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菌落总数的快速测定方法1 适用范围:可用于各类食品及原料中菌落总数的测定。也可用于与食品接触的容器、操作台和其他设备表面的卫生检测。2 方法原理:将营养培养基、凝胶和氯化三苯基四氮唑(TTC)显色剂等加载在试纸片,经加样、培养后,细菌菌落在测试片上显现出红色菌斑,通过计数报告结果。3 操作方法3.1样品处理:无菌称取样品25g(或25mL)放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内,经充分振摇(均质)做成1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,用1mL灭菌吸管反复吸吹制成1:100的稀释液。以此类推,做出1:1000等稀释度的稀释液,每个稀释度更换一支灭菌吸管。3.2接种:一般食品选2~3个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如食用纯水和矿泉水等)可直接用原液检测。将测试片放在水平台面上,揭开上面的透明薄膜,用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL,均匀加到中央的纸片上,轻轻将上盖膜放下,静置5 min使培养基凝固,最后用手轻轻地压一下。每个稀释度接种两片。3.3培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。4 结果判断与计数:4.1细菌在纸片上生长后会显示红色斑点,选择菌落数适中(10个~100个)的纸片进行计数,乘以稀释倍数后即为每克(或毫升)样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时,按实有数报告。大于100时,用二位有效数字,二位有效数字后面的数字,以四舍五入方法计算,并以10的指数来表示。4.2计数原则与报告方式4.2.1通常选择菌落在10个~100个之间的纸片进行计数,乘以稀释倍数报告之(见下表中例次1)。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL,cfu的含义为菌落形成单位。4.2.2若有两个稀释度的菌落数在10个~100个之内,两者的比值小于2,则取其平均数,若大于2,则采用稀释度小者报告(见下表中例次2和例次3)。4.2.3若三个稀释度的菌落数都有在10个~100个之内时,应选择二个低数值的平均数(见下表中例次4)。4.2.4若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时,应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数;或采用均小于数量标准的最小值,或采用均大于数量标准的最大值(见下表中例次5和例次6)。 例次稀释度两稀释 度之比选定计数 稀释度报告方式 (个/g或 个/mL)10-110-210-31 2 3 4 5 6158 208 265 98 8 295
1.菌落总数的测定:是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后,每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20%),因而并不能测出每g或mL检样中实际的总活菌数,厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长,有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制,因此所得结果,只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。2.鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个,成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在,因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块,也可以来源于单个细胞,因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数,而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units,CFU)报告之。3.每种细菌都有它一定的生理特性,培养时,应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足其要求,才能分别将各种细菌都培养出来。因此,要得到较全面的细菌菌落总数,应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上,并培养在不同条件下,如温度,氧气供应等。但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定,都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的,因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。
颜色测量的数字化探寻应用实例一:菌落计数 在微生物检测中菌落计数是一项非常繁琐的工作,其目的就是把培养皿、测试片或试剂盒中的菌落计数准确,因培养皿面积小,各种颜色的小菌落密集,所以人工计数非常困难,耽误时间。机器视觉识别:根据被测培养皿或试剂盒的实际尺寸,我们来确定放大倍数,一般在5-12倍之间,属于低倍显微成像。实验仪器:YZ-2000B 免疫动态比色仪样品:一块牛津公司的Eliopot测试板96孔,孔底膜有斑点;几个带菌落的培养皿试验内容:打开YZ-2000B 免疫动态比色仪的上盖,把Eliopot测试板和培养皿倒扣在测量池中。打开电脑软件扫描出一张符合软件识别的图片。见图1http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020824_607956_3024149_3.jpg图片前处理抠图、放大,拆边,调节对比度。见图2http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020826_607957_3024149_3.jpg自动计数 见图3http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020828_607958_3024149_3.jpg统计结果 见图4http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020829_607959_3024149_3.jpg4个直径5cm的带背景纸培养皿,一个9cm的菌落培养皿http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020831_607960_3024149_3.jpg图片前处理 见图6http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020832_607961_3024149_3.jpg目标菌落染色 见图7http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020833_607962_3024149_3.jpg计数 见图8http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020834_607963_3024149_3.jpg统计结果 见图9http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020836_607964_3024149_3.jpg完成。下一组http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020838_607965_3024149_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020839_607966_3024149_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020840_607967_3024149_3.jpg下一组http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020840_607968_3024149_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020843_607969_3024149_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020844_607970_3024149_3.jpg下一组http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020845_607971_3024149_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020845_607972_3024149_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609020846_607973_3024149_3.jpg总结体会:调节仪器的光源位置、颜色、强度和对样品的反射是关键,其次是分辨率的大小。一定要扫描出高质量的图片。应用软件要熟练,知道每一步的目的。 扬子华纳 2016-8-31