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荧光恒温扩增检测仪

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  • 【实战宝典】扩增曲线常出现阳性对照有典型的“S”型扩增曲线，但不显示 Ct 值的原因及解决方案？以非洲猪瘟检测为例

    问题描述：扩增曲线常出现阳性对照有典型的“S”型扩增曲线，但不显示 Ct 值的原因及解决方案？以非洲猪瘟检测为例解答：[align=left][font=宋体][color=black]出现以上情况的主要原因是仪器默认的荧光阈值线过高[/color][/font][sup][font='Times New Roman','serif'][color=black][17][/color][/font][/sup][font=宋体][color=black]。[/color][/font][font=宋体][color=black]解决方案：一般将荧光阈值设在[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] [/color][/font][font=宋体][color=black]指数扩增的起始，并高于阴性对照曲线。其数值选择与试剂盒的性能有关，对荧光强度较高的扩增曲线，阈值的设定不一定非要遵循固定的原则。[/color][/font][font=宋体][color=black]因此，针对试剂盒性能不同，实验室应建立自己的阈值范围，尽可能保证低值样本检测结果的稳定性[/color][/font][sup][font='Times New Roman','serif'][color=black][19][/color][/font][/sup][font=宋体][color=black]。[/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 【分享】PCR扩增仪的选择

    1971年Kleppe等人在Journal of molecular biology上发表文章首次准确、精炼、客观的阐述了PCR方法，1976年一种从嗜热水生菌(Thermus aquaticus)分离得到的热稳定的DNA依赖的DNA聚合酶的应用大大增加了PCR的效率。而现今所发展出来的PCR则是源于由Saiki和Mullis等人于1988年发表在Science上的一篇论文，Mullis当时服务于Perkin Elmer（PE）公司，因此PE公司在PCR界有着特殊的地位。后来PE被Applied Biosystems Inc.（ABI）公司收购、分拆、再转卖，而PCR的专利和倍受信赖的PCR仪器生产和销售就留在ABI名下。到如今，PCR方法愈发趋向自动化，并从中衍生出更多的新技术方法，可以说，PCR技术是支撑现代分子生物学发展的一块重要基石。这种技术的广泛应用催生了一个庞大的市场，多个公司均有各种类型的商品化PCR仪出售。PCR的专利目前依然掌握在ABI和Roche（罗氏）两大公司手中，去年业界颇为引人瞩目ABI诉MJ公司侵犯侵犯PCR仪知识产权案最终以MJ败诉并宣布破产、最终被Bio-rad收购暂告一段落。其后还会不会有后继的故事还需拭目以待。 PCR原理 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶的作用下，以单链为模版，根据碱基互补配对原则复制成新的单链，与模版配对成为双链分子挎贝。在体外实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计与模板DNA的5’端结合的两条引物，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制，多次重复“变性解链—退火—合成延伸”的循环就可以以几何级数大量扩增特定的基因。 发现耐热DNA聚合酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该类酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。 从PCR原理可以看出，PCR仪的关键是升降温的步骤。现在偶尔还能听到一些前辈们笑谈早年的PCR实验如何在3个水浴锅中完成的趣闻。经过不断改进，今天的PCR已经越来越完善和智能化。出于市场推广的战略需要，各厂家的PCR仪型号不同，着力宣传的技术指标和参数也不尽统一，编者在这里简单列出选购时我们认为应该考虑的常用指标，希望有助于大家选购PCR仪的选购技巧。PCR仪介绍及其选购 PCR仪的种类总体来说可以分为两大类：PCR扩增仪和实时荧光定量PCR仪，普通的PCR扩增仪又衍生出带梯度PCR功能的梯度PCR仪、和带原位扩增功能的原位PCR仪等等。1996年由ABI公司首先推出将扩增和检测融为一体的实时荧光定量PCR仪，此后很多公司如Eppendorf、ROCHE、Corbett、MJ等等都先后推出不同款式的定量PCR仪。

  • 荧光增白剂检测仪器可以检测什么项目

    荧光增白剂检测仪器可以检测什么项目

    [size=16px]　　荧光增白剂检测仪器可以检测什么项目　　荧光增白剂检测仪器可以检测以下项目：　　样品中是否含有荧光增白剂。　　样品中荧光增白剂的种类和含量。　　样品中荧光增白剂的分子结构和性质。　　样品中荧光增白剂的来源和生产过程。　　样品中荧光增白剂的毒性和安全性评估。　　具体来说，荧光增白剂检测仪器可以应用于以下领域：　　食品行业：用于检测食品中是否含有荧光增白剂，以及荧光增白剂的种类和含量。　　纺织品行业：用于检测纺织品中是否含有荧光增白剂，以及荧光增白剂的种类和含量。　　日化产品行业：用于检测日化产品中是否含有荧光增白剂，以及荧光增白剂的种类和含量。　　环境监测领域：用于检测环境中是否含有荧光增白剂，以及荧光增白剂的种类和含量。　　总之，荧光增白剂检测仪器可以广泛应用于各个领域，帮助人们更好地了解样品中荧光增白剂的情况，保障人类健康和环境安全。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/11/202311091016536333_2457_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size]

  • 北京临床基因扩增检验实验室筹建策划方案

    北京临床基因扩增检验实验室筹建策划方案

    北京临床基因扩增检验实验室筹建策划方案项目名称：2012年临床基因扩增检验实验室1 概述 临床基因扩增实验是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，因此被临床医生广为认可，已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。但是，这种实验需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视，因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。本文主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局，空调通风系统设计、气流控制和污染的防制几个方面对实验室设计中的主要特点进行了阐述。 临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。因此，实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。下面就对这几个方面分别进说明。2 临床基因扩增实验室平面布局 临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。 各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。临床基因扩增实验室平面布置示意图如图1所示。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/11/201111250944_332855_2394712_3.jpg图1临床基因扩增实验室平面布置示意图3 实验室空调通风系统设计及压力控制 临床基因扩增实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。3.1 试剂贮存和准备区 该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。 对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。3.2 标本制备区 该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。 本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。3.3 扩增反应混合物配制和扩增区 该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。 本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。3.4 扩增产物分析区 该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。 本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。4 污染的预防与控制 临床基因扩增实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。4.1 工作区域的严格划分（1）各个实验区域设置合理；（2）各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。4.2 合理的系统设置（1）合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；（2）严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。[/fon

  • 【参数解读总结篇】基因扩增仪(PCR)的技术参数解读与使用

    【参数解读总结篇】基因扩增仪(PCR)的技术参数解读与使用

    【参数解读】基因扩增仪(PCR)的技术参数解读与使用PCR技术的基本原理PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。请您来解析：1、普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类仪器有何异同？http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502251536_536341_1608710_3.png2、我们应该如何根据检测需求来选购PCR的四类仪器？根据检测的定量要求来选择仪器类型。3、PCR的核心参数都有哪些？核心参数是温度控制。4、梯度PCR仪可以分离不同DNA的片段吗？与普通PCR的异同在哪？梯度PCR可以分离不同DNA片段,与普通PCR仪不同的地方在于。可以设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR扩增就可以筛选出表达量高的最适合退火温度进行有效的扩增。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增，这样可节省试验时间、提高实验效率，又节约实验成本。5、使用过程中常见的问题PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污 染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生. 一、污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶 或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染. (二)PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水 及其它溶液被PCR核酸模板污染. (三)PCR扩增产物污染.这是PCR反应中最主要最常见的污染问题.因为PCR产物拷贝量 大(一般为1013拷贝/ml)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物 污染，就可造成假阳就可形成假阳性. 还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩 擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样 枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由 其造成的污染是一个值得特别重视的问题. (四)实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的 检验室，这个问题也比较常见.因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化 过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简 便性及具有很强的生命力.其污染可能性也很大. 二、污染的监测 一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以 便采取措施，防止和消除污染. 对照试验 1.阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志.阳性 对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳 性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下).但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳 性标本，其对检测或扩增样品污染的可能性很大.因而当某一PCR试剂经自己使用稳 定，检验人员心中有数时，在以后的实验中可免设阳性对照. 2.阴性对照:每次PCR实验务必做阴性对照.它包括①标本对照:被检的标本是血清就用 鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照.②试剂 对照:在PCR试剂中不加模板DNA或RNA，进行PCR扩增，以监测试剂是否污染. 3.重复性试验 4.选择不同区域的引物进行PCR扩增 三、防止污染的方法 (一)合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定 等步骤分区或分室进行，特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应与其它步骤严格分开. 最好能划分①标本处理区;②PCR反应液制备区;③PCR循环扩增区;④PCR产物鉴定区. 其实验用品及吸样枪应专用.实验前应将实验室用紫外线消毒以破坏残留的DNA或RNA. (二)吸样枪:吸样枪污染是一个值得注意的问题.由于操作时不慎将样品或模板核酸吸 入枪内或粘上枪头是一个严重的污染源，因而加样或吸取模板核酸时要十分小心，吸 样要慢，吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或产生气溶胶污染. (三)预混和分装PCR试剂:所有的PCR试剂都应小量分装，如有可能，PCR反应液应预先 配制好，然后小量分装，-20℃保存.以减少重复加样次数，避免污染机会.另外，PCR试剂，PCR反应液应与样品及PCR产物分开保存，不应放于同一冰盒或同一 冰箱. (四)防止操作人员污染，使用一次性手套、吸头、小离心管应一次性使用. (五)设立适当的阳性对照和阴性对照，阳性对照以能出现扩增条带的最低量的标准病 原体核酸为宜，并注意交叉污染的可能性，每次反应都应有一管不加模板的试剂对照 及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照. (六)减少PCR循环次数，只要PCR产物达到检测水平就适可而止. (七)选择质量好的Eppendorf管，以避免样本外溢及外来核酸的进入，打开离心管前 应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部.开管动作要轻，以防管内液体溅出. 常见问题分析与对策 PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改。 酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。 引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度 高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单 位。②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有 引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条 带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高，一条 亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融 或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④引物设计不合理，如引物长度不 够，引物之间形成二聚体等。 Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特 异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。 反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多 大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul 后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。 物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出 现假阴性;退火温度过低，可致

  • 【实战宝典】荧光定量PCR扩增效率低的原因？

    问题描述：荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增效率低的原因？解答：[align=left][font=宋体][color=black]可能的原因有：[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=#262626][back=white]（[/back][/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=#262626][back=white]1[/back][/color][/font][font=宋体][color=#262626][back=white]）反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。[/back][/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=#262626][back=white]（[/back][/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=#262626][back=white]2[/back][/color][/font][font=宋体][color=#262626][back=white]）反应条件不够优化，可适当降低退火温度或改为三步扩增法。[/back][/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=#262626][back=white]（[/back][/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=#262626][back=white]3[/back][/color][/font][font=宋体][color=#262626][back=white]）反应体系中有[/back][/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=#262626][back=white][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp]PCR[/url][/back][/color][/font][font=宋体][color=#262626][back=white]反应抑制物，一般是加入模板时所引入，应先把模板适度稀释，再加入反应体系中，以减少抑制物的影响。[/back][/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 【云唐】荧光增白剂检测仪是什么仪器

    [img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404290924279599_4867_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]　　荧光增白剂检测仪是一种专门用于检测各种物品中是否含有荧光增白剂的设备。荧光增白剂是一种广泛应用于纺织品、造纸、塑料等行业的化学物质，它通过使物品表面产生荧光效应来提高物品的美观度和亮度。这种检测仪器的出现，为各行业的生产质量控制和消费者权益保护提供了有力的技术支持。　　荧光增白剂检测仪的原理基于荧光增白剂的荧光特性。荧光增白剂中的荧光物质在特定的光源(如氙弧灯)照射下，会吸收可见光以外的紫外线，并将其转变为具有蓝紫色的可见光反射出来。这种反射光与物品原有的颜色相结合，使得物品看起来更加洁白、亮丽。荧光增白剂检测仪通过检测物品在紫外光源下的荧光发射情况，来判断其是否含有荧光增白剂。　　荧光增白剂检测仪具有广泛的应用范围，不仅适用于纺织品、造纸、塑料等行业，还可用于食品、药品、化妆品等领域的荧光增白剂检测。在食品行业中，荧光增白剂检测仪可用于检测面粉、食品添加剂、水果、蔬菜等是否含有荧光增白剂，以确保食品的安全性和质量。在药品和化妆品领域，荧光增白剂检测仪可用于检测原料和产品中是否含有荧光增白剂，以保障消费者的健康。　　荧光增白剂检测仪具有多种优点。首先，它采用先进的荧光检测技术，具有高灵敏度和高准确性，能够准确地检测出样品中是否含有荧光增白剂。其次，该仪器操作简单、方便，用户只需将样品放置在检测箱内，启动仪器即可进行检测。此外，荧光增白剂检测仪还具有检测速度快、自动化程度高等特点，大大提高了检测效率。　　总之，荧光增白剂检测仪是一种重要的检测设备，它为各行业的生产质量控制和消费者权益保护提供了有力的技术支持。随着科技的不断发展，荧光增白剂检测仪的性能和精度将不断提高，为人们的生活带来更多的便利和安全。

  • PCR常见问题分析及对策【无扩增产物、非特异性扩增、拖尾、假阳性】

    PCR相关经验分享PCR常见问题-分析及对策(无扩增产物、非特异性扩增、拖尾、假阳性)问题1：无扩增产物 现象：正对照有条带，而样品则无 原因: 1.模板:含有抑制物，含量低 2.Buffer对样品不合适 3.引物设计不当或者发生降解 4.反应条件：退火温度太高，延伸时间太短 对策: 1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量 2.更换Buffer或调整浓度 3.重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物 4.降低退火温度、延长延伸时间 问题2：非特异性扩增 现象：条带与预计的大小不一致或者非特异性扩增带 原因： 1.引物特异性差 2.模板或引物浓度过高 3.酶量过多 4.Mg2+浓度偏高 5.退火温度偏低 6.循环次数过多 对策： 1.重新设计引物或者使用巢式PCR 2.适当降低模板或引物浓度 3.适当减少酶量 4.降低镁离子浓度 5.适当提高退火温度或使用二阶段温度法 6.减少循环次数 问题3：拖尾 现象：产物在凝胶上呈Smear状态。 原因： 1.模板不纯 2.Buffer不合适 3.退火温度偏低 4.酶量过多 5.dNTP、Mg 2+浓度偏高 6.循环次数过多 对策： 1.纯化模板 2.更换Buffer 3.适当提高退火温度 4.适量用酶 5.适当降低dNTP和镁离子的浓度 6.减少循环次数 问题4：假阳性 现象：空白对照出现目的扩增产物 原因： 靶序列或扩增产物 的交*污染 对策： 1.操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外； 2.除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管 及加样枪头等均应一次性使用。 3.各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存 PCR引物设计的黄金法则 （转自tiangen）1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。 GC含量（composition）过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的Tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度，一般高于Tm值5~10℃。若按公式Tm= 4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。4.引物3′端要避开密码子的第3位。 如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。5.引物3′端不能选择A，最好选择T。 引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3′端最好选择T。6. 碱基要随机分布。 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（False priming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在GC富集序列区错误引发。7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。 引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构（Hairpin）使引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。引物自身不能有连续4个碱基的互补。 两引物之间也不应具有互补性，尤其应避免3′ 端的互补重叠以防止引物二聚体（Dimer与Cross dimer）的形成。引物之间不能有连续4个碱基的互补。 引物二聚体及发夹结构如果不可避免的话，应尽量使其△G值不要过高（应小于4.5kcal/mol）。否则易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR 反应不能正常进行。8. 引物5′ 端和中间△G值应该相对较高，而3′ 端△G值较低。 △G值是指DNA 双链形成所需的自由能，它反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性，△G值越大，则双链越稳定。应当选用5′ 端和中间△G值相对较高，而3′ 端△G值较低（绝对值不超过9）的引物。引物3′ 端的△G 值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA 聚合反应。（不同位置的△G值可以用Oligo 6软件进行分析）9.引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。 引物的5′ 端决定着PCR产物的长度，它对扩增特异性影响不大。因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物5′ 端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA序列；引入点突变、插入突变、缺失突变序列；引入启动子序列等。 引物的延伸是从3′ 端开始的，不能进行任何修饰。3′ 端也不能有形成任何二级结构可能。10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。 某些引物无效的主要原因是扩增产物单链二级结构的影响，选择扩增片段时最好避开二级结构区域。用有关软件（比如RNAstructure）可以预测估计mRNA的稳定二级结构，有助于选择模板。实验表明，待扩区域自由能（△G°）小于

  • PCR扩增仪常见问题汇总

    问题1:不出现扩增条带 引物：引物质量是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。对策为：①选定合适的引物合成单位；②引物的浓度不仅要看OD值，最好用引物原液做琼脂糖凝胶电泳，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应与引物合成单位协商解决，如一条引物亮度高，一条引物亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度；③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏而导致变质降解失效；④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。 Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。 靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，其PCR扩增是不会成功的。问题2:出现非特异性扩增带 PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带出现的原因：一是引物与靶序列不完全互补，或引物聚合形成二聚体；二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。 其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。对策为：必要时重新设计引物；减低酶量或调换另一来源的酶；降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数；适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。问题3:出现片状拖带或涂抹带 PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。可能由于Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多，GC含量过高引起。对策为：适当降低Mg2+浓度；增加模板量；减少循环次数；加入添加剂甘油或Qiagen公司的Q-solution。问题4:污染的监测——对照试验 1.阳性对照：应设有阳性对照，它是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要标志。阳性对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下)。 2.阴性对照：每次PCR实验务必做阴性对照。它包括①标本对照：被检的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照，被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照；②试剂对照：在PCR试剂中不加模板DNA或RNA进行PCR扩增，以监测试剂是否污染。 3.重复性试验 4.选择不同区域的引物进行PCR扩增问题5:污染的处理 （一）环境污染 1．稀酸处理法 2．紫外照射(UV)法 （二）反应液污染，可采用下列方法之一处理： 1．DNase I法 2．内切酶法 3．紫外照射法 4．Gama射线辐射法 （三）尿嘧啶糖苷酶(UNG)法 由于UV照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好，而临床用于检测的PCR扩增片段通常为300bp左右，因此UNG的预防作用日益受到重视和肯定。 （四）固相捕获法 用于去除标本中污染的核酸和杂质。 （五）RS-PCR法(RNA-specificPCR) 也称为链特异性PCR，主要指用于RNA模板的特异性PCR法，该法可明显降低假阳性而不影响PCR的敏感性。 （六）抗污染引物法 该对引物扩增时通过病毒DNA克隆如入质粒的位点，这一区域只存在于完整的原病毒中。如果重组质粒污染了标本，就不能扩增出任何条带，即使出现了扩增带，其大小也与预期的不同。只有原病毒DNA才能被引物扩增，因此只要出现预期大小的扩增带就可以证明标本是阳性的，该法试用于环状靶分子系列。

  • 【求助】扩增效率低的原因

    今天遇到个难解的困惑： 做某个基因荧光定量标曲的时候，感觉什么指标都很好了，如稀释度间的间距、重复性、溶解曲线、标准偏差值等等都基本满意了，但是扩增效率却怎么也上不去，重复了一次还是如此情况，跟前面其它几个基因的相比，大多数指标数据的并没有大的差异，但就是不知怎么今天做的这个基因扩增效率显示这么低。。。诚向各路高手请教，不知你们是否曾经遇到过类似的情况呢？可能的原因是什么呢？求帮忙分析下下。。谢谢各位了！

  • 【资料】PCR扩增过程中常见的问题及解决方法

    PCR技术具有高度的特异性、选择性、灵敏性，而且快速、简便、易于自动化，因此在临床医学工作中受到广泛的重视及合理的应用。目前在我国许多基层医疗单位均已相继开展PCR研究用应用工作。PCR技术很简单，原理也很清楚，因此有条件的单位都能较顺利地上马，但毕竟PCR技术是一种新生事物，受到许多条件因素的影响，所以要做得好也不容易。在PCR技术应用过程中会遇到这样或那样的问题，更甚至会得到与事实完成相反的结果。为了使我们能够顺利地开展PCR工作，更好地发挥PCR技术的工具作用，我们根据多年来PCR工作总结的经验，对PCR扩增过程中经常出现的一些问题进行简要的总结，提供给广大科研工作者作为参考，抛砖引玉，不足之处欢迎指正。 一、 假阳性扩增 在实验过程中有时会碰到所检验的样本全部阳性，而且扩增产物电泳条带亮度均一，这是扩增系统受到污染时最典型的一种表现，需仔细检查，排除污染源，一般应从以下步骤着手： ⒈ 试剂污染： 厂方提供的试剂或其中的某种组分在出厂或运输、贮存过程中受到污染。检测方法，可按试剂盒说明书将试剂分装好，直接置于PCR仪中扩增（不加阴性对照，可加适量蒸馏水），便可简单而有效地判断试剂是否已受到污染。 ⒉ 实验室污染： 这是最常见的污染源，由于PCR技术可以在几个小时内将模板中某些特异性序列扩增到数百万倍以上，扩弗产物可能在电泳等过程中污染[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]、操作台或随着蒸发所形成气溶胶而污染整个实验室。扩增产物又是最有效的模板，一旦出现产物污染其污染程度都较严重。判断方法：可以将实验中最关键步骤如试剂分装、样品处理等转移到一个新的环境中或转移到超净工作台中完成。当然，所用的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]、吸咀管（离心管）都应彻底更换。解决方法：实验室污染是PCR扩增过程中最易出现的现象，而且一旦出现污染，消除污染源又极其困难，往往需对整个实验室及实验器材彻底清洗处理，所以应该以预防为主，实验过程中严格遵守实验基本要求，样品处理与扩增产物及电泳应尽量分开，最好能在两个房间进行。扩增前处理所用的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]及扩增后点样用的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]应严格地分开，不可互换。PCR室应保持良好的通风、清洁、最好能专用。 ⒊ 采样污染： 在实验过程中，有时会出现一批结果阳性率很高，一批结果阳性率又下降很多，如此反复，这种现象大都是由于采样时污染所致，一般来讲正规试剂生产厂家，其试剂出厂时都要经过严格的质量检测、批间，特别是批内差异都极小，不致出现如此明显的反复，这种现象主要是由于收集样本的试管或吸管受到污染所致。PCR扩增非常敏感，而一般实验室对重复使用的试管所进行的洗涤方法往注不能去除痕量DNA，这些痕量DNA便成为PCR模板，出现阳性扩增结果，由于采样试管受污染程度不一，所以出现忽高忽低的现象解决方法建议使用一次试管及吸咀取样。 二、 假阴性扩增： 如果连续几次扩增结果都是阴性，或已知阳性样本出现阴性扩增结果，一般认为这是假阴性，出现这现象有以下几种原因： ⒈ 仪器故障： 出现全阴结果，首先考虑到仪器运转是否正常。正确判断仪器的工作状况，是排除假阴性其它原因的基础，仪器运转是否正常是PCR扩增最关键的步聚之一。判断仪器是否正常，首先要测定加热体的温度是否准确，波动范围是否答合要求，各孔之间差异是否符合要求，PCR扩增往往对仪器加热温度及各管间的差异要求有很高的精度，如果误差太大，势必出现假阴性。必须注意的是不能过信名牌，我们经常发现一些名牌机器温度差异高达二度以上。 ⒉ 试剂失效或无效： 了解机器是否正常，便可对试剂进行检测。首先要了解试剂是否超过有效期，试存放方法是否达到要求，如果试剂盒在有效期内，贮存方法是正确，那么就应该仔细、慎重地判断试剂是否是无效试剂或称不合格试剂。可以用已知阳性样本，或试剂盒提供的阳性对照，严格按说明书操作扩增一次，然后把扩增产物用双蒸水稀释1000倍，作为模板进行第二次扩增，判断结果，如果是阴性说明试剂无效或不合格，如果结果阳性那么可用以下方法判定试剂的灵敏度。

  • ATP荧光检测仪有哪些功能

    ATP荧光检测仪有哪些功能

    [size=16px]　　ATP荧光检测仪有哪些功能　　ATP荧光检测仪具有多种功能，可以用于多种生物样品中的ATP含量检测，包括：　　检测细胞活力：可以检测细胞悬液中的ATP含量，从而评估细胞的活力水平。　　检测细胞增殖：可以检测细胞培养基中的ATP含量，从而评估细胞的增殖水平。　　检测细胞凋亡：可以检测血清、血浆、组织液、细胞提取物等样品中的ATP含量，从而评估细胞的凋亡水平。　　检测其他有机物：如蛋白质、核酸、糖类等，从而可以更好地了解细胞的生物学过程。　　此外，ATP荧光检测仪还可以用于研究ATP的生物学功能，以及检测药物的活性、蛋白质的结构和功能、细胞的活性等。总之，ATP荧光检测仪是一种功能强大的工具，可以广泛应用于生物医学领域。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/12/202312111001065946_671_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size]

  • 【实战宝典】检测样品无典型“S”形扩增曲线，但其 Ct 值显示为阳性？以非洲猪瘟检测为例

    问题描述：检测样品无典型“S”形扩增曲线，但其 Ct 值显示为阳性？以非洲猪瘟检测为例解答：[align=left][font=宋体][color=black]实际检测过程中，也会遇到被检样品无典型[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]“S”[/color][/font][font=宋体][color=black]形扩增曲线，但其[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black] Ct [/color][/font][font=宋体][color=black]值显示为阳性（按照试剂盒说明书[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black] Ct [/color][/font][font=宋体][color=black]值判定标准）的情况。主要是由于被检样品不够新鲜或经反复冻融等，导致样本携带的病毒出现降解或样本核酸提取不纯。[/color][/font][sup][font='Times New Roman','serif'][color=black][18][/color][/font][/sup][font=宋体][color=black]。因此，被检样品要尽量新鲜，[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]4℃~8℃[/color][/font][font=宋体][color=black]保存的血清或抗凝血样品一般不超过[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black] 120 h[/color][/font][font=宋体][color=black]，唾液样品、组织样品冻融次数一般不超过[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black] 3 [/color][/font][font=宋体][color=black]次。[/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 中国PCR基因扩增仪市场研究报告(2017版)

    [url]http://www.instrument.com.cn/news/20170525/220477.shtml[/url]　　为了解近年来PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]的技术发展趋势、市场发展行情、PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]各品牌在市场中的占有率以及重点应用领域等内容，同时，为各PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]厂商在以后的仪器销售和市场推广活动中做指导，仪器信息网特组织了“中国PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场调研”活动。此次调研，面对的调研对象包括仪器信息网相关注册用户、PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]制造、应用领域专家以及部分PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]生产厂商等。　　《中国PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场研究报告(2017版)》内容包含了PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]产业概述、新品盘点、主要制造商地区分布及零部件供应商、销量与售价分析（地区）、销量与份额分析（品牌）、营销渠道分析、市场发展趋势、产业研究总结。　　《中国PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场研究报告(2017版)》的完成得到了广大用户、企业以及业内专家的大力支持。在前期调研过程中，咨询了业内相关专家30余位，超过1500家实验室用户参与了此次PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]的调研，在此，谨对他们表示最衷心的感谢！　　报告链接：[color=#00b0f0][b][url=http://www.instrument.com.cn/survey/Report_Census.aspx?id=134]中国PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场研究报告(2017版)[/url][/b][/color][color=#00b0f0]　　[color=#000000][b][color=#000000]欢迎感兴趣的网友和我们联系购买报告事宜，[/color][color=#000000]联系电话：010-51654077-8049[/color][/b][/color][/color][b]节选[/b]第一章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]产业概述1.1 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]定义及分类　　PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）是一种在体外特异性扩增靶DNA序列的的技术，通过多个循环的变性、退火和延伸，能够使微量的遗传物质在几小时内得到几百万倍的扩增。其基本过程为变性、退火和延伸，这三步需要不同的温度条件。PCR仪是指为PCR反应提供所需要的温度循环条件的仪器。根据工作原理和功能可以分为六种：普通PCR仪、梯度PCR仪、实时荧光定量PCR仪、原位PCR仪、数字PCR仪、恒温PCR仪、高速PCR等。一般原理有相似的地方，但在结构和配件方面还存在一些差异。来源：《生物化学与生物物理进展》，中国科学院和中国生物物理学会，2017年5月1.2 不同类型PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量份额[img]http://img1.17img.cn/17img/images/201705/insimg/7392dd08-91c1-4c09-875a-640ff8fd94a7.jpg[/img]图1.3 2016年不同类型PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量份额（台）来源：抽样统计，2017年5月　　我们通过对相关企业的长期跟踪调研，同时统计分析了超过*家PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]用户。2016年国内PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量在*~*台。2016年普通PCR和梯度PCR市场销量总和大约是荧光定量PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]的*倍。2014年数字PCR中国市场销量不足*台，2016年数字PCR中国市场销量不足*台。1.3 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]使用单位分布表1.1 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]使用单位一览表[table][tr][td=1,1,74][b]单位类别[/b][/td][td=1,1,386][b]具体单位[/b][/td][/tr][tr][td=1,1,74]工业企业[/td][td=1,1,386]生物制药、食品加工、基因测序等企业[/td][/tr][tr][td=1,1,74]政府机构[/td][td=1,1,386][color=#333333]食药监、质监局、疾病控制中心、血液中心、公安局、出入境检验检疫局等[/color][/td][/tr][tr][td=1,1,74]医疗系统[/td][td=1,1,386]医院、康复中心、特殊病防治院/所等[/td][/tr][tr][td=1,1,74]教学/科研[/td][td=1,1,386]大学高校、研究院/所、中学等[/td][/tr][/table]来源：仪器信息网产业研究部，2017年5月　　2016年国内PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]采购用户中，其中教学/科研用户数量超过*，高校和研究院/所主要选用进口品牌*的相对较新型的高精度仪器，也会有部分初、高中采购PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]用于教学实验，主要品牌为国产的*。政府机构为*大类的用户，表现比较抢眼的是各地的*等。本次调研数据显示，医疗系统占2016年PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场销量份额的*，其中用户基本上都是*，涉及*批量采购的倾向更为明显。企业用户主要以*为主。第二章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]新品盘点　　为了跟踪PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]技术发展方向和各个厂商的最新产品动态，本章对2016年在中国上市的PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]进行了一个系统梳理。据不完全统计，2016年，中国市场上一共上市了5款PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]，其中1款普通PCR，1款梯度PCR，3款荧光定量PCR。3款进口新品，2款国产新品。第五章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量与份额分析（品牌）5.1 主要品牌PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量及市场份额[img=,489,367]http://img1.17img.cn/17img/images/201705/insimg/cac447df-a97c-4407-9f3b-27f57c47c89b.jpg[/img]图5.1 2016年主流企业销量市场份额来源：抽样统计，2017年5月　　2016年中国PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场规模*台，销售总额为8亿人民币左右。总的来说，国内PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场现在的格局是基本被国外厂商垄断，国外厂商的市场占有率在*%以上。但因为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]技术门槛较低，参与低端市场竞争的企业非常多，2016年中国市场上有产品销售的厂商多达40多家。国外厂商包括赛默飞、伯乐、罗氏、耶拿、艾本德、安捷伦、丹纳赫、圣欧（SensoQuest）、凯杰（QIAGEN）、威泰克(Wealtec)等，国内厂商包括博日、东胜、天隆、朗基、力康、达安基因、六一、安杰思等。第七章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场发展趋势7.1 2017-2022年PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场预测[img]http://img1.17img.cn/17img/images/201705/insimg/0da11d31-d94d-4538-9114-33bc02c11ca7.jpg[/img]图7.1 2017-2022年中国PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量（台）及增长趋势来源：仪器信息网产业研究部，2017年5月[b]正文目录[/b]第一章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]产业概述... 11.1 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]定义及分类... 11.2 不同类型PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量份额... 41.3 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]使用单位分布... 41.4 普通PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]产业链结构... 61.5 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]产业概述... 7第二章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]新品盘点... 82.1 普通PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]... 82.1.1 赛默飞自动化PCR仪（ATC）... 82.2 梯度PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]... 92.2.1 耶拿Biometra TOne梯度[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]... 92.3 荧光定量PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]... 102.3.1 耶拿qTOWER3G touch荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]... 102.3.2 天隆Gentier 96E 实时荧光定量PCR检测系统... 112.3.3 枫岭FTC-8000 实时荧光定量PCR仪... 12第三章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]和主要制造商地区分布及零部件供应商... 133.1 主要PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]生产企业生产基地分布... 133.2 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]部分主要零部件供应商... 15第四章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量（地区）与售价分析... 164.1 2016分地区销量分析（台）... 164.2 2016售价分析... 18第五章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量与份额分析（品牌）... 205.1 主要品牌PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量及市场份额... 20第六章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]营销渠道分析... 236.1 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]营销渠道现状分析... 236.2 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]营销渠道特点及其发展趋势... 24第七章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场发展趋势... 257.1 2017-2022年PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]市场预测... 257.2 2017-2022年PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]销量（台）份额预测... 26第八章 PCR[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]产业研究总结... 28

  • 【分享】出现非特异性扩增带

    PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数 过多 有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出 现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：①必要时重新设计引 物。②减低 酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次 数。④适当提 高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。

  • 【参数解读】基因扩增仪(PCR)的技术参数解读与使用

    仪器简介PCR是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成，它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术，可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准，可以将PCR仪分为普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类。PCR技术原理该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆列举部分仪器的个别参数，仅供参考：技术参数：样品台容量:96X0.2ml PCR管、 96孔PCR板、8排/12排PCR管工作原理：TE半导体系加热致冷技术屏幕：彩色触摸屏（5.7英寸）温度控制范围：4℃-105℃ 升降温速度：≥4.0℃/秒 温度均匀性：≤0.3℃ 温控精度：≤0.1℃ (@55℃) / ≤0.2℃(@90℃以上)温度显示精度：0.1℃程序温控方式：Block模式和Tube模式变温速度可调范围：0.1-4.0℃程序可储存数：最大可存250个程序，可通过U盘扩展存贮最大循环数：99循环，可套嵌两级，可做巢式PCR实验时间递增/递减：0-9分59秒，可做Long PCR实验温度递增/递减：0.1-9.9℃，可做Touch down实验断电保护/暂停功能：有Soak功能：有运行状态显示功能：[color=

  • 售价1万的手持式ATP荧光检测仪面世 15秒揪出食物中的“坏分子”

    http://bimg.instrument.com.cn/show/NewsImags/images/201412814415.jpg根据监测点的不同，ATP数值上下限也不同　　下馆子，最怕碗筷、骨碟不干净，可肉眼又看不出“猫腻”。昨天，一款专门针对物体表面洁净度的快速检测仪在园区亮相。据介绍，只需用检测拭纸在餐具等物品表面轻轻擦拭，15秒后，就能检测出物品表面残留的细菌数量是否超标。　　这款名叫手持式ATP荧光检测仪的高科技产品，由苏州工业园区纳米城的天隆生物科技公司自行研发生产，迄今已是第三代。该公司技术服务部经理黄发平告诉记者，所谓ATP指的是三磷酸腺苷，它是一切生命体能量的直接来源，存在于所有活的动植物细胞、细菌和食物残留中。ATP荧光检测法是根据萤火虫发光原理开发的快速检测技术。有氧条件下，虫荧光素酶催化虫荧光素和ATP之间发生氧化反应形成氧化荧光素并发出荧光，其强度与微生物数量呈比例关系。通过测试荧光信号的强度可得知待测目标被细菌、食物残留等污染的程度，因此检测ATP可以作为判断洁净的指标。　　他表示，以往卫监部门抽查餐馆卫生状况是否达标，把样本带回实验室，经过细菌培养等复杂处理，少则48小时，多则一周才能出具检测结果。而他们生产的手持式ATP荧光检测仪只需要在物体表面轻轻一擦，15秒就能检测细菌数量是否超标，连接移动式手持打印机，实时出具结果。“我们行业内有一个统一的ATP标准值，用来衡量细菌数量是否超标。”他说，台面、菜刀、砧板等监测点不同，ATP上下限数值也是不一样的。　　据悉，目前这台手持式ATP荧光检测仪市场售价在1万元左右，在西安、上海等地，该产品已被运用于各类医疗卫生机构卫生监督、食品安全现场快速抽检工作中。　　天隆科技是一家针对医学诊断、食品安全、病原体检测和生物学医学科研等市场需求，进行分子诊断、核酸检测、POCT等检验仪器、医疗器械及体外诊断试剂的研发、生产和销售的高科技企业。公司和研发基地分布西安和苏州两地。昨天，天隆科技在园区独墅湖世尊酒店举办新产品发布会，除了手持式ATP荧光检测仪之外，现场还展示了新一代磁珠法核酸提取仪、基因扩增热循环仪器及四通道实时荧光定量PCR仪、多款PCR检测试剂等高科技产品。　　据悉，未来2年，天隆科技还将建成医学诊断仪器与试剂的综合性生产基地，仪器产品种类将扩展到8大类20余项产品，覆盖从大型自动化监测工作站到小型便携式快速诊断仪器，配套试剂品种将达到百种以上，形成完整、成熟的分子诊断类产品线。2015年项目达产后将达到3亿元的年产值。

  • 【实战宝典】 荧光定量PCR，扩增曲线有一向上或向下的尖峰的现象，可能是什么原因？

    问题描述：荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]，扩增曲线有一向上或向下的尖峰的现象，可能是什么原因？解答：[align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]1[/color][/font][font=宋体][color=black]）反应过程中电压不稳定。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]2[/color][/font][font=宋体][color=black]）可能在[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black] 20 [/color][/font][font=宋体][color=black]个循环左右时，仪器暂停了或被开盖，使光线突然增强。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]3[/color][/font][font=宋体][color=black]）如果尖峰向下，可能是由卤素灯老化所致，这时应更换。[/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • 【讨论】食品检测仪器设备

    1. 水质分析仪；　　 7. 农残检测仪；　　13. [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增仪[/color][/url][/color][/url]； 　 19. 生物芯片；2. 水分测量仪；　　 8. 甲醛测定仪；　　14. 分光光度计；　　 20. 培养基（箱）；3. 近红外分析仪；　 9. 微生物测定仪；　15. 亚硝酸盐测定仪； 21. 检测试剂盒；4. 水分活性计；　　10. 等离子光谱仪；　16. 二氧化硫测定仪； 22. 金属检测机；5. 蛋白质分析仪；　11. [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]；　　17. 氨基酸测序仪； 　23. 异物探测器；6. 荧光检测仪；　　12. 液相色谱仪；　　18. [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱仪[/color][/url]； 24. 自动选别机；国内做这些的出名厂家好少哦! 都是国外的....[em01]

  • 【实战宝典】荧光定量PCR，其中部分样本扩增效率过低如何改进？以诺如病毒检测为例

    问题描述：荧光定量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]，其中部分样本扩增效率过低如何改进？以诺如病毒检测为例解答：[align=left][font=宋体][color=black]可能的原因有：[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]1[/color][/font][font=宋体][color=black]）检查反应条件：如病毒中[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/color][/font][font=宋体][color=black]反应程序设定错误，将[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black] 42℃[/color][/font][font=宋体][color=black]设置成[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black] 50℃[/color][/font][font=宋体][color=black]。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]2[/color][/font][font=宋体][color=black]）提取液残留，一定程度抑制了[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url] [/color][/font][font=宋体][color=black]反应。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]3[/color][/font][font=宋体][color=black]）反应液未严格取量混匀或分装不均匀，建议规范操作，严格按照说明书操作。[/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

  • ATP荧光检测仪可以检测什么细菌

    [size=16px][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#05073b]ATP荧光检测仪可以检测什么细菌[/color][/font]ATP荧光检测仪是一种专门用于检测微生物代谢活性的仪器，其原理是基于细菌在代谢过程中会产生一种荧光物质——ATP。当细菌接触到荧光染料时，ATP会被荧光染料标记，随后被检测器检测到，从而确定细菌的数量和代谢活性。具体来说，ATP荧光检测仪可以快速检测各种食品样品（包括肉类、海鲜、蔬菜、水果等）中的微生物数量，如葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌等。此外，它还可以用于检测土壤、水体和生物体内的细菌、真菌、原生动物和藻类等微生物的数量和代谢活性。除了食品安全领域，ATP荧光检测仪还广泛应用于医药卫生、环境监测等领域。例如，在医院内部环境的卫生检测中，使用ATP荧光微生物检测仪可以对手术室、病房、器械等进行快速检测，及时发现和消除卫生隐患，保护患者的健康。总之，ATP荧光检测仪是一种功能强大的微生物检测工具，其应用范围广泛，对于确保食品安全、环境卫生和医疗安全等方面具有重要意义。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403151353381095_7818_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size]

  • PCR基因扩增仪的工作原理

    什么是PCR技术？ PCR（Polymerase Chain Reaction）技术，中文译为聚合酶链式反应，是一种在体外（试管、切片…）扩增核酸的技术。PCR的基本反应包括以DNA为模板的反应和以mRNA为模板的反应。 PCR技术是模拟体内天然DNA（脱氧核糖核酸）的复制过程。以扩增DNA为例，其基本原理是在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下，特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应。

  • 新型ATP快速荧光检测仪

    日本KIKKOMAN公司的ATP荧光检测仪原理: 细菌以及食物残渣中含有大量的ATP，通过特定试剂的作用，使细菌及食物细胞的细胞膜透性增强，以便ATP从细胞中释放出来。ATP与荧光素/荧光素酶反应发光，发光程度与ATP的含量成正比关系，而ATP的含量又与细菌及食品残留的多少成正比关系。即：发光程度与细菌及食品残留含量成正比关系。 ATP + (Luciferin + Luciferase) = Light 检测仪器参数:检测限: 10-15mol ATP检测时间: 10秒钟数据输出: RLU(相关光度值)存储空间: 1200个数据显示: LCD电脑传输: RS232C/USB打印: 可选购电源: 1.5V, R6, AA电池两节尺寸: 80×203×50重量: 280克(无电池情况下) 优势：具有专利保护的ATP/AMP检测方法，同时可以检测ATP和AMP，已使检测结果更加精确和稳定。所用的酶可以抵抗清洁剂，防止用在生产上的清洁剂影响酶的活性试剂长效稳定，使用非常方便 世界上第一台可以检测ATP的同时还可以在把AMP转化成ATP，所以可以使结果更加准确和稳定。同时KIKKOMAN公司的ATP细菌检测仪可以检测表面的细菌量（估计值），有兴趣请来电：021-65110203/651101339-28 赵先生或者我们的网站：www.biochemmu.com

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