量基因扩增分析仪

PCR扩增线粒体DNA(mtDNA)的序列分析正迅速成为法医测试中公认的手段。法医mtDNA应用关键性的第一步，是确定这些扩增产物片段大小、纯度和浓度是否适合序列分析。Agilent 2100生物分析仪和DNA 500 LabChip能够准确而精密地测定 DNA片段的大小和浓度。在这篇应用报告中，用生物分析仪在序列测定前快速而有效地分析了PCR扩增的DNA片段。

PCR扩增过程中，每一轮循环均检测一次荧光信号的强度。随着反应循环次数的不断增加，所扩增的目的基因片段呈指数规律增长，反应中产生的荧光信号强度与PCR产物的数量呈正比。仪器实时检测和采集的荧光信号，随着时间和循环数的不断增加，产生一条反映实时荧光信号强度变化的曲线，称为扩增曲线。扩增曲线以循环数为横坐标，荧光强度为纵坐标。

实验方法原理TA克隆 系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3' 末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3' T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点（MCS）中。 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。 T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步：首先，T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物；然后，酶-ATP复合物再结合到具有5' 磷酸基和3' 羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最hou产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。连接反应通常将两个不同大小的片断相连。因为DNA片断有两个端点，所以切割时出现两种可能，一种是单酶切，另一种是双酶切，这两种酶切方法在基因工程操作中都经常用到。对于单酶切来说，载体与供体的末端都相同，连接可以在任何末端之间进行，这样就导致了大量的自连接产物。为了减少自环的高本底，可对载体进行5' 除磷酸处理，原理是连接酶只能连接DNA片断的3' OH末端与5' 端，所以除磷后载体不会自环。一旦有外源片断插入时，由外源片断提供5' 端就能与载体进行连接。通过这种方法可大大减少由载体的自环造成的高本底。对于双酶切来说，无论载体与供体同一片段上都有不同的末端，这样就避免了载体与供体的自环，能使有效连接产物大大增加。双酶切的另一个特点是能将供体分子定向连接到载体上。 连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。因此采取折中的温度，即12-16℃，连接12-16h（过夜），这样既可最da限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。Taq DNA酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱基，可以与pGEM-T Easy Vector 末端游离的T碱基互补形成环状重组T质粒。

环介导等温扩增( LAMP) 技术是近年发展起来的一项新的快速核酸恒温扩增技术，具有高效、快速、特异、易检测、易操作等特点，自面世以来被科学家认为是能替代常规PCR 的一项扩增技术，非常适用于现场检测和基层检测。本文就LAMP 技术的原理、特点、进展及其在病原微生物检测中的应用进行了简要的概述。

引物设计：引物长度适当，18-24mers，并保证序列独特性，以降低序列在非目的片段中存在的可能性，但长度大于24核苷的引物并不意味着有更高的特异性，较长的序列可能会与错误配对序列杂交，反而降低特异性，而且长序列比短序列杂交慢，影响产量； 引物浓度：引物的浓度会影响特异性。最佳的引物浓度一般在0.1到0.5μM。较高的引物浓度会导致非特异性产物扩增

针对畜牧养殖行业以及饲料行业，LUMEX为该行业客户打造即用的行业用户方法包。实时荧光定量PCR分析仪AriaDNA结合先进的实时荧光微芯片技术，配合专用方法试剂包，使病原菌及转基因片段分析饲料源性成分，以及动物病害疫情分析检测变得简单快捷。可用于动植物病害测定，饲料原料转基因鉴别，饲料的源性成分分析。满足国标SN/T 4781-2017、SZDBZ268-2017及SNT 3731.4-2013对于动物源及植物园饲料的源性分析要求。

PCR仪一般分为普通PCR仪、梯度PCR仪、原位PCR仪以及实时荧光定量PCR仪四类。普通PCR仪是指一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，能够应用于简单的目的基因退火温度的扩增。选购基因扩增仪的时候，可根据它的应用领域和特点，选择适用的仪器设备。

通过数字PCR扩增反应直接得出转基因植物外源基因（品系特异序列）和植物内源基因的拷贝数含量。样品DNA中的外源基因和内源基因的拷贝数比值（百分数）即为样品中相应的转基因植物品系的相对百分含量。

分析级制备纯化 行业特点：大多数单次制备纯化量较少，可采用分析级纯化方案 半制备级纯化平台 适合大制备量核苷酸纯化，单次制备量可达200~2000 OD QC质检 HTCS核酸质谱检测系统（基于LTQ系列质谱） DEL-核酸质谱检测系统（基于LTQ质谱） 基因扩增 Realtime PCR----荧光定量PCR仪 核酸药物高端研究 Thermo LTQ-Orbitrap XL高分辨质谱系统

核酸检测是新冠肺炎确诊的重要标准，也是精准医疗的基础，常被应用于传染病检测、遗传病诊断、肿瘤风险预测、食品安全检测、海关检疫、法医鉴定等领域。

近年来细胞治疗领域取得的进步大大提升了对T细胞扩增技术的需求。T 细胞必须能够迅速扩增，才能在维持高存活率和T细胞属性的同时达到高细胞密度。

PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。

使用Archimed时间分辨荧光定量PCR系统对核酸PCR进行扩增，并对扩增产物进行熔解曲线分析其特异性。应用手册内容涵盖整体操作流程，如软件操作，数据分析，以及注意事项等。

目的通过比较两种PCR检测的灵敏度，选择不同条件下经济准确的方法检测病原微生物。方法制备标准样品用以两种PCR扩增条件的确定，通过目的基因片段设计引物，扩增菌体裂解液上清。PCR产物分别通过扩增曲线和琼脂糖电泳检测目的条带的存在，以最低检测的条带浓度作为两种不同PCR检测的最高灵敏度，通过比较，选择在不同的限制条件下较为方便经济的方法检测病原微生物。结果实时PCR中裂解菌液上清经过10^-8倍稀释后仍能观测到扩增曲线的存在。而普通PCR产物经过琼脂糖电泳染色后观测只能观测到10^-5浓度的条带，灵敏度远不及RT-PCR。结论荧光PCR检测灵敏度较高，普通PCR琼脂糖电泳方法只能达到RT-PCR检测灵敏度的一半但比较经济。

以抗蝶目害虫性转基因玉米为研究对象，使用玉米内源性基因SSIIb和转基因M810特异性引物进行PCR扩增，并运用岛津微芯片电泳仪MultiNA进行PCR产物的分析，建立了转基因玉米的鉴定方法。该方法操作简单，灵敏度高，可用于快速、高通量的转基因玉米的定性分析。

本应用介绍如何使用Archimed荧光定量PCR系统进行基因表达相对定量分析，包括软件的详细操作流程，以及应用案例。

第三代PCR技术-数字PCR，作为分子诊断领域的佼佼者，在病原体核酸检测方面彰显出巨大优势。naica® 微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度，融合传统微滴式和芯片式优势，被称为下一代数字PCR技术。

裙带菜(Undaria pinnatifida)配子体经2.5 L气升式光生物反应器快速营养增殖，通过基因枪法将携带草丁膦抗性基因(bar)的载体转入扩增后的配子体，经草丁膦筛选，获得抗性克隆。提取抗性克隆配子体基因组总DNA，经PCR和PCR Southern检测，结果显示60%抗性克隆可检出bar基因，表明bar基因是裙带菜配子体基因工程有效的筛选标记。

寡核苷酸是一类短链核苷酸的总称（包括脱氧核糖核酸及核糖核酸），如用于基因扩增和基因诊断的 PCR 引物和反义核酸，介导基因沉默的小干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）等，努力研究开发基因靶向治疗药物用于治疗病毒、肿瘤和遗传疾病。

快速检测禽流感在世界范围内的重要性是不可低估的。近年来，PCR和RT-PCR技术的发展加快了筛选过程，但样品制备工作相对滞后。Aurora Biomed通过验证VERSA 110 NAP/PCR构建工作站来解决这一问题，该工作站用于使用市售试剂盒自动执行流感病毒A/H5N1 RNA检测所涉及的样品制备步骤。对禽流感基因大小合适的扩增产物的检测表明，VERSA工作站可以成功地用于a/H5N1基因检测的自动化样品制备。

PCR技术是现代分子生物学最基础的技术之一，在实现扩增效果的同时如何缩短PCR的实验时间成为实验工作者亟待解决的问题。本文从高速PCR的概念入手，阐述了实现高速PCR仪器技术的原理、优势，及可能的应用。指出了高速PCR技术的核心在于，不仅要提高PCR 仪器的升降温速率，更重要的是提高PCR样品温度与金属样品槽的一致性，从而达到缩短变性，退火，延伸等停留时间的目的，进而大大的缩短PCR时间。同时也指出，高速PCR对提高反应特异性带来的好处等。

Namocell单细胞分离仪能够快速、准确、高效地将目的单细胞分离至孔板中，并且能够与后续的基因扩增及测序进行无缝对接。

"全自动核酸质谱分析系统基本原理是将预处理后的PCR扩增产物，通过仪器点样至带有基质的芯片上，使其与基质结合形成共结晶，采用基质辅助激发技术，使样品离子加速进入飞行管，将不同目标离子进行质量分离，离子质量越小，飞行速度越快，也就更早到达检测器，不同分子量的核酸分子因到达检测器的时间不同而得到检测，根据标准物质标定出不同质量数的特征谱图，经过软件的分析计算，实现对样品结果的目标判断。该系统整合了PCR技术的高灵敏度、芯片技术的高通量、质谱技术的高精确度，以及生物信息的智能化分析功能，为临床研究与应用提供了另一个技术平台。具有多重检测、低成本、高通量、检测周期短、灵活性高、准确度高、高度自动化等特点。适用于遗传病筛查、药物基因组学、病原体检测、肿瘤早筛等多个领域的基因检测。"

该研究应用naica?微滴芯片数字PCR系统对西瓜CITST2基因的拷贝数进行检测，证实了不同西瓜种质之间CITST2基因拷贝数存在差异，甜西瓜种质中CITST2基因的拷贝数增加可能是造成糖含量增加的原因。

PCR技术是一种体外扩增特定DNA序列的方法。该技术以其高特异性和灵敏度等优点已广泛用于各领域。本文主要对PCR技术的原理及其在一次性使用卫生用品微生物检测的应用前景等方面进行综述。

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菌落PCR出现假阳性的原因：可能使用了错误的PCR鉴定引物、样品间交叉污染、PCR试剂的污染、PCR扩增产物的污染、气溶胶污染以及实验室中克隆质粒的污染。‌

聚合酶链式反应(PCR)是一种在分子生物学中广泛使用的方法，用于制造特定 DNA 片段的多个拷贝。PCR 可以使特定目标/测试样品的少量 DNA (低至单个拷贝)成指数扩增，从而产生该特定 DNA 片段的数千到数百万个拷贝。

质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法：碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。

生化试验：进行一系列生化试验，如糖发酵试验、氧化酶试验、动力试验等，以确定菌种。分子生物学方法：使用PCR、实时PCR或其他分子生物学技术对特定基因进行扩增和鉴定。