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单细胞蛋白分析仪

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  • Nature Communications |PiSPA平台:单细胞蛋白质组分析新工具

    近日,[b]科创中心生物与分子智造研究院分子智造研究所所长方群教授团队[/b]再出新成果!团队[b]开发了“点取式”单细胞蛋白质组分析(PiSPA)工作流程和基于纳升级微流控液滴操控机器人,实现了单细胞的精准捕获、前处理以及自动进样,并首次在单个哺乳动物细胞中实现了高达3000种蛋白质的超高定量深度[/b]。目前,相关研究成果以“ Pick-up single-cell proteomic analysis for quantifying up to 3000 proteins in a Mammalian cell ”为题在国际权威期刊《自然通讯》上发表。[b]这项成果也再次向我们证明了单细胞蛋白质组学在诊疗和预防、药物开发、癌症基因组学等精准医学研究中的应用潜力。[/b][align=center][img=,700,444]https://img1.17img.cn/17img/images/202402/uepic/a2bc5a12-447c-42f5-901c-d7cd2ada8821.jpg[/img][/align][align=center]团队自研的探针式微流控液滴操纵机器人系统[/align][color=#0070c0][b]更强大的单细胞蛋白质组分析工具:PiSPA工作流程[/b][/color]单细胞蛋白质组学技术是近年来生命科学领域研究的热点。因单个细胞中的蛋白质含量极微(仅约0.2 ng)且无法扩增,单细胞蛋白质组分析极具挑战性。目前传统蛋白质组分析技术仅能在每个细胞中鉴定1000种左右的蛋白质,而这在单细胞分析领域显得有些“力不从心”。此外,传统的样本前处理操作大多在微升级反应器中进行,在样品处理和转移的过程中会出现明显的样品损失,这会限制单细胞蛋白质组学的鉴定深度,难以满足生命科学研究的迫切需求。“想要突破单细胞蛋白质组学鉴定深度的障碍,有两种策略。一是在足够小的微反应器中进行样品前处理,利用微尺度效应提高反应效率;二是将所有操作整合在一起,降低样品损失,但这两种策略对技术与设备的要求都很高”,本项成果第一完成人王宇博士解释道,“我们利用微流控技术将商品化的内插管改造为阵列化的纳升级微反应器,解决了纳升级样品反应与自动进样的问题。PiSPA平台可自动完成细胞捕获、样品前处理、色谱分离、质谱检测、数据处理等操作,进一步降低了样品损失。”[align=center][img=,700,303]https://img1.17img.cn/17img/images/202402/uepic/63b80008-6467-4583-b1b7-147e9680c481.jpg[/img][/align][align=center]“点取式”单细胞蛋白质组分析流程示意图[/align][b]PiSPA工作流程使得高精度的液体操控、单细胞的精确处理以及先进的LC-TIMS-QTOF MS技术融为一体,重新定义了单细胞蛋白质组学分析。[/b]“在研究中,我们将该平台应用于三种哺乳动物细胞(HeLa、A549和U2OS细胞)的单细胞蛋白质组分析,以及HeLa细胞迁移过程中的细胞异质性研究中,均实现了超高深度定量分析”,王宇博士说。同时,迁移细胞的单细胞蛋白质组分析也证实了PiSPA平台具有识别细胞迁移关键分子以及有价值靶点的应用潜力。[align=center][img=,700,394]https://img1.17img.cn/17img/images/202402/uepic/b4d136ba-e078-4fc6-b59d-911f8f0abfcc.jpg[/img][/align][align=center]哺乳动物细胞的单细胞蛋白质组分析结果[/align][color=#0070c0][b]单细胞的定量深度:从3000+走向全蛋白质组测序[/b][/color]PiSPA平台集成了基于序控液滴(SODA)技术的自动化液滴操纵机器人,能够在“点取式”操作模式下实现纳升级的细胞分选、多步样品前处理和自动进样操作。相比于其他单细胞分析方法,[b]PiSPA平台的优势主要体现在与成像技术结合,能够灵活地选择任意单个细胞进行分析,目标细胞的捕获指向性强,具有很高的捕获准确性和成功率,并可保留目标细胞的表观和空间信息,显著增加了单细胞分析的信息维度[/b]。其次,PiSPA平台采用针对单细胞样品的“定制化”分析条件,实现了蛋白质鉴定深度的大幅提升,能够为生物医学研究提供更多有效的基础数据。这些优势对推动单细胞蛋白质组分析的实际推广应用具有重要意义。“目前的单细胞定量深度只是一个起点”,方群教授分享道,在该项研究中,可从单个哺乳动物细胞中可定量多达3000种蛋白质,约占人类基因编码蛋白质总数(约20,000种)的15%,其鉴定深度已经达到10年前单细胞转录组测序技术的相近水平。类比单细胞转录组测序技术的发展历史,可以预见当前已处于单细胞蛋白质组分析技术的爆发阶段,随着技术的快速革新,单细胞的定量鉴定深度还将得到史无前例的提升。“这意味着单细胞蛋白质组学技术已进入在广泛的生物医学研究领域中实际应用的阶段。”[align=center][img=,700,315]https://img1.17img.cn/17img/images/202402/uepic/0ff9f496-19a8-4d58-a0de-a5d54a37ad74.jpg[/img][/align][b]团队表示,未来,他们将进一步提高单细胞蛋白质组分析的鉴定深度和通量,以持续推进该技术实用化和应用拓展的水平[/b]。此外,在上述成果基础上,目前团队还在利用iChemFoundry平台的自动化机器人技术和机器视觉技术构建能够完成单细胞蛋白质组分析全部流程操作自动化的分析平台,很快会有新的成果发布,这些都将为人们了解生命活动中细胞异质性的变化带来更有力工具。[来源:浙大杭州科创中心][align=right][/align]

  • 奥素科技完成近亿元A轮融资|启动单细胞蛋白组学领域加速键

    1月2日,佛山奥素博新科技有限公司(以下简称奥素科技)宣布完成近亿元A轮融资。本轮融资由鲁信创投领投,老股东启明创投、线性资本、同创伟业等持续加码,凯乘资本(WinX Capital)担任财务顾问。本轮融资后,奥素科技将进一步加速在单细胞蛋白组学领域的商业化推广,提供差异化的产品和服务,填补实验室样本预处理、功能发现及验证等需求的空白,力争将中国制造的先进生命科学仪器推向全球市场。奥素科技成立于2021年,具有全球领先的有源数字微流控液滴操控平台,在两年多时间内已连续获得四轮融资,股东包括诸多顶级VC及知名产业投资人。公司推出的第一款商业化产品Boxmini? SCP,是全球首款全流程微流控片上单细胞蛋白组学样本前处理工具,高效协助用户实现高通量、快速、精确的微量样本控制,一站式完成复杂的单细胞蛋白质样本前处理工作,且对无标记和TMT标记处理方案均可适配,产品推出后备受市场关注。[img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/ea05f042-359a-4e3c-a6db-2edf2fa796f0.jpg[/img]对于本次融资,[b]奥素科技创始人兼CEO马汉彬博士[/b]表示:“将消费电子半导体技术引入到生命科学领域,奥素团队已经完成了0到1的积累:特别是在单细胞蛋白质组学样本前处理应用场景,我们通过有源数字微流控微芯片上纳升样本精准操控及全流程集成能力,获得了海内外多位头部PI的认可并产生了对整个领域有促进意义的实验结果;在单细胞多组学、微生物及合成生物学等其他领域,奥素也将与不同的下游伙伴携手前行,加速新产品的开发及商业化落地。我们将在新老股东的支持下,利用产品技术优势,迅速开拓海内外市场,以单细胞蛋白质组学产品为突破点,通过开放式数字微流控共享平台打造半导体技术的生物芯片生态,让生命科学实验室及医疗检验自动化快速迈入消费电子时代。”此前,在仪器信息网[url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/icca2023][font=arial][color=#000000]第六届细胞分析网络大会(iCCA2023)的【单细胞分析技术】专题会场中,[/color][/font][/url][url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/icca2023]马汉彬[/url]研究员分享《[url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/icca2023][font=arial][color=#c00000] [/color][/font][color=#c00000]基于有源数字微流控的单细胞分选和操控系统[/color][/url]》的主题报告。[url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/icca2023][i](详情点击)[/i][/url][align=center][url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/icca2023][img=,200,200]https://img1.17img.cn/17img/images/202308/uepic/34781884-5a9f-4e5a-b5df-03783a77c663.jpg[/img][/url][/align][align=center][url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/icca2023]马汉彬 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 研究员[/url][/align]马汉彬研究员课题组也在2023年成功研发出了一套基于大面积薄膜晶体管开关阵列的有源数字微流控平台,在Analytical Chemistry发表并被选为当期的封面论文。[url=https://www.instrument.com.cn/news/20230817/680090.shtml][i](详情点击)[/i][/url][align=center][img=7872d6238fc05517bb5f145142a71dee_7b4ffe77-43f0-48a2-886a-b31b248d32ca.jpg,350,465]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/e362de5d-8580-4bc7-baf3-7272a8a7d52c.jpg[/img][/align]本轮领投方,[b]鲁信创投副总经理邱方[/b]表示:“鲁信创投作为国有控股的专业创投机构,一贯秉持以创业投资形式,支持我国自主的研究平台、仪器设备成果应用转化,将实现我国高水平科技自立自强的任务放在首位。奥素科技掌握有源数字微流控的核心底层技术,有潜力将实验室自动化推进到一个全新的局面,形成新的研究平台。公司推出的单细胞蛋白组学产品,为单细胞多组学等前沿研究提供先进工具,在包括鲁信已投企业在内的下游客户中引起强烈关注,体现出国产科学仪器的高水平自立自强,即将迎来新的局面。鲁信创投将支持奥素科技,打好科学仪器设备国产化攻坚战。”[b]启明创投合伙人陈侃[/b]表示:“启明创投作为上轮领投方,已连续两轮增资奥素科技。公司凭借强大的研发能力和优秀的执行力,快速的推出了单细胞领域的尖刀产品,面向一片蓝海市场。我们对公司未来充满信心,继续助力公司海外市场的商业化,期待奥素科技将“中国智造”先进科学仪器推向世界。”[b]线性资本董事总经理郑灿[/b]表示:“线性资本作为天使轮领投方,坚定认为投资要找到正确的人。我们亲眼见证了马汉彬博士从一名科研工作者向现代企业家的转变。马汉彬博士的为人、科学素养、前沿视野和企业家精神令我们印象深刻。在他带领下,公司首先推出了具有划时代意义的单细胞蛋白质组学解决方案,为全球蛋白组学领域研究再填一把火。我们本轮继续增持,推动奥素科技向先进科学仪器标杆企业迈进。”[b]同创伟业北京医药基金合伙人郗砚彬[/b]表示:“我们始终认为,奥素科技的数字微流控芯片系统,有望成为下一代生命科学微反应器的关键载体,持续为科学研究、医药工业等提供创新解决方案。公司的单细胞蛋白组学产品,将蛋白组学研究推进到了切实可行的单细胞颗粒度,使客户能够不再受工具所限,以全新的角度验证所知和探索未知。我们本轮继续增持,期待奥素科技能够让先进技术在应用层面全面开花。”[b]凯乘资本创始合伙人邹国文[/b]表示:“凯乘资本很荣幸连续第三轮担任奥素科技融资的财务顾问,见证了奥素从初创、一路飞速发展及商业化;作为数字微流控行业头部企业,奥素能够穿越市场周期,在不到三年的时间连续获得四轮融资,充分体现了资本端对公司的高度认可。期待奥素在下游领域的进一步拓展,成为世界领先的生命科学工具企业。”[b]关于鲁信创投:[/b]鲁信创投是山东省鲁信投资控股集团有限公司控股的省内最大、国内具有重要影响力的专业创投机构,是国内资本市场首家上市的创投机构(股票代码:600783.SH)。成立20余年以来,管理运作各类基金已达40余只,基金规模约200亿元,覆盖医疗健康、军民融合、先进制造、电子信息、新能源、新材料等细分产业,境内外上市公司40余家,在医疗健康领域先后投资了思路迪、硅基仿生、中科新生命、爱博泰克、唯迈医疗、美东汇成、英赛斯、荣昌生物等一批优秀企业。[来源:仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

  • 【每周读报】单细胞分析--CE无可取代地位之体现!

    【每周读报】单细胞分析--CE无可取代地位之体现!

    题名:自动化毛细管电泳的快速单细胞分析(Automated Capillary Electrophoresis System for Fast Single-Cell Analysis)作者:Alexandra J. Dickinson , Paul M. Armistead , andNancy L. Allbritton (一群美国滴家伙)杂志:Analytical Chemistry年卷页: 2013, 85 (9), pp 4797–4804 正文:毛细管电泳在单细胞分析上显示了其独特而强有力的优势,这是HPLC和UPLC等难望其项背的优势之一。以下就给大家介绍一个该项技术在单细胞分析上的应用,很牛很强大~ 为了介绍全面一点,我把整段摘要给翻译了。毛细管电泳用于单细胞分析是一种非常有前景的技术,但是在生物研究上其具有低通量的局限性。本文提出了一个微型细胞捕获器和三通道体系的自动化分析平台,在该系统上可进行快速缓冲液交换以进行快速单细胞分析。导入的细胞跟荧光素和俄勒冈绿一起被分离分析,通量为3.5 细胞/分,荧光素和俄勒冈绿的分离度为2.3±0.6。细胞蛋白激酶B(PKB)的活性是通过检测免疫荧光染色后的二氧膦基-PKB来检测的。结果显示,PKB在并没有变化,说明在CE分析过程中应激活化蛋白酶没有被上调,而且在细胞溶膜之前基底细胞的生理机能也没有被扰乱。在癌细胞中鞘氨醇激酶(SK)通常情况下是会被上调的。在此实验中,通过将神经胺-荧光黄(SF)基底引入细胞中而对SK进行检测。SF、神经胺-1-磷酸荧光黄(S1PF)和1/3荧光种类在单细胞中得到分析。219个细胞中,单细胞通量为2.1细胞/分钟。虽然这些亚种群细胞(此类细胞SK活性差异很大,这些差异跟种群均值有关)很容易被测定到,但88%的细胞具有上调SK的活性。该系统稳定,重现性好,可用于上百个贴壁和非贴壁细胞的生物组分的分离分析;还可用于检测非表征的生物学现象。生物方面的知识翻译起来颇费功夫,有些地方翻译得不一定地道。不过生物知识在这里不是重点,亮点在仪器上。比如微型细胞捕获器,这个装置至于毛细管入口端上面50微米处,那个三通道系统也一副牛掰哄哄的样子。如下图: http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/01/201401202053_488354_1624715_3.png其他参数:溶膜方式:激光脉冲生理盐水和分离缓冲液的控制方式:接地电位进样方式:电动进样(-5kV,1s),此时横跨毛细管的电压设为0,1s,毛细管被从air gap移动到分离缓冲溶液中。结语:如果没有多年的科研积累和强大的平台是做不出这样的实验的。纵观这两年发到AC上的文章,动则CE-MS,剩下的就是类似这种:需要很多电化和物化知识外加搞技术难度的仪器创新。革命尚未成功,同志们需多努力啊~~~~~~~

  • 单细胞分析——你能做得更多

    定义:单细胞研究,就是针对单个细胞的研究,这是相对于群体细胞的研究。研究意义:细胞是生命活动的基本单位,研究细胞的结构功能及行为,有利于揭示复杂生命体的生命活动规律,探究生理生化现象,获得统计平均结果。然而,现代研究表明,单个细胞内的成分存在巨大差异,平均分析结果不能反映单个细胞内成分的真实情况,会带来误导信息。癌症等疾病总是从个别细胞的变异开始,极少量异常细胞信号会被群体信号所掩盖,不能及时获得有关病变的信息。另外,细胞间的信号传导,应激反应等活动在细胞内迅速发生,传统方法无法做到实时监测。对于数量较少且较为珍贵的细胞样本,如干细胞、元祖细胞及患者样本,传统分析方法需要大量的细胞样本,并不适宜。关于物质在细胞内的空间分布,亚细胞结构如细胞器的分析,传统方法也不能满足。这些都要求我们在一定范围内从单细胞水平研究细胞的生命活动。单细胞分析方法:毛细管电泳、微流控芯片、图像分析、动力学分析及纳米技术等。目前单细胞分析存在的难点:首先无论是针对一个特异性大分子,还是在OMIC水平上进行分子分析,都存在单细胞提取物数量少,难以分析的困难,这甚至可以说是不可能完成的,因此增加灵敏度势在必行。除此之外高通量分析也是一个瓶颈,要想获得单细胞分析确切的分析结果,研究人员必须快速而准确的分析多个细胞,这并不容易。另外单细胞分析也常常需要进行多种方式分析,这不仅是由于细胞存在于一种异质性环境汇总,而且也在同一时间,也需要测量多个参数。

  • 血细胞分析仪检测原理

    目前血细胞分析仪检测原理包括电学和光学两种,电学包括电阻抗法和射频电导法,光法包括激光散射法和分光光度法。电阻抗法根据Coulter原理及血细胞非传导的性质,以电解质溶液中悬浮的血细胞在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础,进行血细胞计数和体积测定。当有细胞通过小孔时,由于电阻增加,于瞬间引起电压变化及通过脉冲。细胞体积越大,脉冲振幅越高,细胞数量越多,脉冲数量也越多。脉冲信号经过:放大、阈值调节、甄别、整形、计数而得出细胞技术结果。电阻抗法可准确量出细胞(或类似颗粒)的大小,是三分类血液分析仪的主要应用原理,并与光学检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。激光散射法应用了流式细胞术检测原理及细胞通过激光束被照射时,产生与细胞特征相应的各种角度的散射光。对经信号检测器接受的散射光信息进行综合分析,即可准确区分正常类型的细胞。激光散射法在区别体积相同而类型不同的细胞特征时,比电阻抗法分群更加准确。故激光散射法已成为现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。射频电导法是用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞的导电性,提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质、颗粒成分等特征信息。射频电流是每秒变化大于10000次的高频交流电磁波,能够通过细胞壁。分光光度法是所有类型的血细胞分析仪检测血红蛋白的原理,它利用血红蛋白与溶血剂在特定波长下比色,吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成比例。

  • 无细胞蛋白表达:优势及应用详解

    [font=宋体][font=宋体]无细胞蛋白表达是一种体外重组蛋白质表达技术也称为无细胞蛋白质合成技术([/font][font=Calibri]CFPS[/font][font=宋体]:[/font][font=Calibri]Cell-free protein synthesis[/font][font=宋体]),是指用含有蛋白合成必需的组分(核糖体,转运[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体],氨酰合成酶,启动[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]延伸[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]终止因子,三磷酸鸟苷,[/font][font=Calibri]ATP[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]Mg2+[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]K+[/font][font=宋体])的细胞裂解物在体外进行蛋白合成。无细胞蛋白表达技术适用于制备各种类型的蛋白质,包括难表达蛋白质、毒性蛋白质、复杂蛋白质等。在药物研究、生物制造和生命科学等领域中得到广泛关注和应用,无论是研究、开发还是商业化应用过程。目前无细胞蛋白表达主要应用于药物研发领域,例如抗体制备和生物药物生产等。随着人工智能技术的不断发展,无细胞蛋白表达技术可以与人工智能算法结合,构建计算机辅助的高通量生产系统,实现个性化、精准的生物医学治疗。除此之外,还能够应用于其他领域,例如基因工程、环境保护和农业生产等。随着无细胞蛋白表达技术的不断发展和人工智能技术的不断进步,我们可以看到更多的新领域和新应用出现,给生物科技行业带来更多的机遇和挑战。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]相较于传统的活细胞蛋白表达技术,无细胞蛋白表达技术具有以下几个显著的优势:[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]更高的蛋白质表达量:传统的活细胞蛋白表达技术受限于细胞本身的多方面因素,其表达的蛋白质数量往往受到限制。而无细胞蛋白表达技术通过在体外底物浓度高的环境中进行合成反应,不但避免了传统活细胞表达所面临的方方面面的限制,还能够很好地控制反应体系,从而获得表达量更高的蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]更快的表达速度:传统活细胞蛋白表达需要细胞生长并达到最佳密度才能进行蛋白质表达,这个过程往往需要数天时间。而无细胞蛋白表达技术通常只需要数小时就能够完成蛋白质的表达,这个速度明显快于传统活细胞表达技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]更精准的蛋白质合成:无细胞蛋白表达技术在体外进行蛋白质合成,能够精确控制底物浓度、反应温度、反应剂比例等参数,因此可以更加精准地合成定制的蛋白质,这对于研究和应用来讲具有重要意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]更灵活控制:在无细胞蛋白表达技术中,可以使用分离的组分体系进行蛋白质的合成,可以控制底物和反应剂的比例,也可以在适当的反应条件下进行自定义的修饰,如蛋白质标记、药效分析等。这些优点使得无细胞蛋白表达技术更加灵活、可控,适用于更广泛的应用领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]无细胞蛋白表达应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]无细胞蛋白表达技术是一种飞速发展的新型生物技术,具有广阔的应用前景和潜力。该技术可以快速、高效、经济地合成蛋白质,可广泛应用于医疗、制药、农业、生物材料等多个领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]医疗领域:无细胞蛋白表达技术在医疗领域应用广泛,可以用于生产多种蛋白质药品,如单克隆抗体等。其中,单克隆抗体是一种重要的治疗药物,具有高度特异性和亲和力,可用于肿瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病等疾病的治疗。传统单克隆抗体生产方法需要花费大量时间和成本,而无细胞蛋白表达技术则可以在短时间内大规模合成单克隆抗体,从而大大缩短生产周期,并且可以降低成本。此外,无细胞蛋白表达技术也可以用于疫苗研发。比如疟疾疫苗研究开发昂贵又耗时,目前利用[/font][font=Calibri]WGE[/font][font=宋体]系统可加速疫苗研发,并建立高通量疟原虫抗体筛查系统。[/font][font=Calibri]Stark[/font][font=宋体]等利用大肠杆菌的便携式冻干裂解物再水化,[/font][font=Calibri]1h[/font][font=宋体]内合成高致病性病原体土拉弗朗西斯菌亚种的生物偶联疫苗,与工程菌生产的疫苗相比,其可引发更高水平的病原体特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]制药领域:是无细胞蛋白表达技术的一个重要应用领域。药物开发的成功率取决于药物分子对目标蛋白的亲和力,而目标蛋白对于专一的细胞表达系统和分类的组织或器官非常敏感。通过无细胞蛋白表达技术,研究人员可以在不依赖于细胞的情况下直接生产大量需要的蛋白质,为药物研发提供了更快更便捷的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]基础研究领域:利用无细胞蛋白质合成系统可以直接对表达产物进行核磁共振分析,目前已确定了数千个蛋白质的结构。可以通过合成蛋白质建立蛋白质阵列,解开基因产物的功能;应用核糖体展示和 [/font][font=Calibri]mRNA [/font][font=宋体]展示技术,更有利于实现高通量筛选,全面深入研究基因特征和功能。通过无细胞蛋白表达技术可以实现对大型蛋白质的生产和分析,同时也为基础研究打开了新的研究领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州无细胞合成服务正在活动中,活动时间[/font][font=Calibri]2023[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]月[/font][font=Calibri]23[/font][font=宋体]日[/font][font=Calibri]-12[/font][font=宋体]月[/font][font=Calibri]31[/font][font=宋体]日。有需求的可以咨询或者进入义翘神州网进行查看。更多详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service[/font][/font]

  • 稳定细胞系助力重组蛋白高效生产

    [b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]在蛋白质研究领域,稳定细胞系的应用已成为生产高质量结构生物学蛋白质的关键手段。随着技术的不断进步,稳定细胞系的生成与筛选方法得到了显著改进,从而推动了蛋白质生产的高效化与精准化。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]细胞系的建立和应用[/font][font=宋体][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞系[/font][/font][/b][font=宋体]因其稳定的蛋白表达和适当的翻译后修饰而被广泛用于结构生物学研究。这些细胞系能有效地生产具有复杂糖基化模式的蛋白质,这对于确保蛋白质的功能和稳定性至关重要。糖基化缺陷细胞系通过特定的基因改造,能够分泌脱糖基化糖蛋白,为蛋白质生产提供了更加纯净的原料。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]稳定细胞系的生成[/font][/b][font=宋体][font=宋体]传统的稳定细胞系生成技术如瞬时转染,虽然方法简便,但存在整合频率低、转基因沉默等问题。为了克服这些困难,研究者们开发出了一系列新技术,如细胞分选技术、位点特异性重组(如[/font][font=Calibri]FLP/FRT[/font][font=宋体]系统)、转座子系统(如[/font][font=Calibri]piggyBac[/font][font=宋体])、慢病毒系统以及噬菌体整合酶等,提高了稳定细胞系的生成效率和稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]序列特异性基因组工程也为稳定细胞系的生成提供了新的思路。通过敲除或修饰特定的基因,研究者们能够实现对细胞功能的精准调控,从而优化蛋白质生产的效率和纯度。例如,一种同时缺乏[/font][font=Calibri]GnTI[/font][font=宋体]和谷氨酰胺合成酶([/font][font=Calibri]GS[/font][font=宋体])活性的[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞系被成功开发出来,为高效筛选具有[/font][font=Calibri]GS[/font][font=宋体]标记的稳定细胞系提供了有力工具。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]稳定细胞系与瞬时转染的比较[/font][/b][font=宋体]稳定细胞系相较于瞬时转染具有多个优点,包括能够进行大规模生产和保持高水平的蛋白表达稳定性。尽管瞬时转染在某些情况下能快速产生大量蛋白,但其表达水平和重复性通常不如稳定细胞系。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]展望[/font][/b][font=宋体]近年来,利用稳定细胞系高效生产结构生物学蛋白质已成为研究的热点和趋势。通过引入新技术、优化筛选方法和改进整合系统,不仅能够提高蛋白质生产的效率和纯度,还能够为结构生物学研究提供更加精准、可靠的实验工具。随着基因编辑和细胞工程技术的进步,预计在未来,通过精确的基因操作能够更有效地创建和利用稳定细胞系。这些技术的进步将促进结构生物学和药物开发中蛋白质的高效和可持续生产。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]本文由义翘神州进行整理,同时提供[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][u][font=宋体][color=#0000ff]稳定细胞系构建服务[/color][/font][/u][/url][font=宋体],详情可点击了解![/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献:[/font][font=Calibri]Büssow K. Stable mammalian producer cell lines for structural biology. [/font][i][font=Calibri]Curr Opin Struct Biol[/font][/i][font=Calibri]. 2015 32:81-90. doi:10.1016/j.sbi.2015.03.002[/font]

  • 全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗?

    全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗?库尔特原理库尔特原理指出:悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时,在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化,产生电位脉冲。脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。这主要是根据血细胞与稀释剂相比,血细胞是不良导体的特性而提出的。起初,原始的库尔特计数器只能计算和测量红细胞。后来,随着技术的不断发展和设备的不断改进,临床医生还可以利用它来计算和测量白细胞。到20世纪70年代,技术的进一步发展使技术人员能够分离血小板。全自动细胞计数器的演进传统意义上的血细胞计数器是通过研究外周血涂片,使用血细胞仪和白细胞分类计数而手动完成的(也称为100个细胞涂片分类,手动白细胞分类计数或手动计数器)。根据库尔特原理导致了库尔特计数器的发明,随后又开发出了技术先进的全自动血液细胞分析仪。自此,仪器的技术水平得到不断提高。由于技术的进步,一台仪器可以分析越来越多的参数,从而大大提高了血液检测的效率,减少在多台仪器上分析一个样品的情况。现代的细胞分析仪能够测量白细胞(WBC)、白细胞分类(五分类)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、平均红细胞体积(MCV)、平均血小板体积,并且可以自动计算血细胞比容(HCT)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度,血小板比积和血小板分布宽度。自动分析仪的其他重要因素包括它们运行的速度和每批次可以处理的样本数量(大处理容量可以减少周转时间)。即时检验(POCT)即时检验([/

  • 无细胞蛋白表达系统优缺点详解

    [font=宋体][font=宋体]无细胞蛋白表达系统([/font][font=Calibri]Cell-Free Protein Expression System[/font][font=宋体])是一种基于原核和真核细胞提取物构建的体外蛋白表达系统。它具有许多优点,例如可以在短时间内生产大量的蛋白质,同时避免了细胞内的复杂调控机制和翻译后修饰等繁琐过程。因此,无细胞蛋白表达系统在生物制药、生物材料、生物燃料等领域具有广泛的应用前景。本文将详细介绍无细胞蛋白表达系统的优缺点。[/font][/font][font=宋体][b]一、无细胞蛋白表达系统的优点[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]高效性:无细胞蛋白表达系统具有高表达效率的优点,这是由于体外体系中不存在靶蛋白累积所需的细胞分裂和细胞复杂代谢反应。此外,由于无细胞蛋白表达系统不受到细胞毒性和免疫反应的限制,可以实现大规模的蛋白质表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]灵活性:无细胞蛋白表达系统可以使用一系列不同的原核和真核细胞提取物作为反应体系,例如[/font][font=Calibri]E.coli[/font][font=宋体]、小麦胚芽和人类细胞等。这意味着可以根据不同的实验目的和需求进行合理的选择,以适应多样化的研究需要。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]易操作性:无细胞蛋白表达系统非常容易操作。与传统的细胞表达系统相比,无细胞蛋白表达系统不需要细胞培养、生长和繁殖。此外,无细胞蛋白表达系统可以快速进行,通常只需要数小时至几天即可完成目标蛋白的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]简单纯化:由于无细胞蛋白表达系统可以避免有机溶剂和离子交换剂等复杂的步骤,从而使目标蛋白的纯化工作更加简便和迅速。例如,可以使用亲和柱、凝胶过滤和电泳分析等方法来快速分离和纯化蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、无细胞蛋白表达系统的缺点[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]成本较高:尽管无细胞蛋白表达系统可以大规模进行蛋白质表达,但是所需的原核和真核细胞提取物通常需要较高的成本。此外,涉及到的一些试剂和设备也比较昂贵,使得无细胞蛋白表达系统在应用过程中存在一定的经济压力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]表达限制:由于无细胞蛋白表达系统缺乏复杂的代谢反应和细胞分化机制,因此它不适用于某些特定类型的蛋白。例如,它无法表达复杂的膜蛋白和困难的药物蛋白等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]不稳定性:无细胞蛋白表达系统通常具有一定的稳定性问题。由于缺乏细胞膜的保护,无细胞蛋白表达体系会更容易受到外部条件的影响,如温度、[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]、离子浓度等,从而导致蛋白质的不稳定性、聚集和降解等现象。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]不适合复杂蛋白结构:无细胞蛋白表达系统对于复杂蛋白结构的模拟效果不佳。例如,膜蛋白、多肽和糖蛋白等复杂蛋白质可能会被无细胞蛋白表达系统无法很好地复制,从而限制了其应用范围。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]无细胞蛋白表达系统具有高效、灵活、易操作、简单纯化等优点,但同时也存在着成本较高、表达限制、不稳定性和不适合复杂蛋白结构等缺点。在实际应用中,需要根据具体的研究目的和需求进行选择,并结合其他技术手段来弥补其不足之处。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service][b]无细胞蛋白表达服务[/b][/url],服务优势:[/font][font=宋体]①快速、高效 ②高成功率 ③一致性 ④高难度抗体表达[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以咨询,具体[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service[/font][/font]

  • 细胞因子和重组蛋白溶解必读(一)

    我们知道,PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉,这使得运输非常便捷,只要常温即可。而且,细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定,在-20℃或-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解,然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键,因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活,这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。 那么,应该如何进行正确的溶解呢? 下面我们以Recombinant Human IL-4 (重组人IL-4,产品编号:200-04)的说明书为例,对细胞因子或蛋白的溶解方法进行详细的阐述。 拿到重组人IL-4的说明书后,您会发现有一段关于Reconstitution(重悬)的叙述,这段内容含有溶解相关的所有信息。 1. Centrifuge the vial prior to opening.第1步:开盖前离心试剂管 PeproTech的细胞因子或蛋白冻干粉装盛在塑料管中,为无菌包装。冻干粉在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上,所以在打开塑料瓶盖前,需将冻干粉通过离心收集到管底,以便用很小体积的液体即可将冻干粉完全溶解。 有很多用户会问一个问题,即应该用多少转速、多长时间离心试剂管,才能达到良好的收集效果?答:有些小型高速离心机(多为进口品牌)的面板上有一个Spin键,按了此键后,离心机会自动快速上升到其最大速度(10000rpm或12000rpm),上升到最高点后速度即刻下降,直至停止旋转,整个过程大约30s。这个Spin键足以很好的将细胞因子或蛋白收集到管底。 但有些实验室没有这样的高速离心机,只有最高转速为4000-4500rpm的离心机。这种情况下,需3000-3500rpm离心5min,也能达到类似的效果。 2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do not vortex.第2步:用无菌水重悬至0.1-1.0 mg/ml,不可振荡。 这个步骤即为溶解步骤,非常重要。 1) 一定要用推荐的溶液重悬(或溶解)冻干粉 用于溶解细胞因子或蛋白的溶液千差万别。此例中的重组人IL-4需用水溶解,而重组人IL-2 (产品编号:200-02)则需用100mM Acetic Acid (醋酸)溶解,重组人TGF-beta1 (产品编号:100-21)需用10mMCitric Acid (柠檬酸),pH3.0溶解,重组人FGF-basic(产品编号:100-18B)需用5mMTris,pH7.6溶解,重组人FGF-10(产品编号:100-26)需用5mMSodium Phosphate(磷酸钠),pH7.4溶解,重组IL-13(产品编号:200-13)需用20mMMHCl溶解。(注:即使同一重组细胞因子或蛋白,不同批次的溶解方法也可能有所不同,因此上面的叙述仅供参考。具体应该如何溶解应以相应批次的官方说明书为准)。后续的文章中将对各种溶解液的配制方法进行详细的阐述,望继续关注。 经常有用户会问,为什么会有这么多种溶解方法?答:我们知道,蛋白的溶解性与很多因素有关,其中比较重要的是pH值和离子强度。PeproTech的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试,说明上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白完全溶解的液体。如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符,很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能完全溶解或者根本无法溶解,这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。 有不少用户没注意说明书上的描述,而是根据习惯,直接用PBS或培养液(1640或DMEM等)等溶解细胞因子或蛋白的冻干粉。这样做可以吗?答:有时可以,要看具体情况。PeproTech的大多数细胞因子或蛋白冻干粉的溶解液不是PBS,此时千万不能用PBS或培养液直接来溶解,具体原因在上面已经叙述过。而有部分细胞因子,如重组人KGF(产品编号:100-19)和重组人FGF-23(产品编号:100-52)等,说明书上的溶解液即为1x PBS,此时用PBS溶解完全没问题,那么用培养液溶解也是可以的,不过最好还是用先用PBS溶解,然后再用培养液稀释。

  • 英发现细胞信号通路新“刹车”蛋白

    细胞的癌变是细胞在信号通路调节失控情况下的无限制增生,而RAF-MEK-ERK信号通路的持续性激活则是诱导细胞癌变的重要原因。因此,对RAF-MEK-ERK信号通路的研究一直是分子生物学研究的热点。英国科学家在最近一期《分子与细胞生物学》杂志上发表论文称,真核翻译起始因子3a(EIF3a)可以通过和RAF激酶结合,抑制RAF-MEK-ERK信号通路,是这一信号通路的重要“刹车”蛋白。这一发现意味着EIF3a可能成为下一代抗癌药物全新的靶标蛋白,为抗癌药物的研发提供新思路。 EIF3a是细胞蛋白质翻译起始复合物的重要构件。由英国格拉斯哥大学和爱尔兰都柏林大学研究人员组成的研究小组研究发现,EIF3a能够与细胞外信号调节激酶通路的两个组成部分SHC蛋白和Raf1蛋白绑定,不仅可以调节蛋白质翻译,影响细胞的生长和分化,还通过和RAF激酶结合,抑制RAF-MEK-ERK信号通路,成为RAF-MEK-ERK信号通路的重要“刹车”蛋白。同时,研究人员还发现,EIF3a和另一个“刹车”蛋白——β抑制蛋白(β-arrestin2)结合,能够调节细胞的另一条最主要信号通路:G蛋白偶联受体(GPCR)信号通路。 该论文首席作者,格拉斯哥大学生物医学与生命科学学院的徐天瑞博士指出, RAF-MEK-ERK信号通路是细胞外信号传递入细胞内的主干通路,绝大多数细胞外信号都可以通过RAF-MEK-ERK通路影响细胞行为,诸如细胞增值、细胞分化、细胞凋亡。新发现表明,EIF3a可以抑制RAF-MEK-ERK信号通路,从而抑制癌症的产生;其通过与β抑制蛋白结合影响其功能,可治疗由G蛋白偶联受体信号通路失控而导致的癌症;同时,EIF3a可以抑制RAF激酶活性,诱导细胞凋亡,从而杀灭癌细胞;而对EIF3a本身蛋白质翻译的调节,也可以作为治疗癌症的重要手段。 徐天瑞博士说:“信号抑制蛋白EIF3A的发现意义重大,《科学—信号传导》杂志最近将其列为2011年度细胞生物学领域八项重大进展之一。我们的新研究证明,EIF3a不仅是蛋白质翻译起始因子,也是RAF-MEK-ERK信号通路和G蛋白偶联受体信号通路交汇点上的重要调控蛋白。通过对EIF3a的调控,有可能四管齐下地杀灭癌细胞,从而使EIF3a可能成为下一代抗癌药物全新的靶标蛋白,为抗癌药物的研发提供新思路。”(记者 刘海英)

  • 尿液分析仪和手工镜检尿液中红细胞的结果分析

    尿干化学法分析仪和传统显微镜镜检是基于两种不同原理的检验手段,因此检测结果可能存在一定程度的差异。临床中两种诊断血尿方法常配合使用以达到检测效率与质量的统一,总结起来,对检测结果的影响因素主要有以下几方面。  3.1 假阳性 即尿干化学分析仪潜血实验呈阳性,但镜检却呈阴性 。其原因包括:(1)尿液分析仪潜血实验可与完整红细胞阳性反应,也能够与血红细胞释放的血红蛋白(hemoglobin,Hb)进行反应,这与显微镜只能够观察到完整的红细胞存在差异。健康人群尿Hb水平极低,定为阴性;(2)肌红蛋白(myoglobin,Mb)分子中包含Hb基团,当骨骼肌、心肌严重受损,血MB浓度升高,经肾排泄,导致尿液MB水平升高,潜血反应因此呈阳性,而显微镜检查却呈阴性;(3)部分患者尿中存在对热不稳定的酶,也可导致试剂块发生颜色变化,发生潜血反应;氧化性物质的污染也是造成潜血反应假阳性因素;高温或标本存放时间过长导致潜血反应阳性率增高 ;(4)尿试纸条超过保质期,或没有妥善保存、操作不当、仪器故障等均可能造成假阳性。  3.2 假阴性 即尿干化学分析仪潜血实验呈阴性,但镜检却呈阳性。其原因包括:(I)食物、药物影响:某些饮食、药物可引起尿液成份的改变如当尿液中存在大量的维生素时,维生素具有的强还原性使其竞争性结合反应产生的氧,导致尿试纸条无法出现潜血反应即出现假阴性反应;(2)高蛋白、高比重尿样削弱了试剂块潜血反应的敏感度,使能够发生反应的成分被包裹,反应试剂无法接触到,从而出现假阴性结果。  3.3 离心对检测结果的影响 离心中若速度过快,致使有形成分遭到破坏;但过慢时,沉渣中可能无法找到,以至于漏掉。因此对检验结果出现怀疑时,可实验潜血证实进行验证。总之,随着尿干化学分析仪普及,工作效率得到了极大提升,也使检测红细胞敏感度提高,但显微镜镜检也是无法替代的。对于疑似阳性反应的病例,应采用尿沉渣镜检进行复测,以求结论准确,提高检测可靠性。

  • 分享一篇2013年Science上单细胞代谢的研究

    该文该文汇总了单细胞代谢的研究方法,包括质谱 (MS),质谱成像( MS imaging), 毛细管电泳(CE)(其中主要是chip ce), 光谱学(optical spectroscopy),和荧光生物传感器等多种技术手段分析了几百个单细胞,对单细胞进行大分子层面上的表征,以此阐述细胞代谢的表型异质性(phenotypic heteroge-neity)。大概就这个意思吧,大牛的东西,读起来反正就是半懂不懂。

  • 单细胞转移分离系统特点

    [b][url=http://www.f-lab.cn/cell-analyzers/puncher.html][b]单细胞转移分离系统[/b][/url]是可用于单细胞转移,单细胞分离和单细胞隔离,单细胞成像应用的多功能单细胞分离操作仪器,它可以实现从微孔芯片转移单细胞到细胞收集管中。单细胞转移分离系统[/b][color=#666666]集单细胞成像,单细胞隔离,单细胞选择功能于一体,自动聚焦成像。[/color][b]单细胞转移分离系统转移单细胞到Eppendorf微管,PCR微孔板或其它反应微管中,[/b][color=#666666]在隔离单细胞后,它可以对选定收集的细胞进行扫描并成像。[/color][b]单细胞转移分离系统[/b][color=#666666]采用Nikon Ti-2倒置荧光显微镜,配备自动扫描显微镜载物台,自动聚焦器件,高灵敏度荧光CCD相机和LED激发光源组建而成。[/color][img=单细胞转移分离系统]http://www.f-lab.cn/Upload/single-cell-isolation.JPG[/img][b]单细胞转移分离系统[/b]特点完全自动化,步进系统高质量单细胞荧光成像单细胞分离的效率超过90% 超过70%分离的细胞增殖 分离后兼容所有的单细胞的WGA工具包(放大器的‐1,picoplex,复制‐G)实惠微Wells基于硅微孔微腔。由薄膜封闭70µ m,井底直径(1µ m),包含一个单孔。样品流体进入威尔斯并从底部的孔隙中流出。单个细胞被拖着走。一旦单个细胞降落到孔隙上,流动停止,其他细胞就不会进入井内。有用的细胞被识别出来。选定的细胞穿孔从微孔到384孔PCR板或离心管等等。单细胞转移分离系统:[url]http://www.f-lab.cn/cell-analyzers/puncher.html[/url]

  • AI 单细胞应用!英伟达携手Deepcell开发单细胞分析的生成式AI技术应用

    [b][i]Deepcell周一表示,已与英伟达合作开发用于单细胞研究应用的生成人工智能技术。[/i][/b][align=center][b][i][img=image.png,113,83]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/174b29e0-2f00-4d45-af22-8d08603d1fda.jpg[/img][/i][/b][/align][align=center][b][i][img=e763286044be6f856573c041d533273b_logo_with_R.jpg]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/ee51f257-73e0-4f4c-beab-da55f87c445f.jpg[/img][/i][/b][/align]通过合作,公司将利用英伟达的计算专业知识和Clara一套专注于医疗保健的计算平台和软件,为基于细胞形态的分析应用程序构建新的算法,这些算法可以与Deepcell最近推出的REM-I高维细胞分析和分选平台等工具结合使用。Deepcell联合创始人、总裁兼首席技术官Mahyar Salek在一份声明中表示:“我们看到了将多模式和生成性人工智能融入我们的平台的多种可能性,并利用我们拥有的数十亿细胞图像的专有数据库来训练更多的人工智能模型。我们与英伟达的关系将帮助我们加快此类增强,并将这些进步带给我们的客户。”总部位于加利福尼亚州门洛帕克的Deepcell成立于2017年,是斯坦福大学的子公司,于2022年初筹集了7300万美元的B轮资金。Deepcell 是人工智能(AI)驱动的单细胞分析领域的先驱,旨在推动深度生物学发现,早在2023年2 月 6 日宣布,它已经发布了三个数据集,使研究人员能够探索新的高维形态数据。这些数据集是在 Deepcell 的高通量平台上生成的,该平台由成像和分选仪器、AI 模型和软件套件组成。Deepcell的首席技术官 Mahyar Salek曾经表示:“Deepcell的数据表明,深度学习可以实现较高的分类准确率,揭示了精确描述细胞特征和表型的新方法,并能够对感兴趣的细胞进行无标记分离,以进行进一步的深度分析。这项技术为生物医学界的科学家、转化研究机构和制药行业提供了一种新的工具,以从细胞形态学数据中获得对细胞的深度认识。”[b]关于 Deepcell[/b]Deepcell 是一家生命科学公司,它将 AI 引入细胞生物学,开启了称为形态组学的高维生物发现新领域。通过 Deepcell 的人工智能成像和微流体解决方案 REM-I 平台,该公司正在利用细胞形态学进行无限发现,从而实现新规模的细胞生物学研究和单细胞分析。Deepcell 的平台利用其 AI 模型,即人类基础模型,根据形态差异来识别和分类细胞,有助于推动基础和转化研究,并提供诊断测试和治疗靶向方面的未来应用。该公司于 2017 年从斯坦福大学分拆出来,已筹集近 1 亿美元的风险投资。[来源:仪器信息网译] 未经授权不得转载[align=right][/align]

  • 变异蛋白在血细胞中逐渐积累引发亨廷顿病

    中国科技网伦敦9月20日电 英国科学家在最近一期《临床调查杂志》上刊发论文称,他们利用新的检测技术证明,导致亨廷顿病的有害蛋白是逐渐在血液细胞中积累起来的。他们在论文中对这些有害细胞是如何损害人的大脑进行了详细阐述,而这一新发现不仅有助于监测亨廷顿病的进展情况,也有助于开发抑制有害蛋白的新药。 亨廷顿病是一种致命的遗传神经疾病。患者由于基因突变导致机体细胞错误地制造一种名为“变异亨廷顿蛋白”的有害物质,这些异常蛋白会损坏部分脑细胞,导致患者神经系统逐渐退化,致使身体出现不可控制的抽搐,并能发展成痴呆,最后导致死亡。 发表论文的研究小组由英国伦敦大学学院、伦敦国王学院以及诺华生物医学研究所的研究人员组成。他们使用一种新的超敏测试技术测量亨廷顿病患者发病不同阶段体内变异亨廷顿蛋白的水平。这种测试技术名为时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET),可对变异亨廷顿蛋白进行极为精确的测量。研究人员发现,在亨廷顿病患者表现出相关症状之前,其体内变异亨廷顿蛋白即开始逐渐积累,而正常的亨廷顿蛋白含量则在整个发病过程中保持不变。核磁共振扫描显示,亨廷顿病患者脑萎缩的速度明显高于常人。而令研究人员惊讶的是,变异亨廷顿蛋白在白血细胞中的数量与脑萎缩的速率极为一致。这一发现表明,未来或许可以利用血检来预测神经退行性疾病患者脑萎缩的速度。 “使用TR-FRET技术测量变异蛋白水平,是治疗亨廷顿病的一个十分有用的新手段,”研究小组的领导者,伦敦大学学院的萨拉·塔布利兹教授说,“如今获得患者的血液样本很方便,这使得我们能够准确地研究变异亨廷顿蛋白的毒性。而变异亨廷顿蛋白水平与脑萎缩间的关联,使我们对亨廷顿病患者大脑退化的过程有了更新的了解。” 塔布利兹教授指出,TR-FRET技术对于未来基因沉默药物的临床试验也十分有用。她表示,基因沉默药物可用来抑制大脑中有毒蛋白的产生,十分有前途,但也极有可能产生副作用,因此了解药物降低变异亨廷顿蛋白水平的过程十分重要。而TR-FRET技术则提供了这样的手段,这对于新药的开发十分有利。(记者刘海英) 《科技日报》(2012-09-22 二版)

  • 牛奶蛋白质分析仪可以用于检测乳蛋白制品嘛

    牛奶蛋白质分析仪可以用于检测乳蛋白制品。以下是详细解释和相关信息:  功能与应用:牛奶蛋白质分析仪是一种专门用于分析牛奶及其制品中蛋白质含量的仪器。它基于先进的生化分析技术,如比色法、光谱法或电化学法等,能够准确、快速地检测样品中的蛋白质含量。  乳蛋白制品的检测:乳蛋白制品,如奶粉、酸奶、奶酪等,其蛋白质含量是产品质量和营养价值的重要指标。牛奶蛋白质分析仪可以有效地检测这些乳蛋白制品中的蛋白质含量,为生产厂家提供准确的质量控制手段。  优点与特点:  准确性高:牛奶蛋白质分析仪具有高灵敏度和高准确性,能够确保测量结果的可靠性。  快速便捷:该仪器操作简单,使用方便,可以快速得出测量结果,提高检测效率。  适用范围广:除了牛奶及其制品外,还可以用于其他含蛋白质样品的检测,如豆类制品、肉制品等。  在乳品工业中的重要性:随着乳品市场的不断扩大和消费者对乳制品质量要求的提高,牛奶蛋白质分析仪在乳品工业中的重要性日益凸显。它可以帮助乳品企业提高产品质量、降低生产成本,同时为消费者提供更加安全、健康的乳制品。  综上所述,牛奶蛋白质分析仪是一种功能强大、应用广泛的检测仪器,完全可以用于检测乳蛋白制品中的蛋白质含量。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405271615421543_8284_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

  • 雷公藤红素靶向YY1和HMCES蛋白诱导白血病中DNA损伤和细胞死亡

    1、雷公藤红素抑制CML细胞增殖作者首先进行了网络药理学分析,以评估在治疗CML方面最有效的天然产物。通过对3882种天然产物进行了网络药理学分析,发现从传统中药“雷公藤”(Tripterygium wilfordii)根皮中提取的五环三萜雷公藤红素在抑制CML方面排名第一。为了验证网络药理学筛选的可靠性,作者在CML细胞中进行细胞活力测定。选择18β-甘草次酸作为阴参,因为它与雷公藤红素的结构最相似,但在3882 种天然产物中预测得分不高,选择17-AAG(HSP90抑制剂,已有文章报道HSP90是雷公藤红素的靶点)和TKI 药物伊马替尼作为阳参。结果表明雷公藤红素、17-AAG和伊马替尼均能有效抑制CML细胞增殖,而18β-甘草次酸几乎不影响细胞生长。作者进一步开展细胞实验,发现雷公藤红素对K562和K562T315I细胞表现出抗增殖活性,诱导细胞凋亡。尽管对雷公藤红素的研究很深入,但尚未系统地鉴定出雷公藤红素在CML中的直接蛋白质靶点,尤其是在耐药性CML细胞中 雷公藤红素抑制CML细胞增殖2、雷公藤红素处理后 K562T315I 细胞的转录组和蛋白质组学分析接着,作者通过RNA 测序发现富集的通路包括铁死亡、蛋白水解调节、响应p53介导的DNA损伤等。作者还进行了蛋白质组学分析雷公藤红素对K562T315I细胞中蛋白质表达水平的调节,下调蛋白主要富集于DNA和RNA代谢途径以及 DNA损伤反应,以及蛋白质加工途径。MCODE分析发现“对DNA损伤刺激的反应”和“对未折叠蛋白的反应”分别是最具特征性的途径。雷公藤红素与其已知靶标HSP90的相互作用可能是“对未折叠蛋白的反应”上调的关键贡献事件。而目前尚未有报道称雷公藤红素的直接蛋白质靶标与“对DNA损伤刺激的反应”途径有关( 雷公藤红素处理后 K562T315I 细胞的定量蛋白质组学分析3、雷公藤红素处理后 K562T315I 细胞的CETSA-MS分析作者接着检测了K562T315I细胞中celastrol处理后可溶性蛋白质水平的变化,在雷公藤红素处理后鉴定了178种差异溶解蛋白质,主要位于DNA中心区域,包括细胞核和线粒体,更具体地说是在DNA损伤位点。此外,“分子伴侣复合物”中溶解度降低,这可能是由于雷公藤红素和HSP90之间的互作所致 雷公藤红素处理后 K562T315I细胞的CETSA-MS分析4、雷公藤红素诱导 K562T315I 细胞DNA损伤对 K562T315I细胞经雷公藤红素处理后总蛋白和可溶性蛋白水平变化的系统分析表明,雷公藤红素主要诱导K562T315I细胞中的DNA损伤和未折叠蛋白反应。因此,作者进行了实验来验证这些观察结果。结果显示雷公藤红素显著诱导γ-H2AX(DNA损伤的常见标志物)的表达,并降低DNA损伤修复相关蛋白FANCD2水平,彗星试验进一步证实了雷公藤红素促进的DNA损伤( 雷公藤红素诱导 K562T315I细胞DNA损伤5、雷公藤红素在K562T315I细胞中的靶点鉴定然后,作者在细胞裂解物中开展质谱耦合等温剂量反应-细胞热位移分析(MS-ITDR-CETSA)实验,以确定雷公藤红素的直接蛋白质靶标,特别是那些参与DNA损伤反应的蛋白质靶标。在检测到的3393种蛋白质中,有12种蛋白质表现出热稳定性的显著变化,代表了最有潜力且可信度高的靶标蛋白质。值得注意的是,雷公藤红素的已知靶标HSP90 (HSP90AA1和HSP90AB1) 的热稳定性仅表现出很小的变化,并且没有超过阈值。对这12个潜在靶标和定量蛋白质组学以及CETSA-MS分析的差异蛋白进行PPI分析,发现 YY1均为最紧密相关的蛋白质。因此,YY1与所有这些DEP/DSP的关联节点数量最多,并且可能是与DNA损伤相关的最重要的靶标。现有研究表明,YY1作为转录因子,可以调节参与DNA修复和细胞存活的各种蛋白质的表达,以响应DNA损伤。此外,HMCES已被确定为通过屏蔽脱碱基位点来保护基因组完整性免受氧化碱基损伤的关键蛋白。因此,作者继续通过蛋白质印迹结合细胞热位移分析(WB-CETSA)验证了celastrol与YY1和HMCES的互作。同样,报道的阳性对照HSP90蛋白也显示出明显的热稳定性增加( 雷公藤红素在K562T315I细胞中的靶点鉴定6、雷公藤红素与YY1和HMCES相互作用的验证为了进一步验证celastrol与YY1和HMCES的直接相互作用,合成了可点击炔烃标签功能化celastrol探针(Cel-P),该探针保留了celastrol对K562T315I细胞的抑制活性。利用该探针开展Pulldown实验发现Cel-P 能够成功地从细胞中拉下HMCES和HSP90蛋白,但由于尚不清楚的原因,在蛋白质印迹膜上的下拉样本中未检测到YY1。随后,表达并纯化重组YY1(rYY1)蛋白,发现随着Cel-P浓度的增加,rYY1的标记以剂量依赖性方式增加 雷公藤红素与YY1和HMCES相互作用的验证7、雷公藤红素通过靶向YY1和HMCES诱导DNA损伤在验证了celastrol与YY1和HMCES之间的相互作用后,作者继续在K562T315I细胞中敲低 YY1或HMCES。结果显示YY1或HMCES的敲低显著增加了DNA损伤的发生率,同时影响细胞生长,增强细胞对celastrol的敏感性。此外,与HMCES相比,YY1敲低对细胞的影响更为显著,表明YY1发挥着更为重要的作用。对接分析显示,与HMCES相比,celastrol对YY1的亲和力略强,且Celastrol与YY1上的Leu132和Val316形成氢键,与HMCES的Glu127、Arg130和Arg137形成氢键 雷公藤红素通过靶向 YY1 和 HMCES 诱导 DNA 损伤鉴于YY1在雷公藤红素诱导的DNA损伤反应中发挥关键作用,作者对YY1蛋白进行了进一步实验。发现YY1过表达对细胞生长没有显著影响,但减轻了雷公藤红素引起的细胞死亡和DNA损伤,且通过裂解的PARP1和Caspase-3水平发现YY1表达与雷公藤红素诱导的细胞凋亡呈负相关。使用双荧光素酶报告基因发现雷公藤红素显著抑制了YY1的转录活性,BLI结合试验发现celastrol 可以与 rYY1 结合(图8)。图8 YY1在雷公藤红素诱导的 K562T315I细胞DNA损伤和细胞死亡中起关键作用总结研究使用多组学方法对雷公藤红素的作用机理进行了系统研究,利用蛋白质组范围的无标记靶标反卷积方法MS-CETSA来识别雷公藤红素的蛋白质靶标。研究不仅验证了雷公藤红素通过靶向HSP90来诱导未折叠蛋白反应,而且还发现它通过直接靶向耐药 K562T315ICML 细胞中的YY1和HMCES来诱导DNA损伤(图9)。研究有助于更好地理解雷公藤红素的多方面机制。研究提供了一种有效的系统药理学工作流程范例,该范例集成了网络药理学分析、蛋白质丰度和溶解度测量以及 MS-CETSA,以揭示任何天然产物或活性化合物的作用机理。

  • 【转帖】细胞膜蛋白激光检测技术研制成功

    将在药物开发进程中发挥重要作用2011年03月26日 来源: 科技日报 作者: 常丽君  本报讯 据每日科学网近日报道,美国范德堡大学研究人员开发出一种新型激光技术,可检测细胞膜上的蛋白质和其它多种生物分子之间的相互反应。这种检测将在药物开发进程中发挥重要作用。   人类细胞中约有7000种蛋白质,其中30%在细胞膜上,控制细胞分子运作机制的信号有60%—70%由这些膜蛋白产生,因此当前市场上约一半的药物都是瞄准细胞膜蛋白。但因为膜蛋白很难提纯,科学家在研究它们的结构时面临很多困难。现有的检测膜手段大多是将膜蛋白从其所处环境中分离,或用不同方式如荧光标签加以修改,以分析它们的活性。这些方法不仅昂贵耗时,还可能会影响目标膜蛋白的功能。  范德堡大学化学生物研究院化学教授达里尔·波恩霍普领导的研究小组和斯克里普斯研究院合作,开发了一种名为“后向散射干涉仪”(BSI)的新型激光技术,能精确检测出膜蛋白和自然界中各种分子之间的结合力。  BSI操作起来很简单,只要把两种分子混合装入一个充满液体的显微镜小盒中,用一束类似于条形码扫描仪的红色激光照射,就能测出它们之间的结合力。小盒的几何形状调整合适后,激光就会产生干涉图案,而这种干涉图案对分子之间的反应非常敏感。如果分子开始互相作用,图案就开始变换。  为了检验BSI的准确性,研究人员制造了一种含有GM1小蛋白质的合成膜,霍乱毒素要进入细胞,主要结合对象就是这种小蛋白质。他们把霍乱毒素B和这些膜混合,检测出的结合力结果与用其他方法所得到的结果一致。为了进一步确认,他们还用了一种和胸腺癌相关的天然分离膜和3种分别与疼痛、发炎和神经传导素GABA(用于放松、睡眠和调节紧张)相关的蛋白质膜进行检验,把包含这些蛋白质的膜和对应结合分子相混合,用BSI技术测得的值也和用其他方法得到的结果一样。  此外,该技术进入商业化也前景广阔,范德堡大学对新型激光检测技术已申请了专利,并已获得3项批准。他们还专门成立了一家分子传感公司对新技术进行独家开发。

  • 西达本胺促进SCLC细胞系组蛋白乙酰化

    西达本胺促进SCLC细胞系组蛋白乙酰化

    [align=left][size=18px]西达本胺促进[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系组蛋白乙酰化[/size][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px] [/size][size=16px]为验证西达本胺是否上调[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞系的乙酰化水平,我们使用[/size][size=16px]Western blot[/size][size=16px]检测了不同浓度([/size][size=16px]I[/size][size=16px]C10[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC20[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC50[/size][size=16px])西达本胺处理[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后,[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系中乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平,并以组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平为对照。结果如图所示。在四种亚型细胞系中,总组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达水平无变化,乙酰化组蛋白[/size][size=16px]H[/size][size=16px]3[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]4[/size][size=16px]表达量随加药浓度增大而增多,这证明了西达本胺对[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系组蛋白乙酰化的促进作用,这种作用呈剂量依赖性。[/size][/align][align=left][size=18px]A[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350400898_8640_5887180_3.png[/img][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=center][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px]西达本胺通过线粒体凋亡途径诱导[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系凋亡[/size][/align][align=left][size=16px]我们的功能实验表明,西达本胺[/size][size=16px]可剂量依赖的[/size][size=16px]促进[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞[/size][size=16px]系[/size][size=16px]凋亡[/size][size=16px],但其机制尚未明确。[/size][size=16px]依据国内外报道,西达本胺主要通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡[/size][size=16px]。除此之外,[/size][size=16px]西达本胺[/size][size=16px]能[/size][size=16px]使[/size][size=16px]线粒体[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]双链断裂,发生损伤。[/size][size=16px]为探究其是否通过此途径在[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系中发挥作用,我们检测了加药[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后,[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]DMS114[/size][size=16px]细胞中由线粒体介导的[/size][size=16px]C[/size][size=16px]aspase[/size][size=16px]信号通路相关蛋白[/size][size=16px]Bcl-2[/size][size=16px],[/size][size=16px]Bax[/size][size=16px],细胞色素[/size][size=16px]C[/size][size=16px],[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 9[/size][size=16px],[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved Caspase 9[/size][size=16px],[/size][size=16px]P[/size][size=16px]ARP[/size][size=16px],[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved [/size][size=16px]PARP[/size][size=16px],[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 3[/size][size=16px],[/size][size=16px]c[/size][size=16px]leaved Caspase 3[/size][size=16px]以及[/size][size=16px]D[/size][size=16px]NA[/size][size=16px]双链断裂标志物[/size][size=16px] [/size][size=16px]γH2AX[/size][size=16px]表达水平。[/size][size=16px]Western blot[/size][size=16px]结果显示,[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 9[/size][size=16px],[/size][size=16px]P[/size][size=16px]ARP[/size][size=16px] [/size][size=16px],[/size][size=16px]Ca[/size][size=16px]spase 3[/size][size=16px]表达水平无明显变化,[/size][size=16px]Bcl-2[/size][size=16px]表达下调,其余蛋白表达均上调。这些结果表明,在[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞中,西达本胺可以通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。[/size][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][size=16px]A[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350402755_79_5887180_3.png[/img][/align][align=left][size=18px] [/size][size=18px]西达本胺通过抑制[/size][size=18px]C[/size][size=18px]yclin-CDK[/size][size=18px]复合物活性阻滞[/size][size=18px]S[/size][size=18px]CLC[/size][size=18px]细胞系周期[/size][/align][align=left][font='宋体'][size=16px]据文献报道,[/size][/font][size=16px]不同[/size][size=16px]HDACI[/size][size=16px]对不同细胞阻滞时相不一致。为验证西达本胺对[/size][size=16px]SCLC[/size][size=16px]细胞周期的作用,我们检测了[/size][size=16px]经[/size][size=16px]西达本胺[/size][size=16px]处理[/size][size=16px]48[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后,[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]DMS114[/size][size=16px]细胞中细胞周期相关蛋白的表达水平,如图所示。[/size][size=16px]在[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]细胞系中[/size][size=16px]P21[/size][size=16px]、[/size][size=16px]P27[/size][size=16px]表达上调,[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin A2[/size][size=16px]与[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK[/size][size=16px]2[/size][size=16px]表达下调[/size][size=16px],[/size][size=16px]说明西达本胺阻滞[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]于[/size][size=16px]S[/size][size=16px]期。在[/size][size=16px]H446[/size][size=16px]细胞系中[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin E1[/size][size=16px]与[/size][size=16px]C[/size][size=16px]DK2[/size][size=16px]表达下调[/size][size=16px],说明西达本胺阻滞其于[/size][size=16px]G[/size][size=16px]1[/size][size=16px]/S[/size][size=16px]期。[/size][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350422585_1956_5887180_3.png[/img][size=16px] [/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211302350405804_8826_5887180_3.png[/img][/align][align=left][size=18px]小结[/size][/align][size=16px]1[/size][size=16px].[/size][size=16px]西达本胺可以增强[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞系组蛋白乙酰化水平。[/size][size=16px]2.[/size][size=16px]西达本胺诱导[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞凋亡的机制可能与其激活线粒体介导的[/size][size=16px]caspase[/size][size=16px]凋亡途径有关。[/size][size=16px]3[/size][size=16px].[/size][size=16px]西达本胺可阻滞[/size][size=16px]S[/size][size=16px]CLC[/size][size=16px]细胞周期,可能与其上调细胞周期蛋白激酶抑制剂表达、从而抑制[/size][size=16px]C[/size][size=16px]yclin-CDK[/size][size=16px]复合物活性有关。[/size]

  • 哈工深圳陈华英团队: 单细胞连续捕获, 弹性模量测量和可寻址分选打印

    [size=15px][color=#333333]细胞的机械特性对其生物学功能(如增殖、分化和凋亡)和形态状态(如迁移、附着和病理状态)至关重要。目前常用的细胞弹性模量测量技术包括原子力显微镜、微管吮吸、光镊和磁镊等。这些技术可以有效测量单个细胞的机械性质,但是通量低,限制了其实际应用。[/color][/size][size=15px][color=#333333]近年来,微流控芯片因其在小体积液体操控方面的独特优势,也被用于测量细胞弹性模量。现有的微流控芯片主要侧重于平台开发,虽然通量大幅提高,但很少将测量后的细胞进一步收集以实现后续分析。[/color][/size][size=15px][color=#333333]单细胞分析技术的发展要求能够准确地打印单个细胞。传统单细胞打印技术包括荧光激活细胞分选、有限稀释和手动细胞挑选,这些方法打印效率较低且难以实现自动化。[/color][/size][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]近年来,各种微流控技术被开发用于高通量精确打印单个细胞,如喷墨打印、精确分配、双阀门筛选和移液管式单细胞分离等。这些技术可以根据目标细胞的荧光、形态等特征进行识别并打印,但是大多技术难以获得单细胞的机械信息。[/color][/size][/font][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]因此,本研究报道了一款基于 U 型阵列的微流控系统,集成了单细胞连续捕获,弹性测量和可寻址打印。该装置在研究细胞力学与其他生物学特性的关系方面具有强大的应用潜力。[/color][/size][/font][b]研究内容[/b][size=15px]近日,哈尔滨工业大学(深圳)[color=#004976][b]陈华英课题组[/b][/color]在英国皇家化学会(RSC)期刊[color=#004976][b] Lab on a chip[/b][/color] 上发表题为“Continuous trapping, elasticity measuring and deterministic printing of single cells using arrayed microfluidic traps” ([color=#007aaa]《单细胞连续捕获、弹性模量测量和可寻址分选打印》[/color])的研究论文,报道了一款创新的微流控芯片,实现了基于精确调节的压力对微球/细胞进行捕获和逐个打印,并将已知弹性模量的单细胞确定性地打印到孔板中(图 1)。[/size][size=15px]该论文第一作者是哈工大(深圳)在读硕士研究生[color=#004976][b]蔡逸珂[/b][/color]和硕士毕业生[color=#004976][b]余恩[/b][/color]。[color=#004976][b]陈华英副教授[/b][/color]为通讯作者。[/size][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/b3ebc9a4-6d42-4ef1-bfd0-c7cf1f5c3a15.jpg[/img]微流控芯片(图 1A)由冲洗入口、样品入口、打印入口、压力维持口和两个平行的主通道组成,下游有打印出口。在所有入口通道中设计了宽度从 200μm 减小到 25μm 的微通道阵列,以过滤介质中较大的颗粒/细胞碎片。如图 1A 和 B 所示,在每个主通道的一侧有 16 个 U 型捕获陷阱,且吮吸通道的高度比分流通道的高度低 15 μm,以保证细胞停留在 U 型陷阱中并诱导其微小变形。[img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/b3ee5e4c-b99c-4b5e-8904-b5a6d2817633.jpg[/img][table=677][tr][td=1,1,5]▲[/td][td=1,1,549][b]图1[/b] 单细胞连续捕获、弹性测量和可寻址打印系统。(A)微流控芯片连接到压力泵,将单细胞精确分配到孔板中;(B)通过调节打印压力(Po)捕获(Pi-Po0)和释放(Pi-Po0)单个细胞的机制;(C)用于捕获和分离细胞的吮吸通道;(D)用于捕获和分离微球的分流通道。[/td][/tr][/table][来源:陈华英团队 RSC英国皇家化学会][align=right][/align]

  • 【转帖】细胞间存传递致癌蛋白“木马”

    据美国物理学家组织网报道,北卡罗莱纳大学科学家的一项最新发现显示,细胞感染人类疱疹病毒(EBV)后,会产生小泡或被称为外体的液囊,从而改变细胞中所含的蛋白质和RNA(核糖核酸)。这种变质的外体一旦进入健康细胞,就能转变细胞的良性生长方式,使之变成不可控的致癌生长。这一发现刊登于美国《国家科学院院刊》网络版。EBV可能是世界上最成功的病毒,它无法被免疫系统彻底清除,几乎每个人终生都被它感染。它们不断进入唾液,在这里进行有效地传播。感染这种病毒很少致病,然而在几种主要的癌症中都发现了它的踪迹,包括淋巴瘤和鼻咽癌,它的蛋白质劫持了细胞生长调控机制,引发不可控的细胞生长,从而导致癌变。研究认为一种名为潜伏膜蛋白质1的蛋白质是EBV的致癌基因。通过外体,它们被传递给未受感染的细胞。研究人员还指出,EBV也彻底改变了外体的内含物,在细胞之间传递能激活癌症的蛋白质,这是值得注意的地方。这些发现表明,通过这种方式,病毒感染细胞能广泛影响并潜在控制全身其他细胞,引发它们的不可测生长。免疫系统不断地监视着外来病毒蛋白质,然而经外体携带的这些蛋白质可以不向免疫系统“报告”感染,并刺激癌细胞生长,由此容许了一种不可测的生长。该研究还显示,细胞能产生血管,这一被称为血管新生的过程很容易接受变质外体并引发潜在生长。北卡罗莱纳大学莱恩伯格综合癌症研究中心微生物与免疫学教授南希·瑞玻-特拉玻说:“外体就像特洛伊木马,EBV通过木马甚至能控制那些还没有感染的细胞。但重要的是,外体的产生可能为我们提供了一种新的治疗标靶,封锁它们就能控制癌症蔓延。”论文第一作者、瑞玻-特拉玻实验室博士后戴维·麦克表示,下一步研究是测定哪些蛋白质被选中进入外体,病毒如何控制了这些蛋白质,以及怎样才能遏制这一过程。

  • 【转帖】纳米微粒结合转铁蛋白 猎杀癌细胞

    美国北卡罗莱纳大学教堂山分校文理学院的首席化学教授约瑟夫—德西蒙博士领导的研究小组发现,人体中的一种正常的良性蛋白质,如果和纳米粒子相结合,就能瞄准并杀死癌细胞,而无须负载那些携带化疗药物的粒子。此前,研究人员曾认为,纳米粒子只有携带了有毒的化学载体才能达到这样的效果。转铁蛋白是人体血液中数量第四多的蛋白质,近20年来一直被作为肿瘤靶向载体用以递送治癌药物。纳米粒子通常也是无毒的,需要通过负载标准化疗药物来治疗癌症。然而,结合转铁蛋白的“打印”纳米粒子,不仅能识别它们,还能诱导癌细胞死亡。而不与任何纳米粒子结合的自由转铁蛋白,能从拉莫斯癌细胞中获得养料生长,即使在很高浓度下也不会杀死任何拉莫斯癌细胞。然而令人吃惊的是,转铁蛋白附着在纳米粒子表面后,其能有效地筛选标靶,攻击并杀死B细胞淋巴瘤。在许多迅速生长的癌细胞表面,蛋白质受体被过度表达,于是和转铁蛋白配体结合的治疗就能找到并瞄准它们,而结合转铁蛋白的纳米粒子被认为是安全且无毒的。德西蒙实验室发明了一种“打印”技术,能人为造出尺寸精确且形状符合预期的纳米颗粒。他们采用这种技术制作出一种可与人类转铁蛋白相结合的生物相容性纳米粒子,其能安全且精确地识别广谱癌症,除了B细胞淋巴瘤外,还能有效地指向非小型细胞,如肺、卵巢、肝脏和前列腺的癌细胞。研究人员目前正在进一步研究,携带转铁蛋白的纳米粒子如何及为何对于拉莫斯癌细胞是有毒的,而对其他细胞却无毒。化学治疗和放射治疗曾被认为是癌症的最有效疗法,但这些疗法通常会损害健康组织和器官。这一发现将可能发展出一种全新的策略来治疗某种类型的淋巴瘤,而副作用更小。不过,德西蒙承认,该研究也会引起一些人对不可预期后果的担忧,即一个设计好的针对某类癌症的靶向化疗载体是否会偏离目标。

  • 【转帖】《生物化学杂志》:三种蛋白在神经细胞修复中起重要作用

    俄亥俄州哥伦布市一项新的研究表明,成熟脑细胞表面的三种特定蛋白量的增加可促使细胞产生新的生长延伸。该研究探讨了小鼠脑神经细胞上的三个相关的受体蛋白:GPR3,GPR6和GPR12。当研究人员增加这三种蛋白的量后,细胞生长延伸比蛋白水平正常时的神经细胞的生长大三倍,延伸速度比对照细胞快4-8倍。俄亥俄州立大学医学中心的项目主持人Yoshinaga Saeki说,“我们的研究结果显示,这三种蛋白可能是用于治疗中风、脑和脊髓损伤及神经退行性疾病的重要靶点。”该研究刊登在4月6日的《生物化学杂志》(Journal of Biological Chemistry)上。 这些蛋白量的增加与神经细胞cAMP内的一种重要的信号分子的水平的增加有关。这个分子在调控神经细胞生长、分化和生存,以及传输神经冲动的轴突再生中起着关键作用。随着哺乳动物神经细胞的成熟,其细胞内的cAMP水平下降,这可以部分解释为什么成熟神经细胞受损的轴突不能再生。神经外科副教授、俄亥俄州州立dardinger神经肿瘤及神经科学实验室主管Saeki声称,“我们的发现为cAMP在轴突生长中起着重要作用这一观点提供了更多证据,并显示出这些受体蛋白可能在调节神经细胞cAMP的产生中起主要作用。” 该研究的第一作者Shigeru Tanaka是Saeki所在实验室的一名博士后研究员。在本项研究中,他与同事从小鼠与大鼠脑组织神经母细胞瘤中取得神经细胞,使之在培养基中生长以了解更多关于这三种蛋白及其调控cAMP生长中的作用。他们向这些细胞中注入三种基因以增加这三种蛋白的含量水平,然后用一种被称为核糖核酸干扰的实验室技术关闭这三种蛋白的产生。上述三个蛋白分子中GPR3在神经细胞中最为丰富,而GPR12刺激神经细胞延伸的作用最强。研究表明,阻断GPR3的产生会大大减慢神经细胞的生长速度,研究者们通过修复GPR3或GPR12的产生扭转了这种效应。三种蛋白质的含量水平高也与较高水平的cAMP有关,同时GPR6和GPR12能增加两倍到三倍的水平。 Saeki说,“总的来说,我们的研究结果显示,这三种蛋白能加快神经细胞的生长即使在抑制分子的存在下也是如此,我们迫切希望能找出可以在临床前中风或脊髓损伤动物模型身上重现此结果的方法。”来源:生物谷

  • 【转帖】纳米粒子与转铁蛋白结合即可猎杀癌细胞

    转铁蛋白与纳米粒子结合就可瞄准并杀死拉莫斯癌细胞,而无需负载其他化疗药物,此项发现将有望发展出癌症靶向治疗的新策略。   相关研究成果发表在本周的《美国化学协会杂志》上。  美国北卡罗莱纳大学教堂山分校文理学院的首席化学教授约瑟夫德西蒙博士领导的研究小组发现,人体中的一种正常的良性蛋白质,如果和纳米粒子相结合,就能瞄准并杀死癌细胞,而无须负载那些携带化疗药物的粒子。此前,研究人员曾认为,纳米粒子只有携带了有毒的化学载体才能达到这样的效果。   转铁蛋白是人体血液中数量第四多的蛋白质,近20年来一直被作为肿瘤靶向载体用以递送治癌药物。纳米粒子通常也是无毒的,需要通过负载标准化疗药物来治疗癌症。然而,结合转铁蛋白的“打印”纳米粒子,不仅能识别它们,还能诱导癌细胞死亡。而不与任何纳米粒子结合的自由转铁蛋白,能从拉莫斯癌细胞中获得养料生长,即使在很高浓度下也不会杀死任何拉莫斯癌细胞。   然而令人吃惊的是,转铁蛋白附着在纳米粒子表面后,其能有效地筛选标靶,攻击并杀死B细胞淋巴瘤。在许多迅速生长的癌细胞表面,蛋白质受体被过度表达,于是和转铁蛋白配体结合的治疗就能找到并瞄准它们,而结合转铁蛋白的纳米粒子被认为是安全且无毒的。   德西蒙实验室发明了一种“打印”技术,能人为造出尺寸精确且形状符合预期的纳米颗粒。他们采用这种技术制作出一种可与人类转铁蛋白相结合的生物相容性纳米粒子,其能安全且精确地识别广谱癌症,除了B细胞淋巴瘤外,还能有效地指向非小型细胞,如肺、卵巢、肝脏和前列腺的癌细胞。   研究人员目前正在进一步研究,携带转铁蛋白的纳米粒子如何及为何对于拉莫斯癌细胞是有毒的,而对其他细胞却无毒。   化学治疗和放射治疗曾被认为是癌症的最有效疗法,但这些疗法通常会损害健康组织和器官。这一发现将可能发展出一种全新的策略来治疗某种类型的淋巴瘤,而副作用更小。   不过,德西蒙承认,该研究也会引起一些人对不可预期后果的担忧,即一个设计好的针对某类癌症的靶向化疗载体是否会偏离目标。(科技日报)

  • 细胞分析仪最新功能介绍

    用途: 流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说,它的细节 分辨率为零。 流式细胞仪主要由四部分组成。它们是:流动室和液流系统;激光源和光学系统;光电管和检测系统;计算机和分析系统 参数测量原理荧光信号主要包括两部分:①自发荧光,即不经荧光染色细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光;②特征荧光,即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光,其荧光强度较弱,波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号,在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中,对于结合水平不高的荧光抗体来说,如何提高信噪比是个关键。一般说来,细胞成分中能够产生的自发荧光的分子(例核黄素、细胞色素等)的含量越高,自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞比例越高,自发荧光越强;细胞样品中所含亮细胞的比例越高,自发荧光越强。  减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是:①尽量选用较亮的荧光染料;②选用适宜的激光和滤片光学系统;③采用电子补偿电路,将自发荧光的本底贡献予以补偿。仪器的操作和使用  ①打开电源,对系统进行预热;  ②打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;  ③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;  ④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的荧光强度最强,并要求变异系数为最小;  ⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程;  ⑥样品测量完毕后,再用去离子水冲洗液流系统;  ⑦因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统,存贮量更大),因此可关闭气体、测量装置,而单独使用计算机进行数据处理;  ⑧将所需结果打印出来。热销细胞网是采用Accuri 型2号流式细胞仪,指示符®软件和工作站电脑供应在对市场价格领先的系统的一小部分的功能齐全的流式细胞仪的所有功能。在C6系统包括蓝色和红色激光,四色探测器和正向和侧向散射检测器加上软件,非常直观,你通常将和内收到您的Accuri小时运行的系统。

  • 研究发现HIV表面糖蛋白gp120可使B细胞失活

    位于HIV病毒表面的糖蛋白gp120可让人体B免疫细胞失去活性,这是《自然—免疫学》Nature Immunology上一项研究给出的结论。这项发现解释了为什么HIV病人抗体反应比较弱。人们已经发现HIV能够引起CD4+辅助性T免疫细胞不断丧失,导致免疫系统功能受损、其他感染更容易乘机而入。但人们一直没有弄清为何在HIV感染早期,T细胞数量还处于相对正常时,人体就不产生有力的抗体反应了。Claudia Cicala与同事发现,HIV的gp120蛋白可通过宿主细胞表面受体α4β7直接作用于B细胞。通过α4β7将信号传递给B细胞,诱发一种免疫反应抑制分子和一种抑制受体的表达。这种由gp120引发的反应大大影响了B细胞活性并降低其产生病毒抗体的能力。

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