牛奶中微生物检测

[摘要] 目的 建立链霉素在牛奶中残留的微生物学检测方法。方法 采用微生物测定法定量检测牛奶中链霉素残留量，样品前处理用10%（m/v）三氯乙酸作为提取液，采用冷冻离心，使牛奶中残留链霉素得到提取和分离。结果 链霉素在0.10~3. 20u/mL的浓度范围内具有良好线性关系（r=0.9981）,牛奶中3种添加浓度0.20、0.80、1.60 u/g的平均回收率为 97.6%（n=9）， 3种添加浓度0.20、0.80、1.60u/g 各自的RSD为：1.6 %，3.7 %，1.2 %（n=3）。结论 本方法可用于牛奶中链霉素残留的检测。设备 高速冷冻离心机(Sigma公司)，高压蒸汽灭菌锅（日本TOMY），生化培养箱(SANYO公司)，抑菌圈测定仪ZY-300IV（北京先驱威锋技术开发公司）。

在微生物鉴定领域，与传统的平板计数法、生化反应法相比，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)法具有快速、准确、使用成本低、操作简便等特点。本文使用岛津MALDI-8020结合毅新博创微生物数据库，对牛奶中微生物进行了快速鉴定，检测到的微生物主要包括不动杆菌、乳酸菌及大肠菌群等。

酸度是一个代表牛奶新鲜程度的理化指标，通过它可以评判出牛奶的新鲜程度。正常情况下，新鲜的牛奶是呈弱酸性。如果酸度偏高，说明牛奶受微生物影响的程度更高；酸度偏低，则表示牛奶更新鲜。所以，快速准确的检测出牛奶的酸度指标是生产厂家非常关注的问题。在本实验中依据GB/T 5009.239-2016，采用T960全自动电位滴定仪并搭配自动进样器去检测牛奶的酸度，滴定速度快，检测样品数量多，滴定结果准确，是检测该类样品的不错选择。

以下是牛奶兽药残留快速检测仪检测牛奶中兽药残留的实验操作步骤：准备样品：从所需检测的牛奶中取出适量样品，通常为10毫升。将样品转移到一个干净的试管中。样品预处理：

牛奶分析仪检测牛奶中蛋白质操作步骤

GB 29688-2013 食品安全国家标准 牛奶中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法规定了牛奶中氯霉素残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶中氯霉素残留量的检测。

要使用牛奶兽药残留快速检测仪检测牛奶中抗生素残留，可以按照以下实验操作步骤进行：准备材料和设备：牛奶样品牛奶兽药残留快速检测仪实验容器温水实验笔记本或记录表格

通过电子鼻系统检测在羊奶中掺入不同比例的牛奶的混合物中挥发性物质的响应值，利用主成分分析法（ PCA） 及线性判别分析法（ LDA） 对羊奶牛奶混合物的挥发性成分进行分析。结果表明: 电子鼻各感应器对于原料羊乳和牛乳及杀菌羊乳和牛乳的反应值均不同。对于生奶和杀菌奶，PCA 和LDA 分析均能够区分羊奶中混入不同比例的牛奶，具有较好的区分性。

喹诺酮类药物和庆大霉素均为高效、广谱抗菌药物，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抗菌效果，是中国畜牧业和水产业中常用的两类兽药。由于这两类药物在动物源性食品中的残留可能导致对人类健康的危害，因此，为了保护消费者的健康，研究和制定动物源性食品中同时检测这两类药物的残留检测方法对完善中国的食品安全监测体系具有重要意义。 【方法】建立了同时检测牛奶中 13 种喹诺酮类和庆大霉素残留的胶体金免疫层析方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，并对喹诺酮类和庆大霉素单克隆抗体按比例进行混合标记。同时， 采用方阵法系统研究了胶体金标记这两类抗体时的 pH 值和抗体用量对灵敏度的影响，并对这两类药物抗原的包被条件进行选择确定。 在此基础上研发出可同时检测牛奶中 13 种喹诺酮类药物和庆大霉素的胶体金快速检测试纸条，试纸条采用直接竞争法原理。

喹诺酮类药物和庆大霉素均为高效、广谱抗菌药物，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抗菌效果，是中国畜牧业和水产业中常用的两类兽药。由于这两类药物在动物源性食品中的残留可能导致对人类健康的危害，因此，为了保护消费者的健康，研究和制定动物源性食品中同时检测这两类药物的残留检测方法对完善中国的食品安全监测体系具有重要意义。 【方法】建立了同时检测牛奶中 13 种喹诺酮类和庆大霉素残留的胶体金免疫层析方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，并对喹诺酮类和庆大霉素单克隆抗体按比例进行混合标记。同时， 采用方阵法系统研究了胶体金标记这两类抗体时的 pH 值和抗体用量对灵敏度的影响，并对这两类药物抗原的包被条件进行选择确定。 在此基础上研发出可同时检测牛奶中 13 种喹诺酮类药物和庆大霉素的胶体金快速检测试纸条，试纸条采用直接竞争法原理。

将电子鼻应用于对掺假牛奶的检测，旨在寻求一种快速有效的方法以实现对牛奶的质量监控。实验过程是：纯牛奶中掺入不同比例的奶粉奶，并用电子鼻检测1—7d的气味；纯牛奶中掺入不同体积的蒸馏水并用电子鼻检测。将检测结果用LDA和PCA方法分析。在LDA和PCA分析图中可以得出如下结论：电子鼻可以准确地区分纯牛奶与奶粉奶。当纯牛奶与奶粉奶以不同的比例混合后，电子鼻根据气味的浓度区分它们。在第1～3天，LDA分析图中各组样品根据纯牛奶和奶粉奶的混合比例有规律地分布；当纯牛奶中掺入不同体积水时，电子鼻能准确地区分它们。在PCA分析图中．高浓度奶与低浓度奶被明显地区分．可以籍此来判别牛奶的浓度。电子鼻能区分存放1~4d的牛奶．不能区分存放5～7d的牛奶。随着存放时间的延长，电子鼻可以根据牛奶气味的变化，在LDA和PCA分析图中反映牛奶的新鲜度。

本实验参考《GB 29688-2013食品安全国家标准 牛奶中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》采用睿科Fotector Plus全自动固相萃取仪进行净化，睿科Auto EVA 80全自动平行浓缩仪进行浓缩，高效液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。在添加浓度为0.1～5.0 µ g/kg范围内，回收率为78%～89%，相对标准偏差小于10%，准确度和精密度均符合残留分析要求，可以满足牛奶中氯霉素残留量的检测需要。

本文通过检测牛奶中的青霉噻唑酸钾，单接检测牛奶中是否添加了β-内酰胺酶。用4个不同浓度标准品进样，得到校准曲线关系数为0.9999，检测限为6.05μg/L,定量限为18.34μg/L。

本文通过检测牛奶中的青霉噻唑酸钾，单接检测牛奶中是否添加了β-内酰胺酶。用4个不同浓度标准品进样，得到校准曲线关系数为0.9999，检测限为6.05μg/L,定量限为18.34μg/L。

微波消解前处理方法是检测牛奶中的Pb等重金属及有害物质检测的最佳方法，应用TOPEX+全能型微波化学工作平台的快速高效性以及超高压消解罐的良好密闭性，确实保证了Pb等重金属及有害物质分解完全，极大的提高了测定结果的准确性、平行性和可靠性。

本方法规定了牛奶中喹诺酮类药物残留量检测的高效液相色谱测定方法。本标准适用于牛奶中达氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星药物残留量的检测。（本实验样品为牛奶）。参考标准：《GB 29692-2013 牛奶中喹诺酮类药物多残留的测定 高效液相色谱法 》。

牛奶是一种营养丰富、易于消化吸收的食品。其营养因素全面，包括了：水，脂肪，蛋白质，糖类，无机盐等。牛奶中的糖类物质种类繁多，99%为乳糖。乳糖的检测方法多为国标中的直接滴定法，该方法对操作条件、加热温度都有要求，且操作费时。因此，建立一种简单快速、准确的乳糖测定方法，对乳品加工企业具有重大意义。

牛奶是一种营养丰富、易于消化吸收的食品。其营养因素全面，包括了：水，脂肪，蛋白质，糖类，无机盐等。牛奶中的糖类物质种类繁多，99%为乳糖。乳糖的检测方法多为国标中的直接滴定法，该方法对操作条件、加热温度都有要求，且操作费时。因此，建立一种简单快速、准确的乳糖测定方法，对乳品加工企业具有重大意义。

检测牛奶中硫氰酸钠含量的实验通常是为了检测牛奶中是否存在过量的添加物。下面是一般性的操作步骤，但请务必在进行实验前详细阅读所使用试剂和仪器的操作手册，以确保正确操作。注意：实验中应遵循安全操作规范，佩戴适当的防护装备，操作在清洁的实验环境中进行。材料与试剂：牛奶样品硫氰酸钠检测仪硫氰酸钠试剂水浴或加热装置试剂瓶和容量瓶移液枪或注射器显微镜或分光光度计实验器材（试管、移液枪尖等）

冷超滤或微过滤牛奶：成分差异对其凝胶功能的影响的系统比较Cold ultrafiltered or microfiltered milk retentates A systematic comparison of the effects of compositional differences on their gelation functionality

本文将电子鼻用于对掺加了奶粉奶和水(蒸馏水)的牛奶的检测和区分，旨在寻求一种快速有效的方法以实现对牛奶的质量监控。

牛奶经常发生掺假事件，这已经引起了生产者和消费者的广泛关注。一些常见的牛奶掺假物包括水、乳清、氢氧化钠、尿素、三聚氰胺及其他潜在有害物质。通过掺假，人为地使牛奶体积增加或是掩盖低劣的质量，最终都是为了获得经济利益。 鉴于此，人们非常关注能够快速、便捷地检测牛奶是否被掺假以及测定掺假物 含量的分析方法。在最近发表的一篇论文中，研究者采用 Agilent Cary 630 FTIR 光谱仪对牛奶中的掺假物进行了测量，结果表明对于这些测定而言，中红外 光谱系统优于近红外 (NIR) 光谱系统。借助最新的、易于使用的专业 FTIR 分析仪，可以筛查牛奶中的掺杂物并测定其 含量，比传统的分析方法更简单快捷。这些 FTIR 分析仪设计用于生产现场，不需要经验丰富的操作人员，为乳品业检测提供了提高生产率的有效方案。

使用蛋白质检测仪来测定牛奶中蛋白质含量的实验操作步骤如下：样品准备：准备需要测试的牛奶样品，可以是商业牛奶或自制牛奶。如果需要，对样品进行适当的均匀搅拌或摇匀，以确保样品的均匀性。仪器准备：确保蛋白质检测仪已经正确设置和校准，按照仪器说明书的要求进行仪器的准备工作。

牛奶是成人和儿童广泛饮用的饮品，配方奶粉是婴儿的主要营养来源。另外，牛奶和奶粉还广泛应用于食品行业，可用于生产其他食品。由于牛奶的营养价值高、食用范围广，因此许多国家会制定牛奶品质的强制标准，并按照标准和法规进行常规监测。牛奶及乳品制造商、食品制造商需要对牛奶和奶粉中的主要元素、微量元素和污染元素进行分析，从而达到标示的合规性要求、监测营养品质、保证安全，防止有毒元素的污染。样品的元素浓度水平从ng/L 到百分比水平不等，这对检测实验室的ICP-MS 仪器提出了不小的挑战，我们需要不断追求更高的样品处理量和样品处理效率。为了对牛奶和牛奶制品进行分析，我们需要掌握一种可靠的检测方法。牛奶含有机和无机成分，属于高固溶含量（TDS）样品。即使利用微波消解，有机成分可以得到完全的消解，但高浓度的无机盐依然留在溶液当中。牛奶通常含有高浓度的磷（P）、钾（K）、钙（Ca）和中高浓度的钠（Na）和镁（Mg）。在众多可用的元素分析技术当中，只有ICP-MS 能够快速地测量同一样品中不同浓度水平的元素。珀金埃尔默公司的NexION® 2000 ICP-MS 具备多项应用优势，其中之一就是非常高的基体耐受性，可应对高TDS 样品。这是由于NexION 2000 配备了独有的全基体进样系统（AMS）1，它是一种创新型氩稀释系统，可在气溶胶达到等离子体之前将其精确稀释到1至200倍。具备了这一功能，ICP-MS 就能在不进行离线稀释的条件下引入高TDS样品，从而免去了这一步骤可能带来的污染和稀释误差问题。本文介绍了NexION 2000 ICP-MS 同时分析牛奶样品中的主要元素和微量元素的应用，证明了AMS的优势。针对多原子离子干扰采用碰撞模式，同时使用AMS 减少进入等离子体的TDS水平，确保将基体效应降至最低。这种先进的方法简单且快速，并在多种牛奶样品的有证标准物质与加标回收率研究中得到了论证。

牛奶中氯化物的含量随细菌感染的增加而升高，对于乳房患病的奶牛所产的奶，其氯化物含量也远高于正常值。因此，氯化物含量是牛奶质量监测的一个重要指标。中华人民共和国国家标准《GB 5009.44-2016 食品中氯化物的测定》中就对乳品中的氯化物含量测定方法有明确的规定，本文按照标准中的方法用电位滴定仪测定牛奶中氯化物的含量，操作简单，结果准确。

本方案参考《GB/T 22966-2008 牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，采用高氯酸溶液对目标化合物进行提取，HLB固相萃取柱净化，甲醇洗脱，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。整个方法具有良好的平行性与准确性，可用于对牛奶样品中磺胺类药物的检测。

本应用重点介绍了一种 10 分钟的分析方法，用于精确定量猪肉和牛奶中 12 种受法规监管的兽药化合物。该方法将 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱仪与配备 ESI 离子源的 Agilent Ultivo 三重四极杆液质联用系统结合使用。根据全球法规的规定，本方法选择用于评估的 12 种兽药化合物最大残留限量 (MRL) 高达1000 µ g/kg，需要进行分析的浓度高达 MRL 的 5 倍。Ultivo 的直观设计和易维护性使该系统非常适合用于上述兽药的高通量检测。选择猪肉糜和牛奶代表脂肪和水含量较高的多种基质。该方法超出了全球法规规定的灵敏度要求，该方法中所有兽药化合物均具表现出高精度 (RSD% 14%)。

牛奶中酸度增高，主要是微生物的活动的结果。通过测定牛奶的酸度即可确定牛奶的新鲜程度，同时可反映出乳质的实际状况。《GB 19645-2010 食品安全国家标准 巴氏杀菌乳》中规定全脂巴氏杀菌乳酸度（° T）为12-18，《GB 25190-2010 食品安全国家标准 灭菌乳》中规定全脂灭菌乳酸度（° T）为12-18，《GB 19302-2010 食品安全国家标准 发酵乳》中则规定全脂发酵乳酸度（° T）≥ 70.0，以上国标表明不同乳制品对于酸度有不同的要求，所以需要根据检测结果对应不同的种类要求去判断乳制品的品质状况。我们采用《GB 5413.34-2010 食品安全国家标准 乳和乳制品酸度的测定》中电位滴定法去测定牛奶的酸度，此法操作方便、准确度高。

适用于食品中q化可的松的测定。（该实验选用基质为牛奶）参考标准：《农业部 1031号公告-2-2008 动物源性食品中糖皮质激素类药物多残留检测 液相色谱-串联质谱法》

离子色谱一紫外法检测牛奶中三聚氰胺的方法。利用乙腈沉淀牛奶中的蛋白，十八烷基(ODS)固相革取柱对上清液中的三聚氰胺进行富集。选用SH-Cation 2阳离子交换色谱柱，以甲烷磺酸(MSA)作淋洗液，240nm紫外波长下进行检测。该法在0．10～10．0mg／L范围内线性关系良好，Ⅳ为0．9998，检测限为O．50 u g／L，加标回收率在92．0％-99．8％之间。方法简便易行，灵敏度高，结果准确。