琼脂充分溶解；2此时，可开启高压灭菌锅开始预热升温，注意检查灭菌锅内水量。）5、 调pH至6.8±0.1，加入约15滴1mol*L-1 NaOH溶液（7-8滴）。6、 将营养汤锥形瓶包扎封口，放入高压灭菌锅中121摄氏度灭菌约15min，（A号控温不稳定），（注：做实验要求既好又快，合理安排时间，提前做好准备，计算好时间）。7、 灭菌结束后，迅速去除两瓶营养肉汤，放入超净台中冷却，待接种，（此时开启紫外灯灭菌。）二、接种1、 灭菌后的肉汤放入超净台中，约需1h冷却；2、 戴好口罩，用75%酒精喷洗手杀菌，坐于超净台前，点起酒精灯，从冰箱中拿出冷藏的菌种，对接种铂丝灭菌冷却接种，（提前开启培养箱，设定温度为37°C，振荡速度为100rpm）。3、 接种完毕，放入振荡培养箱中培养18-24h，（一般18h细菌活性最强，最适宜做实验，所以实验前需计算好时间。）（注：离开实验室时，注意再次查看振荡培养箱的温度，振荡是否都开启。）

  • 【分享】数显生化培养箱 16s rrna细菌鉴定原理

    一、微生物数码鉴定法 早在七十年代中期，一些国外公司就研究出借助生物信息编码鉴定细菌的新方法。这些技术的应用，为医学微生物检验工作 提供了一个简便、科学的细菌鉴定程序，大大提高了细菌鉴定的准确性。目前，微生物编码鉴定技术已经得到普遍应用，并早已商品化和 形成独特的不同细菌鉴定系统数显生化培养箱。如API、Micro-ID、RapID、Enterotube和Minitek等系统。这种鉴定 系统是自动化鉴定系统的基础。 （ 一）数码鉴定法基本原理数码鉴定是指通过数学的编码技术将细菌的生化反应模式转换成数学模式，给每种细菌的反应模式赋予一组数码，建立数据库或编成检索 本。通过对未知菌进行有关生化试验并将生化反应结果转换成数字（编码），查阅检索本或数据库，得到细菌名称。其基本原理是计算并 比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。随着电脑技术的进步，这一过程已变得非常容易。 1．数显生化培养箱 简要介绍计算步骤：（1）出现频率（概率）的计算：将记录成阳性或阴性结果转换成出现频率：①对阳性特征，则除以100即得。②对阴性特征，除以1 00的商被1减去即可。③说明：对“0”和“100”，因这2个数太超量，为了使结果不出现过小或过大，而用相似值0.01或0 .99值代替。（2）在每一个分类单位中，将所有测定项目的出现频率相乘，得出总出现频率。（3）在每个分类菌群中的所有菌的总出现频率相加，除以一个分类单位的总出现频率，乘100，即得鉴定%（%id）（4）在每个菌群中，再按%id值大小顺序重新排列。将未知菌单次总发生频率除以最典型反应模式单次总发生频率，得到模式频率T 值，代表个体与总体的近似值。T值越接近1，个体与总体越接近，鉴定价值越大。按%id大小排序，将相邻两项的%id之比为R， 代表着首选条目与次选条目的差距，差距越大，价值越大。如果%id≥80，参考T及R值可作出鉴定。 2．在编码检索本中检索数据谱得出的结果有以下几种形式（以API鉴定系统为例）。 （1）有此数码谱:①有一个或几个菌名条目及相应的鉴定值（%id和T值）。②对鉴定结果好坏的评价，最佳……等。 ③用小括号列出关键的生化结果及阳性百分率。④有时，鉴定结果不佳或有多条菌名条目,需进一步补充试验项目才能得出良好的鉴定结 果。⑤指出某些注意要点，需用“推测性鉴定”，并将此菌送至参考实验室；需用“血清学鉴定”，作进一步的证实等。 （2）无此数码谱：可能有以下原因：①此生化谱太不典型。②不能接受，鉴定值低（%id＜80.0）。③可疑。需进一步确认是否 纯培养，重新鉴定，可与供应商技术服务部联系。3. 结果解释（1）如果排序第一的细菌%id≥80.0，则可将未知菌鉴定在此条目中，并按%id值的大小对鉴定的可信度作出评价。%id≥ 99.9和T≥0.75为最佳的鉴定；%id 99.0~98.9之间，T≥0.5为很好的鉴定 数显恒温水浴锅 恒温培养摇床 omega试剂盒

  • 【讨论】水质与食品检验中当细菌培养在平板无菌落生长时，为什么菌落总数报告方式不同？

    [size=4][font=黑体]我们都知道：菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。但在水质与食品检验中当细菌培养在平板无菌落生长时，为什么菌落总数报告方式不同？水质：若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以（未检出）报告之。食品：若所有稀释度均无菌落生长，则以小于l(1)乘以最低稀释倍数(l×10或lO)报告之。请各位朋友发表自己的看法或见解![/font][/size]

  • 真菌培养基

    真菌培养基培养基真菌培养基的成分有碳源、氮源和其他营养物质。葡萄糖提供碳源，硝酸盐、亚硝酸盐、氨、尿素、氨基酸和其他化合物提供氮源。1.普通培养基(1)改良沙氏琼脂、多选择沙氏琼脂(Sabouraud dextrose agar , SDA): 含有放线菌酮和氯霉素，放线菌酮可抑制腐生性真菌(多数可能为条件致病菌)，氯霉素可抑制大多数细菌(并非所有细菌) 。放线菌酮也抑制新型隐球菌、一些念珠菌、烟曲霉等。(2) 马铃薯葡萄糖培养基(potato dextrose agar , PDA) : 天然培养基。(3)脑心浸膏琼脂 临床常用脑心浸膏琼脂(brain-heart infusion agar , BHI) 分离深部真菌、双相真菌如皮炎芽生菌等，也可以在其中加入抗生素和血液制品。(4) 抑制性霉菌琼脂(inhibitory mold agar , IMA ) : 含有氯毒素，可抑制细菌的生长，是用于临床真菌培养标本初次增菌的理想培养基，常用于筛选放线菌酣敏感的真菌，如隐球菌、组织胞浆菌和接合菌等。2. 选择培养基(1)咖啡酸琼脂(CAA) : 用于鉴定新型隐球菌。由于该菌含有靛酚氧化酶，在CAA 培养基中菌落呈黑色。CAA 培养基对光敏感，应避光保存。(2) 鸟食琼脂(BA) : 用于从痰等标本中分离新型隐球菌。新型隐球菌在培养基上产生棕黑色色素，但是其他隐球菌在延长培养时也可产生色素。其他真菌也可在此培养基上生长，但不产生色素。(3) KT 培养基:由吐温、蛋白、烟酸和0.3 %水解酪蛋白氨基酸组成，用于皮炎芽生菌转相(为酵母相)培养时使用。(4) Kelley 琼脂:用于皮炎芽生菌( B. dermatitidis) 转相(为酵母相)时使用。(5) CHROM 琼脂: 念珠菌显色培养基。是一种用于鉴定培养念珠菌的培养基，不同念珠菌在此培养基上生长显不同颜色。

  • 【分享】霉菌培养箱的作用及日常维护办法

    培养箱是培养微生物的主要设备，可用于细菌、细胞的培养繁殖。原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境，如控制一定的温度、湿度、气体等。霉菌培养箱的运用范围： 霉菌培养箱一般应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环境保护等研究应用领域, 是水体分析、BOD测定，细菌、菌种、微生物的培养、保存和植物栽培、育种实验生物培养的专用设备。 日常维护办法： 1、用霉菌培养箱底部调节螺钉调节高度，使箱体安置平稳。 2、插上电源插座(电源应有良好接地)，按下电源开关，显示屏亮，此时显示屏所显示的是培养箱室内的实际温度和湿度。 3、加湿器的安装：将加湿器的电源插头插在仪器背面的电源插座上，再将仪器的加湿管与加湿器相连，相连处一定要紧密连接。加湿器水箱里加水一定要按说明书上正确操作。 4、温度调节：按下温度设定按钮，数字显示即为设定值，旋转温度调节电位器到所需温度值，松开按钮，数字显示即为培养室内的实际温度。此时如培养箱内的实际温度比设定温度小，加热指示灯亮，加热器开始加热；如培养箱内的实际温度比设定温度大，制冷指示灯亮，制冷系统开始制冷；如加热指示灯与制冷指示灯均暗，则培养箱处于恒温状态。

  • 霉菌培养箱技术特点

    上海产霉菌培养箱是一种常用的培养箱产品，但它不是生化培养箱、也不是隔水式培养箱，是水体分析和 BOD 测定细菌、霉菌、微生物的培养、保存、植物栽培、育种实验的专用恒温振荡[u]设备[/u]。今天我们主要来介绍一下霉菌培养箱的特点及使用注意事项，希望可以帮助用户更好的应用产品。霉菌培养箱的特点1、本机温控系统采用微电脑单片机技术，控温精度高 2、具有温度、时间调节控制，触摸式键盘设定调节 3、带有超强的紫外灭菌功能，保证纯净的培养环境 4、机体外壳采用喷塑处理，整机造型美观大方 5、内胆均为镜面不锈钢材料制成 6、工作室内装照明装置，大视角保温真空钢化玻璃，便于观察。霉菌培养箱的使用注意事项1、此[u]控制器[/u]的特点是，先控制温度，待温度基本稳定后再控制湿度，故刚开机或重新设定温度后，既无加湿也无除湿是正常现象，待温度达到设定温度，加湿和除湿才会工作。2、对于加湿器的使用，先将加湿器雾量控制旋钮顺时针旋到中间处，不宜过大防止湿度过冲，若加湿器通过连续加湿20分钟也达不到所设定的湿度值，此时才可渐渐将加湿器雾量控制旋钮顺时针旋至最大。3、对于箱体加热和制冷功率的匹配，一般250L的箱体，加热功率建议选用500W左右，制冷功率建议选用180W左右 150L的箱体，加热功率建议选用350W左右，制冷功率建议选用140W左右。

  • 双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法

    双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法

    [align=center]双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法[/align][align=center]季学猛[/align][align=center]（南开大学 医学院, 天津 300071）[/align]摘 要：双歧杆菌在维护宿主健康方面具有重要作用，因此对其高密度培养条件的探索具有重要意义。目前，双歧杆菌的高密度培养主要受到培养基组分和培养条件的优化的影响。这里报道了一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法。该方法使用补料与碱泵耦合的方法进行补料，通过控制发酵培养基的pH值来调节补料培养基的补入量。此外，本研究还进行了补料培养基的优化实验，通过调整氢氧化钠和葡萄糖浓度的比例，比较了不同补料培养基的发酵性能。实验结果表明该补料培养基及补料方法适用于两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌等多种双歧杆菌，而且能够达到较高的活菌密度。本研究提出的补料培养基及补料方法可为双歧杆菌的高密度培养提供有效的解决方案。关键词：双歧杆菌；高密度培养；补料培养基；补料方法；碱泵耦合中图分类号：G482[color=gray] [/color]文献标识码：A[align=center]A supplementary culture medium and supplementation method for high-density cultivation of Bifidobacterium[/align]JI Xuemeng（School of Medicine, Nankai University, Tianjin 300071, China）Abstract: Bifidobacterium plays a significant role in maintaining host health, making the exploration of high-density cultivation conditions crucial. Currently, the high-density cultivation of Bifidobacterium is mainly influenced by the optimization of culture medium components and cultivation conditions. Here, we report a supplementary culture medium and supplementation method for high-density cultivation of Bifidobacterium. The method utilizes coupling of supplementation with an alkaline pump to control the supplementation rate of the culture medium by adjusting its pH value. Furthermore, optimization experiments of the supplementation culture medium were conducted by varying the ratio of sodium hydroxide to glucose concentrations, comparing the fermentation performance of different supplementation culture media. Experimental results demonstrate that this supplementation culture medium and supplementation method are applicable to various Bifidobacterium strains such as Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, and Bifidobacterium longum, achieving high viable cell densities. The proposed supplementation culture medium and supplementation method in this study offer an effective solution for high-density cultivation of Bifidobacterium.Key words: Bifidobacterium high-density cultivation supplementary culture medium supplementation method alkaline pump coupling双歧杆菌广泛分布于动物和人类的肠道中，已经发现双歧杆菌在维护宿主健康方面起着极其重要的作用，双歧杆菌作为益生菌的功能特性已经引起了越来越多的关注[sup][back=yellow][1-3][/back][/sup]。双歧杆菌的益生菌制剂有潜力通过选择和加强有益菌群来调节肠道微生物群的组成和微生物平衡，从而更有利于人体健康。双歧杆菌制剂已被报道能改善肥胖相关特征、缓解便秘和增强免疫力[sup][back=yellow][4-6][/back][/sup]。双歧杆菌已经成为国内外正在快速发展的微生态制剂中的主要菌种之一。努力探索双歧杆菌的高密度生长条件，对于提高该菌的生产效率和应用推广具有重要意义。双歧杆菌的高密度培养条件的摸索主要涉及培养基组分和培养条件的优化。目前，MRS培养基是最常用的双歧杆菌等乳酸菌培养基，被广泛地用于双歧杆菌的发酵中[sup][back=yellow][7][/back][/sup]。双歧杆菌的最适生长 pH 值在 6.0-7.0 之间[sup][back=yellow][8][/back][/sup]，然而，由于双歧杆菌发酵过程中会产生有机酸等代谢副产物，导致培养过程中培养基的 pH 值不断地降低，限制细菌的生长[sup][back=yellow][9-11][/back][/sup]。为解除酸等代谢副产物对双歧杆菌生长的限制，一些创新型的发酵培养方法已经被提出，比如细胞周期培养、透析培养、细胞固定培养和嵌入法[sup][back=yellow][12-15][/back][/sup]。然而，这些方法在工业应用中受到了各种因素的限制。目前，分批的发酵罐内恒定pH培养方法仍然是主流，在发酵中通过添加碱性溶液来控制培养基的pH值，以减轻酸性生长抑制。在解除酸性生长抑制后，双歧杆菌的生长还受到渗透压和底物不足的限制[sup][back=yellow][16][/back][/sup]。许多营养物在高浓度下导致的高渗透压对细胞有抑制作用，而为了达到高细胞密度，又必须供给大量的营养物质。因此，为了双歧杆菌培养中有效地利用底物，必须优化培养过程以解决底物浓度和渗透压之间的矛盾。将浓缩营养物以与其消耗速率成比例地加入反应器中是一种有效的解决底物浓度和渗透压之间的矛盾的方法，为此产生了多种形式的补料喂养模型：间歇喂养，恒定喂养和指数喂养[sup][back=yellow][17-19][/back][/sup]。在间歇补料喂养中，通过周期性检查并补充生长基质中的葡萄糖含量达到稳定葡萄糖浓度的目的，然而，这种补料模型决定了必然需要大量人力。而且在对数生长阶段，细菌细胞快速消耗葡萄糖，因此在任何两个测量间隔期间可能发生底物缺乏，可能会导致补料不及时，进而影响细菌的生长。在恒定补料喂养中，饲料介质以恒定的流速持续添加到发酵培养基中。这种方法优点是减少了人力需求。但是，益生菌对葡萄糖的消耗速率不是恒定的，这就导致了低喂养速率可能导致细菌生长的底物不足，而高喂养速率会引起过量底物积累，也会抑制细菌生长。对于指数喂养模型，在益生菌前期生长阶段，指数喂养能够很好的耦合细菌对数生长。然而，在细菌对数生长后期，细菌生长速率趋缓，而流加速率继续指数增加会导致底物浓度迅速增加，进而对细菌菌株的生长能力造成不良影响。因此，指数喂养模型也不是合理的方法。综上所述，在益生菌菌株生长期间，这些方法均不能准确控制生长介质中的葡萄糖含量。目前，针对双歧杆菌等厌氧菌发酵过程中产酸，而且产酸与消耗的碳源成正比的特性[sup][back=yellow][20][/back][/sup]，通过将补料与碱泵偶联，可实现了补碱的同时补加碳源。然而，补料与碱泵偶联对于发酵罐技术要求高，该技术仍没有在实验室和工厂中得到广泛推广。1? 补料系统的设计为克服现有技术中的缺陷，这里提出了一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法，技术方案如下：一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基，该补料培养基包括质量比为1:10的氢氧化钠与葡萄糖。其中氢氧化钠浓度小于等于50 g/L，葡萄糖浓度小于等于500g/L。可减少补料培养基中氢氧化钠、葡萄糖和溶氧氧化还原反应产生的副产物浓度。为了减少补料培养基中氢氧化钠、葡萄糖和溶氧的氧化还原反应，配制补料培养基的水应尽可能减少溶氧。可通过高温灭菌、煮沸、通氮气或通二氧化碳的方法减少溶氧。氢氧化钠和葡萄糖溶液应分别进行灭菌后进行混合。使用所述的补料培养基的补料方法，需将补料培养基通过碱泵与发酵培养基连接，根据所述的发酵培养基的pH值控制所述的补料培养基的补入量即成。碱泵的流速为5-10mL/min；碱泵的每次开启时间小于等于30s；发酵培养基的pH值的检测周期为20s。补料培养基补入后发酵培养基的pH值与补入前发酵培养基的pH值之差小于等于0.1。用于双歧杆菌高密度培养的发酵的方法包括如下步骤：（1）将双歧杆菌种子液接种至发酵培养基中进行发酵；（2）将补料培养基通过碱泵与发酵培养基连接，根据所述的发酵培养基的pH值控制所述的补料培养基的补入量；（3）在发酵过程中，间隔1小时对发酵培养基取样，检测580nm-620nm下的吸光度值，并检测葡萄糖浓度与活菌数目，当吸光度值大于0.5且相邻2次取样的吸光度值相等或降低即为发酵结束。2? 补料培养基的优化制备如下5种补料培养基，其中氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值分别为1:2、1:5、1:10、1:20、1:40，以比较发酵性能。发酵培养基组成如下：1000mL蒸馏水、14.3g大豆蛋白胨、16.7g酵母粉，10g葡萄糖，0.5g可溶性淀粉，1g氯化钠，1g磷酸氢二钾，1g磷酸二氢钾，0.01g FeSO4?7H2O，0.005g MnSO4，0.2gMgSO4，0.5g L-半胱氨酸，使用50g/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.8；其中L-半胱氨酸配制为50g/L浓度，膜过滤除菌，在发酵培养基灭菌结束后再按照1/100（v/v）加入L-半胱氨酸。发酵罐通气孔中接入氮气，使得溶氧降至1mg/L以下；设置发酵参数：发酵温度设为37.0℃范围内，搅拌转速200r/min，培养基温度达到37.0℃后，在火焰圈的无菌环境下按照5%（v/v）的接种量加入种子液，同时，加入3滴消泡剂；开启发酵罐搅拌器，设置种子液加入后的培养基的当前pH值6.6为发酵设定pH值。补料设置参数：将补料培养基中碱泵利用软管连接，设置碱泵最大流速为10mL/min，设置碱液根据pH自动控制加入，设置碱泵启动参数为pH值小于6.55，设置每隔10秒测定一次pH值，设置每次碱泵开启时间15秒；发酵中，每隔3小时测OD，每隔5小时取样监测培养液葡萄糖浓度，检测到15小时。如[back=yellow]图1[/back]所示，发现在发酵前5小时，各补料培养基都可以维持葡萄糖浓度处于适宜双歧杆菌快速生长的浓度（灰色范围），而从发酵10小时开始，氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值为1:2的补料出现了葡萄糖浓度的下降，说明该碱碳比例在发酵后期不足以满足双歧杆菌开始生长对碳源的需求。同样的，从发酵10小时开始，氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值为1:40的补料出现了葡萄糖浓度的过高，说明该碱碳比例在发酵后期不足可能产生高渗透压，不适合双歧杆菌的生长。而氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值1:5至1:20补料可以维持发酵过程中葡萄糖浓度的稳定。综合下来，我们发现了补料培养基中氢氧化钠浓度(C碱，g/L)和葡萄糖浓度(C料，g/L)的合适比值为1:5至1:20。[align=center][back=yellow]图1[/back] 不同配比的补料培养对发酵体系葡萄糖浓度的影响的柱状图[/align]3? 补料系统的应用实践3.1? 两歧双歧杆菌高密度培养如[back=yellow]图2[/back]所示，使用本方法，发酵体系中pH值始终保持在6.6±0.1，葡萄糖浓度始终维持在9-13g/L，发酵结束时，发酵液总体积达到4.9L，吸光度达到OD620 12.8，活菌密度最高达到 8.5±0.2 ×10[sup]9[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图2[/back] 两歧双歧杆菌的高密度培养的曲线图3.2? 长双歧杆菌高密度培养如[back=yellow]图3[/back]所示，使用本方法，发酵体系中pH值始终保持在6.9±0.1，葡萄糖浓度始终维持在8.5-13g/L，发酵结束时，发酵液总体积达到4.4L，吸光度达到OD[sub]620[/sub] 9.2，活菌密度最高达到 6.4±0.2 ×10[sup]9[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图3[/back] 长双歧杆菌的高密度培养的曲线图3.3? 青春双歧杆菌高密度培养如[back=yellow]图4[/back]所示，使用本方法，发酵体系中pH值始终保持在6.7±0.1，葡萄糖浓度始终维持在7-11g/L，发酵结束时，发酵液总体积达到4.6L，吸光度达到OD[sub]620[/sub] 15.3，活菌密度最高达到 1.2±0.1 ×10[sup]10[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图4[/back] 青春双歧杆菌的高密度培养的曲线图3.4? 动物双歧杆菌的高密度培养如[back=yellow]图5[/back]所示，使用本方法，发酵体系中pH值始终保持在6.5±0.1，葡萄糖浓度始终维持在7-12g/L，发酵结束时，发酵液总体积达到4.2L，吸光度达到OD[sub]620[/sub] 20.5，活菌密度最高达到 1.7±0.1 ×10[sup]10[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图5[/back] 动物双歧杆菌的高密度培养的曲线图4? 结语该研究提供了一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法，补料方法包括如下步骤：将补料培养基通过碱泵与发酵培养基连接，根据发酵培养基的pH值控制补料培养基的补入量即成。通过优化补料培养基及补料方法，无需发酵罐补料偶联技术便实现了根据pH值变化，利用碱泵自动补充碳源和碱液，实现了保持pH值和碳源浓度的稳定；该补料方法对发酵罐的设备技术要求低，操作简单，降低了发酵成本。参考文献(References)：[1]杨硕,唐宗馨,段勃帆,陈禹含,郭欢新,孟祥晨.双歧杆菌及其制剂对炎症性肠病作用机制研究进展[J].食品科学,2023,44(05):275-281.[2]马岩,王中江,杨靖瑜,李哲,彭霞,单秀峰,李柏良,马微微.动物双歧杆菌乳亚种XLTG11对克林霉素诱导的抗生素相关性腹泻的改善作用[J].食品科学,2023,44(03):170-178.[3]李虔全,罗京,周江,刘亭,陈于彪,彭霞,杨建,胡闵山.孟鲁司特钠联合双歧杆菌四联活菌治疗儿童过敏性紫癜有效性Meta分析[J].海峡药学,2023,35(01):127-133.[4]石英,拉巴普尺,张丹瑛,翁书强,刘心怡,汪皓琪.双歧杆菌对高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠非酒精性脂肪肝的影响[J].中国临床医学,2022,29(03):473-480.[5]陆敏,袁琳,胡娜,钟霄毓,姜逸,林敏,陆雄.双歧杆菌三联活菌对肥胖小鼠慢性低度炎症的影响[J].卫生研究,2022,51(05):797-802.DOI:10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2022.05.020.[6]李亦汉,王琳琳,赵建新,张灏,王刚,陈卫.两歧双歧杆菌CCFM1167通过提升肠道中乙酸水平以抑制炎症从而缓解便秘[J].食品与发酵工业,2023,49(06):35-41.DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.031238.[7]Umar Farooq. 小米膳食纤维作为主要碳源对益生菌生长和发酵过程中短链脂肪酸产量的影响研究[D].江南大学,2013.[8]杨玲,张栋,齐世华,马新颖,周帅康,艾连中,王世杰.两歧双歧杆菌TMC3115冻干菌粉生产工艺优化[J].乳业科学与技术,2021,44(05):12-17.DOI:10.15922/j.cnki.jdst.2021.05.003.[9]熊三玉. 两歧双歧杆菌驯化及培养条件优化的研究[D].中国海洋大学,2007.[10]冯诗诗. 长双歧杆菌F16的益生特性及其在酸浆豆腐制备中的应用[D].河南工业大学,2022.DOI:10.27791/d.cnki.ghegy.2022.000088.[11]武婷,郭帅,杨阳等. 动物双歧杆菌乳亚种Probio-M8在发酵山羊乳中的应用[C]//中国食品科学技术学会.第十七届益生菌与健康国际研讨会摘要集.[出版者不详],2022:149-150.DOI:10.26914/c.cnkihy.2022.018592.[12]赵春燕,张颖,王丹,刘臻.乳酸菌细胞固定化发酵的研究进展[J].中国酿造,2009(05):11-14.[13]李秀凉,雷虹,张龙丰,周东坡,平文祥.从L-乳酸菌酸菜发酵液中初步分离肽类抑菌物质[J].食品工业科技,2008(07):91-93.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2008.07.022.[14]邓鹏超. 乳酸菌的高密度培养及酸奶冻干发酵剂的研究[D].华中农业大学,2008.[15]于修鑑. 乳酸菌高密度培养及浓缩型发酵剂研究[D].南京工业大学,2004.[16]黄晓英. 传统发酵食品中具有抑菌特性乳酸菌的筛选、抑菌机理及其在泡菜发酵中的应用[D].西南民族大学,2022.DOI:10.27417/d.cnki.gxnmc.2022.000050.[17]彭海芬. 阿维拉霉素高产菌株的选育及其发酵条件优化[D].河南工业大学,2022.DOI:10.27791/d.cnki.ghegy.2022.000511.[18]吴斌.罗非鱼无乳链球菌SIP-pET32a基因工程菌高密度发酵工艺及SIP蛋白提取方及SIP蛋白提取方法研究[J].中国水产,2022(11):73-78.[19]熊华仪,陈曦,刘月锋,陈雄,李沛,王志.补料策略优化促进乳球菌HB03发酵合成Nisin[J/OL].食品科学:1-11[2023-05-18].http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.2206.ts.20230428.1620.026.html[20]孙东霞,周子安,冯志合,胡修玉,祁光霞,董黎明.pH值调控柠檬酸污泥厌氧发酵产酸及碳源潜力研究[J].中国环境科学,2022,42(11):5198-5207.DOI:10.19674/j.cnki.issn1000-6923.20220620.001.收稿日期：2023-10-19 修改日期：第一作者简历：季学猛，硕士，实验师，研究方向为生物化工、机器学习；生物信息学。E-mail：jixuemeng@nankai.edu.cn。

  • 霉菌培养箱日常维护的15个办法

    培养箱是培养微生物的主要设备，可用于细菌、细胞的培养繁殖。原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境，如控制一定的温度、湿度、气体等。 　　霉菌培养箱一般应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环境保护等研究应用领域,是水体分析、BOD测定，细菌、菌种、微生物的培养、保存和植物栽培、育种实验生物培养的专用设备。 　　1、当仪器在停止使用时，应拔掉电源插头。 　　2、若湿度长期不用时，请将盒内水倒尽。 　　3、为了保持设备的美观，不准用酸或碱及其它腐蚀性物品来擦表面，箱内可以用干布定期擦干。 　　4、温度调节：按下温度设定按钮，数字显示即为设定值，旋转温度调节电位器到所需温度值，松开按钮，数字显示即为培养室内的实际温度。此时如培养箱内的实际温度比设定温度小，加热指示灯亮，加热器开始加热;如培养箱内的实际温度比设定温度大，制冷指示灯亮，制冷系统开始制冷;如加热指示灯与制冷指示灯均暗，则培养箱处于恒温状态。 　　5、搬运时必须小心，搬运时与水平面的夹角不得小于45°。 　　6、如箱内不需杀菌时，应将面板上的杀菌开关置于“关”的位置。 　　7、当温度设定好之后，不能随便将控温旋钮来回多次旋转，以免压缩机启动频繁，造成压缩机出现过载现象，影响压缩机的使用寿命。 　　8、本机背部装有二组保险盒，2A?为制冷加热负载保险丝盒，8A?为控制电源保险丝盒，若机器运转出现故障，例如控温失灵，不加热或不制冷，须切断电源，分别检查保险丝是否完好，再检查相应部位。 　　9、湿度调节：按下湿度设定按钮，数字显示即为设定值，旋转湿度调节电位器到所需湿度值，松开按钮，数字显示即为霉菌培养箱内的实际湿度。当培养室内的实际湿度比设定的湿度小时，此时加湿对培养室内加湿，加湿指示灯亮;当培养室内的实际湿度比设定的湿度值大时，此时加湿器停止工作，加湿指示灯灭。 　　10、当使用温度较低时，应定期倒掉位于箱内底部积水盘内的积水。 　　11、加湿器若有故障，请按加湿器使用说明书上的保修点，就近修理。 　　12、当湿度传感器长时间处于高湿状态，会形成结露即湿度显示值会居高不下，若需要准确的湿度显示值，则应关机后，将培养箱箱门打开，让湿度传感器处于室温中，自然干燥后，即可继续使用。 　　13、加湿器的安装：将加湿器的电源插头插在仪器背面的电源插座上，再将仪器的加湿管与加湿器相连，相连处一定要紧密连接。加湿器水箱里加水一定要按说明书上正确操作。 　　14、插上电源插座(电源应有良好接地)，按下电源开关，显示屏亮，此时显示屏所显示的是培养箱室内的实际温度和湿度。 　　15、用霉菌培养箱底部调节螺钉调节高度，使箱体安置平稳

  • 霉菌培养箱的日常维护及注意点

    霉菌箱是培养微生物的主要设备，可用于细菌、细胞的培养繁殖。原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境，如控制一定的温度、湿度、气体等。 　　霉菌培养箱一般应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环境保护等研究应用领域,是水体分析、BOD测定，细菌、菌种、微生物的培养、保存和植物栽培、育种实验生物培养的专用设备。 　　1、插上电源插座(电源应有良好接地)，按下电源开关，显示屏亮，此时显示屏所显示的是培养箱室内的实际温度和湿度。 　　2、如箱内不需杀菌时，应将面板上的杀菌开关置于“关”的位置。 　　3、若湿度长期不用时，请将盒内水倒尽。 　　4、当温度设定好之后，不能随便将控温旋钮来回多次旋转，以免压缩机启动频繁，造成压缩机出现过载现象，影响压缩机的使用寿命。 　　5、当使用温度较低时，应定期倒掉位于箱内底部积水盘内的积水。 　　6、本机背部装有二组保险盒，2A?为制冷加热负载保险丝盒，8A?为控制电源保险丝盒，若机器运转出现故障，例如控温失灵，不加热或不制冷，须切断电源，分别检查保险丝是否完好，再检查相应部位。 　　7、搬运时必须小心，搬运时与水平面的夹角不得小于45°。 　　8、用霉菌培养箱底部调节螺钉调节高度，使箱体安置平稳。 　　9、当湿度传感器长时间处于高湿状态，会形成结露即湿度显示值会居高不下，若需要准确的湿度显示值，则应关机后，将培养箱箱门打开，让湿度传感器处于室温中，自然干燥后，即可继续使用。 　　10、温度调节：按下温度设定按钮，数字显示即为设定值，旋转温度调节电位器到所需温度值，松开按钮，数字显示即为培养室内的实际温度。此时如培养箱内的实际温度比设定温度小，加热指示灯亮，加热器开始加热;如培养箱内的实际温度比设定温度大，制冷指示灯亮，制冷系统开始制冷;如加热指示灯与制冷指示灯均暗，则培养箱处于恒温状态。 　　11、加湿器若有故障，请按加湿器使用说明书上的保修点，就近修理。 　　12、当仪器在停止使用时，应拔掉电源插头。请各位客户在使用霉菌培养箱过程中，能注意以上几点，做好霉菌培养箱日常维护. 　　13、为了保持设备的美观，不准用酸或碱及其它腐蚀性物品来擦表面，箱内可以用干布定期擦干。 　　14、加湿器的安装：将加湿器的电源插头插在仪器背面的电源插座上，再将仪器的加湿管与加湿器相连，相连处一定要紧密连接。加湿器水箱里加水一定要按说明书上正确操作。 　　15、湿度调节：按下湿度设定按钮，数字显示即为设定值，旋转湿度调节电位器到所需湿度值，松开按钮，数字显示即为霉菌培养箱内的实际湿度。当培养室内的实际湿度比设定的湿度小时，此时加湿对培养室内加湿，加湿指示灯亮;当培养室内的实际湿度比设定的湿度值大时，此时加湿器停止工作，加湿指示灯灭。

  • 霉菌培养箱的特征及作用简介

    霉菌培养箱是适合培养霉菌等真核微生物的试验设备，因为大部分霉菌适合在室温(25摄氏度)下生长，且在固体基质上培养时需要保持一定的湿度。霉菌培养箱由制冷系统、制热系统、空气加湿器和培养室、控制电路和操作面板等部分组成，并使用温度传感器和湿度传感器来维持培养室内的温度和湿度的稳定。 霉菌培养箱采用国内首创流线圆弧型设计，外壳采用冷轧钢板制造、表面静电喷塑；工作内腔采用镜面不锈钢材质。霉菌培养箱外表采用烤漆亚光镀层避免光辐射，内胆镜面不锈钢，隔板可以任意调节；观察窗采用独创的复门设计，观察内腔培养物品时可打开复门观察，不用观察时可关闭复门。霉菌培养箱具有因停电、死机状态数据丢失而保护的参数记忆，来电恢复功能；采用微电脑智能控制，液晶显示控制温度、时间，具有超温报警功能。 霉菌培养箱可以设定温度湿度随培养时间变化，是水体分析和 BOD 测定细菌、霉菌、微生物的培养、保存、植物栽培、育种实验的专用恒温、恒温振荡设备，可应用于各种霉菌、组织细胞、微生物、抗生物的培养，也可用于昆虫、小动物的饲养及其它用途的恒温试验。霉菌培养箱广泛应用于环境保护、卫生防疫、农畜、药检、水产等科研、院校实验、生产部门、生物工程、饮料等科研部门、大专院校的理想之选。

  • 【转帖】146种培养基配方（细菌培养基与植物培养基）！

    培养基及成分 1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml [Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃ for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the liquid , then autoclave at 121℃ for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基 I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2g Tomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5ml Distilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0 适用范围：植物乳杆菌（胚芽乳杆菌）、嗜热乳酸链球菌 6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ (乳酸菌培养基 Ⅱ) Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8 适用范围：植物乳杆菌（胚芽乳杆菌） 7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY （蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基） Peptone（蛋白胨） 10g Yeast extract （酵母膏） 5g Glucose （葡萄糖） 1g Distilled water （蒸馏水） 1L 8. Glycerol Agar （甘油琼脂） Peptone （蛋白胨） 5g Beef extract （酵母膏） 3g Glycerol （甘油） 20g Top water （自来水） 1000ml Agar （琼脂） 15g pH 7.0-7.2 9. Rhizobium medium （根瘤菌培养基）AS 9 Yeast eztract （酵母膏） 1g Soil eztract （土壤浸提液） 200ml Mannitol （甘露醇） 10g Agar （琼脂） 15g Distilled water （蒸馏水） 800ml pH 7.2 [Note]：Soil extract：Suspend 50g finely and dried gardon soil in 200ml of tap water. Autoclave at 121℃ for 1 hr. Decant through cotton-cloth, filler though paper, make up volume to 200ml. Resterilize for 20 minutes at 121℃ , then mixed with othringredients and distributed. (土壤浸提液的制法：取土壤50克，加水200毫升，15磅蒸煮1小时，经滤纸过滤后加水补足到200毫升。) 适用范围：大豆根瘤菌（慢生型）、豇豆慢生根瘤菌、花生根瘤菌、紫云英根瘤菌、 大豆根瘤菌（快生型）、大豆根瘤菌、豌豆根瘤菌、苜蓿根瘤菌、田菁根瘤菌 10. Mannitol Agar (甘露醇琼脂) Yeast extract (酵母膏) 5g Peptone (蛋白胨) 3g Mannitol (甘露醇) 25g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml

  • 弧菌分离培养基

    碱性琼脂 用于霍乱弧菌分离培养蛋白胨10g ，氯化钠5g，牛肉膏3g ，脂20g ，蒸馏水1L 。将前4 种成分混合于水中，加热溶解，校正pH 至8.4 ，分装后121℃ 灭菌15min ，倾注平板。凡急性患有水样便标本做增菌培养的同时，应直接取标本接种到碱性琼脂平板或亚碲酸钾琼脂平板上。置35 ℃ 培养12-16h ，观察结果。霍乱弧菌生长较快，菌落大而扁平，呈青灰色，半透明，光滑湿润。在亚碲酸钾琼脂上菌落呈灰黑色。 各实验室凡自配培养基或商品培养基，在使用前可用标准菌株生长对照，临床实验室可送防疫部门所设立的专门检验机构进行目的菌监测，质量可靠者方可使用。EL-Tor弧菌生长良好；大肠埃希菌ATCC25922 生长抑制。 置4℃ 冰箱，1 周内用完2 碱性胆盐琼脂 用于霍乱弧菌分离培养蛋白胨10g ，牛肉膏5g，氯化纳5 -10g ，琼脂20g，胆盐（牛、猪）2.5g，蒸馏水1L。 将上述成分称量混合于水中加热溶解，校正pH 至8.4 ，分装121 ℃ 灭菌15min ，倾注平板。取粪便标本或增菌培养物1 接种环接种平板，置35 ℃ 温箱培养16-18h 。霍乱弧菌迅速生长，其它细菌生长较缓慢。在16-18h 后，霍乱弧菌的菌落，直径可达2mm左右，呈扁平，青灰色，半透明，光滑湿润，易挑起。其它细菌菌落小而凸起，不透明，或有色素。同碱性琼脂置冰箱，1 周内用完。3 庆大霉素琼脂用于霍乱弧菌分离培养。 蛋白胨10g ，牛肉浸膏3g ，氯化钠g，构椽酸钠10g，无水亚硫酸钠3g ，蔗糖（或白糖）10g ，琼脂15-20g 庆大霉素、多粘菌素B “双抗液”2 ml，蒸馏水1L 。将上述成分（除“双抗液”外）称量混合于水中，加热溶解，校正pH 至8.4 ，分装灭菌121 ℃ 15 min ，待冷却至50 ℃ 后，每100ml内加“双抗液”0.2ml，另加5g / L 亚碲酸钾溶液0.1ml，再倾注平板。最后每毫升培养基内含有庆大霉素0.5U ，多粘菌素B6U 。将粪便标本或增菌培养物划线接种到该平板上，置35 ℃ 培养16-18h。 由于该培养基抑制性强，其它非弧菌科细菌被抑制，而霍乱弧菌生长迅速，16h 菌落可达2mm，菌落青灰色半透明，扁平，光滑湿润。若培养时间长，菌落略黄色、隆起，中心厚而不透明。霍乱弧菌（小川、稻叶）生长良好，培养18-24h 菌落直径2.5-3.0mm；大肠埃希菌和变形杆菌生长抑制。置4 ℃ 冰箱内，1 周内用完。注：（1）该培养基国内有商品出售，多数产品已加入庆大霉素，使用时，应详阅说明书。（2）“双抗液”配制：98ml 工灭菌蒸馏水中加庆大霉素（25 000U / ml）1ml，多粘菌B 或抗敌E ( 300 000U / ml）1ml4 ℃ 冰箱保存，1 月用完。4 四号琼脂用于霍乱弧菌分离培养 蛋白胨10g ，氯化钠5g，牛肉浸膏3g ，亚硫酸钠（无水）3g ，枸椽酸钠10g ，猪胆汁粉5g，十二烷硫酸钠20g，利凡诺（雷佛奴尔）3g ，琼脂粉12g ，庆大霉素亚碲酸钾混合液1ml，蒸馏水1L。将前8种成分放入玻璃或搪瓷容器内（严禁用铝制容器等金属容器），加入蒸馏水，加热溶解混合后，调整至pH8.0 ，然后按12%加入琼脂，煮沸至琼脂溶化后，冷至60 ℃ 左右，按每100ml琼脂加入庆大霉素亚碲酸钾混合液（1ml 40 000U 庆大霉素加79ml蒸馏水混合后，加入0.8g 亚碲酸钾溶解混合即成，每毫升含500U 庆大霉素和10g / L 亚碲酸钾）0.1ml，摇匀，倾注平板。 取待检标本划线接种平板，置35 ℃ 培养过夜。8h 后即可初步观察结果。24h 培养后，霍乱弧菌呈中心黑色、较大而扁平的菌落。配成的培养基呈亮黄色透明；EL-Tor弧菌稻叶型生长良好；EL-Tor弧菌小川型生长良好；大肠埃希菌ATCC25922 抑制生长。注：（1）庆大和亚碲酸钾混合液应新鲜配制并置冰箱保存。（2）雷佛奴尔应避光保存，而且每批均应预试后方可使用。成品培养基应避光保存。

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