CloneSelect单细胞分离系统(CloneSelect Single Cell Printer)采用类似喷墨打印的技术,柔和地产生包裹细胞的液滴无接触地直接分配到微孔板中(图1)。同时,该系统借助智能图像分析,确认细胞数目,分析细胞的形态(大小和圆度)及荧光强度,联动的真空装置将不符合要求的液滴(如空液滴或者含多个细胞的液滴)直接吸走,而符合要求的细胞液滴则分配至微孔板,从而实现对单个细胞的分选和接种。单细胞分离系统是一种可比移液器操作的柔和的单细胞分离技术,而流式分选由于高的液体剪切力和电压的影响,会降低敏感细胞和部分受损细胞(如电转后的细胞)的成克隆率,因此单细胞分离系统更适用于基因工程细胞的克隆,维持细胞活力,并提供直接的单克隆性图像证据。
简介在一段时间内同时检测几种不同信号的输出尤其在研究蛋白或化合物对细胞生长或基因表达作用方面很有帮助。在本应用指南里,我们利用SoftMax? Pro 7版本软件同时来检测细胞生长(光吸收)和蛋白表达(荧光)。在细菌中,lac操纵子是一种由编码?-半乳糖苷酶的启动子调控的基因群。将一个蛋白表达序列插入到含有lac操纵子的质粒中并转染细菌,可使这一转化细菌来表达感兴趣的蛋白。通常情况下,lac启动子是被变构抑制的,但是在异丙基-?-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)存在下,阻遏物从启动子序列释放引起感兴趣蛋白的的表达。相反,如果IPTG过量,细胞会转变为优先将胞内物质用于蛋白表达并且细胞生长也会受到阻碍。通过同时检测细胞密度和蛋白表达,我们展示了大肠杆菌(E.coli)是如何响应系列稀释的IPTG的。
CRISPR-Cas9技术彻底改变了基础生物研究和应用生物技术的许多领域。但在临床基因治疗实施中脱靶效应的检测仍然存在难题。德国汉堡大学-艾本多夫医学中心(UKE)干细胞移植、细胞和基因治疗研究所的学者们近日在知名杂志《Molecular Therapy》上发表“LATE–a novel sensitive cell-based assay for the study of CRISPR/Cas9-related long-term adverse treatment effects”的文章,建立了称为LATE(长期不良治疗效果鉴定检测)的新型检测方法,该方法使用Stilla naica® 微滴芯片数字PCR系统检测低频的脱靶事件,且有助于分析Cas9脱靶切割效应的影响,并可在单细胞层面进行评估。