恒温核酸扩增检测仪

环介导等温扩增( LAMP) 技术是近年发展起来的一项新的快速核酸恒温扩增技术，具有高效、快速、特异、易检测、易操作等特点，自面世以来被科学家认为是能替代常规PCR 的一项扩增技术，非常适用于现场检测和基层检测。本文就LAMP 技术的原理、特点、进展及其在病原微生物检测中的应用进行了简要的概述。

近年来细胞治疗领域取得的进步大大提升了对T细胞扩增技术的需求。T 细胞必须能够迅速扩增，才能在维持高存活率和T细胞属性的同时达到高细胞密度。

PCR扩增过程中，每一轮循环均检测一次荧光信号的强度。随着反应循环次数的不断增加，所扩增的目的基因片段呈指数规律增长，反应中产生的荧光信号强度与PCR产物的数量呈正比。仪器实时检测和采集的荧光信号，随着时间和循环数的不断增加，产生一条反映实时荧光信号强度变化的曲线，称为扩增曲线。扩增曲线以循环数为横坐标，荧光强度为纵坐标。

PCR扩增线粒体DNA(mtDNA)的序列分析正迅速成为法医测试中公认的手段。法医mtDNA应用关键性的第一步，是确定这些扩增产物片段大小、纯度和浓度是否适合序列分析。Agilent 2100生物分析仪和DNA 500 LabChip能够准确而精密地测定 DNA片段的大小和浓度。在这篇应用报告中，用生物分析仪在序列测定前快速而有效地分析了PCR扩增的DNA片段。

引物设计：引物长度适当，18-24mers，并保证序列独特性，以降低序列在非目的片段中存在的可能性，但长度大于24核苷的引物并不意味着有更高的特异性，较长的序列可能会与错误配对序列杂交，反而降低特异性，而且长序列比短序列杂交慢，影响产量； 引物浓度：引物的浓度会影响特异性。最佳的引物浓度一般在0.1到0.5μM。较高的引物浓度会导致非特异性产物扩增

实时荧光RT（real-time）-PCR，即实时荧光反转录聚合酶链式反应。它首先将提取的病毒基因组RNA，通过反转录变成DNA（cDNA）。然后再用病原体特异性的引物，以cDNA作为模板扩增病原体核酸序列。因为扩增的过程中荧光染料能同步整合在产物上，所以研究者可以通过荧光信号的强弱，进行实时检测。

包含10多种样品前处理、反应孵育和检测仪器在内的完整解决方案，与WHO推荐的RT-PCR，其他核酸检测，全基因组测序和成对样品的血清学检测四种方法学的检测试剂配套，保障RNA提取纯化、反转录、PCR扩增、实时荧光定量PCR、血清学抗原抗体快速检测、实验室生物安全等关键环节的有效性和效率。

核酸检测是新冠肺炎确诊的重要标准，也是精准医疗的基础，常被应用于传染病检测、遗传病诊断、肿瘤风险预测、食品安全检测、海关检疫、法医鉴定等领域。

试剂的污染：由于操作不当，造成核酸提取、扩增过程中各相关试剂的污染。

使用Archimed时间分辨荧光定量PCR系统对核酸PCR进行扩增，并对扩增产物进行熔解曲线分析其特异性。应用手册内容涵盖整体操作流程，如软件操作，数据分析，以及注意事项等。

实验方法原理TA克隆 系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3' 末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3' T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点（MCS）中。 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。 T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步：首先，T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物；然后，酶-ATP复合物再结合到具有5' 磷酸基和3' 羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最hou产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。连接反应通常将两个不同大小的片断相连。因为DNA片断有两个端点，所以切割时出现两种可能，一种是单酶切，另一种是双酶切，这两种酶切方法在基因工程操作中都经常用到。对于单酶切来说，载体与供体的末端都相同，连接可以在任何末端之间进行，这样就导致了大量的自连接产物。为了减少自环的高本底，可对载体进行5' 除磷酸处理，原理是连接酶只能连接DNA片断的3' OH末端与5' 端，所以除磷后载体不会自环。一旦有外源片断插入时，由外源片断提供5' 端就能与载体进行连接。通过这种方法可大大减少由载体的自环造成的高本底。对于双酶切来说，无论载体与供体同一片段上都有不同的末端，这样就避免了载体与供体的自环，能使有效连接产物大大增加。双酶切的另一个特点是能将供体分子定向连接到载体上。 连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。因此采取折中的温度，即12-16℃，连接12-16h（过夜），这样既可最da限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。Taq DNA酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱基，可以与pGEM-T Easy Vector 末端游离的T碱基互补形成环状重组T质粒。

“为了提高蛋白检测的灵敏度，研究者们都尝试将蛋白检测转换成核酸检测，然后利用众多的核酸检测信号放大方法来提高检测灵敏度。核酸酶是利用核酸检测各种靶标的有效工具，可以利用核酸酶的催化特性来放大响应信号，从而实现高灵敏度的检测。我们的研究利用Exo III 设计促进靶分子循环利用的策略，以实现对核酸靶标的信号放大和灵敏检测。相比其它核酸酶的利用，这种扩增策略很简单，只需要一种酶和一个发夹DNA 作为反应物来产生扩增的信号。重要的是，ExoIII 表现出与序列无关的活性，这体现出其与其他扩增策略中使用的内切酶的区别以及优势。将 Exo III 辅助信号放大与结合诱导的 DNA 组装相结合，则实现了Exo III 辅助信号放大作为通用型平台应用于蛋白质高灵敏检测。” 张华昌表示。张华昌师从岭南师范大学周国华副教授，上述研究已经发表在《Microchemical Journal》上。

"全自动核酸质谱分析系统基本原理是将预处理后的PCR扩增产物，通过仪器点样至带有基质的芯片上，使其与基质结合形成共结晶，采用基质辅助激发技术，使样品离子加速进入飞行管，将不同目标离子进行质量分离，离子质量越小，飞行速度越快，也就更早到达检测器，不同分子量的核酸分子因到达检测器的时间不同而得到检测，根据标准物质标定出不同质量数的特征谱图，经过软件的分析计算，实现对样品结果的目标判断。该系统整合了PCR技术的高灵敏度、芯片技术的高通量、质谱技术的高精确度，以及生物信息的智能化分析功能，为临床研究与应用提供了另一个技术平台。具有多重检测、低成本、高通量、检测周期短、灵活性高、准确度高、高度自动化等特点。适用于遗传病筛查、药物基因组学、病原体检测、肿瘤早筛等多个领域的基因检测。"

如何使用荧光增白剂检测仪器检测双孢蘑菇中的增白剂污染的操作步骤

分析级制备纯化 行业特点：大多数单次制备纯化量较少，可采用分析级纯化方案 半制备级纯化平台 适合大制备量核苷酸纯化，单次制备量可达200~2000 OD QC质检 HTCS核酸质谱检测系统（基于LTQ系列质谱） DEL-核酸质谱检测系统（基于LTQ质谱） 基因扩增 Realtime PCR----荧光定量PCR仪 核酸药物高端研究 Thermo LTQ-Orbitrap XL高分辨质谱系统

第三代PCR技术-数字PCR，作为分子诊断领域的佼佼者，在病原体核酸检测方面彰显出巨大优势。naica® 微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度，融合传统微滴式和芯片式优势，被称为下一代数字PCR技术。

检测酒中甲醛通常使用甲醇检测仪，其中甲醛是一种有毒的挥发性有机化合物，可能是由于酒精酿造或存储条件等原因产生的。以下是一般实验操作步骤：材料准备：酒样品甲醇检测仪甲醛检测试剂盒（通常包括吸附剂、洗涤剂、反应剂等）称重器具恒温水浴或恒温箱实验步骤：样品制备：a. 取一定量的酒样品，通常是按照试剂盒说明来操作。确保酒样品充分代表所要测试的样品。b. 如果样品中存在固体颗粒或悬浮物，需要使用适当的方法将其去除。吸附甲醛：a. 将甲醛检测试剂盒中的吸附剂加入酒样品中，按照试剂盒说明来操作。b. 通过轻轻摇晃混合，使吸附剂充分接触酒样品，以便将甲醛吸附在吸附剂上。

过氧化值是衡量食用油品质和新鲜度的指标之一，一般用于检测油脂中的氧化程度。使用过氧化值检测仪可以方便地进行这种检测。以下是一般实验操作步骤：材料准备：大豆油样品过氧化值检测仪过氧化值试剂盒（通常包括提取剂、酸和碘酸钾溶液等）恒温水浴或恒温箱称重器具洗涤溶液和洗净瓶

吊白块（也称为沉降值）是衡量馒头中淀粉含量的指标。以下是使用吊白块检测仪检测馒头中吊白块含量的实验操作步骤： 材料准备： 面粉样品吊白块检测仪及其配件（包括玻璃筒、吊白块、计时器等）蒸馏水或去离子水称量器具温度控制设备（温水浴或恒温箱）实验步骤： 样品制备：a. 称量一定量的面粉样品，通常为10克。b. 将面粉样品均匀撒在平板上，使其表面光滑平坦。

2018年8月非洲猪瘟疫情在中国爆发，爆发地区分布交广，对我国畜牧养殖造成了巨大损失。应用实时荧光PCR技术可以从低微含毒量样品中扩增获得病毒特异性核酸片段，进行病毒鉴定。本解决方案通过三款国家公布的猪瘟试剂盒标准品在Archimed上的实验表现，展示Archimed对非洲猪瘟病毒检测试剂盒的适配性。

随着3D生物打印和人类诱导多能干细胞(hiPSCs)的出现，组织工程领域发展迅速，但由于缺乏功能丰富的厚组织，影响有限。绕过这一限制的方法之一是用含有 hiPSCs 的3D 生物打印组织。通过这种方式，iPSCs可以在实质细胞分化之前增殖并填充厚组织块。在这里 , 我们设计了一个灌注生物反应器，用于装载hipsc的3d生物打印室， 目的是在分化之前在 整个结构中增殖hipsc，以产生厚组织模型。生物反应器由数字光投影制成，经过优化，可 以在水凝胶室内部灌注而不会泄漏，也可以在外部提供流体流动，从而最大限度地提高整 个室壁的营养输送。经过7天的培养，我们发现在3ml min-1下间歇灌注(每15分钟15秒)，相 对于在静态条件下培养的类似腔室，工程组织中的干细胞集落密度增加了1.9倍。我们还观 察到，相对于静态对照，灌注结构的组织壁内的菌落分布更均匀，反映了培养基中营养物 质的均匀分布。在流体流动的作用下，hiPSCs保持多能性和增殖性，产生平均约1.0 dyncm-2 的壁剪切应力。总的来说，这些充满希望的结果在灌注干细胞水凝胶后支持多种组织类 型的产生，并改善了厚度，因此增加了功能和实用性。

使用尿素检测仪检测食品中尿素含量的实验操作步骤：实验材料：食品样品（牛奶）尿素检测仪尿素标准溶液蒸馏水称量瓶或容量瓶称量仪或容量瓶恒温水浴或恒温器离心机高速离心管

PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。

检测蜂蜜中葡萄糖含量通常使用折射率测定方法，其中包括使用蜂蜜检测仪。以下是一般实验操作步骤：材料准备：蜂蜜样品蜂蜜检测仪（折射率仪）温度控制设备（温水浴或恒温箱）实验步骤：样品制备：a. 准备一定量的蜂蜜样品，足够填充蜂蜜检测仪的测试池。b. 如果蜂蜜处于结晶状态，需要在温水浴中轻轻加热，使其回到液态状态。不要过热，以免影响测量准确性。仪器预热：开启蜂蜜检测仪，根据仪器说明进行预热，以确保仪器达到稳定的工作温度。校准仪器：a. 根据蜂蜜检测仪的要求，进行仪器的校准。通常，你需要使用校准液（通常是蒸馏水）来设置仪器的折射率基线。b. 进行仪器的校准，以确保后续测量的准确性。测量蜂蜜折射率：a. 将校准好的蜂蜜检测仪测试池中，加入足够的液态蜂蜜样品，确保液面平稳。b. 仪器会测量蜂蜜的折射率。记录测量结果：记录蜂蜜样品的折射率值。蜂蜜的折射率与其中的固溶物浓度（主要是葡萄糖和果糖）有关，从而可以估计葡萄糖含量。

以下是使用蜂蜜检测仪检测蜂蜜纯度的实验操作步骤：准备工作：确保蜂蜜检测仪已经校准并处于正常工作状态。准备一定量的待测试的蜂蜜样品。样品准备：选择具有代表性的蜂蜜样品，确保样品干净无杂质。如有需要，将蜂蜜样品在恒温条件下轻轻加热，使其变得更加流动，以便更好地进行测试。

吊白块（也称为沉降值）是衡量面粉中淀粉含量的指标。以下是使用吊白块检测仪检测面粉中吊白块含量的实验操作步骤：材料准备：面粉样品吊白块检测仪及其配件（包括玻璃筒、吊白块、计时器等）蒸馏水或去离子水称量器具温度控制设备（温水浴或恒温箱）实验步骤：样品制备：a. 称量一定量的面粉样品，通常为10克。b. 将面粉样品均匀撒在平板上，使其表面光滑平坦。准备玻璃筒和吊白块：a. 将玻璃筒洗净并彻底干燥。b. 将干燥的吊白块放入玻璃筒中。添加水：a. 用蒸馏水或去离子水，将玻璃筒中的吊白块浸泡，使其完全湿润。b. 在玻璃筒中加入足够的水，使吊白块完全浸没。吊白块过程：a. 将装有吊白块的玻璃筒悬挂在恒温水浴中，温度通常设定为30°C，以保持稳定的温度。b. 开始计时器，记录时间。吊白块会逐渐下沉，直到不再下沉为止。这个过程反映了面粉中淀粉的沉降速度。结果测定：当吊白块停止下沉时，停止计时器，并记录下吊白块下沉的时间，通常以秒为单位。数据计算：使用以下公式计算吊白块含量：吊白块含量（%） = (吊白块下沉时间 / 标准吊白块下沉时间) × 100标准吊白块下沉时间是指在标准淀粉溶液中吊白块下沉的时间，用于校准。

过氧化值是衡量食用油品质和新鲜度的指标之一，一般用于检测油脂中的氧化程度。使用过氧化值检测仪可以方便地进行这种检测。以下是一般实验操作步骤：材料准备：大豆油样品过氧化值检测仪过氧化值试剂盒（通常包括提取剂、酸和碘酸钾溶液等）恒温水浴或恒温箱称重器具洗涤溶液和洗净瓶实验步骤：样品制备：a. 从大豆油样品中取一定量，通常是按照试剂盒说明来操作。确保油样品充分代表所要测试的样品。b. 如果样品中存在固体颗粒或悬浮物，需要使用适当的方法将其去除。提取：a. 将油样品加入试剂盒中的提取剂中，按照试剂盒说明来操作。b. 通过轻轻摇晃混合，使油样品与提取剂充分接触，以便将过氧化物质从油中提取出来。酸化反应：a. 添加试剂盒中的酸到提取液中，使其酸化。这一步骤有助于将过氧化物质转化成碘。b. 需要注意酸化反应的时间和温度，通常需要在适当的条件下进行。碘化反应：a. 在酸化的提取液中加入试剂盒中的碘酸钾溶液，触发碘化反应。碘化反应会转化过氧化物质并形成碘。b. 通常需要将样品放置在恒温水浴或恒温箱中，以控制温度。测定吸光度：使用过氧化值检测仪，在适当的波长下（通常为500 nm），测量样品和标准样品的吸光度。构建标准曲线：a. 使用一系列不同浓度的标准样品，绘制吸光度和标准样品浓度之间的曲线。b. 根据标准曲线，将待测样品的吸光度值转换为过氧化值。

由于许多疾病相关生物标志物的浓度超低，所产生的信号往往会被其他高浓度分子所产生的信号所干扰，因此从生物流体中进行超低浓度样品（每100 μ L中有1到10份）的检测一直是医学/生物分析领域的一个难题。近日，复旦大学魏大程教授课题组使用小型台式无掩膜光刻机- MicroWriter ML3制备了基于石墨烯场效应管的分子微纳机电芯片解决了这一难题。所制备的芯片实现了对低浓度离子，生物分子和新冠病毒（每100 μ L中有1到2份）的快速检测。使用该芯片对新冠病毒进行检测时，仅需鼻咽样本即可，无需RNA提取和核酸扩增，四分钟内就可得到检测结果。相关研究论文已在国际知名期刊《Nature Biomedical Engineering》（IF=25.7）上发表。

使用酸价检测仪检测食用油中的酸价是一个常见的实验，用于确定食用油的新鲜度和质量。以下是一般的实验操作步骤：注意：在进行实验前，请确保您已经熟悉并遵守所有相关的安全规定和操作指南。实验所需材料和设备：食用油样品酸价检测仪（自动或手动）乙醇或异丙醇（用作溶剂）酚酞指示剂或苯酚指示剂硫酸（浓度为0.1 N）烧杯锥形瓶热水浴或恒温器滴定管玻璃棒pH计数据处理软件（如果使用自动酸价仪）实验步骤：样品准备：a. 从市场或供应商处获取食用油样品。b. 确保样品是代表性的，可以充分代表整个批次。c. 将样品置于干净的、干燥的容器中，以避免外部污染。溶剂准备：a. 准备乙醇或异丙醇作为溶剂。b. 确保溶剂是干净的，没有任何杂质。样品溶解：a. 取一定量的食用油样品，通常在2克左右。b. 将样品溶解在溶剂中，确保完全混合。指示剂添加：a. 将少量酚酞指示剂或苯酚指示剂加入样品中。这些指示剂会改变颜色以指示酸碱中和点。滴定操作：a. 在酸价检测仪中设置好滴定条件，包括滴定速度和温度。b. 将样品溶液装入滴定管中。c. 开始滴定，逐滴加入硫酸（0.1 N）直到出现指示剂颜色的明显变化，通常从粉红色变为浅紫色。记录滴定体积：a. 记录所需的硫酸体积，以达到酸碱中和点。b. 根据滴定体积计算酸价，通常以毫克氢氧化钠/克（mg KOH/g）的单位表示。数据处理（如果使用自动仪器）：a. 如果使用自动酸价检测仪，系统会自动记录和计算酸价。b. 导出结果并保存数据。

寡核苷酸是一类短链核苷酸的总称（包括脱氧核糖核酸及核糖核酸），如用于基因扩增和基因诊断的 PCR 引物和反义核酸，介导基因沉默的小干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）等，努力研究开发基因靶向治疗药物用于治疗病毒、肿瘤和遗传疾病。