液相化学发光仪

如前所述，对于化学发光的研究一般仅局限于分子和离子水平以及简单的分子聚集体如胶束和微乳液等。纳米材料作为一种微尺度的物质构成单元，其特殊的Kubo 效应、小尺寸效应、表面效应及量子隧道效应使其呈现许多奇异的物理、化学性质。近年来，有关纳米材料参与的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]和液相化学发光反应体系受到了越来越广泛的关注。对于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]化学发光反应，张兴荣课题组从2002 年开始利用纳米材料优良的催化性能发展了一系列基于纳米材料的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]化学发光传感器，主要用于易挥发性有机物的测定。例如，乙醇和丙酮蒸气在7 种金属氧化物纳米材料的催化氧化作用下具有化学发光现象，其中纳米TiO2 催化作用下的化学发光信号最强，其可能的发光中间体被认为是氧化生成的激发态乙醛分子，并具有很高的选择性。其它易挥发的有机物如丁酮和乙醛也能够在纳米材料的催化氧化作用下产生[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]化学发光。而挥发性氯代有机物在纳米TiO2 的作用下转化为Cl2；生成的Cl2 被富集在填充纳米TiO2 的管中，可以用柱后化学发光法检测。Bard 等于2002 年在Science 上发表第一篇有关纳米粒子的液相电致化学发光的报道以来，纳米粒子参与的液相电致化学发光和化学发光行为也已经引起了人们的关注。Bard 等报道半导体纳米粒子如Si，CdS，CdSe，CdSe/ZnSe，Ge 以及CdTe 等都可以产生电致化学发光。Poznyak 等报道了半导体CdSe/CdS 纳米粒子与H2O2 反应可以产生液相化学发光，其中CdSe/CdS半导体纳米粒子被鉴定为发光体。Corrales 等人报道了纳米TiO2 型着色剂，其化学发光特性可用于聚合物热稳定性的表征。在半导体纳米粒子参与的化学发光或电致化学发光反应中，半导体纳米粒子的表面缺陷以及量子尺寸效应是产生化学发光的基础。总之，纳米材料作为一种新型化学发光响应单元对于提高化学发光反应的效率以及开发新的化学发光反应体系具有重要意义

刚学习化学发光,请专家指点化学发光检测仪采用液相(态)检测方法比化学发光固相(态)检测(成像系统)灵敏多少个数量级? 3~5个?对于化学发光检测,是不是PMT单光子检测做的工作,化学发光成像系统一定不可以做? 例如?

化学发光 (ChemiLuminescence ，简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。体系产生化学发光，必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。依据供能反应的特点，可将化学发光分析法分为： 1 ）普通化学发光分析法 ( 供能反应为一般化学反应 ) ； 2 ）生物化学发光分析法 ( 供能反应为生物化学反应；简称 BCL) ； 3 ）电致化学发光分析法 ( 供能反应为电化学反应，简称 ECL) 等。根据测定方法该法又可分为： 1 ）直接测定 CL 分析法； 2 ）偶合反应 CL 分析法 ( 通过反应的偶合，测定体系中某一组份； 3) 时间分辨 CL 分析法 ( 即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定 ) ； 4 ）固相、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]、掖相 CL 。分析法； 5 ）酵联免疫 CL 分析法等。 在整个的检测系统中其关键的部分为 PMT ，其直接影响到仪器的检测性能，其最高检测极限为 10 － 22 mol/L 。不同型号的仪器其检测技术不一样，但基本原理都是利用待测组份与体系的化学发光强度呈线性定量关系，而化学发光强度随体系反应进行的速度增强或衰弱。记录仪记录峰形，以峰高定量，也可以峰面积定量。因化学发光多为闪烁式发光 (1—2s 左右 ) ，故进样与记录时差短，分析速度快。第二部分、化学发光常用的化学试剂及其原理 化学发光是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。任何一个化学发光反应都包括两个关键步骤，即化学激发和发光。因此，一个化学反应要成为发光反应，必须满足两个条件：第一：反应必须提供足够的能量（ 170 ～ 300KJ ／ mol ） ，第二，这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态，并且有足够的荧光量子产率。到目前为止，所研究的化学发光反应大多为氧化还原反应，且多为液相化学发光反应。 化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子数之比。对于一般化学发光反应，值约为 10 － 6 ，较典型的发光剂，如鲁米诺，发光效率可达 0 . 01 ，发光效率大于 0 。 01 的发光反应极少见。现将几种发光效率较高的常用的发光剂及其发光机理归纳如下。 1. 鲁米诺及其衍生物 鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、 4— 氨基已基 —N 一乙基异鲁诺及 AHEI 和 ABEI 等。鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。 在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢，但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。最常用催化剂是金属离子，在很大浓度范围内，金属离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析，利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物，达到很高的灵敏度。其次是利用有机化合物对鲁米诺化学发光反应的抑制作用，测定对化学发光反应具有猝灭作用的有机化合物。其三是通过偶合反应间接测定无机或有机化合物。其四是将鲁米诺的衍生物如异鲁米诺 (ABEI) 标记到羧酸和氨类化合物上，经过高效液相色谱 (HPLC) 或液相色谱 (LC) 分离后，再在碱性条件下与过氧化氢－铁氰化钾反应进行化学发光检测。也可以采用其它分离方法，如将新合成的化学发光试剂异硫氰酸异鲁米诺标记到酵母 RNA 后，通过离心和透析分离，然后进行化学发光检测。此外应用的还有 N 2(B2 羧基丙酰基 ) 异鲁米诺，并对其性能进行了研究。 2 ．光泽精 光泽精以硝酸盐的形式存在，在碱性介质中，过氧化氢将其氧化成四元环过氧化物中间体，而后裂解生成激发态的吡啶酮而发光。利用光泽精与还原剂作用，可用于测定临床医学上一些重要的还原性物质，如抗坏血酸、肌酸酐、谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、乳糖、葡萄糖。 3 ．洛粉碱 洛粉是文献上记载最早的化学发光试剂，但却迟迟未得到应用，直到 1979 年 Marino 等人将它应用于 Co 的测定后才得到重视。此试剂已被用于多种元素的分析测定。 4 ．过氧化草酸酯类 草酸盐类化学发光反应大都生成过氧草酰 (Peroxalate) 中间体，因此这类反应亦称过氧草酰类化学发光反应。过氧草酸盐类化学发光分析应用的推广还有赖于新的荧光衍生试剂的开发。 5 ． 吖啶酯类 McCap r 等合成了一系列吖啶酯类化合物，对该类试剂的化学发光机理研究表明，发光效率与试剂中的可解离酸性基团的 pKa 有密切关系， pKa 一般应小于 11 。吖啶酯类化合物是一类很有前途的非放射性核酸探针标记物，用作 DNA 的发光探针，发光量子产率高，稳定性好，标记物对杂交反应的动力学和杂交体的稳定性无影响，可以直接在碱性介质中进行化学发光反应。 以上五种化学发光剂化学发光量子产率高，水溶液稳定，能被多种氧化剂直接氧化而发光，也可被众多的金属高于催化发光反应而发光，许多无机、有机和生化组分也能增强或抑制其发光，因此应用十分广泛。目前报道的有邻菲咯啉，碱基水杨酸、罗明丹 —B 、没食子酸、香豆素、皮素，茜素紫、苏木色精，培花青，三苯甲烷类染料，丙酮、乙醇、羟胺等。这些试剂商品化程度高，价廉，使用方便，但化学发光量子产率较低，因此，研究增敏试剂来提高它们的化学发光量子产率是非常关键的。

目前已知的许多氧化还原反应都伴随着微弱的化学发光现象，但是由于其量子产率极低，往往不具有分析应用的价值。为此，必须采取某些办法提高这些氧化还原反应的速率，从而使得发光强度增强到能够用于分析化学测定。近年来，国内外分析科学家模仿生物化学发光的酶反应原理，利用溶液中的表面活性剂等分子自我组合形成胶束、反相胶束、双分子膜等分子聚集体（Organized MolecularAssemblies），或者不形成分子聚集体，但其自身可提供微观非均相反应部位的分子包合化合物、高分子电解质等作为化学发光反应的介质，实现化学发光反应效率的提高。微观非均相体系多指水溶液或其它有机溶液中的小型分子聚集体，如图1-8 所示，包括由表面活性剂和脂质形成的分子聚集体和由无机化合物的重合体形成的反应体系。化学发光常用的微观非均相体系主要包括由表面活性剂等分子聚集体组成的胶束、微乳液、二分子膜和具有独特微观非均相结构的单独分子如环糊精和高分子电解质溶液等。这些溶液外观透明，但是包含可以为化学发光反应提供特异性很高的反应微空间。而无机化合物胶体溶液目前在化学发光研究中应用较少。一般来说，微观非均相体系作为化学发光反应的介质有四种主要的效果：(1)浓缩效应。离子性分子聚集体的表面可以吸附相反电荷的离子，从而使局部反应分子的浓度增大，有利于化学发光反应速度的提高；同时，具有相同电荷的离子被分子聚集体所排斥，使反应具有一定的选择性。(2) 可溶化效应。一些在水中或者有机溶剂中难溶的反应分子、中间体、反应产物等由于其亲水性或疏水性的差异，可以在微观非均相的疏水相、亲水相或者两相的界面上得到溶解。(3) 微观介质的环境效应。介质的极性、粘度、pH 值等受到微观局部环境的作用而产生变化，可能导致化学发光反应的效率和选择性的变化。(4) 激发态分子的稳定作用。由于化学发光的能量弛豫过程往往需要比光致发光更长的时间，因此激发态的稳定性对于化学发光的强度有很大的影响。微观非均相体系的静电相互作用、疏水/亲水作用、氢键结合、电荷移动相互作用等因素的影响，可以促进反应中间体、迁移状态以及激发态分子的稳定性，从而有利于化学发光的产生。林金明等对微观非均相化学发光反应体系作了详细的综述[73]。

以下是我写的综述的部分内容，望得到大家的指教4 纳米体系化学发光4.1纳米材料参与的电致化学发光广义的化学发光也包括电致化学发光(ECL)，电致化学发光是指对电极施加一定的电压进行电化学反应，电极反应的产物之间或与体系中的某种组分发生化学反应，产生激发态物质，激发态物质回到基态时产生的发光[42,43]。它不但具有化学发光分析的许多优点，还具有电化学方法的一些特点，如电发光反应过程控制性强，选择性好等优点[44,45]。近年来,将纳米材料引入分析化学研究中已成为分析化学的一个研究热点，并取得许多创新性研究成果[46,47]。4.1.1半导体纳米粒子电致化学发光机理4.1.1.1半导体纳米粒子直接接受电极提供的能量生成激发态传统ECL是利用电极原位(in situ)产生试剂，这些试剂在溶液中反应，完成较高能量的电子转移而生成激发态的分子，不稳定的激发态分子回到基态过程中以光辐射形式释放能量[48-50]。同理，当电极施加双阶跃正负脉冲(或电位循环)时，半导体纳米粒子(A)在正电位阶跃时被氧化为A+，接着在负电位阶跃时被还原为 A-，A+ 与 A- 反应生成激发态的 A*，激发态的 A* 回到基态过程中时产生了化学发光[24,51-55]。对应的反应过程可以用(4.1)—(4.3)式表示。值得注意的是通过该机理产生发光的必要条件是：产生的还原态 A- 或氧化态 A+ 在溶液中，要能够稳定存在一定时间，从而使得A+ 能够与 A- 相遇、碰撞并产生激发态的 A*[24]。 A → A+ + e－ (4.1) A + e－ → A－ (4.2) A+ + A－ → A* (4.3) A* → A + hv (4.4)较典型的例子是He气氛下，在含有0.1mol/L THAP乙腈溶液中，对Pt电极施加双阶跃正负脉冲电位，并在 +2.7 V 和 -2.1 V循环阶跃，在正电位阶跃时，粒径为2-4nm的Si纳米半导体被氧化成稳定的 Si(NCs)+，接着电位阶跃负方向产生Si(NCs)-，并与Si(NCs)+ 碰撞产生激发态的Si(NCs)*，Si(NCs)* 回到基态时产生640nm的光发射[24]。4.1.1.2 半导体纳米粒子电化学产物与共反应物(coreactant)发生ECL反应若体系中含有共反应物(还原性或氧化性物质)时，仅在工作电极上施加正或负电压，即可生成激发态的A*而发光[24,53,56-58]。其反应过程可以用(4.1)—(4.3)式表示。产生的还原态 A- 或氧化态 A+也要能够稳定存在于溶液中一定时间，才能发生发光[24]。 A → A+ + e－ (4.1)A+ + Re → A* + Ox (4.5)A* → A + hv (4.4)或 A + e－ → A－ (4.2)A－ + Ox → A* + Re (4.6) 其中较为典型的例子是Zou[56]等将纳米CdSe沉积在石墨充蜡电极表面上并成膜，纳米CdSe膜在循环伏安下产生两个ECL通道（ECL-1和ECL-2）。并用ECL-1，在事先通N2 25min 含有0.1mol/L KNO3 pH 9.3 磷酸缓冲溶液中，扫描速率为0.06V/S 下，对H2O2进行了测定，线性范围: 2.5×10-7 ～ 6×10-5 mol/L，检测限: 1.0×10-7 mol/L。他们也提出了ECL的机理(式4.7—4.11)。CdSe NCs + ne → nR• － (4.7)O2 + H2O2 + 2e → OOH－ + OH－ (4.8)2R• － + OOH－ +H2O → 3OH－ + 2R* (4.9)or2R• － + H2O2 → 2OH－ + 2R* (4.10) nR* → CdSe NCs + hv (4.11) 4.1.2 纳米金粒子对电致化学发光体系的催化作用 因纳米具良好的“生物相容性”和高的催化特性，近来人们对纳米金催化等特性的研究进展迅速[59]。崔华[60]研究小组，已将纳米金用于化学发光体系研究，报道了纳米金粒子的催化作用对液相电致化学发光的影响，发现纳米金的催化作用和电化学活性既可以增强两个阳极ECL发光通道，又导致了两个新的阴极ECL发光通道的产生。最近，Liu[61]等发现纳米金可以催化Ru(bpy)32+- pentoxyverine (喷托维林)体系的电致化学发光，将电致化学发光分析法与毛细电泳技术联用，在毛细电泳柱端成功测定了喷托维林，检测限为：6nmol/L；并将该方法用于喷托维林和人血清白蛋白结合常数的测定，测定值为：1.8×103 L/mol。4.1.3 纳米材料作为化学发光试剂的固载。钱柯君[62]等用反胶束法水解正硅酸乙酯(TEOS)合成球形luminol/ SiO2复合纳米微粒；再用壳聚糖修饰已合成的纳米微粒并标记DNA作为DNA探针，构建的DNA探针与固定在聚吡咯修饰电极上的靶DNA杂交。用ECL法对DNA杂交情况进行评估，仅互补序列DNA才可以与DNA探针形成双链DNA（dsDNA）并产生强的ECL。发现3个碱基错配互补靶序列和非互补靶序列产生的ECL可以被忽略，ECL强度与互补序列DNA的浓度在5.0×10-12～1.0×10-9 mol/L范围内呈线性关系，对互补序列DNA的检测限为：2.0×10-12 mol/L。4.2 纳米材料参与的化学发光传统的化学发光研究一般仅限于分子和离子体系。最近，纳米粒子在化学发光中的行为研究已经引起了人们的重视：无论是半导体纳米粒子还是金属纳米粒子在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]和液相化学发光反应中都表现出特殊的活性。4.2.1纳米金参与的液相化学发光4.2.1.1 纳米金作为化学发光反应的微尺度平台Cui[26]等首次报道了，粒径为68-nm 的纳米金与KIO4—NaOH—Na2CO3之间的反应能够产生化学发光现象，该化学发光的光谱具有三个明显的发射带，分别位于380—390 nm， 430—450 nm和490—500 nm；该体系的化学发光强度随着溶液中

[em47] 我是一个化学发光的新手，有几个问题想求助各位大侠，小女子这厢有利了^_^1.化学发光反应中的气泡（如流路漏气，或其它原因）会不会影响化学发光值？2.如果有气泡进入反应盘管，那么化学发光值是增大还是减小？3.化学发光信号很不稳定，那么是否其值能作为判据呢？4.如果将化学发光和其它分离仪器相连应注意什么问题？（如与液相色谱，毛细管电泳等）5.特别是LC，两个流动相的体系PH值完全不一样，怎么样来解决接口和载流的问题？6.关于化学发光免疫法各位大侠有没有好的资料希望不要吝惜，多多给予新手指点，谢谢了！

望得到大家的指导纳米金粒子浓度的增大而线性增加，并且当纳米金粒子表面柠檬酸根离子被SCN—离子取代时，体系化学发光的强度显著增加；实验采用紫外可见吸收光谱、透射电镜(TEM)和X-射线光电子能谱（XPS）技术研究了CL反应前后纳米金的形貌、粒径和氧化态，在此基础上提出体系化学发光的机理可能是纳米金作为化学发光反应的微尺度反应平台，与反应过程中生成的CO3• 一和O2• 一自由基相互作用，在纳米金表面生成了Au(Ⅰ)络合物、二氧化碳双分子对、单线态氧分子对的激发态而产生化学发光(图4-2(a,b))。 图 4-2a 二氧化碳双分子以及单线态氧分子对参与的化学发光机理Figure 4-2a Mechanism of the chemiluminescence involving carbon dioxide dimer and singlet oxygen molecular pair 图 4-2b 与纳米金表面原子氧化相关的化学发光机理Figure 4-2b Mechanism of the chemiluminescence involving the oxidation of surface gold atoms.4.2.1.2 纳米金催化液相化学发光随后，Zhang[63]等发现不同粒径的纳米金于鲁米诺—H2O2液相化学发光体系具有不同程度的增强作用，其中粒径为38 nm的纳米金对于体系的化学发光具有最大的增强作用；提出了纳米金对该体系化学发光的增强作用可能的机理是由于纳米金对于反应过程中自由基的生成以及后续电子转移反应具有良好的催化作用；发现含有-OH、-NH2和-SH的有机化合物对于鲁米诺—H2O2—38 nm纳米金化学发光体系具有明显的抑制作用，在此基础上，进一步研究了鲁米诺—H2O2—38 nm纳米金化学发光体系测定含有-OH、-NH2和-SH的有机化合物分析应用潜力，取得了很好的结果。4.2.1.3 纳米金作为能量接受体诱导液相化学发光 Cui[64]等报到了粒径为2.6～6.0nm 的纳米金可以接受双(2,4,6-三氯苯基)草酸酯(TCPO)与过氧化氢(H2O2)的反应释放的能量产生间接化学发光，其最大发射波长位于～415nm；发现化学发光的强度与纳米金粒子的浓度（在9.1×10-10—3.3×10-8 mol/L）之间存在良好的线性递增关系；提出该化学发光可能的机理: TCPO被H202氧化生成高能量的中间体过氧环乙烷双酮(1,2-dioxetanedione)，该中间体将能量传递给体系中共存的纳米金粒子而使纳米金被激发，激发态纳米金粒子在弛豫回到基态的过程中产生化学发光(图4-3)。 图 4-3 纳米金—TCPO—H2O2-体系的化学发光机理Figure 4-3. CL Mechanism for TCPO-H2O2-Gold Colloid System4.2.1.4 纳米金作为高效还原剂参与液相化学发光Zhang[65]等采用流动注射化学发光法(FIA-CL)研究了纳米金微粒对酸性KMnO4化学发光体系的影响，发现在2.0 mol/L H2SO4介质中纳米金可以与KMnO4发生氧化还原反应；对于粒径为2.6和6.0 nm的纳米金，它们与酸性KmnO4的反应速度快，可以在640 nm左右产生化学发光，并且化学发光的强度与纳米金粒子浓度(在4.6×10-6～2.94×10-4 mol/L浓度范围内)之间存在良好的线性递增关系；对于粒径大于6.0 nm的纳米金，由于与KMnO4的反应速度较慢，反应过程中并不伴随化学发光现象；提出化学发光反应的机理可能是酸性条件下KmnO4被纳米金还原生成激发态Mn(Ⅱ)*而产生化学发光。4.2.2 纳米半导体(NCs)参与的液相化学发光Talapin[66]等首次在碱性H2O2水溶液中，观察到CdSe/CdS 核-壳结构纳米半导体晶体膜的化学发光现象，并认为该化学发光性质与量子约束轨道相关。随后， Wang[67]等发现碱性H2O2和碱性高锰酸钾，可以直接氧化CdTe NCs 产生强的化学发光，化学发光强度与粒度相关，随着粒度的增大而增强。采用流动注射化学发光法(FIA-CL)， 在 3.33-nm CdTe NCs浓度为：1×10-3 mol/L，0.1 mol/L NaOH 条件下，考察了发光系统对不同浓度H2O2的响应，CL强度对H2O2 在1×10-4～1 ×10-2 mol/L浓度范围内呈线性增强；同时也考察了表面活性剂对发光体系的影响。通过光致发光光谱法， CL光谱法和透射电镜法探究了可能的氧化化学发光机理(式4.12—4.16)。RSH + O2 + OH- → O2- + RS + H2O (4.12)O2- + CdTe → CdTe(e-1Se) + O2 (4.13)O2- + H2O2 → OH• + 1O2 (4.14)OH• + CdTe → OH- + CdTe(h+1Sh) (4.15)CdTe(h+1Sh) + CdTe(e-1Se) → (CdTe NCs)* → hv (4.16)5 结论与展望目前，半导体纳米粒子和金属纳米粒子的电致化学发光和化学发光行为己经引起了人们的关注。从Bard[24,50-54]、崔华[26,59,62-64]、张新荣[25,68-71]等研究组报道的工作表明，纳米粒子诱导化学发光反应的研究刚刚起步。从他们报道的研究工作可以看出，纳米粒子可以作为能量接受体、微尺度反应平台、还原剂、催化剂等参与化学发光反应。能量接受体：纳米粒子在量子效应的作用下可能使纳米粒子具有块体材料所没有的特殊能级结构而产生良好的荧光特性。这些具有荧光特性的纳米粒子可以被化学反应释放的能量所激发从而产生化学发光。发光体：通过电化学法和化学法可以向纳米粒子注入电子(electron)和空穴(hole)，电子和空穴再结合(recombination)之后便形成激发子(exciton)，形成的激发子能产生特定波长的光。微尺度反应平台：纳米粒子虽然可以均匀分散在液相，但是纳米粒子与液相本体之间仍然存在固/液界面，从而导致在纳米粒子表面进行的化学反应处于一个固/液界面微尺度反应平台，从而改变了化学发光反应的物理化学过程。还原剂：对纳米粒子液相电化学行为的研究已经表明，在量子尺寸效应的诱导下产生了一定能级分裂的纳米粒子簇，可能作为一个整体接受电子或空穴的注入[72]。另外，组成纳米粒子的活性基本单元(如配位不足的表面原子)也可能独立参与氧化还原反应。故这些具有较高的氧化还原活性的纳米粒子可以作为化学反应的氧化剂或还原剂诱导化学发光。催化剂：纳米粒子可以作为催化剂充当氧化还原过程中电子转移的中介。液相化学发光反应涉及一系列活泼的中间产物如自由基和激发态产物，纳米粒子高的表面活性可能会与参加化学发光反应的初始物质、中间体和激发态物质发生相互作用，从而改变了化学发光反应历程以及化学发光反应的速率。总之，纳米材料作为一种新型化学发光响应单元对提高化学发光反应的效率以及开发新的化学发光反应体系具有重要意义。而且，已报道的一系列基于纳米材料的新的化学发光体系在生命科学、环境科学和分析化学等领域可能具有广阔的应用前景。

液相色谱化学发光分析 化学发光分析法以其仪器简单、操作方便、分析快速、灵敏度高、线性范围宽等显著的优点备受人们青睐，是一种有效的微量和痕量分析技术。然而，化学发光反应固有的选择性差的缺点使得这种分析方法受到了极大的限制。如何将高灵敏度的化学发光法和高选择性的分离技术结合，是分析化学发展的一个前沿方向。 高效液相色谱是近三十年发展的一种分离技术。它具有分离效率高、分析速度快、自动化强等特点，是石油、化工、环保、医药、生化等部门科研和生产中分离检测的一个重要工具。 高灵敏度的化学发光检测手段与高分辨力的高效液相色谱法(HPLC)耦合于一体，将成为一种理想的分离分析方法—液相色谱化学发光检测法(LC-CL)，即通过液相色谱分离系统分离混合物中的各组分，利用化学发光检测系统对各组分进行测定.1974年，Hartkopf等首次报道了液相色谱化学发光检测法，20多年来，这种技术得到了飞速的发展，已广泛用于冶金、化工、环保、生物、医学、药学和临床等方面复杂、低含量组分的分析。McGown等在关于分子发光光谱的评述中，专节介绍了各种色谱法中发光检测技术的进展。其他学者也对其基本理论及应用进行过讨论.于LC-CL的综述还有：LC和流动注射发光检测法的分析应用[基于各种液相CL反应的LC-CL检测法；高效液相色谱一化学发光检测法的生物医学应用；CL检测中所用固定化技术及固态试剂；CL衍生反应及所用衍生试剂,于糖类、类酯类氢过氧化物等物质的CL检测等。高效液相色谱化学发光检测系统 液相色谱化学发光检测系统包括了色谱分离和发光检测两个部分，该仪器包括输液泵、色谱柱、混合器、阻尼器和化学发光检测器(流通池、光电倍增管和记录仪)等5个主要组成部分。待测组分经色谱柱分离后与发光试剂和过氧化氢溶液混合，产生化学发光反应，流通池亦即反应池内的光信号由光电倍增管转换并放大，最后由记录仪记录。由于该检测法不需要光源，消除了光源不稳定和杂散光的干扰，另外直接检测发光强度，故灵敏度一般比荧光检测法高两个数量级。化学发光和色谱联用，解决了化学发光选择性差的问题，在各个方面有较为广阔的应用前景。由于其具有的高灵敏度和分辨率，今后必将成为非常有效的痕量及超痕量分析的有效手段。但某些化学发光反应体系与色谱体系耦合的条件还需要进一步研究和优化。拓宽分析物的范围、化学衍生、标记及固定化酶技术的深入研究是此类分析方法的重要发展方向。

本人研一新生，想做化学发光，但组内没有化学发光仪，有一台荧光分光光度计，不清楚如何使用荧光分光光度计来测化学发光强度！也可以测流动化学发光么？希望懂的老师，师兄师姐可以帮忙一下，或留下联系方式，十分希望有人指点！

[size=2][font=新宋体]化学发光反应所以能用于分析测定，是因为化学发光强度（ICL）与化学反应速度（dc/dt）相关联，而一切影响反应速度的因素都可以作为建立测定方法的依据。化学发光反应一般可表示为：A+B → C*, C* → C+hv化学发光的反应既包括一个发光过程也包括了一个化学发光反应的过程，因此该发光反应的化学发光强度取决于化学反应的速率dc/dt和反应的化学发光量子效率（ ΦCL ） ICL= ΦCLdc/dt.b6u4X!d(P5@-_式中ΦCL可表示为：ΦCL=ΦrΦf；Φr：生成激发态产物的量子产率，也就是每一个参加反应的分子产生的激发态； Φf ：激发态产物分子的发光量子产率，也就是每一个激发态产生的光子数，对于一定的化学发光反应， 为一定值。由于化学发光测定易受化学反应条件，如pH值、离子强度、溶液组成、温度等的影响，影响反应速率或任意一个量子效率的因素都会改变发光强度。因此，在一定的化学反应条件下，通过测定化学发光强度就可以测定反应体系中某种物质的浓度。化学发光分析测定的物质对象可分为三类：第一类物质是化学发光反应中的的反应物；第二类物质是化学发光反应中的催化剂，增敏剂或抑制剂 第三类是偶合反应中反应物，催化剂，增敏剂等。这里所说的偶合反应其实就相当于前面提到的间接化学发光反应，它将一个化学发光反应与另一个或一系列反应进行偶合，只要这一个或一系列反应中的任何一种反应物或产物或催化剂（包括酶）能参与化学发光反应，就可以根据所产生的化学发光信号强度获得该反应中某一组分的量。通过标记方式利用这三类物质还可以来测定人们感兴区的其他物质。进一步扩大了化学发光分析的应用范围化学发光分析最初是以分立式进样化学发光仪作为研究手段，由于化学发光现象一般比较短暂且随时间变化较大，使用间歇式手工操作是较难取得良好的重现性，因此人们将流动注射技术引入到化学发光分析中。流动注射技术是hansen于1975年建立的，把一定体积的试样注入到流动试剂（载流）中，可以保证混合过程与反应时间的高度重现性，特别是在非平衡状态下高效率的完成试样的在线处理与测定。在化学发光分析中，化学反应器可以正面放置在接近光检测器的部位，因此检测器的仪接受较大分量的发射光子，从而提高了灵敏度，其灵敏度可达10-21mol，甚至可检测至单分子水平。化学发光分析的检测线并不受仪器的检测极限的限制，多数是受试剂的杂质污染以及由于浓度极低而带来的其他一些问题的限制。另外，由于化学激发作用具有电子激发态的均一性特点，通常其现行范围所展示的浓度区间较宽，可高达3~6个数量级。对于化学发光分析来说，由于激发能来源于化学反应，无须专门的激发光源以及相应的单色器和聚焦透镜等，所以仪器设备简单、廉价、易微型化。分析化学,论由于化学发光现象一般比较短暂，因此化学发光分析所要求的时间也较短，但其最大的缺点是选择性差。因为化学发光分析的测定大多是在相同条件下，沿用同一个化学发光反应进行的，因而选择性较差。如典型的鲁米诺-过氧化氢化学发光体系，就能被10多种无机离子和30多种有机物催化或者增敏，且均在pH8~11的碱性条件下完成。近年来，化学发光检测与色谱以及毛细管电泳等分离技术的联用，在很大程度上解决了化学发光分析选择性差的问题，扩大了化学发光分析的应用范围。为了提高化学发光分析法的选择性，将高灵敏度的化学发光检测技术与高效能、高分辨力的高效液相色谱或毛细管电泳以适当的方式相结合，集合2种技术的优势，为人们展示了一个分离效能高、检测先低、分析速度快的方法。%I/_8e*液相色谱化学发光检测仪主要包括分离柱、泵系统、混合器和化学发光检测器。柱后的反应和化学发光检测是这一联用方法成功的关键。需要注意的是，化学发光的最佳条件往往并不是分离的最佳条件，比如色谱分离金属离子对常用酸性的流动相，而金属离子与鲁米诺的化学发光反应多在pH10时才有最强的发光强度，因此实际分析中要综合考虑各个方面的因素，选择合适的条件，使其既有利于分离又能保证灵敏、稳定的检测。|分析化学|化学分析|仪器分析|分析测试|色 发光在生物学领域也有着很多应用，主要简介如下：1 血浆和血清的化学发光 亚铁离子催化的化学发光自由基启动的脂质过氧化 (L PO) 是一个链式反应过程。反应过程中产生脂自由基 (R － ) 、烷氧自由基 (RO － ) 、共轭二烯和脂过氧化自由基 (ROO － ) 等中间产物。 ROO － 自反应会产生激发的烷氧自由基 (RO 3 ) 和单线态氧 (O 2 ) ，其回到基态时产生发光。因此，把 Fe 2 + 盐加入含有脂肪的系统中，如细胞膜、线粒体、微粒体、血浆、组织匀浆、尿液等，可产生化学发光。许多实验研究对加入 Fe 2 + 盐的不同疾病患者血浆和血清的化学发光进行的测量表明，与正常健康人相比，腹腔器官局部缺血、肢端闭合性局部缺血、血氧含量下降以及出血、手术性休克病人血浆和血清的发光强度降低。 与此相反，风湿性关节炎、阑尾炎、胆囊炎、胰腺炎等炎性疾病患者血浆和血清的发光强度升高。 降低和升高的幅度与疾病的严重程度有关。 可以看出，利用此方法有可能对非典型的心肌梗塞和腹腔器官炎性疾病做出区别诊断。 2血浆脂蛋白的化学发光 有研究提出，以分离的血浆脂蛋白悬液作为系统模型可以研究不同物质对系统过氧化的调节机制。在分离的血浆脂蛋白悬液中加入胆固醇，温育一定时间后在加入 Fe 2 + 盐，测量化学发光，发现胆固醇能使系统的发光强度降低。分析认为，这可能是由于类固醇的存在抑制了系统的过氧化。对实验性胆固醇过多血症家兔和动脉粥样硬化早期病人进行的测量发现，载脂蛋白 APO – B 。在 Fe 2 + 存在条件下的发光强度出现了增长。同样的现象在肝硬化和慢性肝炎患者身上也被发现。 3尿液的化学发光 利用尿液的化学发光可以研究肾脏功能的变化。将 Fe 2 + 盐加入尿液中，测量其化学发光，发现肾功能不足者尿液的发光强度降低。与正常健康人相比，阑尾炎患者尿液的发光强度则有不同程度的提高。利用这一方法可以评估肾脏的排泄及收缩功能。 4物质抗氧化活性的测定 利用发光测量技术可以评价某些生物组织和体液的抗氧化活性。以某一稳定的发光系统为模型，如脂肪体、线粒体、卵黄脂蛋白等，将待测的抗氧化物质加入该系统，然后加入 Fe 2 + 盐，测量其化学发光。 根据系统化学发光被抑制的程度可以评价物质的抗氧化活性。 利用这一方法进行的研究证明，不同疾病患者血浆和血清的抗氧化活性是不同的。 [/font][/size]化学发光研究的热点方向直接化学发光反应是当前化学发光分析研究的一个重要方向，人们通常通过大量试验筛选氧化反应及反应介质来证明某种有机药物、农药是否具有化学发光特性。以化学发光试剂标记核酸，运用化学发光分析进行核酸分子杂交分析是化学发光分析的前沿，其发展将为基因工程、基因诊断和治疗提供有效的检测手段。分析通常进行化学发光分析都是在现有化学发光试剂的基础上开展研究，而新型化学发光试剂的开发性研究较少，此领域还有研究空间。金属配合物，特别是钌等过渡金属配合物在化学发光分析中的作用正逐渐受到人们的重视。比如钌（Ⅱ）-联吡啶常用作电致化学发光试剂

第一章化学发光的研究与应用绪论1.1 化学发光的原理、特点及发展方向1.1.1化学发光法的原理[to化学 发 光 是指在某些特殊的化学反应中，反应的中间体或产物由于吸收了反应释放的化学能而处于电子激发态，当其回到基态时伴随产生的光辐射现象。根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或反应的发光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法，称为化学发光分析。广义的化学发光也包括电致化学发光。一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下条件:第一是该反应必须提供足够的激发能，并由某一步骤单独提供，因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光 第二是要有有利的反应过程，使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态 第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子，或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。化学 发 光 反应能用于分析测定，是因为化学发光强度与化学反应速度相关联，因而一切影响反应速度的因素都可以作为建立测定方法的依据。化 学发 光 反应一般可表示为:A+ B -- C* ( 1)C` --C + hv (2 )化学发光强度([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]IC[/color][/url],)取决于反应的速度(dP/ d t) 和化学发光量子效率(95CL)[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]IC[/color][/url]L(t)= 5qcLdP/dt (3)郑州大学硕士学位论文式中'PCL= 0,么，其中么，为生成激发态产物分子的量子效率，Of为激发态产物分子的发光量子效率。对于 一 定 的化学发光反应，45C L为一定值，其反应速度可按质量作用定律表示出与反应体系中物质浓度的关系。因此，通过测定化学发光强度就可以测定反应体系中某种物质的浓度，原则上讲，对任何化学发光反应，只要反应是一级或假一级反应，都可以通过公式(3)进行化学发光定量分析。例如，在上述化学发光的反应中，如果物质B保持恒定，而物质A的浓度变化并可视为一级或假一级反应，则:[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]IC[/color][/url]L= f [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]IC[/color][/url] L (t) dt= f 59 CL[dCA/dt]dt= 59CLCA (4)即化学发光强度与A的浓度成正比。化 学发 光 分析测定的物质可以分为三类:第一类物质是化学反应中的反应物 第二类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂 第三类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。这三类物质还可以通过标记方式用来测定人们感兴趣的其他物质，进一步扩大了化学发光分析的应用范围。飞.1.2 化学发光分析法的测定体系1.1.2.1液相化学发光体系[(21(1)过氧化物化学发光体系酞腆 类 担 ydrazides)(鲁米诺及鲁米诺类):有机过氧化物的离解是一种放能过程。大多数观察到的化学发光反应都有过氧化氢参加或中间过程生成过氧化型化合物。在化学分析中，酞阱类有机化合物作为发光试剂的例子很多，其中以鲁米诺研究和使用最多。鲁米 诺 在 碱性溶液中被H202,I :等氧化剂氧化，可产生最大波长为425nm的光辐射。在通常情况「鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应郑州大学硕士学位论文相当缓慢，但当有某些催化剂存在时，反应非常迅速。最常用的催化剂是金属离子，在很大浓度范围内，金属离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析，利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物，达到很高的灵敏度。其次是利用有机化合物对鲁米诺化学发光反应的抑制作用，测定对化学发光反应具有碎灭作用的有机化合物。其三是通过偶合反应间接测定无机或有机化合物。其四是将鲁米诺的衍生物如异鲁米诺(ABEI)标记到梭酸和氨类化合物上，经过高效液相色谱(HPLC)或液相色谱(LC)分离后，再在碱性条件下与过氧化氢一铁氰化钾反应进行化学发光检测。也可以采用其它分离方法，如张帆等[131将新合成的化学发光试剂异硫氰酸异鲁米诺标记到酵母RNA后，通过离心和透析分离，然后进行化学发光检测。此外，他们仁41还合成了N-(O一梭基丙酞基)异鲁米诺，并对其性能进行了研究。光泽 精 体 系:与鲁米诺一样，利用光泽精化学发光反应直接检测H2O:及其超氧化物。许多物质能诱发光泽精发光，如利用胆固醇/胆固醇氧化酶反应产生H2O:来间接测定血清中的胆固醇 基于光氧化抗坏血酸的产物为H202来间接测定血清中的抗坏血酸。亚胺 类 : 在碱性介质中，大量芳基4化合物能产生化学发光。其中洛粉在经典有机化合物化学发光中的使用可能是文献最早记载的，但它们在分析化学中的应用却不象后来发现的鲁米诺和光泽精那样广泛。(2 )酚类化学发光自从 1 91 6年发现用过氧化氢和过氧化物酶处理连苯三酚可使之发光以来，酚类化合物的研究及应用方面的工作却较少。利用酚类化合物对氯硼酸重氟酸重氮盐H2O:的化学发光反应具有淬灭能力检测污水郑州大学硕士学位论文中的苯酚、邻硝基酚、对甲酚和2, 4一二甲酚。1.1.2.2 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]化学发光在气 相 中 ，03能氧化NO、乙烯等产生化学发光，原子氧也能氧化S02, NO, CO等产生化学发光。例如:NO+03--NO2* N02*--N)2+ hV (A-}- 600nm)CO+O--CO2* C 02*-CO2+hV 仆=300-500nm)1.1 .2.3 生物化学发光在生 物 体 系中的化学发光，称为生物发光(Bioluminescence)，它是具有最高发光效率的化学发光体系。该体系主要用于测定生物体内的一些活性物质，如ATP 151, GOD 16〕等。1.1.3 化学发光分析法的测定范围化 学发 光 分析法的测定范围很广。利用化学发光分析法可以测定样品中的无机物，如:Co(II), C u(II), F e(II), A s(III),H 202,C N ,N02-, MO(III)[7-1s1等:也可以测定样品中的有机物，如:腐殖酸、抗坏血酸、葡萄糖、四环素[16-191等，还可以测定生物体内的活性氧[2011.1.4 化学发光分析法的突出特点(1)灵敏度很高。例如，用荧光素酶和腺普三磷酸(ATP)的化学发光反应，可测定低至2X 1 0-'m olL'ATP 利用鲁米化学发光体系测定Cr3+, Cot十等离子的检出限也至10-12g , mL-1。据文献报道，其检出限可以达fmol(10-15mo1/L )[211，甚至检出限可达1个分子[22](2 )测定的线性范围宽。一般有5-6个数量级。(3 )仪器设备简单。化学发光分析仪没有激发光源，由于不存在杂散光和散射光等引起的背景干扰，并且检测的是整个光谱范围内的发光总量，因而也不需要单色器。(4 )分析速度快，易实现自动化。流动注射化学发光分析每小时可测郑州大学硕士学位论文定100个以上的试样。1. 1 .5 化学发光分析法的发展方向今 后化 学 发光分析法应在合成新的化学发光试剂，寻找新的化学发光体系方面以及与新方法，新技术等的联用方面加大研究，以达到对分析物灵敏准确的分析测定。其更应加大对化学发光体系的发光机理的探讨，寻求从化学本质上揭示其发光规律，该工作将会给化学发光新试剂的合成，化学发光新体系的发现等诸多方面提供极有用的理论指导作用。1.2 碘的分析方法进展碘 是生 命 必需元素，碘在人体内的主要生理功能为构成甲状腺素，调节机体热能代谢，促进生长发育，维持正常的神经活动和生殖功能。长期缺碘会出现甲状腺肿大，智力及体格发育障碍，特别是对胎儿和婴儿脑发育造成智力上的影响，可导致呆小症。所以碘的测定有着十分重要的意义。碘 的测 定 方法有:饰一砷催化法，硫氰酸铁一亚硝酸催化法，四甲基四胺基二苯甲烷比色法，选择性离子电极法，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法，离子色谱法等[23]。食品中碘的测定方法主要有澳氧化碘滴定法，分光光度法，现简述如下:1.澳氧化碘滴定法[241此方 法 的 原理是:样品中的碘化物在酸性条件下用饱和澳水氧化成碘酸盐，再于酸性条件下氧化碘化钾而游离出碘，以淀粉作指示剂，用硫代硫酸钠标准溶液滴定。计算含量。2.分光光度法，其中有(1) 氯仿萃取比色法或称重铬酸钾氧化法[251

如题所说，想了解下国内主要有哪些企业从事化学发光免疫，想购2台管式化学发光免疫分析仪.有从事这行业的人不妨留下贵公司的名称和仪器型号。有知道的人也可以告知，谢谢大家！

详细请见附件化学 发 光 是指在某些特殊的化学反应中，反应的中间体或产物由于吸收了反应释放的化学能而处于电子激发态，当其回到基态时伴随产生的光辐射现象。根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或反应的发光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法，称为化学发光分析。广义的化学发光也包括电致化学发光。一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下条件:第一是该反应必须提供足够的激发能，并由某一步骤单独提供，因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光 第二是要有有利的反应过程，使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态 第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子，或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。化学 发 光 反应能用于分析测定，是因为化学发光强度与化学反应速度相关联，因而一切影响反应速度的因素都可以作为建立测定方法的依据[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=18547]化学发光[/url]

1. 《化学发光基础理论与应用》，林金明，化学工业出版社， 2004年07月 简介：化学发光分析法具有灵敏度高、仪器设备简单、操作方便等特点，广泛地应用于环境化学、临床检验、药物分析和工业分析等领域。本书共有11章，侧重于总结化学发光的理论研究，内容包括：总论；鲁米诺、过氧化草酸酯、高锰酸钾和四价铈等四种最常用化学发光试剂的化学发光研究与应用概况；活性氧的化学发光研究；微观非均相化学发光反应；液相色谱柱后化学发光检测技术；毛细管电泳?化学发光联用技术；微流控芯片的化学发光检测系统；中国化学发光研究概况等。2. 《流动注射分析法》，方肇伦 等著，科学出版社， 1999年8月 简介：流动注射分析是70年代中期诞生并迅速发展起来的溶液自动在线处理及测定的现代分析技术。本书全面地阐述了流动注射分析理论和技术的发展，系统介绍了流动注射分光光度法、流动注射原子光谱法、流动注射电化学分析法、流动注射酶分析法、流动注射荧光及化学发光洁、流动注射免疫分析法、流动注射在线分离浓集、在线消解等操作方法和技术关键．全书理论、概念论述清晰，重点突出介绍各种技术和方法，充分体现“流动注射分析法”的含义。3. 《电化学发光》，李云辉 王春燕　等编著，化学工业出版社， 2008年01月 简介：电化学发光分析法具有灵敏度高、仪器设备简单、操作方便、易于实现自动化等特点，广泛地应用于生物、医学、药学、临床、环境、食品、免疫和核酸杂交分析和工业分析等领域。在21世纪中必将继续为解决人类面临的各种重大问题发挥更加显著的作用。 　本书介绍了电化学发光的研究进展及电化学发光分析的特点；电化学发光基本原理；电化学发光的基本类型；电化学发光检测技术；电化学发光的应用；毛细管电泳电化学发光应用实例等。4. 《化学发光免疫分析》，林金明 赵利霞 王栩 主编，化学工业出版社， 2008年03月 简介：本书主要分两大部分，第一部分1～9章介绍化学发光免疫分析的新方法和基础理论研究；第二部分10～18章侧重于化学发光免疫分析的应用，主要针对临床检测、环境分析以及食品安全三大应用领域。第19章简要介绍分析过程的质量管理与控制。附录收集了常用的化学发光免疫试剂盒和相关用语的中英文对照。书中每个章节既有独立性又有相互参考性，尽最大可能地收集与每一章节有关的参考文献。 本书可供从事临床分析、食品检测、环境监测等科研人员和分析工作者参考，也可作为大专院校和科研院所相关专业师生的教学参考书。

[font=新宋体][size=2]化学发光反应所以能用于分析测定，是因为化学发光强度（ICL）与化学反应速度（dc/dt）相关联，而一切影响反应速度的因素都可以作为建立测定方法的依据。 化学发光反应一般可表示为：A+B → C*, C* → C+hv 化学发光的反应既包括一个发光过程也包括了一个化学发光反应的过程，因此该发光反应的化学发光强度取决于化学反应的速率dc/dt和反应的化学发光量子效率（ ΦCL ） ICL= ΦCLdc/dt.b6u4X!d(P5@-_ 式中ΦCL可表示为：ΦCL=ΦrΦf； Φr：生成激发态产物的量子产率，也就是每一个参加反应的分子产生的激发态； Φf ：激发态产物分子的发光量子产率，也就是每一个激发态产生的光子数，对于一定的化学发光反应， 为一定值。 由于化学发光测定易受化学反应条件，如pH值、离子强度、溶液组成、温度等的影响，影响反应速率或任意一个量子效率的因素都会改变发光强度。因此，在一定的化学反应条件下，通过测定化学发光强度就可以测定反应体系中某种物质的浓度。 化学发光分析测定的物质对象可分为三类：第一类物质是化学发光反应中的的反应物；第二类物质是化学发光反应中的催化剂，增敏剂或抑制剂 第三类是偶合反应中反应物，催化剂，增敏剂等。这里所说的偶合反应其实就相当于前面提到的间接化学发光反应，它将一个化学发光反应与另一个或一系列反应进行偶合，只要这一个或一系列反应中的任何一种反应物或产物或催化剂（包括酶）能参与化学发光反应，就可以根据所产生的化学发光信号强度获得该反应中某一组分的量。通过标记方式利用这三类物质还可以来测定人们感兴区的其他物质。进一步扩大了化学发光分析的应用范围 化学发光分析最初是以分立式进样化学发光仪作为研究手段，由于化学发光现象一般比较短暂且随时间变化较大，使用间歇式手工操作是较难取得良好的重现性，因此人们将流动注射技术引入到化学发光分析中。流动注射技术是hansen于1975年建立的，把一定体积的试样注入到流动试剂（载流）中，可以保证混合过程与反应时间的高度重现性，特别是在非平衡状态下高效率的完成试样的在线处理与测定。 在化学发光分析中，化学反应器可以正面放置在接近光检测器的部位，因此检测器的仪接受较大分量的发射光子，从而提高了灵敏度，其灵敏度可达10-21mol，甚至可检测至单分子水平。化学发光分析的检测线并不受仪器的检测极限的限制，多数是受试剂的杂质污染以及由于浓度极低而带来的其他一些问题的限制。另外，由于化学激发作用具有电子激发态的均一性特点，通常其现行范围所展示的浓度区间较宽，可高达3~6个数量级。 对于化学发光分析来说，由于激发能来源于化学反应，无须专门的激发光源以及相应的单色器和聚焦透镜等，所以仪器设备简单、廉价、易微型化。分析化学,论由于化学发光现象一般比较短暂，因此化学发光分析所要求的时间也较短，但其最大的缺点是选择性差。因为化学发光分析的测定大多是在相同条件下，沿用同一个化学发光反应进行的，因而选择性较差。如典型的鲁米诺-过氧化氢化学发光体系，就能被10多种无机离子和30多种有机物催化或者增敏，且均在pH8~11的碱性条件下完成。近年来，化学发光检测与色谱以及毛细管电泳等分离技术的联用，在很大程度上解决了化学发光分析选择性差的问题，扩大了化学发光分析的应用范围。 为了提高化学发光分析法的选择性，将高灵敏度的化学发光检测技术与高效能、高分辨力的高效液相色谱或毛细管电泳以适当的方式相结合，集合2种技术的优势，为人们展示了一个分离效能高、检测先低、分析速度快的方法。%I/_8e* 液相色谱化学发光检测仪主要包括分离柱、泵系统、混合器和化学发光检测器。柱后的反应和化学发光检测是这一联用方法成功的关键。需要注意的是，化学发光的最佳条件往往并不是分离的最佳条件，比如色谱分离金属离子对常用酸性的流动相，而金属离子与鲁米诺的化学发光反应多在pH10时才有最强的发光强度，因此实际分析中要综合考虑各个方面的因素，选择合适的条件，使其既有利于分离又能保证灵敏、稳定的检测。|分析化学|化学分析|仪器分析|分析测试|色 发光在生物学领域也有着很多应用，主要简介如下： 1 血浆和血清的化学发光 亚铁离子催化的化学发光自由基启动的脂质过氧化 (L PO) 是一个链式反应过程。反应过程中产生脂自由基 (R － ) 、烷氧自由基 (RO － ) 、共轭二烯和脂过氧化自由基 (ROO － ) 等中间产物。 ROO － 自反应会产生激发的烷氧自由基 (RO 3 ) 和单线态氧 (O 2 ) ，其回到基态时产生发光。因此，把 Fe 2 + 盐加入含有脂肪的系统中，如细胞膜、线粒体、微粒体、血浆、组织匀浆、尿液等，可产生化学发光。许多实验研究对加入 Fe 2 + 盐的不同疾病患者血浆和血清的化学发光进行的测量表明，与正常健康人相比，腹腔器官局部缺血、肢端闭合性局部缺血、血氧含量下降以及出血、手术性休克病人血浆和血清的发光强度降低。 与此相反，风湿性关节炎、阑尾炎、胆囊炎、胰腺炎等炎性疾病患者血浆和血清的发光强度升高。 降低和升高的幅度与疾病的严重程度有关。 可以看出，利用此方法有可能对非典型的心肌梗塞和腹腔器官炎性疾病做出区别诊断。 2血浆脂蛋白的化学发光 有研究提出，以分离的血浆脂蛋白悬液作为系统模型可以研究不同物质对系统过氧化的调节机制。在分离的血浆脂蛋白悬液中加入胆固醇，温育一定时间后在加入 Fe 2 + 盐，测量化学发光，发现胆固醇能使系统的发光强度降低。分析认为，这可能是由于类固醇的存在抑制了系统的过氧化。对实验性胆固醇过多血症家兔和动脉粥样硬化早期病人进行的测量发现，载脂蛋白 APO – B 。在 Fe 2 + 存在条件下的发光强度出现了增长。同样的现象在肝硬化和慢性肝炎患者身上也被发现。 3尿液的化学发光 利用尿液的化学发光可以研究肾脏功能的变化。将 Fe 2 + 盐加入尿液中，测量其化学发光，发现肾功能不足者尿液的发光强度降低。与正常健康人相比，阑尾炎患者尿液的发光强度则有不同程度的提高。利用这一方法可以评估肾脏的排泄及收缩功能。 4物质抗氧化活性的测定 利用发光测量技术可以评价某些生物组织和体液的抗氧化活性。以某一稳定的发光系统为模型，如脂肪体、线粒体、卵黄脂蛋白等，将待测的抗氧化物质加入该系统，然后加入 Fe 2 + 盐，测量其化学发光。 根据系统化学发光被抑制的程度可以评价物质的抗氧化活性。 利用这一方法进行的研究证明，不同疾病患者血浆和血清的抗氧化活性是不同的。 化学发光研究的热点方向 直接化学发光反应是当前化学发光分析研究的一个重要方向，人们通常通过大量试验筛选氧化反应及反应介质来证明某种有机药物、农药是否具有化学发光特性。 以化学发光试剂标记核酸，运用化学发光分析进行核酸分子杂交分析是化学发光分析的前沿，其发展将为基因工程、基因诊断和治疗提供有效的检测手段。分析通常进行化学发光分析都是在现有化学发光试剂的基础上开展研究，而新型化学发光试剂的开发性研究较少，此领域还有研究空间。 金属配合物，特别是钌等过渡金属配合物在化学发光分析中的作用正逐渐受到人们的重视。比如钌（Ⅱ）-联吡啶常用作电致化学发光试剂[/size][/font]

化学发光免疫分析放射免疫分析法有很高的灵敏度，但存在着放射性防护和同位素污染等问题。近年来，许多非放射性同位素标记的免疫分析方法相继出现。其中，在化学发光反应及抗原-抗体特异性识别基础上建立起来的一种新的非放射免疫分析技术--化学发光免疫分析法，由于这种方法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，线性范围宽，仪器设备简单，试剂价格低廉，方法稳定、快速等优点，已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测。　　化学发光免疫分析包括三大类型：即标记化学发光物质的化学发光免疫分析；标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析。下面以偶合放大化学发光酶联免疫分析法检测人血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为例。　　(一)　原理　　尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H２O２反应体系产生化学发光，但由于该体系的检测灵敏度不够高，不能满足酶联免疫测定的要求。因此，为了提高体系的检测灵敏度，可将HRP催化H２O２氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H２O２的化学发光反应相偶合，建立偶合放大化学发光酶联免疫分析法。这里，酶的活性是基于下列发光反应进行检测的:　 HRP　　　　　　　　　luminol＋H２O２───→产物＋hν　　　　　　　　　　　　　　　　　产　物　　　　　　　　　　　　　　　　　　↑　　　　　 　Eosin＋H２O２ ──────┘　　　　　　　　　　　　　　　HRP　二)　操作步骤　　1.　包被抗体　在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚，再加入300μl用0.05M,PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体，同时设空白对照，置4℃过夜。　　2.　洗涤　用抽滤针头吸干管内液体，加入Tris-HCl-Tween20洗涤3次，每次加2ml，放置3～5min，用抽滤针头吸干管内液体。　　3.　加待检血清和阳性标准品　用PBS-Tween20缓冲液不同倍数稀释HBsAg阳性标准品或待检血清,每管加入300μl。同时设阴性对照;空白对照管只加抗体稀释液。置37℃孵育2h。　　4.　洗涤　同2。　　5.　加酶标抗体　 用含小牛血清的PBS-Tween20缓冲液稀释HRP标记的抗HBsAg抗体，每管加入300μl，空白对照管只加用于稀释酶标抗体的稀释液。置37℃孵育2h。　　6.　洗涤　同2。　　7.　化学发光测定　给每管加入300μl底物溶液，置37℃保温20min。犎;后将小试放入LKB-1250 lumimeter中，并置于测量位置，加入300μl 5.0×10－４M luminol。记录仪记录化学发光强度。　　8.　同时用ELISA方法进行对照，结果测量采用DG3022型酶联免疫检测仪。　　结果判定(1)　定性　按下列公式判别阴、阳性:　　 　　　　　　　L样品－L空白　　　　 ┌≥2.1　为阳性　　　S／N ＝ ────────　＝　商│　　　　　　　L阴性对照－L空白　　　 └＜2.1　为阴性　　　(2)　定量　以不同稀释度的HBsAg阳性标准品的化学发光强度为纵坐标，不同稀释倍数为横坐标，作出剂量反应曲线(标准曲线)，犜r待测样品中HBsAg的含量就可由测量的化学发光强度换算得到。

3. 化学化光在生物领域的应用 化学发光在生物学领域也有着很多应用，主要简介如下： 3.1 Fe 2 + 离子催化的化学发光自由基启动的脂质过氧化 (L PO) 是一个链式反应过程。 在链式反应过程中， Fe 2 + 离子起着启动和催化的作用。 反应过程中产生脂自由基 (R － ) 、烷氧自由基 (RO － ) 、共轭二烯和脂过氧化自由基 (ROO － ) 等中间产物。 ROO － 自反应会产生激发的烷氧自由基 (RO 3 ) 和单线态氧 (O 2 ) ，其回到基态时产生发光。 另外，两个 O 2 分子相互作用也可产生发光。 因此，把 Fe 2 + 盐加入含有脂肪的系统中，如细胞膜、线粒体、微粒体、血浆、组织匀浆、尿液等，可产生化学发光。 化学发光的动力学曲线，可分为快速闪光期、潜伏期、缓慢发光期和稳定发光期。有报告提出，快速闪光期的发光强度与样品中过氧化氢含量有关，潜伏期的长短与样品中抗氧化剂含量有关，而缓慢发光期和稳定发光期的发光强度则反映了系统的过氧化水平，即系统产生活性氧的能力。 3.2 血浆和血清的化学发光 许多实验研究对加入 Fe 2 + 盐的不同疾病患者血浆和血清的化学发光进行的测量表明，与正常健康人相比，腹腔器官局部缺血、肢端闭合性局部缺血、血氧含量下降以及出血、手术性休克病人血浆和血清的发光强度降低。 与此相反，风湿性关节炎、阑尾炎、胆囊炎、胰腺炎等炎性疾病患者血浆和血清的发光强度升高。 降低和升高的幅度与疾病的严重程度有关。 有研究提出，利用此方法有可能对非典型的心肌梗塞和腹腔器官炎性疾病做出区别诊断。 3.3 血浆脂蛋白的化学发光 有研究提出，以分离的血浆脂蛋白悬液作为系统模型可以研究不同物质对系统过氧化的调节机制。在分离的血浆脂蛋白悬液中加入胆固醇，温育一定时间后在加入 Fe 2 + 盐，测量化学发光，发现胆固醇能使系统的发光强度降低。分析认为，这可能是由于类固醇的存在抑制了系统的过氧化。对实验性胆固醇过多血症家兔和动脉粥样硬化早期病人进行的测量发现，载脂蛋白 APO – B 。在 Fe 2 + 存在条件下的发光强度出现了增长。同样的现象在肝硬化和慢性肝炎患者身上也被发现。 3.4 尿液的化学发光 利用尿液的化学发光可以研究肾脏功能的变化。将 Fe 2 + 盐加入尿液中，测量其化学发光，发现肾功能不足者尿液的发光强度降低。与正常健康人相比，阑尾炎患者尿液的发光强度则有不同程度的提高。利用这一方法可以评估肾脏的排泄及收缩功能。 3.5 物质抗氧化活性的测定 利用发光测量技术可以评价某些生物组织和体液的抗氧化活性。以某一稳定的发光系统为模型，如脂肪体、线粒体、卵黄脂蛋白等，将待测的抗氧化物质加入该系统，然后加入 Fe 2 + 盐，测量其化学发光。 根据系统化学发光被抑制的程度可以评价物质的抗氧化活性。 利用这一方法进行的研究证明，不同疾病患者血浆和血清的抗氧化活性是不同的。 3.6 H 2 O 2 激发的化学发光 3.6.1 血浆和血清的化学发光 在血浆和血清中加入 H 2 O 2 溶液后能激发化学发光。有报告提出，发光强度与血浆中血红素的水平呈线性相关，相关系数为 + 0. 71 。在上述发光系统中，加入过氧化氢酶或松香油后，发光被抑制，加入叠氮化钠 (NaN 3 ) 后，发光几乎完全消失。 H 2 O 2 激发的血浆和血清的化学发光，其启动因素很可能是血红素过氧化物酶催化 H 2 O 2 分解引起的。血红素过氧化物对 H 2 O 2 的分解是以 H 2 O 2 氧化其底物为前提的。在这一反应过程中导致自由基及其中间产物生成，并与机体分子相互作用，产生 O2 等活性物质，产生发光。 NaN 3 和松香油是 O2 的抑制剂，所以在上述发光系统中加入松香油的 NaN 3 后，发光被抑制。血液中血红素过氧化物酶等以自由基方式分解 H 2 O 2 ，而过氧化氢酸则以非自由基方式分解 H 2 O 2 ，生物体内这两类反应体系协同作用，能很好的清除细胞内的 H 2 O 2 。病理条件下，这一反应体系的平衡被破坏， H 2 O 2 激发的化学发光强度将发生相应改变。因此，根据血浆和血清化学发光的变化，有可能对某些疾病进行区别诊断。 3.6.2 红细胞的化学发光 1981 年 Cepгиеко 等人在分离出的红细胞悬液中加入 H 2 O 2 溶液，对其化学发光进行测量。 发现，随着红细胞的老化和溶解，系统发光强度呈增长趋势。随后对实验性动脉粥样硬化家兔红细胞化学发光进行的测量发现，与正常对照组相比，发光强度出现了降低。这可能是由于细胞膜中胆固纯含量过高造成的。对恶性肿瘤患者的调查也发现发光强度的改变。红细胞的衰老与脂质过氧化有关。 H 2 O 2 能引发膜脂过氧化， H 2 O 2 和脂质过氧化产物都能引起血红蛋白释放 Fe 2 + ， Fe 2 + 是诱发一系列自由基反应、起动脂质过氧化的催化剂。自由基的产生不仅促进了红细胞的衰老和溶解，而且引发的脂质过氧化还可以导致膜脂组分和结构的改变，直接影响红细胞的生理功能。

FIA-CL检测系统 流动注射分析是Ruzicka和Hansen于1975年首先提出的一种创新技术，这种新技术的发展摆脱了溶液化学分析平衡理论的束缚，可在物理和化学不平衡状态下进行测定。它适应性广泛，分析效率高，试样和试剂消耗量少，检测精密度高，设备简单。该技术发展非常迅速，已被广泛应用于很多分析领域。流动注射分析技术能使样品和试剂以高度重现的方式混合，从混合到检测的时间间隔可以严格控制。同时，由于计算机控制和大规模集成电路的出现，FIA可以实现自动化分析。而一般的化学发光是快速反应，在溶液混合的瞬间就产生发光信号，并且在几秒内发光强度达到峰值。要达到精度较好的测量结果，就必须严格保持测量过程中的物理性质和化学性质能很好地重现。在这方面，流动注射为化学发光分析提供了一个很好的手段。在流动过程中，所有的试验参数如试剂体积、保留时间、温度、试剂的混合时间和方式等都能严格控制并重复操作。因此，这种方法克服了化学发光分析法重现性差、操作费时、不便于实现自动化等缺点。流动注射和化学发光分析的结合，使之成为一种快速、有效的痕量分析技术，被广泛应用于水质检测、土壤样品分析、农业和环境监测、科研与教学、发酵过程监测、药物研究、禁药检测、血液分析、食品和饮料、分光光度分析、火焰光度分析、质谱分析、原子光谱分析、荧光分析、生物化学分析等等。 流动注射化学发光系统一般包括两个部分。一部分是流动体系部分，它控制发光试剂的流速及其混合方式；另外一部分是化学发光检测部分，它将检测到的发光反应发出的光转变成电信号，并由记录仪记录下其发光响应值。常见的流动注射化学发光检测器的装置示意图如图1-1a所示： 图1-1 FIA-CL 联用装置示意图Fig. 1-1 Schematic diagram of FIA-CL detectionP：蠕动泵；V：进样阀；C：流动池；D：检测器；R：记录仪； W：废液 一般优化的流路有三通路、四通路和多通路等形式，各发光试剂以某一恒定流速经蠕动泵驱动，通过进样阀将待测组分与发光试剂混合, 在流动池里面发生化学发光反应, 流通池亦即反应池内的光信号由光电倍增管转换并放大,最后由记录仪记录。由于该检测法不需要光源,消除了光源不稳定的杂散光的干扰, 另外直接检测发光强度,因此灵敏度很高。流动池中的反应可以是不完全反应，只要其中的试剂分散和反应程度可以高度重现就符合试验要求。试样和试剂的分散是所有FIA方法的核心问题，通常用分散系数D来描述试样的分散状态。D定义为：决定分析读数的流体微元组分在扩散过程发生前(C0)与发生后(Cmax)的浓度比值,即D=C0/Cmax 。FIA体系中的分散过程是许多不同因素 (包括流速、管道长度、管径、试样体积与检测方式等)的复杂函数。主要影响有：①试样的进样体积越大，D越小；②反应器管长度越大，D越大；③管路集合形状越复杂，试样在其中流动方向改变越多，D越大；如：直管反应器的D最小，盘管与编织管反应器的D较大。④流速对D的影响与反应器的管径大小有关，关系较复杂。在此装置中，流动池的设计是个关键。由于直管反应器的分散系数较小，试剂分散度不够，所得的发光强度值较弱。因此，在实际中，一般采用如图1-1b所示的盘管式反应器。一般来说，反应器的体积应尽可能大，其发光截面尽可能大，且同光电倍增管尽可能靠近。根据实际分析情况，还可以将萃取渗析、交换柱及填充柱引入FIA系统，使FIA-CL应用更加广泛。

1％),反应非常快,90％的发光在1～10s内完成。例如Пилипчук等用9,10-二甲基吖啶甲基硫酸盐测定一硫酸盐、过二硫酸盐等。1.3过氧草酸盐类(peroxalate)　　60年代开始报道了一类新的发光体系,即含草酸基团的衍生物,其典型化合物有双草酸酯(DNPO)、双草酸酯(TCPO)。Kwakman等对液相色谱过氧草酸酯化学发光检测作了评述。和田光弘对1,1′-草酰二咪唑作为发光剂在PO-CL中的应用作了评述。Jonsson等研究了杂环化合物在PO-CL中的催化作用。最近Barnett等设计合成了草酰双三氟甲基磺酰基亚胺基-双苯基-4-4′-二磺酸及2,2′-草酰双三氟甲基磺酰基亚胺基-双乙苯基-4″-4″′-二磺酸两种新的草酰胺用于水溶性过氧草酸酯发光体系;它们具有较强的反应活性,几乎没有背景发光,具有较好的水溶性;采用罗丹明B对其分析性能进行了评价,其检出限可达1×10-7～5×10-7mol/L。他们对该化合物的非磺酸化物也进行了研究,其检出限可达9×10-8～5×10-7mol/L。1.4　1,2-二氧杂环丁烷类　　1,2-二氧杂环丁烷类的化学发光也研究得比较多,这类化合物经单分子转变后生成两个含羰基的产物,产物之一可生成激发态。由于许多化学发光和生物发光的中间体都可能生成这种过渡态而早已受到人们的注意。Kamtekar等利用碱性磷酸酶(ALP)催化1,2-二氧杂环丁烷的磷酸盐衍生物的水解产生化学发光来测定Zn(Ⅱ)、Be(Ⅱ)、Bi(Ⅲ)。1.5钌(II)的联吡啶(bipy)及邻菲咯啉(phen)配合物　　Ru(bipy)32+是一种被广泛研究的化合物,其化学发光及电致化学发光应用逐渐增多；Ru(phen)32+也可用作化学发光试剂。何治柯等用Ru(bipy)32+及Ru(phen)32+化学发光法在酸性介质中测定草酸、酒石酸及5种羟基酸等。其化学发光反应机理也已有报道。1.6其它发光试剂　　除了上述几类主要的化学发光试剂外,还有芳基咪唑类如洛粉碱、多元酚类如连苯三酚，在H2O2存在下产生发光。四-(N-烷基氨基)-乙烯类化合物也会产生化学发光,常见的有四-(N-二甲基氨基)-乙烯,它在潮湿空气中爆炸,产生明亮的化学发光。此外还有七叶灵、硅氧烯、对氯苯基溴化镁、反式-1-(2′-甲氧基乙烯基)芘、联苯酰基过氧化物、金刚烷1,2-二氧杂环丁烷以及氢过氧化二甲基吲哚等,文献均有介绍。最近Ma等研究了杯芳烃(calixarene)衍生物的光谱特性,合成了3种衍生物,对-(2,3-二氢-1,4-酞嗪二酮-5-偶氮)杯芳烃,n=4,6或8。其特点是水溶性好,象鲁米诺一样,在催化剂存在下,与氧化剂反应发光,可用于测定H2O2。

电致化学发光作为一种分析技术,不仅可用于化学分析,而且正在被越来越多地用于生物检测和传感技术中。电致化学发光生物分析是最近发展起来的一种新型的分析方法,是化学发光、电化学、生物分析、微电子技术以及传感技术相结合的最新产物,主要用于临床、农业、环境监测等领域。电致化学发光(ECL) 是某些具有电致化学发光活性的物质处在一定的电位时,与溶液中氧化还原物质作用生成的不稳定激发态迁移回基态时所导致的化学发光。ECL 生物传感器技术主要应用在免疫标记技术、生物化学固定化技术与微细加工技术等方面。　 电化学发光免疫 免疫分析研究的物质基础是抗体和抗原,对抗原和抗体进行特殊标记是免疫技术的关键。 电致化学发光免疫分析技术( ECL IA) 是利用化学发光剂作为标记物标记抗体或抗原而形成稳定的复合物。当这种复合物与被检测物中对应的抗原或抗体结合后,在加电电极的作用下激发出特异的光,根据发光的强度可检测出被测物的浓度等参数值。ECL 免疫分析可分为直接法、双夹心法和竞争法等3 种方法,其中直接法主要用于检测抗体,双夹心法主要用于测定大分子抗原,竞争法主要用于测定小分子抗原。电致化学发光技术正被越来越多地应用在生物分析领域中,用于蛋白质、激素、肿瘤、病毒、毒物等成分析检测,服务于临床、卫生、食品、环保和军事等领域。 电化学发光与生物化学固定化技术 在20 世纪90 年代中期, 有研究者将磁珠 应用到电致化学发光免疫检测中,其原理是使用物理吸附、包埋和共价结合等生化固定方法通过聚合物将抗体(抗原) 固定在纳米级的磁珠上,注射到装有电极的反应池中,电磁场将磁珠吸附在反应池的底部 然后将待测物质溶液注射到反应池中,待测物质溶液中的目标抗原(抗体) 与固定在磁珠表面的抗体(抗原) 结合,其它的非目标物质则被从反应池中冲洗掉 再将发光剂标记的抗体(抗原) 注射到反应池中,最终形成偶联磁珠抗体(抗原)2待测目标抗原(抗体)-发光剂标记的抗体(抗原) 夹心复合体。形成的复合体在加电电极的作用下会产生特异性发光,通过检测发光强度,可测出待测目标物质的含量。磁珠固定方法有效解决了免疫检测过程中非特异物质有效分离的问题,大大提高了检测灵敏度,在免疫检测中得到越来越广泛地使用。磁珠ECL 技术不仅可用于免疫检测中,还可用于酶及底物、DNA 等对象的分析和检测。　 电化学发光与微细加工技术 由于生物芯片特别是基因芯片技术的发展,越来越多的人看到了ECL 技术应用到生物芯片上的诱人前景。ECL 反应池、电极被制作得越来越小,分析所需的样品量也随之越来越少,而检测精度却越来越高。半导体光刻技术、厚膜薄膜技术、丝网印刷技术等应用于其它高科技领域的技术被引用到制作电致化学发光分析系统中,为该系统拓展了一个全新的发展空间,使系统的集成度和微型化等性能得到大幅度的提高。 Fiaccabrino等设计了磁珠流动注射式ECL 检测装置,在5 mm ×6 mm 的硅基片上制作了微型的ECL 探针,包括电极、反应池和电传感器。电极为金或铂金的插指电极,用光刻的方法刻蚀在硅基片上,1 mm 长即包含125 对电极,每个电极宽3. 2μm ,电极间距0. 8μm 反应池用覆盖在硅片上环氧树脂刻蚀而成,光电二极管紧贴反应池,接收ECL 反应产生的光,以检测被测物质的含量,反应池可容纳的溶液量为2. 25μL 。该装置被用于检测可待因,线性范围为0. 1～2 mmol/ L 用于检测葡萄糖,其线性范围为50～500 mol/ L 。 随着毛细管电泳(CE) 芯片技术的发展,ECL 与CE 芯片的联合应用的报道越来越多。电致化学发光检测技术应用到生物检测和分析中,为生物检测提供了一种全新的手段。由于这种方法具有精度高、应用范围广和易于集成等优点,使它将成为生物技术领域的一种主要检测方式。

化学发光现象是一种常见的自然现象，利用化学发光测定化学发光反应反应物、催化剂、增敏剂、抑制剂，偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂的方法叫做化学发光法。 　　化学发光是物质在化学反应过程中，其物质分子吸收化学能产生光的辐射现象。

化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象，可以分为直接发光和间接发光。直接发光是最简单的化学发光反应，有两个关键步骤组成：即激发和辐射。如A、B两种物质发生化学反应生成C物质，反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*，处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。这里C*是发光体，此过程中由于C直接参与反应，故称直接化学发光。 间接发光又称能量转移化学发光，它主要由三个步骤组成：首先反应物A和B反应生成激发态中间体C*(能量给予体)；当C*分解时释放出能量转移给F(能量接受体)，使F被激发而跃迁至激发态F*；最后，当F*跃迁回基态时，产生发光。 一个化学反应要产生化学发光现象, 必须满足以下条件: 第一是该反应必须提供足够的激发能, 并由某一步骤单独提供, 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光 第二是要有有利的反应过程, 使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态 第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子, 或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。 　　化学发光分析测定的物质可以分为三类：第一类物质是化学发光反应中的反应物；第二类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂；第三类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。这三类物质还可以通过标记方式用来测定其他物质，进一步扩大化学发光分析的应用范围。 化学发光反应的发光类型通常分为闪光型（flash type）和辉光型（glow type）两种。闪光型发光时间很短，只有零点几秒到几秒。辉光型又称持续型，发光时间从几分钟到几十分钟，或几小时至更久。闪光型的样品必须立即测量，必须配以全自动化的加样及测量仪器。辉光型样品的测量可以使用通用型仪器，也可以配有全自动化仪器。本产品针对辉光型化学发光反应进行检测。

第三部分　化学发光的应用• 无机化合物化学发光分析 1.1 金属离子分析 痕量金属离子对化学发光反应具有很好的催化作用，因而化学发光测定金属离子得到广泛的应用 ( 见表 1) 。但是，由于不同金属离子催化氧化发光试剂时，发光光谱相同，致使金属离子催化化学发光反应的选择性较差。为提高分析的选择性，可采用以下方法 : (1) 利用待测金属离子与干扰离子配合物稳定性不同进行选择性分析，如加入掩蔽剂 EDTA 或水杨酸掩蔽干扰离子 (2) 优化实验条件以减少其它离子的干扰 (3) 稀释样品溶液 (4) 加入敏化剂。但是，当样品中待测物相对于干扰物浓度很小时，上述方法也无济于事，只得进行前处理，常用的分离方法有色谱、溶剂萃取等。 色谱分离的高选择性与化学发光检测的高灵敏度相结合，是一种很有前途的联用技术。关键是流动相的选择，流动相选择得好，不仅可以提高选择性，还可以进行多个离子的同时测定。如用离子交换分离法同时测定 Cr (à ) 和 Cr (? ) 。溶剂萃取也是提高化学发光测定金属离子选择性的一个有效方法。这种方法的主要问题是费时，因为进行化学发光检测前必须将无机物从有机溶剂中反萃取出来，或是将有机溶剂蒸发除去。较好的方法是自动在线溶剂萃取选择性检测待测物。 1.2 其它无机化合物的分析　 化学发光反应中，过氧化氢是最常用的一种氧化剂，因此有关 H 2 O 2 化学发光分析的报道较多 ( 见表 2) ，涉及到鲁米诺、过氧草酸酯及光泽精等化学发光反应。根据鲁米诺化学发光反应制成的 H2O 2 光纤传感器与流动注射法联用，可检测 10nmo l ／ L ～ 1 mmo ／ L 的 H 2 O 2 ，用模拟酶代替辣根过氧化物酶催化鲁米诺发光，检测限可达 5 . 5×10 － 9 mo l ／ L 。根据 ClO - 对鲁米诺的氧化作用，可用于测定 ClO - ，其它物质如 Cl 2 的干扰，可用流动注射法消除。利用停流技术测定水中 ClO - 不必进行前处理。含氮的无机化合物如 NH3 ／ NH +4 ，可将其衍生后用 TCPO 化学发光法检测，线性范围为 2 。 9ug ／ L ～ 6 m g ／ L 。 CN － 能抑制鲁米诺 H 2 O 2 － Cu (II ) 的化学发光，据此可分析测定 CN — 。在低温条件下化学发光分析测定 CN － ，当进样量为 100uL 时，线性范围为 10 － 9 － 10 -7 g ／ mL ，当进样量 20 uL 时，线性范围为 10 － 8 ～ 5×10 -7 g ／ mL 。 • 有机化合物的化学发光分析 2.1 有机酸 有机化合物的同系物结构和性质相似，使单一组分的测定遇到困难，因此有机化合物同系物的分析常与 HPLC 相结合。有机酸的化学发光分析 ( 见表 3) ，一般是先将其衍生成荧光物质经色谱分离后进行化学发光检测。但衍生法有如下的缺点 : (1) 衍生反应不完全 (2) 衍生物稳定性差，要求及时检测 (3) 限制了分离方法和条件的选择。由于衍生产物的性质与待测物不同，导致分离效率和分辨率下降，同时增加分析的时间和劳动强度。在临床医学上，草酸是一个重要的检测项目，可以直接用氧化化学发光反应测定尿液和草酸二乙酯中的草酸盐及游离的草酸。另外还可以测定苯酮尿症病人的尿液的苯丙酮酸的含量，方法是先在碱性条件下将苯丙酮酸氧化成 1 ， 22 二氧杂环丁烷类化合物，然后裂解产生化学发光。另外可以将 Fe （ III ）草酸配合物光解得到 Fe (II ) ，催化鲁米诺－过氧化氢化学发光反应，此法线性范围为 0 . 1 ～ 100uM 。此外酶联偶合反应也可以用于某些有机酸的化学发光分析。 2.2 有机碱　 胺类化合物第一离子化电势呈如下规律 : 伯胺 仲胺 叔胺，并随碳链增长，离子化电势逐渐下降，因此叔胺化合物的检测限较低，达 0 . 28 pM 。胺类化合物的分析 ( 见表 4) ，较多的是经柱前衍生生成荧光衍生物，分离后用过氧草酸盐化学发光体系检测，也可将其生成希夫碱或其它产物氧化而发光。有些碱如肾上腺素等可直接氧化而发光。通常有一个经验规则，假如一物质具有荧光或其反应产物有荧光，该物质一般可发生化学发光反应，但也有例外。嘌呤碱是核酸的基础物质，因此对嘌呤碱的分析测定将推动 DNA 分析方法的发展。在酸性醇液中腺嘌呤与苯甲醛反应，然后用过氧化氢氧化反应产生化学发光，此法具有很好的选择性，线性范围为 1 . 5×10 － 7 ～ 5 . 0×10 － 7 M ，用此法测定鸟嘌呤灵敏度比荧光法高 20 倍。 2.3 　氨基酸　 氨基酸分析方法的改进有利于推动生物技术、基因工程、 DNA 重组和基因克隆等的发展。由于绝大多数氨基酸没有内源荧光特性，因此用过氧草酸盐体系测定氨基酸需将其衍生成荧光物质，但此法避免不了衍生法所固有的缺点。此外亦可通过测定氨基酸与氨基酸氧化酶反应产生的过氧化氢来测定氨基酸的含量，如 L 2 氨基酸经反相色谱柱分离后流经 L 2 氨基酸氧化酶反应器产生过氧化氢，然后用过氧草酸盐体系检测。氨基酸与 Ru (b ipy) 3+3 反应，用流动注射化学发光法检测，相对于脯氨酸和天冬酰胺检测限可分别达到 20 pmo l 和 50 pmo l 。一般来说，仲胺反应产生的的发光强度比伯胺大。对氨基酸上取代基性质研究表明，给电子基有利于增强化学发光强度。 2.4 糖类　 光泽精体系可用于测定一些还原性物质，如乳糖、葡萄糖，用于抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的分析测定有很高的灵敏度。但此法用于复杂样品分析却因干扰多而受到限制。用草酰胺化学发光照相法测定了葡萄糖。在微量滴定板上将草酰胺发光剂、荧光增感剂及 50 uL 试样混合，于 5 m in 内用照相荧光剂测定液斑的发光强度，可检出 100 pmo l 的萄萄糖。 糖类物质测定的另一个重要方法是测定酶反应产生的 H 2 O 2 ，由此对酶底物 —— 葡萄糖、乳糖等进行测定。而酶的固定化技术为此法的发展注入了新的活力。采用物理包埋法将葡萄糖氧化酶固定在聚丙烯酰胺凝胶中并制成酶柱，再将酶柱接入流动注射系统中，用流动注射化学发光法测定由酶促反应产生的 H 2 O 2 ，从而测定人体血液中的葡萄糖，检出限可达 0.1 m g ／ L 。 2.5 类固醇与类酯　 一些特异性酶如类固醇脱氢酶和其它荧光素酶与合适底物反应产生 H 2 O 2 ，通过测定 H 2 O 2 达到分析测定底物的目的。 2.6 药物　 根据药物的不同类型选择不同的化学发光分析方法。目前较常用的方法是直接氧化化学发光。在碱性溶液中用 N －溴代丁二酰亚铵氧化含有酰胺基的药物产生化学发光，如利福霉素等检测限在 1 . 23 m g ／ L ～ 0 . 5 g ／ L 之间。氧化四环素类药物检出限在 0 . 02 － 0 . 04 m g ／ L 之间。

1．鲁米诺（luminol）,异鲁米(isoluminol)和他们的衍生物 鲁米诺（3—氨基—邻苯甲酰肼,1）,异鲁米诺（2）及其衍生物（如氨基丁基乙基邻苯甲酰肼，ABENH,3） 在发光分析中被使用。 在二甲基亚砜中，鲁米诺的量子产率不超过5%，在水溶液中是1%~1.5%。鲁米诺在碱性条件下能被许多氧化剂（例如H2O2,O2,ClO-等）氧化而发出蓝色的光，发光反应的量子产率介于0.01~0.05之间，是一个研究最早，最多，应用最广泛的发光试剂.2．过氧草酸类过氧草酸盐（peroxalate）（酯）包括一大类物质，他们自身并不发光，其化学发光均为敏化化学发光，化学发光反应是芳香草酸值得过氧化氢氧化作用，芳香草酸盐和H2O2芳香草酸盐和H2O2反应形成高能量的中间物。 与鲁米诺相比，过氧草酸盐化学反应的发光效率更高，可达到27%，且在较宽的酸度范围内(PH4~10)都能发光。 过草酸发光体系可用于测定的物质有：（1）待测物质本身是荧光剂，可作为能量接受体和发光体 (2)待测物质遭遇某一反应可产生H2O2等氧化剂而间接被测定；（3）待测物质可被衍生成荧光物质。可见，过氧草酸盐类化学发光法的分析应用还有赖于新荧光衍生剂的开发。

化学发光　　化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象，可以分为直接发光和间接发光。直接发光是最简单的化学发光反应，有两个关键步骤组成：即激发和辐射。如A、B两种物质发生化学反应生成C物质，反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*，处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。这里C*是发光体，此过程中由于C直接参与反应，故称直接化学发光。　　间接发光又称能量转移化学发光，它主要由三个步骤组成：首先反应物A和B反应生成激发态中间体C*(能量给予体)；当C*分解时释放出能量转移给F(能量接受体)，使F被激发而跃迁至激发态F*；最后，当F*跃迁回基态时，产生发光。　　一个化学反应要产生化学发光现象, 必须满足以下条件: 第一是该反应必须提供足够的激发能, 并由某一步骤单独提供, 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光; 第二是要有有利的反应过程, 使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态; 第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子, 或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。　　化学发光分析测定的物质可以分为三类：第一类物质是化学发光反应中的反应物；第二类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂；第三类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。这三类物质还可以通过标记方式用来测定其他物质，进一步扩大化学发光分析的应用范围。　　化学发光反应的发光类型通常分为闪光型（flash type）和辉光型（glow type）两种。闪光型发光时间很短，只有零点几秒到几秒。辉光型又称持续型，发光时间从几分钟到几十分钟，或几小时至更久。闪光型的样品必须立即测量，必须配以全自动化的加样及测量仪器。辉光型样品的测量可以使用通用型仪器，也可以配有全自动化仪器。

化学发光(Chemiluminescence)是指某些化学反应中发出可见光的现象. 其发光机理是：反应体系中的某种物质(反应物、产物、中间体或荧光物质)的分子吸收了反应所释放的能量而由基态跃迁至激发态，然后再从激发态返回基态，同时将能量以光辐射的形式释放出来，产生化学发光. 其过程可以表示为：　　A+B→C*+D, C*→C+hν或A+B→C*+D,C*+F→F*+C,F*→F+hν.将化学发光反应应用于分析化学，根据某一时刻的发光强度或反应的发光总量来确定体系的相应组分含量的分析方法叫化学发光分析法. 最早发现的化学发光现象发生在生物体内，即荧火虫，现在称之为生物发光(Bioluminescence). 到了十九世纪后期人们发现简单的非生物有机化合物也能产生化学发光. 1877年，Radziszewski［1］发现洛汾碱(2，4，5-三苯基咪唑)在碱性介质中被过氧化氢等试剂氧化时发出绿色的光. 1928年，Albrecht［2］观察到鲁米诺(3-氨基苯二甲酰肼)在碱性介质中的化学发光行为. 1935年，Gleu和Petsch［3］第一个报告了光泽精(N,N-二甲基二吖啶硝酸盐)与过氧化氢反应产生化学发光. 由于大多数化学发光非常微弱，且稍纵即逝，并由于检测器的限制，使得化学发光反应被用于分析化学，建立化学发光分析法，则是到了本世纪六十年代. 国外化学发光分析方面的研究在六、七十年代得到迅速发展，现在，化学发光分析的研究和应用仍然是当前痕量分析领域的一个十分重要的研究方向. 国内化学发光分析方面的研究起步于八十年初，自章竹君及其研究小组在鲁米诺的合成、发光仪的研制方面取得突破性的进展以来，短短十多年时间，国内化学发光分析的研究有了很大的发展. 他们对鲁米诺化学发光反应的研究、偶合化学发光反应的研究都比较深入细致，有关高效液相色谱化学发光检测的分析方法、化学发光免疫分析法和生物的超微弱发光在生命科学、临床医学中的应用都已成为研究的热点. 　　由于化学发光分析不使用任何光源，避免了背景光和杂散光的干扰，降低了噪声，大大提高了信噪比，因而，化学发光分析法一般都有很高的灵敏度，通常可测定纳克级或皮克级的化学成分.　　产生化学发光的反应必须具备两个条件，一是该反应能释放出一定的能量，且释放出的能量可以被某种反应产物或中间体所吸收，使之处于激发态；二是这种激发态产物应具有一定的化学发光量子产率，或者可以将其能量有效地转移给某种荧光物质，产生光辐射. 基于此，并不是任何化学反应都能产生化学发光反应，因此，如果测量条件适当，化学发光分析会有足够的选择性. 　　测量化学发光强度，多采用光电转换装置，用函数记录仪或数显装置，记录化学发光的相对强度. 以最大发光强度(曲线的峰高)定量被测组分的浓度. 　　由于流动注射分析(FIA)技术的发展，流动注射化学发光仪也广泛使用. 配备微机系统，自动进样，储存记录，打印结果，使化学发光分析的速度更快.　　研究和应用最早的化学发光体系，以有机物作为发光剂的情况较多，如目前研究较为成熟的有鲁米诺、光泽精、洛汾碱、过氧草酸酯等，它们的发光效率较高，现已广泛用于多种金属和非金属无机离子及有机物的分析，近几年，一些新的发光剂及发光体系的研究成功，使化学发光分析呈现出新的局面.

化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型： 　　（一）化学发光酶免疫测定 　　化学发光酶免疫测定（CLEIA）是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大，具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶，发光底物为dioxetane磷酸酯，固相载体为磁性微粒贵州学|习网搜集整理。 　　（二）化学发光免疫测定 　　化学发光免疫测定（CLIA），是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物，在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。 　　用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件： 　　1.能参与化学发光反应。 　　2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。 　　3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。 　　4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。 　　鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。 　　（三）微粒子化学发光免疫分析 　　该免疫分析技术有两种方法：一是小分子抗原物质的测定采用竞争法；二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒极微小，其直径仅1.0%26mu;m，这样大大增加了包被表面积，增加抗原或抗体的吸附量，使反应速度加快，也使清洗和分离更简便。其反应基本过程：（1）竞争反应：用过量包被磁颗粒的抗体，与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育，其免疫反应的结合形式有两种，一是标记抗原与抗体结合成复合物；二是测定抗原与抗体的结合形式。（2）双抗体夹心法：标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式，即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。 　　（四）电化学发光免疫测定 　　电化学发光免疫测定（ECLI）是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应，包括电化学和化学发光两个部分。分析中应用的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺（NHS）酯，可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合，制成标记的抗体或抗原。ECLL的测定模式与ELISA相似。其基本原理是发光底物二价的三联吡啶钉及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H+而成为强还原剂，将氧化型的三价钌还原为激发态的二价钌，随即释放光子而恢复为基态的发光底物。这一过程在电极表面周而复始地进行，不断地发出光子而常保持底物浓度的恒定。

昨天发了一些关于化学发光仪的图片，首先声明绝非灌水，也不是推销仪器。我个人认为做化学发光，就和化学发光仪不能分开，就像做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]一样，谈论仪器是一样的道理，每个做化学发光的同行都是用过发光仪，我们可以互相交流经验，比如仪器的灵敏度，软件界面是否友好，操作方法是否简单的。或者有什么需要改进等等。这些都是在仪器网上截取下来的资料。希望大家来讨论，交流经验。也可以把你用过的仪器一些技术参数登陆上去。以后在大家选择的时候也提供一些参考。