石蜡浸透仪

植物的一切生命活动，都是以细胞作为基本结构和功能单位进行的。因此，对植物的组织、器官的研究就显得非常重要。石蜡切片法是动物、植物和病理组织切片制作上最重要、最常用的一种方法。由此方法制作的切片在显微镜下观察清晰，能显示其细致结构，反映其真实性，而且可以长期保存。除某些材料确实经不住石蜡法中各种药剂的处理或加温而不能应用外，一般的材料都可以采用石蜡切片法来制成装片在显微镜下观看或长期保存。本法的优点是可以极薄的切片，并可制作大批或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块还可以长期保存。番红-固绿染色法可以区分开结构中的木质化和纤维化部分。　　显微摄影是一项重要的显微技术，在生物科学的研究中，从再现显微镜中物体影像的各种方法中比较，显微摄影是最好的方法。基建的结果除文字的描述外，显微照相能客观而生动的记录下生物体的细微结构或形态，它常与生物绘图技术配合，起到相辅相成的作用。本实验采用盆中冲洗的方法。整个冲洗过程需在暗室中进行。若为涂塑像纸则直接晾干，普通像纸要进行上光。　　1 材料　　1.1 材料　　某植株(完整植株，长有新鲜叶片)、乐凯全色黑白胶卷(ASA100)、涂塑相纸、普通像纸　　1.2 试剂　　1.2.1 浓度为35%、70%、85%、95%、100%的酒精　　1.2.2 二甲苯、二甲苯酒精等量混合液　　1.2.3 包埋剂：纯石蜡配制　　1.2.4 染色剂：浓度为2% 番红水溶液(用水配制)、0.1% 固绿(由95%酒精配制而成)　　1.2.5 固定液FAA(福尔马林 、冰醋酸、70%酒精以1:1:6比例配制)　　1.2.6 封固剂：加拿大树胶　　1.2.7 D-72显影液： 50℃温水 750ml，米吐尔 3.1g，无水亚硫酸钠 45g，无水碳酸钠67.5g，对苯二酚 12g，溴化钾 1.9g，然后加冷水至1000ml。　　1.2.8 定影液F-1和F-5。　　F-5定影液：50℃温水600ml，结晶硫代硫酸钠240g，无水亚硫酸钠15g，28% 乙酸 48ml，硼酸 7.5g硫酸铝钾 15g，然后加冷水至1000ml。　　1.2.9 停影液: 水　　1.3 工具及仪器　　双面刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、染色缸、镊子、旋转切片机、金属温台、毛笔、OlympusBH2型显微照相系统、放大仪、印相仪、上光仪等。　　2 石蜡装片的制作　　2.1 取材　　从植株上取新鲜、健康、有代表性的叶片，用锋利的刀片切取幼茎、叶柄、叶片，并用水清洗干净。将幼茎与叶柄切成约5毫米长的小段，将叶片从主脉处切取5mm× 8mm的长方形，并保证切主脉两侧的叶片相等且主脉与短边平行，底部能立于包埋盒内。　　2.2 固定　　将已经配制好的FAA固定液倒入一个小试剂瓶中，再把已经切好的材料浸入其中，在瓶上贴好标签，待用。　　2.3 浸洗　　用50%酒精或70% 酒精浸洗一、二次就可以进行脱水。　　2.4 脱水　　包埋前的第一个重要步骤为脱水。本实验以酒精为脱水剂，采用逐渐提高酒精浓度来减少材料中水分的含量。可以以此梯度进行操作，70% 酒精、85%酒精 、95%酒精、无水酒精I、无水酒精II，在每级酒精中浸2～24小时，使脱水充分。　　2.5 透明　　酒精不能作为石蜡的溶剂，因此必须经过透明剂透明。二甲苯可以溶解石蜡，有利石蜡透入，同时还有脱去酒精的功效。但二甲苯易使组织收缩变脆，故浸留时间不宜过长。同时若脱水不干净，就会引起不良后果。为了避免组织收缩，在纯酒精或丙酮脱水以后，并不直接移入二甲笨中，其间必须经过几个梯度，逐渐置换，在每一级中停留的时间为1—2小时，二甲苯易挥发，在切片透明之后，从染色缸中取出封藏，手段要敏捷，不宜久置。在纯酒精中脱水后需要经过的几种溶液配比如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011151102_259410_1856701_3.jpg　　2.6 浸蜡　　石蜡能溶于透明剂二甲苯中。把已透明的材料投入熔化的石蜡中，即可取代透明剂，而使组织中的一切空隙为石蜡透入而填满，即为浸蜡。为了使石蜡更好地浸透到组织中去，浸蜡一般需要经过四个不同配比的溶液，在前三杯溶液中停留半小时左右，在温箱中或在包埋箱中进行。然后取出在经第四种溶液。保温箱的温度要适宜，太高，会使材料收缩，太低，石蜡会冻结而不能透入组织。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011151102_259411_1856701_3.jpg　　2.7 包埋　　包埋是将浸过蜡的组织块包埋于石蜡中以利于切片。将已熔化的石蜡倒入做好的包埋盒内，然后用酒精灯加热的镊子将材料从石蜡液中取出，迅速放入纸盒里的石蜡中。放置的方向要按照切片的方向而定，最好把切面向下，并且放正。若石蜡中有气泡，也可用热针刺入石蜡中，将气泡烫去。材料块放置妥当后，以左右手分持纸盒两耳，半浸于冷水中，并用口吹气使蜡表面凝结，蜡凝后，除去纸盒即成蜡块。　　包埋过程中应注意的事，包埋蜡的温度不宜过高，否则会将组织烫坏。　　2.8 切片　　首先要修块，将已凝固的蜡块取出，用刀片把它切至何时大小，修整平滑。然后将蜡块底部稍融化贴在一小木块上，再用融化的蜡粘在蜡块的四周使蜡块牢固帖在木块上。将带石蜡的木块装在旋转式切片机上，将切片刀装在夹刀部位上，调整切片刀的角度，进行切片。将切下的条状蜡带，用毛笔取下放于一张纸上，挑取较好的一小条蜡带做切片。　　2.9 粘片和展片　　以手指涂一薄层Mayer甘油蛋白于干净载玻片上，再用滴管滴一滴蒸馏水于载玻片上，然后用镊子挑取一段切片蜡带置于载玻片的水面上(注意：要以石蜡切片背面比较光滑的一面放在水上，才易展平)。然后将载玻片放在金属温台上加热，使切片蜡带自由展平。注意，载玻片上的水要多放一点，加热温度不要过高，否则石蜡会熔化，组织脱落。自然风干。　　2.10 番红-固绿染色　　2.10.1 溶蜡　　将切片放入二甲苯溶液中，5～10分钟，彻底除去切片上的石蜡。如果室温过低，需延长脱蜡的时间，脱蜡要彻底，否则染色困难。　　2.10.3 复水　　将切片经纯酒精和二甲苯的1:1的溶液，100%、95%、70%、35%酒精溶液各3分钟。逐步过渡，防止材料收缩。　　2.10.4 蒸馏水浸洗　　因为染色液番红是用蒸馏水配置的，应将切片放入蒸馏水中3分钟，以便彻底复水，然后进行染色。　　2.10.5 初染　　将切片放入2%的番红水溶液中染色10～20分钟，使红色染透，否则材料容易褪色。如果番红染色过度，应返回到酒精中进行轻微脱色，再进行以下操作。　　2.10.6 流水冲洗　　用流水冲去多余染液，以冲洗去切片上的番红余色。而且对一些不易被固绿着色的幼嫩组织材料，其切片经水冲洗后吸水膨胀，染色剂易于渗入组织进行染色。　　2.10.7 镜检　　将载玻片放在显微镜的载物台上，进行镜检，染色效果良好，则可进入下一步操作。　　2.10.8 脱水　　将切片依次经过35%，70%的酒精各30秒。因为固绿是用95%酒精配置的，因此应脱去水分再进行固绿染色。　　2.10.9 复染　　用0.1%固绿染色5～10秒，时间不宜过长，否则绿色太深，将切片变为蓝绿色或深绿色，失去的双重染色的意义。　　2.10.10 镜检　　将切片放入95%的酒精过一下后，进行镜检。所染材料的木质化部分呈红色，纤维素部分呈绿色。　　2.10.11 浸洗　　用100%的酒精溶液浸洗3分钟，以洗去切片上固绿的余色，同时也使切片过度到纯酒精中。该步时间不宜过长，由于固绿在纯酒精中易褪色。　　2.10.12 透明　　将切片放入纯酒精和二甲苯的1:1的混合溶液中浸3分钟，使切片从酒精中逐步过渡到纯的二甲苯溶液中。然后将切片放入纯的二甲苯溶液中，浸5分钟，使切片完全过渡到二甲苯溶液中。至材料完全透明后应立即进行封片(为防止二甲苯使组织收缩)。　　对于脱水不彻底的材料投入到二甲苯溶液中时会出现乳白色雾状，这表明该材料无法进行透明，应该退回到无水酒精和95%的酒精进行重新脱水。　　2.11 封片　　把切片从二甲苯溶液中取出，用纸擦去载玻片上的多余液体。滴一滴加拿大树胶于组织上，用镊子夹取一片盖玻片，与载玻片成一倾斜的角度，使盖玻片的一个边缘与加拿大树胶完全接触，然后轻轻地覆盖下，防止产生气泡。树胶的量要适中，使盖玻片与载玻片之间没有空隙。　　3 显微照相　　3.1 安装好显微照相系统　　将小型显微照相连接器连接到OlympusBH2型显微镜上。　　3.2装胶片　　打开相机后盖，装入35毫米胶片，盖好后盖。注意把胶片头部放入收片轴的片槽里时，不要使它超出片槽的另一端。　　3.3 设置自动曝光器　　根据胶片感光度(ASA)选择控制器上感光度标记，按下感光片类型标记按钮(35)。将胶片倒易律失效特性的修正数设置在中间档。　　3.4 试拍　　通过自动

一、取材与固定1 准备工作：工具、药品、计划等2 动物的麻醉：氯仿麻醉3 解剖取材4 材料分割：保持样品的完整性与代表性，考虑切片方向，实心组织大小5*5*2mm,空心细长组织10mm长。5 固定：布温氏固定液固定24h。6 漂洗：70%乙醇换洗3次，每次20~60min。7 保存：70%乙醇0~4 ℃ 。二、脱水、渗透与包埋1 脱水：85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇，每步30min~60min2透明：1/2乙醇＋1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步30min~60min3 渗透： 1/2二甲苯＋ ½ 石蜡→石蜡→石蜡，每步20min~60min，温度62℃4 包埋：将材料放入盛有石蜡的纸盒中，摆好位置（要考虑下一步的修快与切片方向），在水中冷却5～10min.三、切片1 修块 用单面刀片在玻璃板上修快使达到以下要求：（1）一个蜡块含一个材料，蜡块呈正方形或长方形，材料位于蜡块正中央。（2）材料边缘与蜡块边缘平行，各面要平直，材料边缘与蜡块边缘的距离约3mm。2 固着 将修好块的蜡块用烧热的解剖刀固着在样品台上。3 切片 按以下顺序进行（1）将样品台固定在切片机样品臂上，使切面竖直；（2）调切片厚度5～10um；（3）将切片刀用纱布蘸少许二甲苯擦净后装到切片机上，调刀角15～20，将刀固定好；（4）调刀距 使样品与刀口尽可能靠近；（5）切片顺时针摇动切片机速度40-60r/min；（6）将切好的蜡带光面向下用毛笔放到台纸上[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912141513_189942_1769204_3.jpg[/img] 贴片(1)清洗载波片；(2)加粘片剂，要求薄、匀；(3)放切片，光面向下；(4)加水于切片下面；(5)展片将载波片放于50℃的温台上至切片完全展平；(6)烤干吸掉多余水，继续放于温台上至水完全干燥；5 贴标签 临时标签，用铅笔写明组号、姓名。

http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_646666_2692547_3.jpg该图是石蜡的DSC谱图，升温速率为10℃/min，按理说应该算第一个峰处为该石蜡的熔点，但该石蜡的实际熔点接近于第二个峰处的温度，这个怎么办？我知道石蜡的熔点不是定值，但是这也差太多了吧！

广东中山黑心工厂用墨汁石蜡炮制红薯粉 来源：大洋网-广州日报 2011年04月23日03:15http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104231042_290432_1604910_3.jpg谁能想到，如此炮制毒“红薯粉”的工厂竟然证照齐全。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104231043_290433_1604910_3.jpg中山截至昨日查获265袋问题粉丝；涉案工厂证照齐全　　黑工厂老板称“拜师”东莞，东莞市质监部门已展开调查　　本报讯 （记者肖成、齐华伟、李冀珩、黄庭辉、陈明、喻莉萍、周睿鸣）前日，中山市质监局根据市民投诉捣毁了一大型“墨汁石蜡红薯粉”生产工厂，昨日稽查人员联合警方抓捕工厂老板罗某父子。截至昨日共在金叶市场查获265袋问题粉丝。　　经审讯，自今年2月生产以来，该工厂已生产了约50吨红薯粉，获利20万元。厂长罗某称“技术”来自东莞。据了解，该厂证照齐全。　　毒“红薯粉”定性为假冒伪劣　　昨天上午，中山市质监局稽查队联合警方再次前往“墨汁石蜡红薯粉”工厂抓捕老板罗某父子。副局长吕庆强称，罗某生产的部分不合格“红薯粉”被定性为假冒伪劣商品，“部分样品添加的"原料"可能伤害人体健康，要警方介入调查。”　　市场查获265袋毒红薯粉　　据现场的执法人员介绍，他们前日赶到该厂时，在“冷却室”内，工人正将调兑好的黑色浑浊液体大勺加入淀粉搅拌机内。“该黑色液体由墨汁、柠檬黄、果绿等勾兑而成。经清点，我们共查获成品“红薯粉”5.54吨，珍珠粉1.1吨。”　　据介绍，该厂名为“中山市祥明食品有限公司”，去年底工商登记，今年初拿到工业产品生产许可证。　　昨晚8时，中山市召开新闻发布会通报，截至昨日共在金叶市场查获265袋“祥明”品牌及无厂名厂牌的问题粉丝，该市质监局副局长吕庆强表示，已检查全市所有生产淀粉类企业，没有发现类似情况。　　老板母亲现场演示　　在昨天清查的现场，老板罗某的儿子小罗向现场执法人员介绍了红薯粉的制造过程。随后，罗某的母亲现场演示了“墨汁石蜡红薯粉”的制作过程：先用明火将干锅烧热，放上石蜡，石蜡融化后加入玉米淀粉、然后加入调制好的黑色液体，再放进机器，红薯粉就压制出来。　　记者了解到，只要用半立方水、一吨玉米淀粉、一小盖（墨水瓶盖）墨水、一勺子果绿和一勺柠檬酸就能制造出一吨的红薯粉，“成本价3250元，约卖5000元。”如果使用正规生产方法，成本要四五千元。　　昨天上午，记者找到这个隐蔽的工厂，面积约1400平方米，由两个大工棚组成。工厂虽已被查封，但大量的红薯粉依然搭在杆上晾晒。　　一个装有石蜡的缸边，竟然写有一行警告员工不得倒掉“老料”（用过的石蜡）的“提醒”（见上图），这些石蜡散发着恶臭。　　东莞在行动　　昨天上午，罗氏父子被警方带走时，罗某突然向记者喊冤：“我不服，你给我电话号码，我把全部事情说给你听。”　　罗某喊冤：在东莞“拜师学艺”　　老罗说，他是在东莞做生意的时候，看到很多人这样制造红薯粉，去年想给儿子找份事做，才特地向人学习了制作过程。“东莞万江大莲塘有几十家、甚至上百家这样做红薯粉的。”老罗说。　　老罗被带走后，罗母也表示他们是在东莞“拜师学艺”，学会给玉米淀粉添加墨汁冒充红薯粉的。“东莞技术更好些，我们做的卖不过他们。”工作人员立即向省质监局和东莞质监局通报情况，随后东莞质监局针对辖区内红薯粉厂家检查。　　得到消息后，记者赶往东莞各大市场采访，巧遇东莞市质监局及万江区政府的工作人员，他们正在提取各种红薯粉的样品，准备送检。　　市场老板：有些粉丝生产时使用“色素”　　昨日下午1时，记者来到东莞万江大莲塘综合市场，发现多家店面都有花样繁多的“红薯粉丝”售卖。　　某店主称，这些红薯粉丝价格差别很大，最贵的6元一斤，最便宜的仅3元一斤。　　关于粉丝产地，店主表示，粉丝都是“湖南造”。追问之下店主改称，上述粉丝系“湖南人手工制造”，产地则在东莞大岭山镇。　　为何颜色不同？店主透露：“有些粉丝生产时使用了"色素"。”　　如何识别　　真假红薯粉？　　某超市工作人员介绍，真正用红薯淀粉制作的粉丝，颜色不会呈现金黄色或黑色，而且真正的“红薯粉丝”在断裂切口处还可以看到白色粉质。 (责任编辑：克伟)